Name: Opzet en werking van een continue 13 C 15 N Labeling Kamer voor Uniform of Differentieel, Metabole en structurele, Plant isotooplabelen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-16T14:15:00.000+00:00
Duration: 10 min 16 s
Description: Leer hoe u een continue 13C 15N isotopenlabelingskamer bouwt en bedient voor uniforme of differentiële labeling van plantenweefsels. Deze methode maakt nauwkeurige metabole en structurele studies mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Speciale dank aan de Plant Groeifaciliteit en EcoCore analytische faciliteit in Colorado State University en de vele studenten en docenten die aan dit project geholpen. Dit werk wordt gefinancierd door de NSF DEB subsidie ​​# 0918482, USDA National Needs Fellowship, en de Cotrufo-Hoppess fonds voor bodemecologie onderzoek.

1. Kamer Bouw <ol><li> Construeer de etikettering kamer in een kas te zorgen voor een maximale lichtinval potentieel voor de groei van planten. Zorg ervoor dat er voldoende voeding is beschikbaar voor alle kameronderdelen macht. </li><li> Construeer de etikettering kamer door montage 3,175 mm dik transparant acryl muren (polycarbonaat zou ook geschikt zijn) en een 6,35 mm dik transparant acryl plafond op een aluminium frame met een wit geschilderde stalen vloer aan zonnereflectie maximaliseren. De afmetingen van de kamer kan worden afgestemd op de individuele behoeften onderzoek. </li><li> Monteer de kamer op ¾ in (19 mm) multiplex op sintelblokken. </li><li> Boor gaten in het acrylglas, aluminium frame en stalen vloer en het gebruik schroeven om alle onderdelen samen vast. </li><li> Dicht alle naden met siliconenkit om een ​​luchtdichte afdichting te verzekeren. </li><li> Construeer een deur door de montage van een gedeelte van de acryl panelen op lange schroeven, die kan worden vastgeschroefd met behulp van removable vleugelmoeren. </li><li> Verzegeling van de deur met tochtstrip aan de lucht lekkage te voorkomen. </li><li> Selecteer een gebied direct grenzend aan de kamer als het controle centrum om alle temperatuur, luchtvochtigheid, CO 2-regelaars, en bewakingsapparatuur monteren. </li><li> Boor voorzichtig kleine gaatjes in de kamerwand grenzend aan het controlecentrum voor alle elektrische draden en gas leidingen. Gebruik siliconenkit om de gaten rond alle kabels en leidingen af ​​te dichten aan de lucht lekkage te voorkomen. </li><li> Test de kamer voor luchtlekken door deze te vullen met een hoog niveau van CO 2 (bijvoorbeeld 800 ppm) en laten zitten &#39;s nachts. Indien de CO2-concentratie in de kamer wordt gehandhaafd op het oorspronkelijke niveau dan is het luchtdicht. Als de concentratie daalt &#39;s nachts dan alle naden moeten worden onderzocht en opnieuw afgedicht met siliconenkit tot een luchtdichte afdichting wordt bereikt. </li><li> Voor sommige planten die zijn aangepast aan hoge licht omstandigheden, toe te voegen verlichting aangesloten op een timer om de onmiddellijke buitenomgeving van de cHamber aan lichtinval en productiviteit van de vegetatie te verhogen. </li></ol> 2. Temperatuur en vochtigheid Controls <ol><li> Reguleren kamertemperatuur door het installeren van een commerciële split type airconditioner met de koeling (verdamper) spoelen zich in de kamer en de compressor en de condensor spoelen buiten de kas om de warmte af te voeren gevestigd. Zet de airconditioner op de gewenste temperatuur te handhaven. </li><li> Gebruik een kleine kamer ontvochtiger om de luchtvochtigheid te beheersen in de kamer. <ol><li> Boor een drainage gat door de vloer van de kamer naast de ontvochtiger. </li><li> Verwijder het condensaat verzamelaar uit de ontvochtiger, en sluit een afvoerslang van de ontvochtiger via de drainage gat in de vloer van de kamer. </li><li> Onder de kamer, plaatst een open pot gevuld met water voor de ontvochtiger direct afwateren in. Dit zorgt voor een luchtdichte afsluiting, maar ook zorgen voor drukevenwicht. </li></ol></li><li&gt; Installeer een controller, zoals de Omega iSeries-controller, in het control center met een vochtsensor in de kamer. <ol><li> Sluit de controller aan op de luchtdrogingsinstallatie met een solid-state relais en stel de vochtigheid controller met een hoog alarm en swing om optimale groeiomstandigheden in de kamer te houden. Optimale temperatuur en vochtigheid zal verschillen voor verschillende plantensoorten. </li></ol></li></ol> 3. CO 2 Controls <ol><li> De 13 C-CO 2 verrijking wordt bereikt met behulp van twee zuivere CO 2 gastanks, een van 10 atoom% 13 C-CO 2 of hoger en een van 1.1 atoom% 13 C-CO 2 (natuurlijke overvloed). </li><li> Monitor de CO 2-concentratie door het hebben van een membraanpomp continu kamer lucht door een infrarood Gas Analyzer (Irga) en dan pomp de lucht terug in de kamer, dus een gesloten systeem (figuur 1) behoud. </li><li> Seta laag alarm en dode band op de irgA software om de CO 2-concentraties in een gewenste bereik te houden. Hier gebruiken we een lage alarm van 360 ppm met een 40 ppm dode band om de CO 2 concentraties van 360-400 ppm te houden. </li><li> Sluit een doseerventiel aan elke tank en zorgvuldig te passen aan de doelgroep 13 C verrijking niveau te bereiken. Zet de tank regelgevers om 20 psi. </li><li> Plaats een magneetventiel tussen de doseerventiel en de regulator van elke tank. Word lid van