Name: Detecteren van afwijkingen in Choroïdale vaatstelsel in een muismodel van Leeftijdsgebonden Macula Degeneratie door Time-cursus indocyaninegroen angiografie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 24 s
Description: Leer afwijkingen in het choroïdale vaatstelsel detecteren bij muismodellen van leeftijdsgebonden macula degeneratie met behulp van time-cursus indocyaninegroen angiografie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door NIH-subsidie ​​1R01EY022901, de Career Development Award van Onderzoek om Blindheid (RPB) voorkoming, CMReeves &amp; MA Reeves Foundation, E. Matilda Ziegler Stichting voor Blinden, Tempeliers Eye Foundation, en een onbeperkte subsidie ​​aan het ministerie van oogheelkunde aan de Universiteit van Utah van RPB. We danken Balamurali Ambati voor technische bijstand op het Spectralis multimodaliteit Imaging System en Tao Zhang voor discussies en commentaar op het manuscript.

1. Voorbereiding van de instrumenten <ol><li> De procedure wordt uitgevoerd in een behandelkamer per dier faciliteit. </li><li> Draag gezichtsmaskers, haar mutsen, chirurgische toga, steriel mond-covers, en handschoenen voor het begin van het experiment. </li><li> Verwarmen van water in een bekerglas tot ~ 40 ° C op een kookplaat. </li><li> Plaats een steriele blauwe pad bovenop een verwarmingselement dat later zal worden gebruikt om de muis lichaamstemperatuur tijdens de beeldvorming te handhaven. Zet de verwarming pad. </li><li> Bereid de Imaging System: <ol><li> Verwijder de stofkap en zet de laser. </li><li> Haal de 55 ° lens en bevestig deze aan de machine. </li><li> Open de imaging software van de computer en het invoeren van de gegevens van de muis voor de beeldvorming onder het laken van een nieuwe patiënt (bijv. genotype, leeftijd, enz.). Onder &quot;device type&quot;, kies Infrarood (IR)-modus. </li></ol></li></ol> Opmerking: Er is gerapporteerd dat het gebruik of een externe dubbele asferische lens kan de beeldkwaliteit 17-20 te verbeteren maar we hebben geen enkel probleem bij het ​​verkrijgen van beelden van hoge kwaliteit door IV-ICGA zonder gebruik van externe lenzen (zie representatieve resultaten, Figuren 1-4). 2. Staartaderinjectie van ICGA <ol><li> Verwijden muis ogen met 1% Tropicamide oogdruppels en wacht 5 minuten. </li><li> Weeg de muis om de hoeveelheid anesthesie (Ketamine / Xylazine / Acepromazine 65-100/10-20/1-3 mg / kg) nodig te bepalen. </li><li> Ophalen een steriele 1 ml spuit samen met een 32 G naald. Injecteer de muis intraperitoneaal met verdoving (13 mg / ml ketamine, 2,6 mg / ml xylazine, 0,3 mg / ml Acepromazine in steriele PBS). Wacht tot de muis is volledig verdoofd (ca. 5 min.). </li><li> Plaats de muis staart tot 40 ° C warm water om vaatverwijding van de ader veroorzaken. </li><li> Ophalen een 1 ml spuit met een 32 G naald. Trek de gewenste hoeveelheid ICG, typisch 50 ui 1 mg / ml ICG, die steriel gefiltreerd met een 0,2 uM spuit filter in een steriele buis, een muis 25 g (2 mg / kg). Zorg dat er geen lucht in te voeren in de spuit. </li><li> Veeg de staart met een alcoholdoekje om het gebied in te spuiten steriliseren. </li><li> Houd de staart met een hand, zodat de laterale staartader is omhoog. Met de schuine kant van de naald naar boven gericht, injecteer de naald ~ 2 mm in de ader op een minimale hoek. Wees voorzichtig de ader niet te perforeren. Trekken terug op de injectiespuit in een licht en op zoek naar sporen van de bloedstroom in de naald hub, die aangeeft dat de naald met succes in de ader is ingebracht. </li><li> Injecteer langzaam ICG in de ader. Er moet een minimale weerstand bij het injecteren. Verwijder de naald en een alcoholdoekje rechtstreeks van toepassing op de injectieplaats voor ~ 5-10 sec om het bloeden te stoppen. De muis is dan gereed voor de beeldvorming. Om de vroege fase (0-4 min na injectie) vangen, is essential het imago van de muis snel. </li></ol> Opmerking: Muis ogen kunnen gemakkelijk droog en kan cataract onder narcose te ontwikkelen. Het is belangrijk om het oog vochtig te houden door steriele PBS gedurende de procedure. Veeg het overtollige PBS met een steriel wattenstaafje voordat ICGA opname. Andere labs hebben een contactlens gebruikt om uitdroging van het hoornvlies 17-20 vermijden. 