Name: Melk Collection Methoden voor Mice and Reeves Muntjac Herten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Leer een kosteneffectieve methode voor melkcollectie bij muizen en Reeves' muntjac herten. Deze techniek ondersteunt onderzoek naar passieve immuniteit en pathogeenidentificatie in dierlijke modellen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deze experimenten werden gefinancierd door de NIH-subsidie #RAI093634A. We willen onze grote dank betuigen aan Jenny Powers, DVM, PhD, voor haar hulp bij het melken van muntjaks.

1. Mouse Milking Protocol De in dit protocol beschreven methoden werden goedgekeurd door IACUC. 1. Scheiding van de Dam van Offspring <ol><li> Selecteer de dam om gemolken te worden. Kies een dam met een nestje van 4 of meer pups die 8-12 dagen na het werpen te zorgen maximale ophalen van melk-hoewel collectie is mogelijk op elk tijdstip na de bevalling tot 21 dagen. </li><li> Scheid de dam uit haar nest minstens 2 uur voor het melken. Opmerking: Indien een verlangen om meer dan een dam melk in een bepaalde periode, is het acceptabel om de gescheiden dammen in dezelfde kooi met voldoende voedsel en water te huisvesten. </li></ol> 2. Toediening van Oxytocine, Anesthesie en Eye Glijmiddel <ol><li> Dien 2 IE / kg van oxytocine intraperitoneaal (IP). Oxytocine is een hormoon dat de melk van lacterende vrouwen om de afgifte van melk stimuleren. Oxytocine kan worden verworven frOM een dierenarts. </li><li> Dien een verdoving mengsel dat 80-100 mg / kg ketamine in combinatie met 5-10 mg / kg xylazine IP. Zo kan een 10 ml stock anesthesiemengsels worden voorbereid voor muizen gewicht van ongeveer 30 gram en zou omvatten 0,1 ml xylazine, 8,9 ml H2O en 1,0 ml ketamine. 0,25 ml totale verdoving een muis van deze omvang verdoven voor ongeveer 20-30 minuten, die voldoende tijd voor het ophalen van melk moeten verstrekken. Opmerkingen: Om vast te stellen dat het dier met succes is verdoofd, plaats voorzichtig haar op haar buik op een stevige ondergrond; ze mogen niet bewegen haar voeten of een poging om te stijgen naar haar voeten als ze volledig verdoofd. Bij een muis niet volledig verdoofd met de oorspronkelijke dosering, kan de onderzoeker een toedienen ¼ of ½ van de oorspronkelijke dosis van het anestheticum mengsel afhankelijk van de grootte van de muis en / of het niveau van sedatie dat de muis verworvenheden . Echter, dit kon ikncrease de kans op een negatieve reactie op anesthesie, en kan ook resulteren in de muis wordt dieper verdoofd en / of verdoofd voor een langere periode. Opmerking: Als melken meer dan een dam, is het noodzakelijk oxytocine en verdoving injecties door de korte halfwaardetijd van oxytocine en sedatie moment voor ketamine en xylazine spreiden. </li><li> Breng een kleine hoeveelheid oogzalf om de hoek van elk oog en verspreid naar de ogen van de muis uitdroogt terwijl onder narcose. </li></ol> 3. Melk Collection Het ophalen van melk is het meest eenvoudig uitgevoerd met twee onderzoekers: een onderzoeker aan de verdoofde muis vast te houden terwijl handmatig de uiting van de melk (aangeduid als R1), en een onderzoeker aan de melk (R2) te verzamelen. Deze methode kan ook worden uitgevoerd met een persoon, wanneer de muis wordt bevestigd op een plat oppervlak om schade te voorkomen. <ol><li> R2 moeten worden uitgerust met steriele alcohol prep pads, een P-200 pipEtman, een schone pipet tip voor elke muis, en een container aan de melk, zoals een 1,5 ml Eppendorf buis of een 1,2 ml cryovial (zie tabel van Materialen) houden. </li><li> Zoals de oxytocine begint door te voeren, zal de melkafgifte zichtbaar in borstklieren gebied van de muis geworden (zie figuur 1A). R1: Haal een steriele