de uitlaten van de twee maatkleppen elkaar en pijp ze in het midden van de kamer. Sluit een halfgeleiderrelais de irgA uitgang de magneetventielen (figuur 1) besturen. </li></ol> 4. Web-based Remote Monitoring System <ol><li> Monitor CO 2-concentraties van de irgA software door in te loggen naar een lokaal bestand elke 30 sec. </li><li> Maak een aangepast programma (bijvoorbeeld in perl of een andere programmeertaal) te halenvermeldingen vanuit de lokale CO 2 logbestand, samen met de huidige laptop tijdstempel, en upload deze naar een back-end web applicatie. </li><li> Stel de webapplicatie om de temperatuur en vochtigheid sensor data opvragen. </li><li> Gebruik een monitoringsysteem om de status van de temperatuur in de kamer om de vijf minuten om potentiële temperatuur pieken die de planten zou vernietigen als de airconditioning niet te voorkomen controleren. </li><li> Bewaken van de CO 2, temperatuur en vochtigheid op elke standaard web browser, zodat eventuele onverwachte temperatuur spikes of CO 2 druppels onmiddellijk kan worden bijgewoond. </li></ol> 5. Irrigatiesysteem <ol><li> Boor een klein gaatje in de muur van het acrylglas kamer per pot. </li><li> Gebruik irrigatie slang aan een druppelirrigatie ring per pot te creëren en voeden de irrigatie slang door de kamer wand naar buiten. </li><li> Dicht de gaten rond de irrigatie buis met siliconenkitlucht lekkage te voorkomen. </li><li> Aan de buitenkant van de kamer, sluit de irrigatie slang aan op de buis voor een peristaltische pomp. </li><li> Gebruik een kleine slangklem af te sluiten alle irrigatie slang aan luchtlekkage tussen water te voorkomen. </li></ol> 6. Potplanten <ol><li> Selecteer een potmaat geschikt is voor de planten worden geteeld. Hier, 40, 15 L potten gebruikt. </li><li> Maak een bodem gratis potgrond door het mengen van zand, vermiculiet, en het profiel poreus keramisch. </li><li> Test het waterhoudend vermogen van de potgrond door weging van een gevulde pot droog, weken de pot met water en zodat het helemaal uitlekken, en het wegen van de pot nat. Gebruik deze maximale watergehalte om ervoor te zorgen dat overtollige gelabelde kunstmest en water niet lekken uit de potten tijdens het water geven. </li><li> Ontkiemen zaden in potgrond voorafgaand aan het planten ze in de potten. Dit zorgt ervoor dat alleen met succes ontkiemde zaden worden gestart in de etikettering kamer. </li><li> Inoculeren t<html> hij zaailingen met verse grond slurry gunstige microben te introduceren. </li><li> Zodra de zaden ontkiemd, zorgvuldig zaailingen te transplanteren om de potten in het gewenste nummer. </li><li> Eenmaal ingemaakt, verplaatst u de potten in de kamer en monteren elke pot met een individuele irrigatie slang. </li></ol> 7. Het afdichten van de Kamer <ol><li> Wanneer de deur eerste afdichtelement aan de kamer een grote massa van buitenlucht vult de ovenkamer. Scrub uit deze externe CO 2 door het aansluiten van een ademkalk scrubber om de luchtpomp om de CO 2-concentratie schrobben tot minstens 200-250 ppm voor het vullen van de kamer terug naar 400 ppm met behulp van de 13 C-CO 2 tank mengsel. </li><li> Proberen te houden de kamer gesloten door de duur van het groeiseizoen om natuurlijke overvloed CO 2 besmetting te minimaliseren. </li><li> Monitor plantengroei visueel en pas bemesting en irrigatie afhankelijk van de vraag. </li></ol>TITEL &quot;&gt; 8. Bemesting en irrigatie <ol><li> Gebruik een meststofoplossing, zoals een gemodificeerde Hoagland&#39;s oplossing 23 te bemesten door het irrigatiesysteem. </li><li> Label de meststof met 15 N met behulp van een 15 N-KNO 3 subsolution bij de gerichte atoom% 15 N-niveau door het mengen van 98 atoom% 15 N-KNO 3 met natuurlijke overvloed 15 N-KNO 3 (0,37 atoom% 15 N). </li><li> Meng genoeg van de meststofoplossing bij elke fertilisatiegebeurtenis de gehele kamer, op basis van het waterhoudend vermogen van de potgrond. Plaats de juiste hoeveelheid meststof voor een pot in een glazen pot, en bereiden zoals vele potjes er potten. </li><li> Span de irrigatie slangen en leg elk van hen in een pot met de meststof oplossing, en dan sluit ze aan op de peristaltische pomp. </li><li> Waterplanten door het pompen van water door de peristaltische pomp door de individuele infuus irriting slangen regelmatig de planten nodig hebben. </li><li> Bemesting met Hoagland&#39;s oplossing zou de vraag plant of experimenteel ontwerp te volgen, met een toenemende vraag naar voedingsstoffen als de productiviteit van de vegetatie toeneemt om de productiviteit te maximaliseren. </li><li> Eerste, pomp de Hoagland&#39;s oplossing door de irrigatie slang, dan pomp een spoeling met water tot algen en bacteriegroei in de buizen te minimaliseren. </li><li> Span alle slangen na bemesting en irrigatie naar kamer luchtlekken te elimineren. </li></ol> 9. Uniform en Differential Labeling <ol><li> Voor differentiële etikettering van structurele en metabole onderdelen, verwijderen planten uit etikettering kamer 1-3 weken voorafgaand aan de oogst. Planten die uniform worden geëtiketteerd kan continu in de verzegelde etikettering kamer blijven tot de oogst en geïrrigeerd met 15 N-Hoagland&#39;s oplossing. </li><li> Bewaar de verwijderde planten in de kas gedurende deze tijd, zodat ze voldoende licht krijgenen CO 2 op natuurlijke overvloed 