3. ICG-angiografie <ol><li> Start om foto&#39;s te nemen 30-40 sec na ICG injectie, die de verovering van de vroege fase van choroidal vulling toelaat tot retinale en choroïdale circulaties zijn maximale helderheid (0-4 min). De retinale vaatstelsel wordt het best weergegeven bij brandpunt ~ 35-45 dioptrie en choroidal vaatstelsel wordt gevisualiseerd 10-15 dioptrieën. Opmerking: Tijdens het eerste onderzoek van een diermodel, is het raadzaam om beelden vast te leggen van alle kanten (nasaal, temporele, dorsale en ventrale) om alle mogelijke abno identificerenrmalities in de vasculatuur. Tijdens de vroege fase worden zowel middelgrote en grote choroidal slagaders en aders goed zichtbaar. In het diermodel gebruikt in dit protocol, kan choroidal laesies (bijv. polypoidal verwijdingen) beginnen te verschijnen 1 min in de vroege fase. </li><li> Stel het beeld focus op het vaatstelsel. Controle voor helderheid en scherpstellen met de besturingsmodule en focusknop, respectievelijk. Deze waarden zijn instelbaar digitaal en zijn gemakkelijk constant gehouden. Houd de afstand van de muis oog naar de cameralens constant de beeldkwaliteit reproduceerbaar behulp van de techniek die volgt. Opmerking: Aangezien het apparaat kan alleen de beelden een deel van de achterste oog, proberen we de focus, helderheid, en de afstand tussen de camera en de muis oog constant te houden als beeld dat we de hele achterste oog vanuit verschillende invalshoeken. De sleutel hiervoor is de cirkelvormige luminescentie afkomstig van de ICG door het oog met het gebied van vie uitlijnenw van de camera. Dit wordt bereikt door het maken van links naar rechts, up-en-down, en in-en-out aanpassingen van de camera positie totdat het gehele beeld heeft geen donkere gebieden. Wanneer de luminescentie en het gezichtsveld van de camera worden opgesteld, zal de afstand van het oog tot de lens reproduceerbaar zijn voor de volgende reeks van zowel beeld als op een optimale afstand voor kwaliteit beeldvorming. </li><li> Zodra het vaatstelsel is in focus, het beeld vangen frames door op de ronde zwarte knop op de acquisitie module. De ronde zwarte knop kan ook worden gebruikt voor het verminderen of verbeteren van het signaal van de ICG voor de beste beeldkwaliteit. </li><li> Bepaal de optimale kijkhoek en zich te concentreren diepte aan imago choroidal laesies. Het is belangrijk dat de positie van het oog, de focus diepte en andere apparaatinstellingen voor het gehele tijdsverloop ICGA vast te houden. De beelden worden opgeslagen met verwerven knop op het aanraakscherm van de acquisitie module. </li><li> Acquire beelden in de middenfase van 6-15 min after injectie. Opmerking: Zowel de choroïdale en retinale vaten minder duidelijk. Choroïdale vasculatuur verschijnt als diffuse fluorescentie. Choroidale letsels vertonen hyperfluorescence ontstaan ​​in tegenstelling tot het vervagen omringende normale achtergrond fluorescentie. </li><li> Acquire beelden in de late fase bij 17-25 minuten na injectie. Opmerking: Hyperfluorescence vervaagt. Zowel choroïdale en retinale vaten niet meer zichtbaar. De oogzenuwkop wordt zwart. Hyperfluorescent choroidale letsels maximaal contrast met de vervagende achtergrond. </li><li> Na het afronden van de overname van beelden, breng dan een duidelijke glijmiddel ooggel muis ogen en laat de muis op een verwarmingselement voor herstel. </li><li> Terug muizen naar hun kooien en wachtruimte. Exporteer afbeeldingen als TIFF-of JPEG-bestanden voor verdere analyse. </li></ol> Opmerking: De timing van elke fase is niet absoluut. We vonden dat de timing van each fase kan veranderen afhankelijk van de hoeveelheid ICG geïnjecteerd. Meer ICG neiging om elke fase verlengen. De beste manier om een ​​fase te definiëren is volgens de hoofdkenmerken van elk van bovengenoemde fase.