alcohol prep pad en veeg de borstklier gebied van de muis om het gebied voorafgaand aan het melken schoon te maken. Handmatig kolven van de tepel met behulp van de duim en wijsvinger zachtjes masseren en knijp het borstweefsel in een opwaartse beweging tot een zichtbare kraal melk begint te vormen bij de basis van de speen. </li><li> Druk op de P-200 pipetman plunjer naar zijn eerste stop om lucht te laten ontsnappen uit de pipet tip en voor te bereiden voor het ophalen van melk. </li><li> Plaats de pipetpunt bovenaan de druppel melk en trek de melk in de pipetpunt door langzaam vrijgeven van de druk op de zuiger. Let er dan op de tip te dicht bij de speen of de huid aan te brengen (zieFiguur 1B). Het is niet nodig om de plunjer volledig vrij te geven als dit de melk zal trekken tot aan de bovenkant van de pipetpunt en het moeilijk maken om de vaak viskeuze melk verdrijven in de houdcontainer. </li><li> Verdrijf de melk in de container met behulp van de duim om op de zuiger voorbij de eerste stop (zie figuur 1C). Om uitzetting van kleine volumes te vergemakkelijken, druk op de pipet tip tegen de zijkant van de buis, zodat er geen vloeistof verloren gaat. </li><li> Blijf handmatig kolven uit elke speen, bewegen in klokwijzerrichting of tegen zodat ze geen spenen slaan. Het is zowel aanvaardbaar en nuttig om terug te komen en voortdurend uiten melk van dezelfde speen moet produceren meer melk dan de andere. </li></ol> 4. Verdoving Omkering in de Dam <ol><li> In de meeste gevallen is het gebruikelijk om de dam te gaan beginnen wakker tijdens het melken. Indien dit niet het geval is, zet de dam in een cage indirect onder een warmtebron, zoals een verwarmd circulerende deken, totdat ze begint te ontwaken. Opmerking: Omdat de dam begint wakker te worden, houden nauwkeurige observatie van haar activiteit totdat ze in staat is om te lopen over haar kooi in haar eentje. </li><li> Zodra de dam beweegt over de kooi zonder strijd, zet haar terug in haar oorspronkelijke kooi met haar nestje. Geen nadelige gevolgen zijn geconstateerd met betrekking tot de pups &#39;vermogen om te voeden na het ophalen van melk. </li></ol> 2. Muntjac Milking Protocol De in dit protocol beschreven methoden werden goedgekeurd door IACUC. 1. Scheiding van de Doe uit Offspring <ol><li> Selecteer de hinde te melken. Reeves &#39;muntjak hert algemeen bevallen van een fawn 2. Melk de hinde de dag na geboorte aan het reetje mogelijkheid om de toegang tot essentiële voedingsstoffen krijgen in colostrum 8 mogelijk te maken. Opmerking: De fawn verbergt meestal en niet opnieuw in de procedure; scheiding van de moeder-nakomelingen paar is niet noodzakelijk. </li></ol> 2. Toediening van Oxytocine, Anesthesie en Eye Glijmiddel <ol><li> Dien 10 IE / kg Oxytocine intramusculair (IM). Oxytocine is een hormoon dat inwerkt op de melkklieren van de zogende vrouwen om de teleurstelling van melk te stimuleren. Oxytocine kan worden verkregen van een dierenarts. </li><li> Dien de BAM verdoving IM 11 met butorphanol 0,45 mg / kg, azaperon 0,25 mg / kg, medetomadine 0,07 mg / kg. Een dosis van het BAM verdoving mengsel zal een muntjak verdoven voor ongeveer 20-30 minuten, die meer dan voldoende tijd voor complete ophalen van melk voorziet. Een andere optie voor verdoving midazolam op 1-2 mg / kg, die een muntjac zal sederen ongeveer 10-15 minuten. Hoewel dit biedt voldoende tijd voor het ophalen van melk, wordt deze verdoving sneller gemetaboliseerd dan BAM en het dier kan proberen te ontsnappen aan het einde van de kortere periode. Opmerking: Minimale reactie op pijn, Kleine reflexen bij aanraken van de oren, gevolgd door het vermogen van R1 MJ houden zonder strijd blijkt dat het dier