Name: Klinisch onderzoeksprotocol om atypische en klassieke scrapie bij schapen op te sporen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 42 s
Description: Leer een klinisch onderzoeksprotocol om atypische en klassieke scrapie bij schapen op te sporen met gedrags- en neurologische tests. Deze methode verbetert vroegtijdige detectie van TSE's in kleine herkauwers.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De studies die de dieren leverden, werden gefinancierd door het Britse ministerie van Voedsel, Milieu en Plattelandszaken en de Europese Unie (via financiering van het EU TSE Reference Laboratory). We erkennen de steun van de projectmanagers, Dr.M. Simmons en Dr.M. Jeffrey.

1. Beoordeling van de houding
<ol><li>Beoordeel de houding van het dier ongestoord.</li>
	<li>Dieren die door TSE's worden getroffen, kunnen met brede ledematen staan, kunnen gebocheld lijken of kunnen met een lage hoofdwagen staan.</li>
</ol>2. Beoordeling van gedrag
<ol><li>Bestudeer het gedrag van het dier, wanneer het met rust wordt gelaten, wanneer het wordt benaderd en wanneer het wordt behandeld.</li>
	<li>Door TSE getroffen dieren kunnen een verandering vertonen door gescheiden van andere schapen te staan of niet onmiddellijk andere schapen te volgen.</li>
	<li>Wanneer het dier wordt benaderd, kan het weglopen en instorten, of het stort in op de vloer wanneer het wordt behandeld. Dwangmatig met de klok mee of tegen de klok in cirkelen kan worden gezien bij schapen met atypische scrapie.</li>
</ol>3. Dreigingsrespons testen
<ol><li>Houd het hoofd van het dier vast om de dreigingsreactie te testen: beweeg de hand of meerdere vingers meerdere keren naar elk oog van het dier om een knipperreactie op te wekken, maar zorg ervoor dat u geen gezichtsharen aanraakt of luchtturbulentie veroorzaakt die het dier kan doen knipperen.</li>
	<li>De dreigingsreactie kan afwezig zijn bij scrapie-getroffen dieren, met name bij schapen met atypische scrapie. Hoewel het testen van de dreigingsrespons de enige craniale zenuwtest is die als onderdeel van het protocol wordt gebruikt, kan visuele inspectie van het gezicht tijdens deze procedure andere tekenen van neurologische tekortkomingen aan het licht brengen die normaal gesproken niet bij scrapie worden gezien, bijvoorbeeld gezichtsverlamming. Als het dier niet knippert als reactie op de dreiging, is het raadzaam om de palpebrale reflex te testen door de oogleden aan te raken om ervoor te zorgen dat het onvermogen van het dier om te knipperen niet wordt veroorzaakt door gezichtsverlamming.</li>
</ol>4. Testen van de Scratch Response
<ol><li>Zorg ervoor dat het dier kalm is tijdens deze procedure, omdat de test niet kan worden geïnterpreteerd bij een worstelend dier.</li>
	<li>Krasgebieden van de rug bij de thoracale, lumbale en sacrale regio's, pauzerend tussen elke krabaflevering.</li>
	<li>Als het dier reageert met ritmische hoofd- of lichaamsbewegingen, of zijn lippen beweegt of likt bij het krabben van een bepaald gebied, herhaalt u de krastest om de reproduceerbaarheid van de krasrespons te bevestigen.</li>
	<li>Een herhaalbare reactie wordt meestal opgewekt bij dieren die pruritisch zijn, wat meestal schapen met klassieke scrapie of geiten met de pruritische vorm van scrapie omvat, maar er is over het algemeen geen reactie bij schapen met atypische scrapie tenzij andere pruritische huidaandoeningen of ectoparasieten aanwezig zijn.</li>
</ol>5. Controleren op wolverlies en huidlaesies
<ol><li>Inspecteer de huid.</li>
	<li>Pruritus als gevolg van scrapie veroorzaakt meestal haaruitval, die op de poll, rug, romp, kant van de borst of buik als gevolg van overmatig wrijven of krabben waar de onderliggende huid normaal lijkt.</li>
	<li>Schaafwonden kunnen later verschijnen als het dier de mogelijkheid heeft om op scherpe voorwerpen te wrijven. Bijtwonden kunnen verschijnen, vooral op de ledematen, als gevolg van overmatig knabbelen aan de ledematen.</li>
</ol>6. Het scoren van Lichaamsvoorwaarde
<ol><li>Beoordeel de lichaamsconditie van het dier door de dorsale en transversale processen van de lumbale wervels te palperen.</li>
	<li>Scrapie kan een progressief verlies van lichaamsconditie veroorzaken waarbij de dwarsprocessen van de lendenwervels gemakkelijk individueel kunnen worden gevoeld en de uiteinden van de processen scherp lijken.</li>
</ol>7. Blinddoeken van het dier
<ol><li>Bedek de ogen van het dier met een capuchon, die kan worden gemaakt met behulp van een niet-doorzichtige zak waarbij een hoek wordt afgesneden om de ademhaling van het dier mogelijk te maken.</li>
	<li>Laat het dier alleen los als er geen veiligheidsproblemen zijn en er geen risico is op letsel als gevolg van een in paniek rakend dier; houd anders de schapen vast en bestudeer de bewegingen van het dier terwijl het dier nog steeds de controle heeft.</li>
	<li>Blinddoeken kan tekenen van een vestibulair systeem of cerebellaire disfunctie verergeren, die kunnen worden verduisterd door het vermogen van het dier om te compenseren door zijn zicht. Verlies van evenwicht, incoördineerdheid of cirkelen kan worden opgewekt, met name bij anders klinisch onopvallende schapen met atypische scrapie.</li>
</ol>8. Beoordeling van de beweging van het dier
<ol><li>Bestudeer de gang- en spierbewegingen van het dier wanneer het vrij beweegt.</li>
	<li>Incoordinatie kan worden gekenmerkt door brede bewegingen van de achterpoten, springen met beide achterpoten of overmatig zwaaien in de achterverblijven, wat kan leiden tot struikelen of kort zitten.</li>
	<li>De aanwezigheid van een hoofdtrilling is vaak subtiel wanneer het dier ongestoord is, maar kan tijdens of na voltooiing van het klinisch onderzoek meer opvallen.</li>
</ol>9. Interpretatie
<ol><li>Overweeg het belang van de bevindingen met betrekking tot scrapie.</li>
	<li>Hoewel de aanwezigheid van individuele tekenen, zoals een herhaalbare reactie op krabben, tremor, abnormaal gedrag, cirkelen, instortende episodes, ataxie of een afwezige dreigingsreactie, verschillende oorzaken kan hebben, is het gecombineerde optreden van twee of meer van deze tekenen zeer suggestief voor scrapie bij schapen of geiten.</li>
</ol>