<ol><li>Duane, T. D., Tasman, W., Jaeger, E. A. Chapter 4a, Indocyanine Green Angiography. Duane's clinical ophthalmology on CD-ROM. , Lippincott Williams & Wilkins. Philadelphia. (2002).</li>
<li>Alfaro, D. V. Age-related macular degeneration : a comprehensive textbook. , Lippincott Williams & Wilkins. (2006).</li>
<li>Yannuzzi, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indocyanine+green+angiography%3A+a+perspective+on+use+in+the+clinical+setting%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Indocyanine green angiography: a perspective on use in the clinical setting.</a> Am. J. Ophthalmol. 151, 745-751 (2011).</li>
<li>Destro, M., Puliafito, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indocyanine+green+videoangiography+of+choroidal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Indocyanine green videoangiography of choroidal neovascularization.</a> Ophthalmology. 96, 846-853 (1989).</li>
<li>Scheider, A., Schroedel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+indocyanine+green+angiography+with+a+scanning+laser+ophthalmoscope%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">High resolution indocyanine green angiography with a scanning laser ophthalmoscope.</a> Am. J. Ophthalmol. 108, 458-459 (1989).</li>
<li>Guyer, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+indocyanine-green+angiography+in+chorioretinal+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Digital indocyanine-green angiography in chorioretinal disorders.</a> Ophthalmology. 99, 287-291 (1992).</li>
<li>Yannuzzi, L. A., Slakter, J. S., Sorenson, J. A., Guyer, D. R., Orlock, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+indocyanine+green+videoangiography+and+choroidal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Digital indocyanine green videoangiography and choroidal neovascularization.</a> Retina. 12, 191-223 (1992).</li>
<li>Regillo, C. D., Benson, W. E., Maguire, J. I., Annesley, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indocyanine+green+angiography+and+occult+choroidal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Indocyanine green angiography and occult choroidal neovascularization.</a> Ophthalmology. 101, 280-288 (1994).</li>
<li>Scheider, A., Kaboth, A., Neuhauser, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+subretinal+neovascular+membranes+with+indocyanine+green+and+an+infrared+scanning+laser+ophthalmoscope%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Detection of subretinal neovascular membranes with indocyanine green and an infrared scanning laser ophthalmoscope.</a> Am. J. Ophthalmol. 113, 45-51 (1992).</li>
<li>Kuck, H., Inhoffen, W., Schneider, U., Kreissig, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+occult+subretinal+neovascularization+in+age-related+macular+degeneration+by+infrared+scanning+laser+videoangiography%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of occult subretinal neovascularization in age-related macular degeneration by infrared scanning laser videoangiography.</a> Retina. 13, 36-39 (1993).</li>
<li>Imamura, Y., Engelbert, M., Iida, T., Freund, K. B., Yannuzzi, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polypoidal+choroidal+vasculopathy%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Surv.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Polypoidal choroidal vasculopathy: a review.</a> Surv. Ophthalmol. 55, 501-515 (2010).</li>
<li>Ciardella, A. P., Donsoff, I. M., Yannuzzi, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polypoidal+choroidal+vasculopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol.+Clin.+N.+Am%22%5BJournal%5D)">Polypoidal choroidal vasculopathy.</a> Ophthalmol. Clin. N. Am. 15, 537-554 (2002).</li>
<li>Spaide, R. F., Yannuzzi, L. A., Slakter, J. S., Sorenson, J., Orlach, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indocyanine+green+videoangiography+of+idiopathic+polypoidal+choroidal+vasculopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Indocyanine green videoangiography of idiopathic polypoidal choroidal vasculopathy.</a> Retina. 15, 100-110 (1995).</li>
<li>Coppens, G., Spielberg, L., Leys, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polypoidal+choroidal+vasculopathy%2C+diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Bull.+Soc.+belge+d%27Ophtalmol.%22%5BJournal%5D)">Polypoidal choroidal vasculopathy, diagnosis and management.</a> Bull. Soc. belge d'Ophtalmol.. , 39-44 (2011).</li>
<li>Tsujikawa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pigment+epithelial+detachment+in+polypoidal+choroidal+vasculopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Pigment epithelial detachment in polypoidal choroidal vasculopathy.</a> Am. J. Ophthalmol. 143, 102-111 (2007).</li>
<li>Jones, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+expression+of+multifunctional+serine+protease%2C+HTRA1%2C+in+retinal+pigment+epithelium+induces+polypoidal+choroidal+vasculopathy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Increased expression of multifunctional serine protease, HTRA1, in retinal pigment epithelium induces polypoidal choroidal vasculopathy in mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 14578-14583 (2011).</li>
<li>Alex, A. F., Heiduschka, P., Eter, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+fundus+imaging+in+mouse+models+of+retinal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Retinal fundus imaging in mouse models of retinal diseases.</a> Methods Mol. Biol. 935, 41-67 (2013).</li>
<li>Seeliger, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+confocal+imaging+of+the+retina+in+animal+models+using+scanning+laser+ophthalmoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo confocal imaging of the retina in animal models using scanning laser ophthalmoscopy.</a> Vision Res. 45, 3512-3519 (2005).</li>
<li>Fischer, M. D., Zhour, A., Kernstock, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotyping+of+mouse+models+with+OCT%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Phenotyping of mouse models with OCT.</a> Methods Mol. Biol. 935, 79-85 (2013).</li>
<li>Jian, Y., Zawadzki, R. J., Sarunic, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+optics+optical+coherence+tomography+for+in+vivo+mouse+retinal+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Opt%22%5BJournal%5D)">Adaptive optics optical coherence tomography for in vivo mouse retinal imaging.</a> J. Biomed. Opt. 18, 56007 (2013).</li>
<li>Ciardella, A. P., Donsoff, I. M., Huang, S. J., Costa, D. L., Yannuzzi, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polypoidal+choroidal+vasculopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Surv.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Polypoidal choroidal vasculopathy.</a> Surv. Ophthalmol. 49, 25-37 (2004).</li>
<li>Sasahara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polypoidal+choroidal+vasculopathy+with+choroidal+vascular+hyperpermeability%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Polypoidal choroidal vasculopathy with choroidal vascular hyperpermeability.</a> Am. J. Ophthalmol. 142, 601-607 (2006).</li>
<li>Silva, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polypoidal+choroidal+vasculopathy+and+photodynamic+therapy+with+verteporfin%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch.+Clin.+Exp.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Polypoidal choroidal vasculopathy and photodynamic therapy with verteporfin.</a> Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 243, 973-979 (2005).</li>
<li>Yannuzzi, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polypoidal+choroidal+vasculopathy+masquerading+as+central+serous+chorioretinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Polypoidal choroidal vasculopathy masquerading as central serous chorioretinopathy.</a> Ophthalmology. 107, 767-777 (2000).</li>
<li>Janssen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+vessel+formation+in+the+choroid+of+mice+lacking+tissue+inhibitor+of+metalloprotease-3%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Abnormal vessel formation in the choroid of mice lacking tissue inhibitor of metalloprotease-3.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2812-2822 (2008).</li>
<li>Ding, X., Patel, M., Chan, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathology+of+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Retin.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Molecular pathology of age-related macular degeneration.</a> Prog. Retin. Eye Res. 28, 1-18 (2009).</li>
<li>Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+choroidal+and+retinal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Retin.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Animal models of choroidal and retinal neovascularization.</a> Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).</li>
<li>Pennesi, M. E., Neuringer, M., Courtney, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+age+related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Aspects+Med%22%5BJournal%5D)">Animal models of age related macular degeneration.</a> Mol. Aspects Med. 33, 487-509 (2012).</li>
<li>Elizabeth Rakoczy, P., Yu, M. J., Nusinowitz, S., Chang, B., Heckenlively, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of age-related macular degeneration.</a> Exp. Eye Res. 82, 741-752 (2006).</li>
</ol>