succesvol is verdoofd. Opmerking: Bij een muntjac niet volledig verdoofd met de oorspronkelijke dosering, kan de onderzoeker een toedienen ¼ of ½ van de oorspronkelijke dosis van het anestheticum mengsel afhankelijk van de grootte van het dier en / of het niveau van sedatie reeds is bereikt. Echter, kan dit de kans op een negatieve reactie op anesthesie verhogen en ook kan leiden tot muntjac wordt dieper verdoofd en / of verdoofd voor een langere periode. </li><li> Breng een kleine hoeveelheid smeermiddel om de hoek van elk oog en uitbreiden tot de ogen van de muntjak&#39;s uitdroogt terwijl onder narcose. </li></ol> 3. Melk Collection Het ophalen van melk is het meest eenvoudig uit te voeren met twee onderzoekers; een onderzoeker aan de verdoofde muntjak houden inde schoot tijdens het handmatig uiting van de melk (Bedoeld als R1), en een tweede onderzoeker aan het hoofd van de muntjak in een comfortabele en veilige positie te houden en om de melk (R2) te verzamelen. <ol><li> Afhankelijk van de verdoving gebruikt, moeten melken in hun hokken worden uitgevoerd ofwel 1) naar een veilige plaats voor hen moeten ze wakker worden tijdens de procedure (-midazolam veroorzaakte) in een-beddengoed gratis voorkamer 2) of om schoon te houden (BAM- geïnduceerde). </li><li> R1 en R2 moeten worden uitgerust met-ethanol gedrenkt gaas en diverse 15 ml conische polypropyleenbuizen om de melk te houden. </li><li> Zoals de oxytocine begint door te voeren, zal de melkafgifte zichtbaar in borstklieren gebied de muntjak geworden. R1: Sanitize gehandschoende handen en vingers, alsmede de gehele uier en elke individuele speen van het dier met de ethanol gedrenkt gaas. R2: Houd het hoofd van de muntjak in een veilige en comfortabele positie om het gemak van de ademhaling mogelijk maken en helpen voorkomen pens oprispingen. Houd de collectie buis cl<html> OSE op de speen gemolken zonder aan te raken om mogelijke besmetting te voorkomen. </li><li> Kolven van de ene speen met behulp van de duim en wijsvinger om knijp het borstweefsel in een opwaartse beweging totdat de speen wordt volgezogen met melk, en zachtjes rol de melk uit de speen en in de buis die R2 houdt (zie figuur 2 ). </li><li> Opmerking: De melk komt uit in een stroom, dus is het belangrijk voor R2 de verzamelbuis geplaatst dat weinig tot geen melk zal worden verspild. </li><li> Uier De muntjak is verdeeld in kwadranten. R1: Blijf kolven van elk kwadrant totdat de melk niet meer stroomt gemakkelijk. Als de melk niet kan worden uitgedrukt van de ene speen, uiten van alle andere spenen alvorens terug te keren naar de eerste. Het is zowel aanvaardbaar en nuttig om terug te komen en voortdurend uiten melk van dezelfde speen moet produceren meer melk dan de andere. </li></ol> 4. Verdoving Omkering in de Doe t &quot;&gt; Het is gebruikelijk voor-midazolam geïnduceerde doe om te beginnen om wakker te worden tijdens het melken. In de meeste gevallen zal de hinde proberen te ontsnappen voordat alle melk is geuit. wordt Minor terughoudendheid gebruikt in een poging om de melk te verhogen opbrengst, maar de veiligheid en het comfort van zowel de onderzoekers en de hinde zijn even belangrijk. <ol><li> Dien atipamezol met 2,5 mg / mg medetomadine subcutaan voor een snelle ommekeer van BAM verdoofd doe. Opmerking: Met beide soorten verdoving, is het noodzakelijk om een ​​nauwkeurige observatie van de hinde handhaven totdat ze in staat is in haar eentje te lopen zonder te struikelen of vallen, en is in staat om te eten en te drinken zonder angst voor aspiratie of stikken. Geen nadelige gevolgen zijn geconstateerd met betrekking tot het vermogen van de fawn om verpleegkundige na het ophalen van melk. </li></ol>