<ol><li>Benestad, S. L., Arsac, J. N., Goldmann, W., Nöremark, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atypical%2FNor98+scrapie%3A+properties+of+the+agent%2C+genetics%2C+and+epidemiology%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Res.%22%5BJournal%5D)">Atypical/Nor98 scrapie: properties of the agent, genetics, and epidemiology.</a> Vet Res.. 39 (4), 19 (2008).</li>
<li>D'Angelo, A., Maurella, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+clinical+criteria+to+diagnose+scrapie+in+Italy%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+J%22%5BJournal%5D)">Assessment of clinical criteria to diagnose scrapie in Italy.</a> Vet. J. 174 (1), 106-112 (2007).</li>
<li>Eloit, M., Adjou, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BSE+agent+signatures+in+a+goat%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Rec%22%5BJournal%5D)">BSE agent signatures in a goat.</a> Vet. Rec. 156 (16), 523-524 (2005).</li>
<li>Fediaevsky, A., Maurella, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence+of+atypical+scrapie+in+sheep+from+positive+flocks+is+not+higher+than+in+the+general+sheep+population+in+11+European+countries%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">The prevalence of atypical scrapie in sheep from positive flocks is not higher than in the general sheep population in 11 European countries.</a> BMC Vet. Res. 6, 9 (2010).</li>
<li>Healy, A. M., Weavers, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+neurology+of+scrapie+in+Irish+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vet.+Intern.+Med%22%5BJournal%5D)">The clinical neurology of scrapie in Irish sheep.</a> J. Vet. Intern. Med. 17 (6), 908-916 (2003).</li>
<li>Houston, E. F., Gravenor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+signs+in+sheep+experimentally+infected+with+scrapie+and+BSE%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Clinical signs in sheep experimentally infected with scrapie and BSE.</a> 152 (11), 333-334 (2003).</li>
<li>Kittelberger, R., Chaplin, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atypical+scrapie%2FNor98+in+a+sheep+from+New+Zealand%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vet.+Diagn.+Invest%22%5BJournal%5D)">Atypical scrapie/Nor98 in a sheep from New Zealand.</a> J. Vet. Diagn. Invest. 22 (6), 863-875 (2010).</li>
<li>Konold, T., Bone, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associations+of+clinical+signs+and+prion+protein+genotypes+in+British+sheep+with+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Dtsch.+Tier%C3%A4rztl.+Wochenschr%22%5BJournal%5D)">Associations of clinical signs and prion protein genotypes in British sheep with scrapie.</a> Dtsch. Tierärztl. Wochenschr. 116 (11), 380-388 (2009).</li>
<li>Konold, T., Bone, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scrapie+in+goats%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Rec%22%5BJournal%5D)">Scrapie in goats.</a> Vet. Rec. 161 (11), 395-396 (2007).</li>
<li>Konold, T., Bone, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pruritus+is+a+common+feature+in+sheep+infected+with+the+BSE+agent%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">Pruritus is a common feature in sheep infected with the BSE agent.</a> BMC Vet. Res. 4, 16 (2008).</li>
<li>Konold, T., Bone, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+clinical+signs+in+goats+with+transmissible+spongiform+encephalopathies%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">Monitoring of clinical signs in goats with transmissible spongiform encephalopathies.</a> BMC Vet. Res. 6, 13 (2010).</li>
<li>Konold, T., Davis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+findings+in+two+cases+of+atypical+scrapie+in+sheep%3A+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">Clinical findings in two cases of atypical scrapie in sheep: a case report.</a> BMC Vet. Res. 3, 1 (2007).</li>
<li>Passler, T., Walz, P. H., Pugh, D. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPassler%2C+T+%22Diseases+of+the+Neurologic+System.+In%3A+Sheep+and+Goat+Medicine%22">Diseases of the Neurologic System. In: Sheep and Goat Medicine</a>. Pugh, D. G., Baird, A. N. , 2, W.B.Saunders. Saint Louis. 361-405 (2012).</li>
<li>Russel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body+condition+scoring+of+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22In+Pract%22%5BJournal%5D)">Body condition scoring of sheep.</a> In Pract. 6 (3), 91-93 (1984).</li>
<li>Simmons, H. A., Simmons, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atypical+scrapie+in+sheep+from+a+UK+research+flock+which+is+free+from+classical+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">Atypical scrapie in sheep from a UK research flock which is free from classical scrapie.</a> BMC Vet. Res. 5, 8 (2009).</li>
<li>Simmons, M. M., Konold, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+atypical+scrapie+phenotype+is+preserved+on+experimental+transmission+and+sub-passage+in+PRNP+homologous+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">The natural atypical scrapie phenotype is preserved on experimental transmission and sub-passage in PRNP homologous sheep.</a> BMC Vet. Res. 6, 14 (2010).</li>
<li>Spiropoulos, J., Lockey, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+prion+with+BSE+properties+from+farmed+goat%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Isolation of prion with BSE properties from farmed goat.</a> Emerg. Infect. Dis. 17 (12), 2253-2261 (2011).</li>
<li>Ulvund, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aUlvund%2C+MJ+%22Clinical+Findings+in+Scrapie.+In%3A+Prions+in+humans+and+animals%22">Clinical Findings in Scrapie. In: Prions in humans and animals</a>. Hörnlimann, B., Riesner, D., Kretzschmar, H. , de Gruyter. Berlin. 398-407 (2006).</li>
</ol>