13 C. </li><li> Voor differentiële 15 N etikettering, blijven bemesten en irrigeren de planten zoals gewoonlijk, maar maken gebruik van natuurlijke overvloed 15 N-KNO 3 in de Hoagland&#39;s meststof oplossing. </li></ol> 10. Oogst <ol><li> Stop planten water geven 1 week voorafgaand aan de oogst dus planten beginnen te senesce en oppotten medium uitdroogt. </li><li> Open de kamer en zet de potten uit voor onmiddellijke knippen en oogsten van de bovengrondse biomassa </li><li> Giet de potgrond en wortels over een grove zeef. </li><li> Gebruik het scherm te scheiden van de wortels van de potgrond en schud de wortels vrij van potgrond. </li><li> Leg de wortels op een 2 mm zeef en spoel ze af met water om alle resterende potgrond materiaal te verwijderen. Gebruik een pincet om eventuele vermiculiet die kunnen vastklampen aan de wortels te verwijderen. </li><li> Laat wortels aan de lucht drogen in de voorbereiding op toekomstige experimenten. </li></ol><ol><li> Weeg de lucht drogen plantmateriaal etikettering kamer biomassa te bepalen. </li><li> Maal een subgroep voor chemische analyse. </li><li> Breng 2,0 g ovengedroogde (60 ° C) in een nest 125 ml zuur gespoelde kolf en voeg 50 ml gedeïoniseerd water. </li><li> Plaats het monster op een voorverwarmde (60 ° C) roerder plaat en plaats een roerstaaf in de kolf. Zet het roeren 200 tpm en laat het monster gedurende 30 minuten verwarmen. </li><li> Na 30 min. Filtreer het nest oplossing door een 20 urn nylon gaas op een vacuüm filtratie. </li><li> Breng het extract aan een vooraf gewogen zuur gewassen buis en bevriezen. </li><li> Breng het vaste residu nest een vooraf gewogen aluminium pan en droog bij 60 ° C. Weeg pan en strooisel na het drogen aan warm water residu massa te bepalen. </li><li> Freeze droog het warm water extract en weeg tot het extract in warm water massa te bepalen. </li><li> Analyseer de oven gedroogd (60 ° C) nest, gevriesdroogd warm waterextract, en in de oven gedroogd warm water residu in een Elemental Analyzer - isotoop ratio massaspectrometer (EA-IRMS). </li></ol>

<ol><li>Bird, J. A., Torn, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine+roots+vs.+Needles%3A+A+comparison+of+%2813%29C+and+%2815%29N+dynamics+in+a+ponderosa+pine+forest+soil%5BTitle%5D)+AND+%22Biogeochemistry%22%5BJournal%5D)">Fine roots vs. Needles: A comparison of (13)C and (15)N dynamics in a ponderosa pine forest soil.</a> Biogeochemistry. 79, 361-382 (2006).</li>
<li>Bird, J. A., van Kessel, C., Horwath, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilization+of+C-13-carbon+and+immobilization+of+N-15-nitrogen+from+rice+straw+in+humic+fractions%5BTitle%5D)+AND+%22Soil+Sci.+Soc.+Am.+J%22%5BJournal%5D)">Stabilization of C-13-carbon and immobilization of N-15-nitrogen from rice straw in humic fractions.</a> Soil Sci. Soc. Am. J. 67, 806-816 (2003).</li>
<li>Denef, K., Six, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contributions+of+incorporated+residue+and+living+roots+to+aggregate-associated+and+microbial+carbon+in+two+soils+with+different+clay+mineralogy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Soil+Sci%22%5BJournal%5D)">Contributions of incorporated residue and living roots to aggregate-associated and microbial carbon in two soils with different clay mineralogy.</a> Eur. J. Soil Sci. 57, 774-786 (2006).</li>
<li>Rubino, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+input+belowground+is+the+major+C+flux+contributing+to+leaf+litter+mass+loss%3A+Evidences+from+a+C-13+labelled-leaf+litter+experiment%5BTitle%5D)+AND+%22Soil+Biol.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Carbon input belowground is the major C flux contributing to leaf litter mass loss: Evidences from a C-13 labelled-leaf litter experiment.</a> Soil Biol. Biochem. 42, 1009-1016 (2010).</li>
<li>Cotrufo, M. F., Wallenstein, M. D., Boot, C. M., Denef, K., Paul, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Microbial+Efficiency-Matrix+Stabilization+%28MEMS%29+framework+integrates+plant+litter+decomposition+with+soil+organic+matter+stabilization%3A+do+labile+plant+inputs+form+stable+soil+organic+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Glob.+Change+Biol%22%5BJournal%5D)">The Microbial Efficiency-Matrix Stabilization (MEMS) framework integrates plant litter decomposition with soil organic matter stabilization: do labile plant inputs form stable soil organic matter.</a> Glob. Change Biol. 19, 988-995 (2013).</li>
<li>Mambelli, S., Bird, J. A., Gleixner, G., Dawson, T. E., Torn, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+contribution+of+foliar+and+fine+root+pine+litter+to+the+molecular+composition+of+soil+organic+matter+after+in+situ+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Geochem%22%5BJournal%5D)">Relative contribution of foliar and fine root pine litter to the molecular composition of soil organic matter after in situ degradation.</a> Org. Geochem. 42, 1099-1108 (2011).</li>
<li>Prescott, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Litter+decomposition%3A+what+controls+it+and+how+can+we+alter+it+to+sequester+more+carbon+in+forest+soils%5BTitle%5D)+AND+%22Biogeochemistry%22%5BJournal%5D)">Litter decomposition: what controls it and how can we alter it to sequester more carbon in forest soils.</a> Biogeochemistry. 101, 133-149 (2010).</li>