<ol><li>Dueling, S. Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , Available from: 
 
 <a target="_blank" href="http://animaldiversity.ummz.umich.edu/accounts/Muntiacus_reevesi">http://animaldiversity.ummz.umich.edu/accounts/Muntiacus_reevesi</a> (2004).</li>
<li>Pei, K., Taber, R., O'Gara, B., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breeding+cycle+of+the+Formosan+Reeves+muntjac+%28Muntiacus+reevesi+micrurus%29+in+northern+Taiwan%2C+Republic+of+China%5BTitle%5D)+AND+%22Mammalia%22%5BJournal%5D)">Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China.</a> Mammalia. 59 (2), 223-228 (1995).</li>
<li>Browning, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+prions+from+mule+deer+and+elk+with+chronic+wasting+disease+to+transgenic+mice+expressing+cervid+PrP%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Transmission of prions from mule deer and elk with chronic wasting disease to transgenic mice expressing cervid PrP.</a> J. Virol. 78 (23), 13345-13350 (2004).</li>
<li>Van de perre, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+antibody+via+mother%27s+milk%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Transfer of antibody via mother's milk.</a> Vaccine. 21 (24), 3374-3376 (2003).</li>
<li>Maden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+modified+mice+produce+human+milk+protein%5BTitle%5D)+AND+%22BioNews%22%5BJournal%5D)">Genetically modified mice produce human milk protein.</a> BioNews. , (2009).</li>
<li>Rodgers, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+aspects+of+milk+collection+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Anim%22%5BJournal%5D)">Practical aspects of milk collection in the rat.</a> Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).</li>
<li>Depeters, E. J., Hovey, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+collecting+milk+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mammary+Gland+Biol.+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Methods for collecting milk from mice.</a> J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).</li>
<li>Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk+yield+and+composition+in+mice%3A+effects+of+litter+size+and+lactation%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Milk yield and composition in mice: effects of litter size and lactation.</a> 84 (1), 127-133 (1986).</li>
<li>Hedrich, H. J., Bullock, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+laboratory+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The laboratory mouse.</a> , 735-736 (2004).</li>
<li>Nishimori, K., Young, L. J., Guo, Q., Wang, Z., Insel, T. R., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+is+required+for+nursing+but+is+not+essential+for+parturition+or+reproductive+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Oxytocin is required for nursing but is not essential for parturition or reproductive behavior.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (21), 11699-11704 (1996).</li>
<li>Miller, B. F., Osborn, D. A., Lance, W. R., Howze, M. M., Warren, R. J., Miller, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Butorphanol-azaperone-medetomidine+for+immobilization+of+captive+white-tailed+deer%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Butorphanol-azaperone-medetomidine for immobilization of captive white-tailed deer.</a> 45 (2), 457-467 (2009).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Muis Er zijn verschillende factoren om rekening te houden bij het verzamelen van melk van een muis, waaronder 1) het bedrag van de tijd gereserveerd voor het verzamelen, 2) de dosis oxytocine toegediend, 3) hoeveel pups de dam is momenteel verpleging en 4) het bedrag van de tijd die is verstreken sinds de bevalling op het moment van de collectie. Met behulp van eerdere studies als leidraad hebben we besloten om de voorwaarden voor de melkgift te optimaliseren. <p class="...