Alle procedures met betrekking tot dieren werden uitgevoerd in overeenstemming met de Animal (Scientific Procedures) Act 1986, onder licentie van het Britse ministerie van Binnenlandse Zaken. De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

Scrapie is een geregistreerde ziekte van de Wereldgezondheidsorganisatie voor diergezondheid (OIE), die, bij gebrek aan een snelle en betrouwbare ante mortemtest, afhankelijk is van het vermogen van de boeren of dierenartsen om de klinische symptomen van deze ziekte te herkennen. De meeste scrapiegevallen, met name atypische scrapiegevallen, worden momenteel echter aangetroffen door gerichte TSE-surveillance, d.w.z. door hersenonderzoek van kleine herkauwers die worden geslacht of dieren van gestorven dieren. Het fokken van schapen voor resistentie tegen klassieke scrapie, waardoor het aantal klassieke scrapiegevallen afneemt, verminderde hoogstwaarschijnlijk ook het bewustzijn van mensen voor de ziekte, zodat het minder vaak wordt overwogen in de differentiële diagnose van neurologische aandoeningen bij schapen. Atypische scrapie heeft ook een lage prevalentie met ongeveer vijf gevallen in slachthuizen en acht gevallen in gestorven dieren per 10.000 geteste in Europa4. Bovendien wordt pruritus, meestal duidelijk als alopecia met of zonder excoriatie, vaak beschouwd als een kenmerkend teken van scrapie13. Een neurologische ziekte zonder gelijktijdige pruritus zoals waargenomen in atypische scrapie12 of de niet-puritische vorm van caprine scrapie11 mag dus geen vermoeden van scrapie wekken.
Dit onderzoeksprotocol was bedoeld om klinische symptomen van TSE bij schapen te identificeren door specifieke klinische symptomen te evalueren die verband houden met verschillende soorten scrapie (atypische en klassieke scrapie, de laatste vertegenwoordigd door een atypisch BSE-geïnensuleerd schaap, dat klassieke scrapie-achtige tekenen vertoonde). In klassieke scrapie varieerde het percentage gevallen dat een positieve krasrespons ("knabbelreflex") vertoonde van 50-77 bij meer dan 100 onderzochte schapen5,8. Bewegingsstoornissen kunnen worden waargenomen in maximaal 81% van de klassieke scrapiegevallen op basis van verschillende studies18. Incoordinatie is ook een belangrijk teken in verschillende natuurlijk voorkomende gevallen van atypische scrapie, vaak vergezeld van gedragsveranderingen1, maar aanvullende tekenen die zowel bij natuurlijk als experimenteel geïnfecteerde atypische scrapieschapen werden gemeld, cirkelden rond en visuele beperking12,15,16, daarom is blinddoeken en het testen van de dreigingsrespons opgenomen in het onderzoeksprotocol. Het scoren van de lichaamsconditie, bijvoorbeeld met behulp van een 6-punts scoresysteem14, maakt evaluatie van vermagering mogelijk, die kan worden waargenomen bij schraapgeschaafde schapen5. Hoewel eerder klinische criteria zijn voorgesteld om scrapie bij schapen te helpenopsporen 2, hadden deze alleen betrekking op de detectie van klassieke scrapie en werd rekening gehouden met de klinische geschiedenis, die mogelijk niet beschikbaar is als dieren in een slachthuis worden aangeboden.
Het huidige protocol maakt het mogelijk om veel dieren binnen korte tijd te screenen op tekenen van scrapie. Bovendien kan het onderzoeksprotocol worden toegepast op experimentele studies van scrapie bij schapen en geiten om het klinische begin, de progressie en het eindpunt te monitoren. Het vervangt echter geen meer gedetailleerd lichamelijk en neurologisch onderzoek door een passende registratie van de klinische voorgeschiedenis, eventueel gevolgd door aanvullende diagnostische tests (onderzoek van bloed en hersenvocht; indien van toepassing geavanceerdere beeldvormingstechnieken), die later nodig kunnen zijn om verschillende andere aandoeningen bij kleine herkauwers met vergelijkbare symptomen uit te sluiten , zoals metabole of inflammatoire neurologische ziekten, hersenabces of tumoren.
Hoewel een klinisch onderzoek over het algemeen minder gevoelig is bij het opsporen van met TSE getroffen dieren dan postmortemtests op basis van detectie van prioneiwit2,11, met name in een vroeg stadium van de incubatieperiode, is dit momenteel de enige detectiemethode bij levende dieren en het meest relevant voor die landen die geen gericht bewakingssysteem hebben om door TSE getroffen kleine herkauwers te identificeren.