YF is uitvinder van de twee patenten die aan de AMD muismodel gebruikt in dit werk relevant zijn. SK, ZB, en ADJ hebben niets te onthullen.

In deze studie hebben we aangetoond dat het gebruik van ICGA op de foto choroidal laesies in HTRA1 transgene muizen. De kenmerken van de vroege, middelste en late fasen van ICGA in onze muismodel overeen het tijdsverloop goed in humane studies 1. Dit is belangrijk om een ​​betere vergelijking tussen humane pathologie en dierlijke fenotypen van onschatbare waarde voor onderzoek naar pathofysiologische mechanismen en therapeutische strategieën van voorwaarden aan het vaatvlies zoals AMD bent. <p class="jove...

Indocyaninegroen angiografie (ICGA) is een diagnostische test op de foto om problemen met betrekking tot de bloedvaten in het oog. Het absorptiespectrum van ICG varieert 790-805 nm, terwijl het emissiespectrum varieert 770-880 nm met de piek emissie bij 835 nm 1. Dit is anders dan de andere populaire kleurstof, natrium fluoresceïne, waarvan het spectrum valt in het zichtbare gebied. Het infraroodspectrum kunnen ICG te dringen door retinale pigmentepitheel (RPE), serosanguineous vloeistof en lipide exudaten, die allemaal gemakkelijk visualisatie blokkeren door natrium-fluoresceïne gebaseerde fluoresceïne angiografie (FA). ICG is 98% eiwit-gebonden het vaatstelsel leidt tot minder extravasatie, waardoor versterkte beeldvorming van choroïdale vaten en choroïdale laesies 1,2. ICGA is bijna de enige keuze choroidale vaatstelsel, die posterieur van RPE visualiseren. Figuur 1 toont de vergelijking van ICGA en F. imaging vasculatuur in muizen ogen. FA kan be gebruikt om het imago van de retinale vaatstelsel goed, maar niet de choroidal vaatstelsel. In tegenstelling, kan ICGA worden gebruikt om beelden zowel retinale en choroïdale vaatstelsel. ICGA wordt uitgevoerd met digitale imaging systemen met een hoge resolutie of scanning laser oftalmoscopen (SLO) in combinatie met infrarood-gevoelige videocamera&#39;s, die we zullen gebruiken in deze studie. In de kliniek, is ICGA aanbevolen in de diagnose van een aantal chorioretinale aandoeningen waarbij de choroidal vaatstelsel inclusief Polypoidal Choroïdale vasculopathie (PCV), retinale Angiomatous Proliferatie (RAP), angioid strepen, vitelliform maculaire dystrofie, centrale sereuze chorioretinopathie, choroidal hemangioom, bloedingen retinale arteriolar macroaneurysms, choroidal tumoren, en bepaalde vormen van uveïtis posterior 1,3. De combinatie van ICGA met FA en Optical Coherence Tomography (OCT) bieden krachtige instrumenten voor de werkers in de diagnostiek en behandeling van exsudatieve leeftijdsgebonden maculairedegeneratie (AMD) 4-10. ICGA is vooral nuttig voor de diagnose van aandoeningen waarbij het vaatvlies. In feite is ICGA beschouwd als de gouden standaard voor de diagnose PCV, een variant van exsudatieve AMD 11-13. PCV wordt gekenmerkt door een netwerk van vertakkende vaten met terminal polypoidal verwijdingen in de choroidal vaatstelsel 11-13. PCV wordt vaak geassocieerd met terugkerende serosanguineous detachementen van de RPE en de retina met lekkage en bloeden uit de polypoidal componenten 11,14,15. We hebben onlangs gemeld het genereren van de eerste PCV proefdiermodel door transgeen expressie menselijke HTRA1, een multifunctioneel serineprotease, in muizen retinale pigmentepitheel (RPE) 16. We toonden aan dat de toegenomen HTRA1 veroorzaakte karakteristieke kenmerken van PCV, bijvoorbeeld polypoidal laesies. Hier toonden we het gebruik van tijd-natuurlijk ICGA door staartaderinjectie in AMD onderzoek met behulp van onze HTRA1 muismodel. Onze gegevens suggereren datIV-ICGA superieur IP (of subcutaan (SC))-ICGA die momenteel worden gebruikt in het veld 17,18 voor het karakteriseren van laesies in het vaatvlies. Verklaring over Animal Research Dierproeven werden uitgevoerd volgens de protocollen door Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) goedgekeurd, en werden uitgevoerd in overeenstemming met de ARVO verklaring voor het gebruik van dieren in Oogheelkundige en Vision Research.