Diermodellen inzicht in pathologie die niet kunnen worden verkregen door in vitro analyse. De meest effectieve resultaten oplevert, is het belangrijk om een ​​diermodel dat nauw samenhangt met de ziekte en soorten van gebruik. Bijvoorbeeld, de Reeves &#39;muntjak (wordt reevesi), een kleine Aziatische hert 1,2 en transgene muizen die de cervid prion eiwit (CerTgPrP) 3 zijn nuttig diermodellen voor soorten hertachtigen. Beide soorten zijn polyestrous, waardoor het hele jaar door fokken, en dus een consistente bron voor zwangerschap-gerelateerde weefsels en vloeistoffen aan specifieke mechanismen bestuderen in hertachtigen biologie. Studies van melk hebben een breed scala van toepassingen die eenvoudiger (en goedkoop) bereikt in diermodellen dan bij de mens. Onderzoekers konden melk en biest als een potentiële bron van 1) overdracht van infectieziekten te onderzoeken, 2) immunoglobulinen overgedragen van moeder op nakomelingen in de ontwikpment van passieve immuniteit 4 en 3) lactoferrine, een eiwit dat voorkomt in moedermelk betrokken bij passieve immuniteit dat de onderzoekers op dit moment proberen om commercieel te produceren 5. Het verzamelen van een grote hoeveelheid melk van kleine dieren kunnen blijken te zijn een moeilijke taak worden. Rogers voorgestelde benadering om melk te verzamelen van ratten 6, die vervolgens werd gebruikt in muizen. DePeters en Hovey voorgesteld twee methoden voor melkinzameling een een handmatig gegenereerde onderdruk door een rubberen pipet bolbodem een ​​Pasteur pipet en een tweede waarbij de constructie van een melkstel, die vervolgens wordt bevestigd aan een vacuümbron (zoals als een kraan) voor muis melk 7 oogsten. Hier stellen we een eenvoudige, goedkope methode voor het verzamelen van melk van zowel muizen als Reeves &#39;muntjac herten, die alleen beschikbaar laboratorium apparatuur en technische basisvaardigheden vereist. Onze methode levert voldoende hoeveelheden melk voor diversetoepassingen.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Materialen&#8212;Muis</td></tr><tr><td>Ketamine (KetaVed 100 mg/ml) (dosis: 80-100 mg/kg)</td><td>MWI/Vedco</td><td>011075</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dosis: 5-10 mg/kg)</td><td>MWI/Vedco</td><td>NADA 139236</td><td></td></tr><tr><td>Oogvocht</td><td>MWI/Apexa</td><td>701013</td><td></td></tr><tr><td>Oxytocine (2 IU/kg)</td><td>Vet One</td><td>501013</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Materialen&#8212;Muntjak</td></tr><tr><td>Midazolam (1-2 mg/kg)</td><td>Amerisource Bergen Drug Corp</td><td>924326</td><td>Optioneel: de onderzoeker kan ofwel Midazolam alleen of de BAM-combinatie als verdoving gebruiken</td></tr><tr><td>Butorphanol tartraat (Torbugesic) (0,45 mg/kg)</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td>NADA 135-780</td><td></td></tr><tr><td>Azaperone tartraat (0,25 mg/kg)</td><td>ZooPharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medetomadine HCl (0,07 mg/kg)</td><td>ZooPharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dosis: 0,25 mg/kg)</td><td>Orion Corporation</td><td>NADA 141-033</td><td></td></tr><tr><td>Oxytocine (10 IU/kg)</td><td>Vet One</td><td>501013</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Apparatuur&#8212;Muis</td></tr><tr><td>P-200 Pipetman</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu;l pipette tips</td><td>Light Labs</td><td>B-2004-SH</td><td></td></tr><tr><td>1 ml spuiten</td><td>MWI</td><td>005427</td><td></td></tr><tr><td>27 G naalden</td><td>MWI</td><td>002031</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Apparatuur&#8212;Muntjak</td></tr><tr><td>15 ml conische buisjes</td><td>VWR</td><td>21008-918</td><td></td></tr><tr><td>22 G naalden</td><td>MWI</td><td>873</td><td></td></tr><tr><td>3 ml luer lock spuiten</td><td>MWI</td><td>001377</td><td></td></tr></tbody></table>

melk collection methoden voor mice and reeves &#39;muntjac herten

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Diermodellen worden vaak gebruikt in onderzoekslaboratoria om te bereiken wat normaal gesproken als onpraktisch zou worden beschouwd in de natuurlijke gastheer van een pathogeen. Melkverzameling van dieren biedt wetenschappers de mogelijkheid om veel aspecten van reproductie te bestuderen, waaronder verticale transmissie, passieve immuniteit, biologie van de borstklier en lactatie. Het verkrijgen van voldoende hoeveelheden melk voor deze studies is een uitdagende taak, vooral bij kleine diermodellen. Hier illustreren we een goedkope en eenvoudige methode voor melkverzameling bij muizen en Reeves' muntjakherten die geen gespecialiseerde apparatuur of uitgebreide training vereist. Deze specifieke methode vereist twee onderzoekers: één om de melk uit te drukken en het dier te stabiliseren, en één om de melk te verzamelen in een geschikte container van een Muntjac of muismodel. Het muismodel vereist ook het gebruik van een P-200 pipetman en bijbehorende pipettentips. Hoewel deze methode kostenefficiënt en relatief eenvoudig uit te voeren is, moeten onderzoekers erop worden gewezen dat anesthesie van het dier vereist is voor een optimale melkverzameling.

Muis Uit onze experimenten hebben we vastgesteld dat het mogelijk is om ongeveer 100-400 pl melk ve laboratoriummuis, afhankelijk van verschillende variabelen verzamelen. Deze variabelen zijn 1) het bedrag van de tijd gereserveerd voor het verzamelen, 2) de dosis oxytocine toegediend, 3) hoeveel pups de dam is momenteel verpleging en 4) de hoeveelheid tijd na de bevalling. Onze studies hebben aangetoond dat de hoogste opbrengst wordt verkregen wanneer de dammen gescheiden va...