Scrapie is een overdraagbare spongiforme encefalopathie (TSE) van schapen en geiten, die behoort tot de groep van eiwitmisplooiingsstoornissen, zoals boviene spongiforme encefalopathie (BSE) bij runderen, chronische verspillingsziekte bij herten en de ziekte van Creutzfeldt-Jakob bij mensen. De diagnose wordt post mortem gesteld door de abnormale vorm van het prion-eiwit te detecteren, dat eiwitresistent is, meestal in de hersenen. Er kunnen twee belangrijke natuurlijk voorkomende scrapievormen worden onderscheiden, die epidemiologisch, pathologisch en biochemisch verschillend zijn: klassieke scrapie en atypische scrapie. Bovendien kan een neurologische ziekte met klassieke scrapie-achtige klinische symptomen worden geïnduceerd bij schapen en geiten door experimentele infectie met hetBSE-agens 6,10-11. In feite is bij geiten de diagnose natuurlijk voorkomende BSE vastgesteld3,17. Bestrijding van klassieke scrapie (en BSE bij schapen als het van nature voorkwam) is bereikt door te fokken op genetische resistentie gericht op het prion-eiwitgen, maar dit is moeilijker voor atypische scrapie, waarvan wordt aangenomen dat het een sporadische ziekte is en is gediagnosticeerd in landen die als vrij van klassieke scrapie worden beschouwd, bijvoorbeeld Nieuw-Zeeland7.
Scrapie is een neurologische ziekte van volwassen schapen en geiten die resulteert in veranderingen in gedrag, gevoel en beweging, maar de ziekte is langzaam progressief en klinische symptomen worden vaak niet herkend omdat de dierenverzorger of dierenarts mogelijk niet bekend is met de klinische symptomen, of scrapie wordt helemaal niet overwogen in de differentiële diagnose van neurologische ziekten bij kleine herkauwers.
Het voorgestelde onderzoeksprotocol was bedoeld om te helpen bij de klinische diagnose van scrapie met twee doelen in gedachten: het moet aanzienlijk kort zijn om het scannen van veel dieren binnen een korte periode mogelijk te maken, maar specifiek genoeg om de detectie van door scrapie aangetaste dieren mogelijk te maken, wat wordt bereikt door de aanwezigheid van klinische symptomen te beoordelen die vaak worden aangetroffen bij scrapie-getroffen dieren. Dit protocol is een kleine wijziging ten opzichte van het protocol dat wordt gebruikt om geiten te controleren op tekenen van klassieke scrapie11 en omvat blinddoeken van het dier, wat klinische symptomen kan verergeren die normaal gesproken niet geassocieerd zijn met scrapie9.

klinisch onderzoeksprotocol om atypische en klassieke scrapie bij schapen op te sporen