<li>Denef, K., Roobroeck, D., Wadu, M., Lootens, P., Boeckx, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+community+composition+and+rhizodeposit-carbon+assimilation+in+differently+managed+temperate+grassland+soils%5BTitle%5D)+AND+%22Soil+Biol.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Microbial community composition and rhizodeposit-carbon assimilation in differently managed temperate grassland soils.</a> Soil Biol. Biochem. 41, 144-153 (2009).</li>
<li>Bird, J. A., Kleber, M., Torn, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C-13+and+N-15+stabilization+dynamics+in+soil+organic+matter+fractions+during+needle+and+fine+root+decomposition%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Geochem%22%5BJournal%5D)">C-13 and N-15 stabilization dynamics in soil organic matter fractions during needle and fine root decomposition.</a> Org. Geochem. 39, 465-477 (2008).</li>
<li>Andresen, L. C., Jonasson, S., Strom, L., Michelsen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uptake+of+pulse+injected+nitrogen+by+soil+microbes+and+mycorrhizal+and+non-mycorrhizal+plants+in+a+species-diverse+subarctic+heath+ecosystem%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Soil%22%5BJournal%5D)">Uptake of pulse injected nitrogen by soil microbes and mycorrhizal and non-mycorrhizal plants in a species-diverse subarctic heath ecosystem.</a> Plant Soil. 313, 283-295 (2008).</li>
<li>Horwath, W. R., Pregitzer, K. S., Paul, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C-14+Allocation+in+tree+soil+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Tree+Physiol%22%5BJournal%5D)">C-14 Allocation in tree soil systems.</a> Tree Physiol. 14, 1163-1176 (1994).</li>
<li>Denef, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Community+shifts+and+carbon+translocation+within+metabolically-active+rhizosphere+microorganisms+in+grasslands+under+elevated+CO2%5BTitle%5D)+AND+%22Biogeosciences%22%5BJournal%5D)">Community shifts and carbon translocation within metabolically-active rhizosphere microorganisms in grasslands under elevated CO2.</a> Biogeosciences. 4, 769-779 (2007).</li>
<li>Pollierer, M. M., Langel, R., Korner, C., Maraun, M., Scheu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+underestimated+importance+of+belowground+carbon+input+for+forest+soil+animal+food+webs%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol.+Lett%22%5BJournal%5D)">The underestimated importance of belowground carbon input for forest soil animal food webs.</a> Ecol. Lett. 10, 729-736 (2007).</li>
<li>Stewart, D. P. C., Metherell, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+%28C-13%29+uptake+and+allocation+in+pasture+plants+following+field+pulse-labelling%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Soil%22%5BJournal%5D)">Carbon (C-13) uptake and allocation in pasture plants following field pulse-labelling.</a> Plant Soil. 210, 61-73 (1999).</li>
<li>Santos, F., Torn, M. S., Bird, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+degradation+of+pyrogenic+organic+matter+in+temperate+forest+soils%5BTitle%5D)+AND+%22Soil+Biol.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Biological degradation of pyrogenic organic matter in temperate forest soils.</a> Soil Biol. Biochem. 51, 115-124 (2012).</li>
<li>Bromand, S., Whalen, J. K., Janzen, H. H., Schjoerring, J. K., Ellert, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pulse-labelling+method+to+generate+13C-+enriched+plant+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Soil%22%5BJournal%5D)">A pulse-labelling method to generate 13C- enriched plant materials.</a> Plant Soil. 235, 253-257 (2001).</li>
<li>Putz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+in+situ-labelling+with+15N+and+13C+of+grassland+plant+species+by+foliar+brushing%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Ecol.+Evol%22%5BJournal%5D)">A simple method for in situ-labelling with 15N and 13C of grassland plant species by foliar brushing.</a> Methods Ecol. Evol. 2, 326-332 (2011).</li>
<li>Wichern, F., Mayer, J., Joergensen, R., Müller, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+wick+method+for+in+situ+%26lt%3Bsup%26gt%3B13%26lt%3B%2Fsup%26gt%3BC+and+%26lt%3Bsup%26gt%3B15%26lt%3B%2Fsup%26gt%3BN+labelling+of+annual+plants+using+sugar-urea+mixtures%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Soil%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the wick method for in situ &lt;sup&gt;13&lt;/sup&gt;C and &lt;sup&gt;15&lt;/sup&gt;N labelling of annual plants using sugar-urea mixtures.</a> Plant Soil. 329, 105-115 (2010).</li>
<li>Fahey, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transport+of+Carbon+and+Nitrogen+Between+Litter+and+Soil+Organic+Matter+in+a+Northern+Hardwood+Forest%5BTitle%5D)+AND+%22Ecosystems%22%5BJournal%5D)">Transport of Carbon and Nitrogen Between Litter and Soil Organic Matter in a Northern Hardwood Forest.</a> Ecosystems. 14, 326-340 (2011).</li>
<li>Stewart, C. E., Paustian, K., Conant, R. T., Plante, A. F., Six, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soil+carbon+saturation%3A+Evaluation+and+corroboration+by+long-term+incubations%5BTitle%5D)+AND+%22Soil+Biol.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Soil carbon saturation: Evaluation and corroboration by long-term incubations.</a> Soil Biol. Biochem. 40, 1741-1750 (2008).</li>