Melkverzameling van diermodellen vergemakkelijkt verschillende onderzoekswegen: het begrijpen van passieve immuniteit, het identificeren van pathogenen die verantwoordelijk zijn voor verticale overdracht en, door het gebruik van transgene muizen, zelfs de commerciële productie van eiwitten die in menselijke moedermelk worden aangetroffen. Hier illustreren we een eenvoudige methode voor melkverzameling bij muizen en Reeves’ muntjakherten.

Melk Collection Methoden voor Mice and Reeves &#39;Muntjac Herten

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

Het algemene doel van deze procedure is om aan te tonen hoe melk kan worden verzameld van een muis of een ree voor gebruik in diverse wetenschappelijke experimenten. Dit wordt bereikt door eerst oxytocine aan het dier toe te dienen om de melkafgifte te stimuleren, waarna het dier wordt geanestheseerd. Vervolgens uit één onderzoeker de melk handmatig, terwijl een tweede onderzoeker deze opvangt.De laatste stap is het waarborgen van de veiligheid van het dier terwijl ze herstelt van de anesthesie. Uiteindelijk kan men ongeveer vijf tot 30 milliliters mutt jack-melk per sessie verzamelen, of tot 450 microliters muizenmelk per sessie. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals die waarbij gespecialiseerde apparatuur vereist is, is dat deze techniek relatief goedkoop is en gemakkelijk te leren.Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van verschillende wetenschappelijke vragen, zoals of een pathogeen via de melk van de moeder op het nageslacht kan worden overgedragen. Personen die nog niet bekend zijn met deze methode raken vaak ontmoedigd, omdat het oefening vereist om de melk correct af te scheiden. Stephanie full away, een laborant uit ons laboratorium, zal mij bij deze procedure ondersteunen om de melkafscheiding bij een lacterende muis te stimuleren.Dien onmiddellijk voor het verzamelen van de melk twee internationale eenheden oxytocine per kilogram intraperitoneaal toe, anesthetiseer de muis en breng een kleine hoeveelheid ooggleidmiddel aan in elk oog om uitdroging van de ogen te voorkomen terwijl gewacht wordt tot het anestheticum is ingetreden. Bereid enkele steriele alcoholpreppads, een P 200 pipetteman, steriele pipetpuntjes en een houder voor de melk voor, zoals een Eppendorf-buisje van 1,5 milliliter of een cryovial van 1,2 milliliter. Het melken vereist twee onderzoekers.Terwijl de ene persoon het dier stabiliseert en de melk afscheidt, verzamelt de andere persoon de melk, waarbij zorgvuldig wordt gewaakt over het voorkomen van contaminatie van het opvangreservoir. Met een steriel alcoholprep-gaasje reinigt de persoon die de melk afscheidt voorzichtig het uiergebied voorafgaand aan het melken.Binnen een minuut of twee na de oxytocine-injectie wordt de melkafscheiding in het uiergebied van de muis zichtbaar. Expressieer handmatig melk uit de tepel door met de duim en wijsvinger het uierweefsel voorzichtig in een opwaartse beweging te masseren en samen te knijpen, totdat er een zichtbare melkdruppel aan de basis van de tepel ontstaat. De melkverzamelaar drukt nu de zuiger van de P 200 pipette naar de eerste stop om lucht uit de pipetpunt te laten ontsnappen en zich voor te bereiden op de melkcollectie.Vervolgens plaatst de melkverzamelaar de pipetpunt aan de bovenkant van de melndruppel. Terwijl hij er zorgvuldig op let de punt niet te dicht bij de tepel of de huid te plaatsen, laat hij langzaam de druk op de plunjer los om de melk in de pipetpunt te trekken, waarbij de pipetpunt tegen de zijkant van het opvangbuisje wordt gedrukt zodat er geen vloeistof verloren gaat. De melkverzamelaar gebruikt de duim om de plunjer voorbij de eerste stop te drukken en de melk in de container te brengen.Ga door met het handmatig uitmelken van elke tepel, waarbij u in kloksgewijze of tegen de klok in draaiende richting werkt. Het is toegestaan om terug te keren naar een vorige tepel om meer melk uit te persen, vooral als deze meer melk produceert dan de andere tepels. Wanneer