Clinical Examination Protocol to Detect Atypical and Classical Scrapie in Sheep

De diagnose van scrapie, een overdraagbare spongiforme encefalopathie (TSE' s) van schapen en geiten, is momenteel gebaseerd op de detectie van ziektegeassocieerd prioneiwit door middel van postmortale tests. Tenzij een aselecte steekproef van de schapen- of geitenpopulatie actief wordt gecontroleerd op scrapie, is de identificatie van scrapiegevallen afhankelijk van de melding van klinische verdachten, die afhankelijk is van de bekendheid van het individu met de ziekte en het vermogen om klinische symptomen geassocieerd met scrapie te herkennen. Scrapie kan niet worden overwogen in de differentiële diagnose van neurologische ziekten bij kleine herkauwers, met name in landen met een lage scrapieprevalentie, of niet worden erkend als het zich voordoet als niet-puritische vorm zoals atypische scrapie. Om te helpen bij de identificatie van klinische verdachten, wordt een kort onderzoeksprotocol gepresenteerd om de weergave van specifieke klinische symptomen in verband met pruritische en niet-puritische vormen van TSE's bij schapen te beoordelen, die ook op geiten kunnen worden toegepast. Dit omvat beoordeling van gedrag, zicht (door het testen van de dreigingsrespons), pruritus (door de reactie op krabben te testen) en beweging (met en zonder blinddoeken). Dit kan leiden tot een meer gedetailleerd neurologisch onderzoek van het melden van dieren als scrapie verdachten. Het kan ook worden gebruikt in experimentele TSE-studies van schapen of geiten om de progressie van de ziekte te evalueren of om klinisch eindpunt te identificeren.

Klinisch gezonde schapen. Poll Dorset wether van een scrapievrije kudde intracerebrally ingeënt met runderhersenen van Nieuw-Zeelandse oorsprong en onderzocht na 49 maanden na de inenting. Dit schaap heeft een normale houding, gedraagt zich normaal, vertoont een normale dreigingsreactie(figuur 1),reageert niet op de krastest, heeft een intact vlies en een zeer goede lichaamsconditie. Het is klinisch onopvallend wanneer geblinddoekt en vertoont geen tekenen van een bewegingsstoornis.
Atypische scrapie schapen presenteren met de niet-puritische vorm van TSE's bij schapen. Cheviot wether van een scrapievrije kudde intracerebrally ingeënt met hersenhomogenaat uit een atypisch scrapieveldgenotype van hetzelfde prioneiwitgenotype (AHQ/AHQ) en onderzocht na 36 maanden na inenting. Dit schaap heeft ook een normale houding maar gedraagt zich anders dan de andere schapen in de hok en cirkelt met de klok mee. Het knippert niet wanneer de dreigingsrespons wordt getest. Krabben roept geen reactie op en er zijn geen vachtveranderingen zichtbaar, maar de lichaamsconditie is alleen eerlijk. Het cirkelt met de klok mee wanneer geblinddoekt (figuur 2) en verliest evenwicht. De gang is ataxisch en een fijne hoofdtrilling is zichtbaar.
Atypische BSE-schapen met de pruritische vorm van TSE's bij schapen, die klinisch vergelijkbaar is met de klinische presentatie van klassieke schraapgeschaapte schapen. Om deze reden is een klassieke scrapie-case niet inbegrepen. Poll Dorset wether van een scrapievrij koppel intracerebrally ingeënt met boviene atypische (L-type) BSE-hersenhomogenaat en onderzocht na 50 maanden na de inenting. Dit schaap staat enigszins gebocheld, heeft de neiging om de achterpoten breed te houden en valt op de vloer wanneer ze worden gevangen. De dreigingsreactie is zwak. Krabben aan verschillende delen van de rug roept hoofd- of lipbewegingen op(figuur 3),en er is wolverlies met een klein huidtrauma op de poll. De conditie van het lichaam is goed. Geblinddoekt is het terughoudend om te bewegen en rust het zijn achterste op de hindernis om het evenwicht te behouden. Het schaap is ataxisch en vertoont hypermetria van de voorpoten.
<img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51101/51101fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51101/51101fig1.jpg"> Figuur 1. Dreigingsreactie testen. Dreigend gebaar naar het oog van het dier veroorzaakt een knipperreactie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51101/51101fig1highres.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken.</a>
<img alt="Figure 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51101/51101fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51101/51101fig2.jpg"> Figuur 2. Blinddoeken. Het cirkelen met de wijzers van de klok mee ontlokte door de schapen met een kap te blinddoeken. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51101/51101fig2highres.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken.</a>
<img alt="Figure 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51101/51101fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51101/51101fig3.jpg"> Figuur 3. Testen van de krasrespons. Krabben aan de rug roept lip likken met zijwaartse bewegingen van het hoofd <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51101/51101fig3highres.jpg" target="_blank">Klik hier om grotere afbeelding te bekijken.</a>

Een kort protocol voor klinisch onderzoek wordt gepresenteerd om te helpen bij de detectie van klassieke en atypische scrapie bij schapen en geiten.

Klinisch onderzoeksprotocol om atypische en klassieke scrapie bij schapen op te sporen

The diagnosis of scrapie, a transmissible spongiform encephalopathy (TSEs) of sheep and goats, is currently based on the detection of disease-associated ...