<li>Fry, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFry%2C+B+%22Stable+Isotope+Ecology%22">Stable Isotope Ecology</a>. , Springer. (2006).</li>
<li>Nippert, J. B., Fay, P. A., Carlisle, J. D., Knapp, A. K., Smith, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecophysiological+responses+of+two+dominant+grasses+to+altered+temperature+and+precipitation+regimes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Oecol.+Int.+J.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Ecophysiological responses of two dominant grasses to altered temperature and precipitation regimes.</a> Acta Oecol. Int. J. Ecol. 35, 400-408 (2009).</li>
<li>Hoagland, D. R. aA., I, D. The Water-Culture Method for Growing Plants without Soil. , The College of Agriculture, University of California, Berkeley. Berkeley, CA. (1950).</li>
<li>Lett, M. S., Knapp, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consequences+of+shrub+expansion+in+mesic+grassland%3A+Resource+alterations+and+graminoid+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Veg.+Sci%22%5BJournal%5D)">Consequences of shrub expansion in mesic grassland: Resource alterations and graminoid responses.</a> J. Veg. Sci. 14, 487-496 (2003).</li>
<li>Knapp, A. K., Seastedt, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detritus+Aaccumulation+limits+productivity+of+tallgrass+prairie%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience%22%5BJournal%5D)">Detritus Aaccumulation limits productivity of tallgrass prairie.</a> Bioscience. 36, 662-668 (1986).</li>
<li>Ting, K. C., Giacomelli, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solar+photosynthetically+active+radiation+transmission+through+greenhouse+glazings%5BTitle%5D)+AND+%22Energy+Agric%22%5BJournal%5D)">Solar photosynthetically active radiation transmission through greenhouse glazings.</a> Energy Agric. 6, 121-132 (1987).</li>
<li>McDermitt, D. K., Welles, J. M., Eckles, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Temperature%2C+Pressure+and+Water+Vapor+on+Gas+Phase+Infrared+Absorption+by+CO2%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Effects of Temperature, Pressure and Water Vapor on Gas Phase Infrared Absorption by CO2.</a> , Li-Cor, Inc.. Lincoln, NE. Forthcoming.</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dit ontwerp voor een continue isotooplabelen kamer werd gebruikt om uniform en differentieel produceren 13C en 15N gelabelde A. gerardii voor volgende veld en laboratoriumexperimenten. Gedurende drie groeiseizoenen van de werking, heeft de kamer met succes gehandhaafd temperatuur, vochtigheid en CO 2-concentraties binnen de ingestelde parameters (figuur 2). De betrouwbaarheid van de temperatuurregeling is cruciaal tijdens de piek van de zomer, wanneer hoge zonnestraling oververhitting in de luchtdichte kamer kan veroorzaken. Het wegwerken van overtollig vocht veroorzaakt door transpiratie van de groeiende planten zorgt ervoor dat planten huidmondjes open blijven voor fotosynthetische opname 22 en dat condensatie van water niet lichtinval belemmeren of schade aan de structuur van de kamer. De bijna continue bewaking van de CO 2-concentratie door de irgA software continu onderhouden13 C etikettering van de planten, terwijl ze in de kamer groeiden. Door de hoge fotosynthetische activiteit van A. gerardii groeien in deze kamer, CO 2 werd geïnjecteerd in het systeem vaak overdag van de piek groeiseizoen wanneer fotosynthetische activiteit trok CO 2-concentraties beneden tot 360 ppm, ongeveer elke 15-20 minuten. De dosering van het verrijkte natuurlijke abundantie 13 C-CO 2 tanks toegestaan ​​voor een gecontroleerde 4,4 atoom% C 13 atmosfeer door het groeiseizoen uniforme plantenweefsel etikettering. 13C-CO 2 productie kan ook worden bereikt door het mengen van 13 C-natrium bicarbonaat of 13 C-natriumcarbonaat en zoutzuur, maar dit type systeem is ingewikkelder en vereist meer controle en onderhoud, dus we raden het gebruik van 13 C-CO 2 gas. Een belangrijke overweging voor de bewaking van de CO 2-concentrations met behulp van een Irga is dat infrarood analyzers verliest tweederde van hun gevoeligheid bij het ​​meten van 13 C-CO 2. Deze onderschatting van ongeveer 2,9% ppm voor onze 4.4% 13 C-CO 2 mengsel was niet van groot belang voor ons, maar kon een kwestie aan belang toenemen bij het ​​benoemen op hogere 13 C niveau 27. A. gerardii is een warme seizoen eeuwigdurende tallgrassprairie graminoid soorten. Het ontwerp van deze kamer werd geoptimaliseerd voor A. gerardii productie (figuur 1). De grootte en hoogte van de kamer werden gekozen als tegenprestatie voor de maximale hoogte productiviteit van A. gerardii in het veld, evenals voor de gewenste plantaardige biomassa voor toekomstige experimenten. A. gerardii is bekend dat licht in het veld 24,25 beperkt zijn. PAR binnen een kas kan worden verminderd door 30-47% ten opzichte van de buitenkant niveau 26. Aangezien onze fabrieks werden gekweekt in een acryl glazen kamer binnen een serre, PAR beperking was een punt van zorg. Wanneer deze is ingeschakeld, de tl-verlichting vergroot PAR binnen de kamer met 9,5%, die kan hebben bijgedragen aan de productiviteit in dit licht gevoelige soorten te verhogen. Bij gebruik van deze kamer ontwerp op andere