de melkverzameling is voltooid, laat u de muis ontwaken uit de anesthesie.Zodra de moeder gemakkelijk in de kooi beweegt, plaatst u haar terug in haar oorspronkelijke kooi bij haar nest om de melkafscheiding te stimuleren. Dien bij lacterende ree-mutt-jack herten 10 internationale eenheden per kilogram oxytocine intramusculair toe en anesthetiseer de mutt-jack onmiddellijk daarna. Het niveau van anesthesie wordt als adequaat beschouwd als er slechts geringe reflexen optreden bij het aanraken van de oren en als de persoon die de melk afscheidt de mut-jack zonder strijd kan vasthouden.Breng vervolgens een kleine hoeveelheid smeermiddel aan in elk oog om te voorkomen dat de ogen van de mut jack uitdrogen. Voorzie zowel de melkexpressor als de melkopvanger van met ethanol gedrenkt gaas en verschillende conische polypropyleen buisjes van 15 milliliter om de melk in op te vangen. Zodra de oxytocine begint te werken, wordt de melkafgifte zichtbaar in het uiergebied van de mutt jack.Zowel de persoon die het uier uitmelkt als de persoon die de melk opvangt, moeten handschoenen dragen en deze desinfecteren met ethanol-gedrenkte gazen. Gebruik daarnaast ethanol-gedrenkte gazen om het gehele uier en elke individuele tepel van het dier te desinfecteren, terwijl de kop van de muntjaks in een comfortabele positie wordt gehouden om een gemakkelijke ademhaling mogelijk te maken en regurgitatie van het rumen te voorkomen. De persoon die de melk opvangt, plaatst de opvangbuis dicht bij de tepel die wordt uitgemolken, zonder deze tegen de huid aan te drukken.De melker gebruikt de duim en wijsvinger om het uierweefsel voorzichtig met een opwaartse beweging samen te knijpen totdat de tepel gevuld is met melk, om vervolgens de melk voorzichtig uit de tepel in de buis te rollen die de melkverzamelaar vasthoudt. De melk komt in een straal naar buiten, dus het is belangrijk dat de opvangbuis zo is gepositioneerd dat er zo min mogelijk melk verloren gaat. Het uier van Mt Jack is verdeeld in kwadranten.De melkexprimer gaat door met het uitmelken van elk kwadrant totdat de melk niet meer gemakkelijk stroomt. Als melk niet uit één tepel kan worden geëxtraheerd, wordt er eerst uit alle andere tepels gemolken voordat er wordt teruggekeerd naar de eerste. Na het verzamelen van de melk wordt aamaz subcutaan toegediend voor een snelle omkeer van de bam-anesthesie; vervolgens wordt het dier gemonitord totdat zij weer zelfstandig kan lopen, eten en drinken. Deze figuur geeft aan dat er 100 tot 450 µL melk kan worden verkregen van een lacterende muis.De maximale melkvolumes werden acht tot 12 dagen na het werpen geoogst met gebruik van twee internationale eenheden oxytocine per kilogram. Hier wordt de geschatte melkopbrengst van een lacterende muis weergegeven, uitgezet naar nestgrootte bij reeve's mut jack-muizen. Het volume melk dat per sessie werd verzameld varieerde van 5 tot 30 milliliter, afhankelijk van het gebruikte anestheticum en het tijdstip na het werpen; de start- en einddata van de melkverzamelingen voor de mut jack-moeders worden in deze tabel getoond.Melk werd gedurende gemiddeld 80 dagen verzameld, met een bereik van 18 tot 150 dagen. Zodra deze techniek onder de knie is, kan deze in ongeveer een uur worden uitgevoerd, afhankelijk van het aantal dieren waarvan u in één sessie melk wilt verzamelen. Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het altijd belangrijk om te onthouden dat de veiligheid van de dieren voorop staat. Na deze procedure kan verwerking van de melk noodzakelijk zijn, gevolgd door in vitro testen of bioassays, wat kan helpen bij het beantwoorden van aanvullende vragen over componenten in de melk.

milk-collection-methods-for-mice-and-reeves-muntjac-deer

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dit protocol laat zien methoden voor de extractie van sperma van de testikels van de mannetjes en daarna inseminatie vrouwelijke muizen. Deze procedure is handig wanneer precieze tijd nodig is in ontwikkeling studies als transgene werken.