Scrapie is een overdraagbare spongiforme encefalopathie bij schapen en geiten, die neurologische symptomen veroorzaakt bij aangedane dieren. De bevestiging van de ziekte vindt post-mortem plaats door onderzoek van de hersenen, wat ook classificatie mogelijk maakt in verschillende vormen van scrapie: klassieke scrapie, atypische scrapie en in zeldzame gevallen andere vormen die zijn overgedragen van andere soorten, zoals bovine spongiforme encefalopathie (BSE). Scrapie is een door de Wereldorganisatie voor diergezondheid vermelde ziekte, maar de ziekte wordt vaak niet herkend bij aangedane kleine herkauwers.Deze video demonstreert een kort klinisch onderzoeksprotocol van ongeveer vijf minuten om te helpen bij de detectie van klinische gevallen die zijn getroffen door overdraagbare spongiforme encefalopathieën, met drie schapen als voorbeeld. Voorbeeld één is een klinisch gezond schaap dat cerebraal is geïnoculeerd met BSE-vrij runderbrein-homogenaat, onderzocht op 49 maanden na inoculatie, wat dient als controle.Voorbeeld twee is een klinisch aangetast schaap dat cerebraal is geïnoculeerd met atypisch scrapy-ovine breinhomogenaat en is onderzocht 36 maanden na inoculatie, wat een geval van atypische scrapy vertegenwoordigt. Voorbeeld drie is een klinisch aangetast schaap dat is geïnoculeerd met atypisch BSE-bovien breinhomogenaat en is onderzocht 50 maanden na inoculatie, wat klinisch vergelijkbaar is met klassieke scrapy. Om deze reden is een geval van klassieke scrapy niet opgenomen.Beoordeling van de houding. Het gezonde schaap met oormerk nummer één, aangegeven door de rode pijl, vertoont een normale houding wanneer het ongestoord in de pen is. De houding van het schaap met atypische scrapy lijkt ook normaal.Het schaap met atypische BSC lijkt licht gebogen en heeft de neiging om mank te lopen met de achterpoten. Bij een brede beoordeling van het gedrag, zoals verwacht bij normale schapen, blijft het gezonde schaap in de groep en volgt het de bewegingen van de onderzoeker. Bij het benaderen en vangen van het schaap, gezien zijn grootte, worden er geen abnormaliteiten vastgesteld.Het atypische schaap met scrapy gedraagt zich anders dan de andere schapen in de ren en staat met de achterzijde naar de camera, terwijl alle andere schapen naar de camera kijken. Schapen zijn sociale dieren die in groepen bewegen, maar dit schaap volgt de andere schapen niet onmiddellijk en lijkt traag te beseffen dat de andere schapen met de klok mee zijn weggegaan. Cirkelen wordt opgewekt na onderzoek van dit schaap.Dit compulsieve gedrag stopt pas wanneer het schaap wordt benaderd en wegrent. Schapen met atypische BSC vallen op de grond wanneer ze worden gehanteerd nadat ze zijn gevangen. Testen van de dreigingsrespons door de hand of meerdere vingers herhaaldelijk naar elk oog van het dier te bewegen, zonder gezichtsbeharing aan te raken of luchtverplaatsing te veroorzaken.Turbulentie zou knipperen moeten uitlokken, zoals waargenomen bij beide ogen en bij het gezonde schaap. De respons van de man is afwezig bij het schaap met atypische scrapy, dat niet knippert. Hoewel het vermogen om te knipperen wanneer de oogleden worden aangeraakt niet is aangetast.Het atypische BSE-schap knippert als reactie op de dreiging, maar de knipperrespons is in het linker oog zwakker in vergelijking met de knipperrespons. Wanneer het ooglid wordt aangeraakt en de krasrespons wordt getest, worden de tests hier uitgevoerd terwijl het schaap naast een muur staat en wordt voorkomen dat het naar voren ontsnapt door één been van de onderzoeker; het schaap is rustig genoeg om met de test door te gaan. Er worden hier verschillende delen van de rug gekrast: de sacrale, lumbale, thoracale, mid-thoracale en craniale thoracale regio's, met een pauze tussen elke krasepisode om de respons te observeren.Dit klinisch gezonde schaap vertoont geen reproduceerbare stereotiepe respons. Evenzo reageert het schaap met atypische scrapy niet op het krabben van verschillende delen van de rug. Er wordt echter wel een respons opgewekt wanneer het schaap met atypische BSC wordt gekrabd.Afhankelijk van het gebied dat wordt bekrast, reageert het dier met knabbelende bewegingen van de lip of met hoofdbewegingen. Deze respons wordt beschouwd als een positieve controle op wandverlies en huidlaesies. Uitgebreide gebieden met wandverlies, met of zonder huidlaesies, kunnen meestal van een afstand worden waargenomen, maar een nauwkeuriger onderzoek van het schaap tijdens de fixatie kan kleinere gebieden van wandverlies identificeren die zijn veroorzaakt door overmatige pruritus.Deze