<table><tbody><tr><td>Spectralis Multi-Modality Imaging System</td><td>Heidelberg Engineering, Germany</td><td>SPECTRALIS HRA+OCT</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamide ophthalmic solution (1%)</td><td>Bausch &amp; Lomb</td><td>NDC 24208-585-64</td><td>voor verwijding van pupillen</td></tr><tr><td>GenTeal Gel</td><td>Genteal</td><td>NDC 58768-791-15</td><td>&nbsp;heldere smeermiddel ooggel&nbsp;</td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Vedco Inc</td><td>NDC 50989-996-06</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Lloyd Laboratories</td><td>NADA 139-236</td><td></td></tr><tr><td>Acepromazine</td><td>Vedco Inc</td><td>NDC 50989-160-11</td><td></td></tr><tr><td>32-G Needle</td><td>Steriject</td><td>PRE-32013</td><td></td></tr><tr><td>1-ml syringe</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>Indocyanine Green</td><td>Pfaltz &amp; Bauer</td><td>I01250</td><td></td></tr></tbody></table>

detecteren van afwijkingen in choroïdale vaatstelsel in een muismodel van leeftijdsgebonden macula degeneratie door time-cursus indocyaninegroen angiografie

Detecting Abnormalities in Choroidal Vasculature in a Mouse Model of Age-related Macular Degeneration by Time-course Indocyanine Green Angiography

Indocyaninegroen angiografie (of ICGA) is een techniek uitgevoerd door oogartsen om afwijkingen van de choroïdale en retinale vaatstelsel van verschillende oogziekten zoals leeftijdsgebonden maculaire degeneratie (AMD) te diagnosticeren. ICGA is vooral handig om het imago van de achterste choroidale vaatstelsel van het oog vanwege zijn vermogen door te dringen door de gepigmenteerde laag met zijn infrarood spectrum. ICGA tijdsverloop kan worden onderverdeeld in vroege, midden en late fasen. De drie fasen leveren waardevolle informatie over de pathologie van oogproblemen. Hoewel de tijd-cursus ICGA door intraveneuze (IV) injectie wordt veel gebruikt in de kliniek voor de diagnose en behandeling van choroidea problemen, ICGA door intraperitoneale injectie (IP) wordt vaak gebruikt in dierproeven. Hier toonden we de techniek om ICGA tijdsverloop beelden met een hoge resolutie in muizen verkrijgen door-staartaderinjectie en confocale laser scanning oftalmoscopie. We gebruikten deze techniek om het imago van de choroidal lelingen in een muismodel van leeftijdsgebonden maculaire degeneratie. Maar het is veel makkelijker om ICG kennismaken met de muis vaatstelsel door IP, onze gegevens blijkt dat het moeilijk is om reproduceerbare ICGA tijdsverloop beelden te verkrijgen door IP-ICGA. In tegenstelling, ICGA via staartaderinjectie biedt een hoge kwaliteit ICGA tijdsverloop beelden vergelijkbaar met menselijke studies. Daarnaast hebben we aangetoond dat ICGA uitgevoerd op albino muizen geeft helderdere foto&#39;s van choroïde dan uitgevoerd op gepigmenteerde muizen. Wij stellen voor dat tijdsverloop IV-ICGA moet een standaard praktijk in AMD onderzoek gebaseerd op dierlijke modellen.