Oogsten Sperma en kunstmatige inseminatie van Muizen

Deze methode beschrijft hoe te ontleden en te evalueren ontwikkeling van de borstklier en de functie van muizen. Weggesneden borstklieren zijn beoordeeld op de mate van ontwikkeling met behulp van ganse berg, terwijl melk ejectie is geëvalueerd met behulp van een oxytocine-based myo cel contractie assay.

Evaluatie van de ontwikkeling van de borstklier en functie in muismodellen

Transabdominale echografie wordt beschreven als een effectief, niet-invasief middel voor het beoordelen van de reproductieve status bij Reeves' muntjac herten. Deze methoden kunnen worden gebruikt om vroege zwangerschapsdiagnose te bereiken en de levensvatbaarheid van de foetus te evalueren. Toekomstige toepassingen van deze techniek omvatten een schatting van de zwangerschapsduur en de effecten van moederziekte op de foetale ontwikkeling.

Transabdominale echografie voor zwangerschapsdiagnose bij Reeves' Muntjac Deer

Melk is een primaire voedingsbron voor de pasgeborene. Analyse van melkcomponenten kan inzicht geven in maternale factoren die de gezondheid van het nageslacht beïnvloeden. Dit protocol beschrijft een handmatige methode voor het verzamelen van melkmonsters van de lacterende rat, die vervolgens kunnen worden gebruikt voor verdere downstream-analyse.

Melk Collection in de rat met behulp van capillaire buizen en Schatting van melk vetgehalte Creamatocrit

Fenotypische verschillen tussen de cervid bevolking kunnen worden gerelateerd aan populatieniveau genetica of voeding; comforthotel die moeilijk is in het wild. Dit protocol beschrijft hoe we ontwierpen een gecontroleerde studie waar voeding variatie werd uitgeschakeld. We vonden dat fenotypische variatie van mannelijke Witstaarthert was beperkter door voeding dan genetica.

Protocol voor het beoordelen van de relatieve effecten van milieu en genetica op gewei en lichaam groei voor een langlevende Cervid

Deze studie meldt bloedmonsters van staart ader in muizen met behulp van een systeem van de buisjes opzuigen met lenzenvloeistof vergrootglas. Onze methode is makkelijk om te oefenen en kan worden gebruikt voor herhalen bloedmonsters in muizen.

Gemodificeerde bloedinzameling uit staart aderen van muizen niet-verdoofd met een systeem voor het verzamelen van vacuüm bloed en lenzenvloeistof Vergrootglas

Dit artikel beschrijft en demonstreert de toediening van intranasale vaccins en de verzameling van melk van zogende konijnen (Oryctolagus cuniculus) als een middel om mucosale immuniteit te beoordelen in een translationeel geschikt model van maternale immunisatie.

Intranasale immunisatie en melkverzameling in studies naar maternale immunisatie bij Nieuw-Zeelandse witte konijnen (Oryctolagus cuniculus)

Hier beschrijven we micropipetgeleide medicijntoediening (MDA) als een alternatieve methode voor orale maagsonde die het onderzoeksdier stimuleert om behandelingen gemakkelijk in te nemen met minimale stress en ongemak.

Gebruik van micropipet-geleide medicijntoediening als alternatieve methode voor orale sonde in knaagdiermodellen

In dit artikel wordt beschreven hoe u een apparaat in elkaar zet dat kan worden gebruikt om melk van laboratoriummuizen op te vangen. Dit apparaat is betaalbaar, draagbaar en maakt het mogelijk om 0,1-0,5 ml melk op te halen door één getraind persoon. Er is ook een gedetailleerd melkprotocol opgenomen.

Een efficiënte eenpersoonstechniek voor het bemonsteren van melk van laboratoriummuizen

Hier presenteren we een protocol voor een geoptimaliseerde bloedafnametechniek bij muizen door middel van venapunctie in het gezicht met behulp van een lancet. We gebruiken deze techniek naast flowcytometrische beoordeling om cellulaire fenotypes van transgene, congenische en reporterstammen te karakteriseren. Het is ook geschikt voor serumcytokine-analyse en diabetesstudies.

Venapunctie in het gezicht voor het afnemen van bloed bij muizen

Leer een kosteneffectieve methode voor melkcollectie bij muizen en Reeves' muntjac herten. Deze techniek ondersteunt onderzoek naar passieve immuniteit en pathogeenidentificatie in dierlijke modellen.

Melk Collection Methoden voor Mice and Reeves 'Muntjac Herten

Meer video's verkennen