gebieden bevinden zich vaak op de kop, rug, kruis en aan de zijkant van de thorax of abdomen, vaak bilateraal symmetrisch. Hoewel er bij de controeschapen en de schapen met atypische scrapy geen haarverlies is vastgesteld, is het schaap met atypische BSC de wol op de rug verloren. De huid is verder intact, afgezien van een klein korstje dat is ontstaan na beschadiging van de huid.Dit kan veroorzaakt zijn door een overmatige pruritus-score van de lichaamoconditie. De lichaamconditie van het dier wordt gescoord door de transversusprocessen en processus dorsales van de lumbale wervels te palperen. Dit kan ook gebeuren tijdens het krabtestonderzoek van de schapen.Er kan een score van nul tot vijf worden gebruikt, waarbij een vijf wordt toegekend aan een zeer obese schaap. Dit is weergegeven in de getekende afbeelding van een dwarsdoorsnede door de lumbale wervelkolom. De uitsteeksels van de wervels zijn bedekt met spieren in het rood en vetweefsel in het geel, en het zou onmogelijk zijn om de uiteinden van de dwarsuitsteeksels te vullen, zelfs niet wanneer er druk op de huid wordt uitgeoefend.In tegenstelling hiermee is de lichaamsconditie slecht. Als de uiteinden van de doornuitsteeksels scherp aanvoelen, waarbij elke druk wordt waargenomen en er geen overliggende weefsellaag voelbaar is zoals gedemonstreerd in deze afbeelding, wordt dit gescoord als nul.De lichaamconditie is zeer goed bij de klinisch gezonde schapen met een score van vier; atypische scrapie veroorzaakte een verslechtering van de lichaamconditie, die slechts redelijk is met een score van twee. Daarentegen heeft het schaap met atypische BSC een goede lichaamconditie-score van drie behouden. Bij het blinddoeken van het dier wordt de kop van het schaap hier bedekt met een handgemaakte blinddoek, wat elke niet-C3 zak kan zijn waarbij één hoek is afgesneden bij de neus van het dier om ademhaling mogelijk te maken; zorg ervoor dat het veilig is voor het dier voordat u het schaap loslaat.Sommige schapen kunnen in paniek raken en gaan rennen of springen, waardoor ze zichzelf of anderen kunnen verwonden. Laat het schaap in dat geval niet volledig los en bestudeer de bewegingen van het dier terwijl u het nog vasthoudt. Het gezonde schaap blijft rustig en geblinddoekt, maar schudt met de kop in een poging de blinddoek te verwijderen.De beweging of het evenwicht is niet verstoord. Daarentegen begint het schaap met atypische scrapie in een rechtsomwaartse richting te cirkelen. Er is tevens sprake van balansverlies.Het schaap met atypische BSC is terughoudend om te bewegen en leunt tegen het hek, maar terwijl het dit doet, kruist het zijn vier poten en is er een duidelijk verlies van balans zichtbaar. Bij de beoordeling van de beweging van het dier lijkt de gang bij het klinisch gezonde schaap normaal. Er is geen duidelijke tremor aanwezig, noch wanneer het schaap ongestoord wordt gelaten, noch eerder tijdens de hantering.Ataxie is aanwezig bij het schaap met atypische scrapie. Het schaap glijdt uit wanneer het de andere schapen volgt en de bewegingen van de achterpoten lijken ongecoördineerd; daarnaast is kortstondig een fijne tremor van de kop waarneembaar wanneer het schaap in de groep staat.Een textuur is ook zichtbaar bij het schaap dat is aangemerkt met atypische BSE. Er is sprake van een verlies van coördinatiebalans en hypermetrie, zoals te zien is aan de hoogstappende gang bij het vallen. Interpretatie van de gang.Klinische tekenen bij schapen die zijn getroffen door transmissibele spongiforme encefalopathieën omvatten abnormaal gedrag, het ontbreken van een dreigreflex, een positieve krasreflex, alopecia, huidbeschadiging, cirkelen bij blinddoekjes, coördinatiestoornissen en tremoren; één of meer van deze tekenen worden in de hier gepresenteerde casus getoond. Het optreden van een van deze symptomen moet de onderzoeker alert maken, waarbij scrape moet worden overwogen als een van de mogelijke oorzaken. Conclusie. Deze video toont het protocol voor het klinische onderzoek dat wordt uitgevoerd op een klinisch gezond schaap en geeft voorbeelden van abnormale bevindingen bij schapen die zijn getroffen door transmissibele spongiforme encefalopathieën.Dit protocol is nuttig voor het detecteren van klinisch verdachte gevallen, die gedetailleerder onderzocht kunnen worden om andere ziekten met een vergelijkbare klinische presentatie uit te sluiten, of gebruikt kunnen worden om het klinische begin, de progressie van de ziekte of klinische eindpunten te beoordelen bij experimentele studies naar overdraagbare spongiforme encefalopathieën bij kleine herkauwers.