soorten planten specifieke fysiologische behoeften zoals grootte, verlichting, voedingsbehoefte, temperatuurgevoeligheid en bodemvocht groeien moeten zorgvuldig worden aangepast om optimale groeiomstandigheden voor de planten te handhaven. Bij het ​​werken met dure isotopisch gemerkte verbindingen, zoals 10 atoom% 13 C-CO 2 en 98 atoom% 15 N-KNO3, efficiëntie van etikettering een belangrijke overweging. Deze kamer-ontwerp optimaliseert 13C labeling door alle inspanningen om de kamer te verzegelen en het minimaliseren van luchtlekken in en uit de kamer. Als deze kamer nooit tijdens het groeiseizoen wordt geopend, is geen van de 13 C-labeled CO 2 uit de kamer is uitgelekt aan de atmosfeer. De CO 2 op te bouwen tijdens nachtelijke ademhaling niet verschijnt op de groeiende planten beschadigen en wordt snel na zonsopgang (figuur 2) genomen. Tijdens differentiële labeling, werd de kamer kort geopend om de verschillend gemerkte potten te verwijderen, maar dit bleek niet de beoogde 4,4% op atomaire 13 C etikettering van de continu gelabelde planten (tabel 1) te verdunnen. 13C labeling werd ook geoptimaliseerd door schrobben uit de initiële atmosferische lucht in de kamer bij het afdichten. Tijdens voorproeven op de kamer zonder een eerste scrub van de atmosferische CO 2 werden planten gemeten om een verdunde 13 C-niveau in de eerste bladeren geproduceerd dan in de latere bladeren geproduceerd hebben. De eerste scrub van de atmosferische CO 2 na sluiting kamer lijkt dit probleem te elimineren door en maakt de continue 13 C-etikettering vanzaadje tot volwassenheid. Het handhaven van een bodem vrij potgrond mengsel van zand, vermiculiet, en klei elimineert ook natuurlijke overvloed CO 2 vervuiling uit de bodem ademhaling. De eliminatie van de bodem van het systeem vereist een zorgvuldige bemesting en inenting overwegingen, die uniek zijn voor verschillende plantensoorten kunnen zijn. 15 N etikettering door de beoogde 7 atoom% 15 N Hoegland&#39;s oplossing geproduceerd zeer gelabeld plantmateriaal op 6,7% op atomaire 15 N (Tabel 1). Een lichte verdunning van de beoogde 15 N merker kan worden veroorzaakt door een natuurlijke overvloed N in de potgrond of de geboortegrond inoculatie. Tijdens biosynthese van verbindingen, natuurlijke discriminatie 13 C (of 15 N) optreedt als gevolg van kinetische fractionering en nonstatistical isotoop verdeling in de gesynthetiseerde verbindingen. Dus in het geval van C, secundaire producten (bijvoorbeeld lipiden, Fenolverbindingen) algemeen waaruit 13C vergeleken met primaire producten (koolhydraten). Deze natuurlijke discriminatie 13 C blijkt ook blijven bestaan ​​wanneer planten worden gekweekt in een 13 C verrijkte atmosfeer, zoals blijkt uit het geringe verschil in atoom% 13 C van het heetwaterextracten en warm water resten van het uniform gelabelde planten (Tabel 1 ). Deze natuurlijke kinetische fractionering is zeer klein in vergelijking met de verrijking en heeft de uniformiteit van de etikettering niet in gevaar brengen. Differentiële etikettering van structurele en metabole plantenweefsel is een nieuwe techniek met potentieel voor hogere studies in afbraak van afval, microbiële ecologie en vorming aan organisch bodemmateriaal. Het verschil in 13 C en 15 N van het warm water extracten en warm water residuen wijst op een aanzienlijke verwatering van 13 C en 15 N in de uitloogbare, lagemolecuulgewicht (warm water uittreksels) van de structurele plantmateriaal (warm water residuen) na 7, 14, en 22 dagen van differentiële labeling (P &lt;0,005). Dit verschil etikettering van plantaardige weefsels kunnen worden gebruikt om het lot van structurele en metabole componenten afzonderlijk bijhouden via een ecosysteem. De 13 C differentiële labeling was extremer dan 15 N differentiële labeling. Dit kan te wijten aan de nabijheid van 13C verdunning wanneer het verwijderen van de planten uit de 13 C-gelabeld CO 2 atmosfeer, terwijl de 15 N etiket blijft in de potgrond enige tijd 15 N verdunning optreedt langzamer. Voor meer drastische differentiële labeling van 15 N, kan men overwegen het spoelen van de potten met water voorafgaand aan de natuurlijke overvloed bemesting tijdens de laatste weken van de groei buiten de kamer. De opzet en werking van deze continue 13 &lt;/ Sup&gt; C en 15 N systeem voor de etikettering uniform of differentiële, metabole en structurele, plantenweefsel etikettering voorziet in een nieuwe werkwijze voor het produceren isotoopgelabelde plantmateriaal voor geavanceerd onderzoek. Het ontwerp en de operationele details van deze kamer is gekozen voor 4,4 atoom% 13 C en 7 atoom% 15 N etikettering van A. gerardii, maar kan worden aangepast aan andere vaste isotopen niveaus. De hier beschreven groeiomstandigheden moet worden afgestemd op de grootte, temperatuur, vochtigheid, licht, water en voedingsstoffen eisen van de bijzondere plantensoorten van interesse. Labeling met 18 O of 2 H kan ook worden bereikt door het merken van het water van het irrigatiesysteem. Het hier beschreven systeem behandelt veel van de uitdagingen van een uniforme en differentiële 13C etikettering van plantaardig materiaal. Deze fundamentele kamer-ontwerp kan worden gebruikt door andere onderzoeksgroepen tot zeer gelabeld plantmateriaal voor adv producerenwichtige studies in ecosysteem biogeochemie.