We voerden ICGA time opleiding tot HTRA1 transgene muizen en controle WT nestgenoten, die beide op de CD1 achtergrond. De albino CD1 achtergrond werd geselecteerd om indocyaninegroen angiografie (ICGA) beeldvorming (zie bespreking) te vergemakkelijken. Sommige aneurysma als verwijdingen begon te verschijnen in de vroege fase in de HTRA1 muis (figuur 2, een rode pijl geeft de verwijding aan het uiteinde van een schip en een rode cirkel geeft een soort cluster polypoidal laesie). Choroïdale vaten zijn dui...

Indocyaninegroen angiografie (of ICGA) uitgevoerd door staartaderinjectie biedt een hoge kwaliteit ICGA tijdsverloop afbeeldingen om afwijkingen karakteriseren muis choroidea.

Detecteren van afwijkingen in Choroïdale vaatstelsel in een muismodel van Leeftijdsgebonden Macula Degeneratie door Time-cursus indocyaninegroen angiografie

Indocyanine Green&#160;Angiography (or ICGA) is a technique performed by ophthalmologists to diagnose abnormalities of the choroidal and retinal ...

Het algemene doel van deze procedure is het detecteren van abnormaliteiten in de choroïdale vasculatuur in muismodellen van ouderdomsgebonden maculadegeneratie met behulp van time course endo in green en geography. Dit wordt bereikt door eerst de dieren en de die voor injectie voor te bereiden. De tweede stap is het uitvoeren van staartveneinjecties van incy in green.Vervolgens worden beelden van het oog vastgelegd in de vroege, midden- en late fasen van incy bij groene angiografie, die daarna worden geëxporteerd en geanalyseerd. Uiteindelijk kan het tijdverloop van incy bij groene angiografie worden gebruikt als standaardprocedure voor het karakteriseren van verschillende typen laesies in het choroidea bij maculadegeneratie gerelateerd aan leeftijd. Muismodellen.Het belangrijkste voordeel van deze techniek, in vergelijking met onze bestaande methoden, zoals intraperitonele injectie van endo signin green, is dat het hoogwaardige tijdreeksbeelden oplevert die vergelijkbaar zijn met menselijke studies. Om met de procedure te beginnen, kleed u zich aan in de juiste kleding voor het werken met dieren. Dit omvat het aantrekken van chirurgische jassen, steriele schoenhoezen, haarschermjes, mondkapjes en handschoenen. Bereid vervolgens de warmtemat voor die tijdens de beeldvorming wordt gebruikt door het systeem in te schakelen, de temperatuur op 37 °C in te stellen en deze te bedekken met een steriele blauwe mat.Zet vervolgens een warmteplaat aan en verhit een bekerglas met water tot 40 °C. Bereid het imagesysteem voor op de staartaderinjectie door de laser voor te verwarmen en een lens van 55 graden op het apparaat te monteren. Open daarna de imagingsoftware en voer de identificatiegegevens van de muis in onder een nieuw patiëntenblad voor de beeldvorming.Kies onder apparaattype voor de infraroodmodus. Nadat het beeldvormingssysteem is opgezet, worden de ogen van de muis geweid met een 1% tropicamide-oftalmische oplossing; wacht vervolgens vijf minuten. Weeg tijdens deze tijd de muis om de benodigde hoeveelheid anesthesie te bepalen.Inject vervolgens een mengsel van ketamine, xylazine en acepromazine intraperitoneaal, zoals beschreven in het bijbehorende tekstprotocol. Wacht ongeveer vijf minuten tot de muis volledig is geanestheseerd. In plaats van de ogen van de geanestheseerde muis met oogsalf te bedekken, dient elke twee minuten steriele PBS op de ogen te worden aangebracht of moeten speciale contactlenzen worden ingebracht om uitdroging en het ontstaan van cataract te voorkomen.Zodra de muis is geanestheseerd, wordt de staart gedurende 20 tot 30 seconden in water van 40 °C geplaatst om de staartvenen te dilateren. Gebruik vervolgens een spuit van 1 ml met een naald van 32 gauge om 2 µL per gram lichaamsgewicht van een indocyaninegroen-oplossing van 1 mg/mL op te zuigen. Let erop dat er geen luchtbellen in de spuit terechtkomen.Houd vervolgens de staart met één hand vast zodat de laterale staartvene naar boven is gericht en veeg de staart schoon met een alcoholswab om het te injecteren gebied te steriliseren. Breng vervolgens de naald onder een minimale hoek ongeveer twee millimeter in de vene in, waarbij de opening van de naald naar boven is gericht. Trek de spuit lichtjes terug en controleer op sporen van bloedstroom in de naaldhub, wat aangeeft dat de naald succesvol in de vene is geplaatst.Injecteer vervolgens langzaam de indocyaninegroen-oplossing. Er zou minimale weerstand moeten zijn bij de injectie na de initiële insteek. Verwijder de naald en druk een alcoholgaasje vijf tot 10 seconden direct op de injectieplaats om eventuele bloedingen te stoppen.De muis is vervolgens klaar voor beeldvorming na injectie in de staartvene. Verplaats de muis snel naar het eerder voorbereide beeldvormingssysteem om beelden vast te leggen tijdens de vroege fase van de choroidale vulling. Stel eerst het beeld in en focus op de vasculatuur van belang.Stel de focus in tussen 35 en 45 dioptrie voor de retinale vasculatuur en tussen 10 en 15 dioptrie