clinical-examination-protocol-to-detect-atypical-classical-scrapie

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Aaseters hebben potentieel om besmettelijke overdraagbare spongiforme encefalopathie prionen translokeren in hun uitwerpselen te ziektevrije gebieden. We detail methoden die worden gebruikt om te bepalen of de muis aangepast scrapie prionen infectieus blijven na passage al is het spijsverteringskanaal van de Amerikaanse kraaien (Corvus brachyrhynchos), een gemeenschappelijke consument van dode dieren.

Procedures voor het identificeren van Besmettelijke Prions na passage door het spijsverteringsstelsel van een vogelsoort

Het meten van de barrière voor de overdracht van prionziekten tussen soorten is een uitdaging en omvat meestal dierproeven of biochemische analyses. Hier presenteren we een in vitro prion-eiwitconversietest met de mogelijkheid om soortenbarrières te voorspellen.

Het beoordelen van overdraagbare spongiforme encefalopathie Soort Barrières met een<em&gt; In Vitro</em&gt; Prioneiwit Conversie Assay

Hier presenteren we een protocol om te beschrijven van een eenvoudige, snelle en efficiënte prion amplificatie techniek, de real-time schokkend-geïnduceerde conversie (RT-QuIC) methode.

Real-time schokkend-geïnduceerde conversie Assay voor het opsporen van CWD prionen in fecaal materiaal

De directe Rapid immunohistochemische test (DRIT) biedt een Wereldorganisatie voor diergezondheid en Wereldgezondheidsorganisatie (OIE/WHO) erkend alternatief voor de direct fluorescent antilichaam (DFA) test voor de diagnose van rabiës. Deze test maakt het mogelijk voor veld-gebaseerde toepassingen die kunnen worden uitgevoerd in ongeveer 1 h na hersen vertoningen met behulp van Lichtmicroscopie.

Verbeterde bewaking van rabiës met behulp van een directe snelle immunohistochemische test

Het doel van dit protocol is om in kleine en grote dieren veilige obductie-technieken aan te tonen voor het verkrijgen van bevredigende weefselmonsters voor rabiës testen.

Rabiës necropsy technieken in grote en kleine dieren

We presenteren een compleet protocol voor postmortem diagnose van dierlijke hondsdolheid onder veldomstandigheden met behulp van een snelle immunochromatografische diagnostische test (RIDT), van hersenbiopsie bemonstering tot uiteindelijke interpretatie. We beschrijven ook verdere toepassingen met behulp van het apparaat voor moleculaire analyse en virale genotypering.

Field Postmortem Rabies Rapid Immunochromagrafische Diagnostische Test voor Resource-Limited Settings met verdere moleculaire toepassingen

Immunolabeling van abnormaal prioneiwit met behulp van immunohistochemieprotocollen vereist specifieke monster- en anti-PrP-antilichaamvoorbereidingsmethoden. Het huidige protocol beschrijft de belangrijkste stappen in epitoopontmaskering om te zorgen voor een goede PrP-immunolabeling en om niet-specifieke achtergrondkleuring te minimaliseren. Ook houdt deze benadering rekening met bioveiligheidsmaatregelen bij het uitvoeren van immunohistochemische studies met de prion-geïnfecteerde weefsels.

Detectie van abnormaal prioneiwit door immunohistochemie

Experimentele auto-immuun encefalomyelitis is een van de meest gebruikte muizenmodellen van multiple sclerose. In het huidige protocol worden C57BL/6J-muizen van beide geslachten geïmmuniseerd met myeline-oligodendrocytglycoproteïnepeptide, wat voornamelijk resulteert in oplopende parese van de staart en ledematen. Hier bespreken we het protocol van EAE-inductie en -evaluatie.

Modellering van multiple sclerose bij de twee geslachten: MOG35-55-geïnduceerde experimentele auto-immuun encefalomyelitis

Dit protocol demonstreert de pan-lyssavirus LN34 real-time reverse transcriptie-polymerasekettingreactie (RT-PCR)-assay van weefselverzameling tot resultaatinterpretatie, inclusief updates van primersequenties en formuleringen om de testprestaties voor sommige niet-rabiës, lyssavirussen en lagomorfen te verbeteren. We demonstreren ook de testopstelling voor een LN34 multiplexed (LN34M) formaat met één put.

Postmortale diagnose van hondsdolheid bij dieren door de bijgewerkte, gemultiplexte LN34 real-time reverse transcriptie-polymerasekettingreactietest

Een methode om veelgebruikte gebieden in laboratoriumomgevingen te beoordelen op prionverontreiniging en effectieve ontsmetting ontbreekt. Het hier beschreven protocol biedt de belangrijkste basisprincipes voor het implementeren van een prionveiligheidstest in het laboratorium die eenvoudig kan worden aangepast aan de individuele behoeften van specifieke laboratoria.

Prion Veiligheid Laboratorium Swipe-test

Leer een klinisch onderzoeksprotocol om atypische en klassieke scrapie bij schapen op te sporen met gedrags- en neurologische tests. Deze methode verbetert vroegtijdige detectie van TSE's in kleine herkauwers.

Klinisch onderzoeksprotocol om atypische en klassieke scrapie bij schapen op te sporen

Meer video's verkennen