Inzicht in de dynamiek van plant-bodem-atmosfeer processen is van cruciaal belang voor het nauwkeurig voorspellen hoe de globale koolstof (C) en stikstof (N) cycli functie onder de huidige en toekomstige milieu-omstandigheden. Stabiele isotopen zijn krachtige hulpmiddelen in kwantitatieve studies van plant-bodem-atmosfeer C en N fietsen. Tracing zeldzame stabiele isotopen uit plantaardig materiaal door het ecosysteem levert gevoelige informatie in studies van biogeochemische cycli, van CO 2 stromen en bodemvorming organisch materiaal om kleinschalige stabiele isotopen-biomarker indringende bv. 4,8,9. De combinatie van 13C labeling met 15 N etikettering, of andere stabiele isotopen zoals 2 H of 18 O in plantenweefsel biedt een high-detectie, traceerbaar, maar complexe substraat voor gebruik in gekoppelde studies van planten en de bodem biochemie. De mogelijkheid om uniform of differentieel labelen structurele en metabolische plantmateriaal advertentieds verdere vermogen om complexe vragen over C en N fietsen door ecosystemen te pakken. Het voordeel van isotoop gemerkte plantenmateriaal kwantitatieve studies van C en N boekhouding, echter afhankelijk van het vermogen 13C en 15N gelabeld materiaal dat ofwel uniform of verschillend gemerkte produceren. Isotooplabelen is gebruikt in studies over planten C en N assimilatie 10, allocatie 11 en rhizodeposition 12. Gelijkmatig 13C en 15N gelabelde plantaardig materiaal zorgt voor een complexe gemerkt substraat voor studies van strooiselafbraak 1,4, vorming organische stof in de bodem 2,6, bodem CO 2-uitstoot 4, bodemvoedselweb bestudeert 13, en studies van de bodem C verblijftijden 2,14. Studies met behulp van 13 C-gelabeld biochar van gelabelde plantmateriaal beginnen ook nieuwe informatie over vroeger over het hoofd gezien te onthullenbodem char zwembaden 15. Terwijl 15 N, 2 H en 18 O etikettering zijn relatief gemakkelijk door water en kunstmest behandeling te bereiken, de uitdaging bestaat in het produceren uniform 13C gelabelde plantaardig materiaal tot en met 13 C-CO 2 fixatie. Continu isotooplabelen van zaailing tot volwassenheid in een afgesloten kamer produceert uniforme isotooplabelen de gehele plant. Andere methoden zoals herhaalde puls labeling 16 en bladtoepassing of wicking 17,18 produceren niet uniform isotoop gemerkte plantmateriaal, noch duidelijke verschil etikettering van specifieke C-verbindingen (bv. metabolische versus structureel) 19. Een belangrijke overweging bij isotopen wordt labelingsefficiëntie, vanwege de hoge kosten van zeldzame isotoop verrijkte verbindingen die voor levensmiddelen. Hoewel continue 13C etikettering in het verleden 2-4,20, er geen kenniseen gepubliceerde gedetailleerde technische beschrijving van een continue labeling kamer met tekenen van hoge labelingsefficiëntie en nauwkeurige controle van de hoeveelheid en uniformiteit van isotopen. Op de voorgrond van de afbraak van afval en bodemvorming organische stof onderzoek is het concept dat metabole plantaardig materiaal (dwz uitloogbare, labiele, verbindingen met laag molecuulgewicht) en structurele plantmateriaal (dwz. Lignine, cellulose, hemicellulose) verschillend in termen van microbiële verwerkt efficiëntie bij het ​​eindgebruik, vorming organische stof in de bodem, en de lange termijn bodem C opslag 5-7. Plantmateriaal dat differentieel is geëtiketteerd zijn structurele en metabolische componenten, dus een nuttig instrument in het bevorderen afbraak van afval en bodemvorming organisch materiaal onderzoek. Differentiële labeling met dual isotopen maakt voor de opsporing van structurele en metabole componenten afzonderlijk via het ecosysteem via een verdeelstekker zwembad isotoop technique 21. Continu isotoop labeling met 13 C en andere isotopen in een afgesloten kamer vereist een zorgvuldige aandacht voor fysiologische omstandigheden planten om productiviteit van de vegetatie en isotooplabelen efficiëntie te maximaliseren. Dagtemperatuur spikes moeten worden gecontroleerd om te planten schade bij het kweken in een luchtdichte kamer te voorkomen. Een optimaal bereik van vochtigheid en temperatuur moeten openblijven planten huidmondjes en de CO 2-opname 22 te handhaven. Hoge luchtvochtigheid oorzaak beslaan van de wanden, die de beschikbaarheid van licht minimaliseert en kan de kamer structuur beschadigen. Zorgvuldige afweging om labelingsefficiëntie isotoop door het elimineren van natuurlijke overvloed isotopen uit de kamer (bijvoorbeeld afkomstig uit het oppotten met bodem organische stof) en het voorkomen van blootstelling aan de buitenlucht is van belang bij het ​​werken met dure zwaar isotoop gemerkte verbindingen. Hier presenteren we een methode voor het bouwen en exploiteren van eencontinue dubbele 13C en 15N isotopen kamer voor de productie van plantaardige materiaal dat ofwel uniform gemerkt of heeft een structurele en metabolische componenten gelabeld op verschillende niveaus. is 13 C etiket gecontroleerd op de kamer niveau, terwijl bemesting en 15 N etikettering gecontroleerd op de individuele pot niveau. Representatieve resultaten zijn het vermogen van deze methode om de temperatuur, vochtigheid en CO2-concentratie gedurende het groeiseizoen controle tonen. Resultaten van groeiende Andropogon gerardii, Kaw ook het vermogen van deze methode om uniform of verschillend gemerkte plantmateriaal te produceren tonen. De beschreven specifieke kamer-ontwerp en werking regeling kan worden aangepast aan verschillende plantensoorten groeien, evenals 2 18 H of O etikettering tegemoet.