voor de choroïdale vasculatuur. Controleer vervolgens de helderheid met de bedieningsmodule, pas de waarden voor focus en helderheid digitaal aan en houd deze, zodra ze zijn ingesteld, constant voor dat type opname. Houd daarnaast de afstand van het oog van de muis tot de camera constant.Om een reproduceerbare beeldkwaliteit te garanderen, wordt de initiële screening uitgevoerd door de gehele achterzijde van het oog vanuit verschillende hoeken in beeld te brengen. Begin met het uitlijnen van de cirkelvormige luminescentie die wordt uitgezonden door de indocyaninegroene kleurstof met het gezichtsveld van de camera.Om dit te bereiken, beweegt u de camera van links naar rechts, omhoog en omlaag, en naar voren en achteren. Pas de camerapositie aan totdat het volledige beeld scherp is en er geen donkere vlekken zichtbaar zijn. Noteer de optimale instellingen van het apparaat voor herhalingsprocedures.Zodra de vasculatuur scherp is gesteld, worden de beeldframes vastgelegd door op de ronde zwarte knop op de acquisitiemodule te drukken. Deze knop kan ook worden gebruikt om het signaal van indoc en groen te verminderen of te versterken voor een optimale beeldkwaliteit. Om een specifiek laesiegebied te onderzoeken op basis van de eerdere screeningsresultaten, wordt het beeldvormingssysteem ingesteld met de eerder vastgestelde optimale hoek en apparaatinstellingen.Houd de positie van de kijkhoek van het oog, de focusdiepte en andere apparaatinstellingen gedurende het gehele verloop constant. Sla de beelden op door op de acquisitieknop op het touchscreenpaneel van de acquisitiemodule te drukken. Ga door met het vastleggen van beelden in de vroege fase totdat de retinale en choroidale circulatie hun maximale helderheid hebben bereikt.Dit kan tot vier minuten duren. Ga daarna verder met het verkrijgen van beelden in de middenfase op zes tot 15 minuten na de injectie. Zoals hier te zien is, worden de choroidale vaten in deze fase minder duidelijk en verschijnen ze als diffuse fluorescentie.Vervolgens verschijnen er choroïdale laesies die hyperfluorescentie vertonen; neem beelden op in de late fase, 17 tot 25 minuten na de injectie. Tijdens deze fase neemt de hyperfluorescentie af en zijn de bloedvaten niet langer zichtbaar. Daarnaast wordt de papil van de oogzenuw zwart en vertonen de choroïdale laesies een maximaal contrast met de vervagende achtergrond.Nadat de beeldacquisitie is voltooid, brengt u een kleurloos smeermiddel (IGEL) aan op de ogen van de muis en laat u de muis ter herstel op een warmteplaat liggen. Zodra ze weer enige beweging vertonen, plaatst u de muizen terug in hun kooien en verblijfsruimte. Exporteer tenslotte alle beelden als afbeeldings- of videobestanden voor verdere analyse.Hier wordt een vergelijking getoond tussen fluoresceïne-angiografie op basis van natriumfluoresceïne en endocyt in green-angiografie voor het in beeld brengen van de retinaire en choroïdale vasculatuur van de muis. Terwijl retinaire vaten met zowel FA als ICGA kunnen worden waargenomen, zijn choroïdale vaten alleen zichtbaar met ICGA. Hier volgen beelden van de choroïdale vasculatuur na injectie van endo in green in de staartvin van de wild-type muis.Er werden geen dilataties of laesies gevonden in 어느 van de beeldvormingsfasen bij de HT A one transgene muis. Echter, zowel dilataties als polypoïdale laesies van het clustertype werden gevonden in de vroege fase, en er verschenen meerdere laesies in de middelste fase die duidelijker werden in de late fase. Om de beeldkwaliteit van staartvene-injectie en intraperitoneale injectie van indocyaninegroen te vergelijken, werden aanvullende HRA one transgene muizen afgebeeld na IP-injectie. De choroidale vasculatuur is voor beide muizen grotendeels onzichtbaar vijf minuten na injectie en is onzichtbaar na meer dan 12 minuten voor de muis.In de onderste panelen beïnvloedt, naast de wortel van de injectie, ook de pigmentkleur de kwaliteit van de beelden. Hier werden een gepigmenteerde en een albino muis vergeleken met behulp van een tijdreeks IV incy in groen, een geografie. De albino muis vertoonde veel scherpere beelden van zowel grote als kleine choroidale vaten tijdens de vroege en middelste fasen en zou een goede fokachtergrond bieden voor verdere studies in dit gebied na de ontwikkeling ervan.Deze techniek heeft de weg vrijgemaakt voor onderzoekers op het gebied van visusonderzoek om afwijkingen van het choroidea in muismodellen te bestuderen.

detecting-abnormalities-choroidal-vasculature-mouse-model-age-related

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Microglia-activatie en microgliose zijn de belangrijkste reacties op chronische neurodegeneratie. Hier presenteren we werkwijzen voor in vivo visualisatietechnieken retinale CX3CR1-GFP + cellen door microgliale confocale Ophthalmoscopie, en drempel en morfometrische analyses worden geïdentificeerd en gekwantificeerd hun activering. We monitoren microglia veranderingen tijdens de vroege stadia van leeftijdsgebonden glaucoom.

In Vivo Dynamiek van retinale Microgliale Activering Tijdens Neurodegeneratie: Confocal oftalmoscopisch Imaging en Cell Morphometry in Mouse Glaucoom

Dit protocol beschrijft hoe hoge resolutie beeldvormende technieken zoals spectrale domein optische coherentie tomografie en scannen van laser ophthalmoscopy kan worden gebruikt in kleine knaagdieren, met behulp van een oogheelkundige imaging platform systeem, om informatie te verkrijgen over netvlies dikte en microglial cel distributie, respectievelijk.

In Vivo Beeldvorming van Cx3cr1gfp/gfp Reporter muizen met spectrale domein optische coherentie tomografie en scannen Laser Ophthalmoscopy

Hier presenteren we het nut van longitudinale in vivo imaging in de follow-up van de morfologische veranderingen van laser-geïnduceerde choroidal neovascularization in muizen.

In Vivo Multimodale beeldvorming en analyse van Laser-geïnduceerde Choroidal Neovascularization muismodel

Hier beschrijven we het gebruik van spectrale optische coherentietomografie (SD-OCT) om retinale en oculaire structuren in vivo te visualiseren in modellen van retinale degeneratie, glaucoom, diabetische retinopathie en bijziendheid.

In vivo structurele beoordelingen van oogziekten in knaagdiermodellen met behulp van optische coherentietomografie

Dit protocol presenteert choroïde kiemen test, een ex vivo model van microvasculaire proliferatie. Deze test kan worden gebruikt om trajecten die betrokken zijn bij het verspreiden van choroidale microvaten te beoordelen en te beoordelen drug behandelingen met behulp van wilde type en genetisch gemodificeerd muisweefsel.

Een Ex Vivo Choroid Sprouting Assay van Oculaire Microvasculaire Angiogenese

Dit protocol beschrijft een gedetailleerde methode voor de bereiding en immunofluorescentiekleuring van retinale flat mounts en analyse van muizen. Het gebruik van fluoresceïne fundusangiografie (FFA) voor muizenpups en beeldverwerking worden ook in detail beschreven.

Monitoring van dynamische groei van retinale vaten in zuurstof-geïnduceerde retinopathie muismodel

Hier beschrijven we een in vivo beeldvormingstechniek met behulp van optische coherentietomografie om de diagnose en kwantitatieve meting van retinopathie bij muizen te vergemakkelijken.

Toepassing van optische coherentietomografie op een muismodel van retinopathie

Hier presenteren we drie data-analyseprotocollen voor fluoresceïneangiografie (FA) en optische coherentietomografie (OCT) beelden in de studie van Retinal Vein Occlusion (RVO).

In vivo Vasculaire letseluitlezingen in het netvlies van muizen om de reproduceerbaarheid te bevorderen

Momenteel is fluoresceïne-angiografie (FA) de voorkeursmethode voor het identificeren van lekkagepatronen in diermodellen van choroïdale neovascularisatie (CNV). FA geeft echter geen informatie over vasculaire morfologie. Dit protocol schetst het gebruik van indocyaninegroene angiografie (ICGA) om verschillende laesietypes van lasergeïnduceerde CNV in muismodellen te karakteriseren.

Karakterisering van vasculaire morfologie van neovasculaire leeftijdsgebonden maculadegeneratie door indocyaninegroene angiografie

Om de moleculaire mechanismen van de ethanol-geïnduceerde ontwikkelingsschade begrijpen, hebben we een zebravis model van ethanol blootstelling en het verkennen van de fysieke, cellulaire en genetische veranderingen die optreden na blootstelling aan...

Het beoordelen van Teratogene Veranderingen in een zebravis model van foetale blootstelling aan alcohol

Leer afwijkingen in het choroïdale vaatstelsel detecteren bij muismodellen van leeftijdsgebonden macula degeneratie met behulp van time-cursus indocyaninegroen angiografie.

Detecteren van afwijkingen in Choroïdale vaatstelsel in een muismodel van Leeftijdsgebonden Macula Degeneratie door Time-cursus indocyaninegroen angiografie (Video) | JoVE Journal

Detecteren van afwijkingen in Choroïdale vaatstelsel in een muismodel van Leeftijdsgebonden Macula Degeneratie door Time-cursus indocyaninegroen angiografie

Meer video's verkennen