<table><tbody><tr><td>40 in Remote Tower Fan</td><td>Living Accents</td><td>FS10-S3R-A</td><td></td></tr><tr><td>42 in Electric Tower Fan met afstandsbediening</td><td>LASKO</td><td>2559</td><td></td></tr><tr><td>Mr. Slim Split-type airconditioner</td><td>Mitsubishi Electric</td><td>R410A</td><td></td></tr><tr><td>Elektronische 24-uurs tijdschakelaars</td><td>Intermatic</td><td>ET100C</td><td>Werkt op Fluorescent Light System</td></tr><tr><td>iSeries Luchtvochtigheid en Temperatuur Controller</td><td>Omega</td><td>CHiTH-i8DV33-5-El</td><td></td></tr><tr><td>Solid State Relais</td><td>Omega</td><td>SSRL240</td><td></td></tr><tr><td>CKR Series Solid State Relai</td><td>Crydon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solenoïde Spoelen</td><td>Dayton</td><td>6X543</td><td></td></tr><tr><td>GasHound CO2 Analyzer</td><td>LI-COR</td><td>LI-800</td><td></td></tr><tr><td>Luchtmerker</td><td>Dayton</td><td>1DGX4</td><td></td></tr><tr><td>Speciale gasregelaar</td><td>Airgas</td><td>CGA 580</td><td></td></tr><tr><td>T5 Hight Output Commercieel Fluorescent Licht Systeem</td><td>Hydro Farm</td><td>FLT48</td><td></td></tr><tr><td>Luchtpomp</td><td>Thermo Scientific</td><td>420-1901</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex Cartridge Pomp Hoofd Systeem</td><td>Cole Parmer</td><td>7553-70</td><td></td></tr><tr><td>1900 Series Netwerk Switch</td><td>Catalyst</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Profile Porus Keramische Top Dressing</td><td>Greens Grade</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Industriële Kwarts 40 mesh</td><td>Unimin</td><td>4095</td><td></td></tr><tr><td>Mycorrhizae Professioneel Groei Medium</td><td>ProMix</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vermiculiet en Perliet</td><td>Thermo-Ran</td><td>C633</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumnitraat- 15N 98 atoom %</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>335134</td><td></td></tr><tr><td>Koolstof-13C Dioxide 10 atoom %</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>600180</td><td></td></tr><tr><td>Medisch CO2</td><td>Airgas</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Regelaar</td><td>Airgas</td><td>CGA 350</td><td></td></tr><tr><td>4 in doos ventilatoren</td><td>Grainger</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Masterflex PharMed BPT Slang</td><td>Cole Parmer</td><td>HV-06508-24</td><td></td></tr></tbody></table>

opzet en werking van een continue<sup&gt; 13</sup&gt; c<sup&gt; 15</sup&gt; n labeling kamer voor uniform of differentieel, metabole en structurele, plant isotooplabelen

Design and Operation of a Continuous 13C and 15N Labeling Chamber for Uniform or Differential, Metabolic and Structural, Plant Isotope Labeling

Tracing zeldzame stabiele isotopen uit plantaardig materiaal door het ecosysteem biedt de meest gevoelige informatie over het ecosysteem processen; van CO 2 stromen en vorming organische stof in de bodem om kleinschalige stabiele isotoop biomarker sonderen. Koppeling meerdere stabiele isotopen zoals 13C met 15 N, 18 O of 2 H heeft het potentieel om nog meer informatie over complexe stoichiometrische verhoudingen in biochemische transformaties onthullen. Isotoop gemerkte plantmateriaal is gebruikt in diverse onderzoeken van afbraak van afval en de vorming van organisch bodemmateriaal 1-4. Uit deze en andere studies is het echter duidelijk geworden dat de structurele bestanddelen van plantaardige materiaal anders dan metabole bestanddelen (dwz. Uitloogbare laag molecuulgewicht) in termen van microbiële benutting en langdurige koolstofopslag 5-7 gedragen. Het vermogen om structurele en metabolische componenten bestuderenafzonderlijk biedt een krachtige nieuwe tool voor het bevorderen van de voorhoede van het ecosysteem biogeochemische studies. Hier beschrijven we een werkwijze voor 13C en 15N gemerkte plantmateriaal dat ofwel uniform gelabelde gehele plant of verschillend gemerkte structurele en metabolische installatiedelen. Hier presenteren we de bouw en exploitatie van een continu 13 C en 15 N etikettering kamer die kan worden aangepast aan verschillende onderzoeksprojecten behoeften te voldoen. Gelijkmatig gemerkte plantenmateriaal wordt geproduceerd door continue etikettering van zaailing tot oogst, terwijl differentiële labeling wordt bereikt door het verwijderen van de groeiende planten uit de kamer weken voor de oogst. Representatieve resultaten van de groeiende Andropogon gerardii Kaw aantonen vermogen van het systeem om efficiënt label plantaardig materiaal op de beoogde niveaus. Door deze werkwijze hebben wij plantaardig materiaal geproduceerd met een 4,4 atoom% 13 C en 6,7 atoom% 15 &lt;/ Sup&gt; N uniforme planten label, of materiaal dat verschillend wordt gemerkt door tot 1.29 atoom% 13 C en 0,56 atoom% 15 N in de metabole en structurele componenten (warm water extraheerbare en warm water restcomponenten, respectievelijk). Uitdagingen liggen in het handhaven van de juiste temperatuur, luchtvochtigheid, CO 2-concentratie, en het lichtniveau in een luchtdichte 13 C-CO 2 atmosfeer voor een succesvolle teelt van gewassen. Deze kamer beschrijving vormt een nuttige research tool om effectief te produceren uniform of verschillend multi-isotoop gemerkte plantaardig materiaal voor gebruik in proeven op ecosysteem biogeochemische cycli.

Onze etikettering kamer is 1,2 mx 2,4 mx 3,6 m groot en houdt 40,15 L potten (figuur 1). De geautomatiseerde irgA controlesysteem onderhouden CO 2-concentraties tussen onze ingestelde waarden van 360 en 400 ppm tijdens de fotosynthetisch actieve periode van de dag (Figuur 2a). De lage CO 2-alarm functie op de irgA getriggerd magneetventielen om CO 2 uit de 13 C verrijkt en natuurlijke overvloed tanks in de kamer wanneer de concentratie gedaald tot onder het minimum (bv. 360 ppm). De dode band functie stopte de stroom wanneer de concentratie bereikt het bovenste instelpunt (bijv. 400 ppm). De iSeries temperatuur en vochtigheid monitoring systeem aangesloten op de airconditioner en ontvochtiger gehouden klimatologische omstandigheden binnen de ingestelde parameters gedurende het groeiseizoen (Figuur 2b). We gebruikten een ton (3,5 kW) airconditioning unit te keep de kamer koel. De remote monitoring-systeem mag de geregistreerde gegevens op elk gewenst moment worden bekeken door een standaard web browser. De CO 2-concentraties, temperatuur en vochtigheid waarden werden naar beneden bemonsterd door de webapplicatie om grafieken weer te geven van de afgelopen 24-240 uur, in stappen van 24 uur. Dit zorgde voor een snelle visuele om te bevestigen dat de dagelijkse schommelingen waren binnen de verwachte grenzen. Bekijk de webinterface toonde ook de huidige kamer status en ontvangen signaleringen potentiële problemen zoals ontvangt recente gegevens. Op elk moment van de volledige dataset ook kan worden gedownload van de web-interface. We meten fotosynthetisch actieve straling (PAR) in de onmiddellijke binnen-en buitenkant van de kamer op vier punten met en zonder de lichten aan in het midden van de zomer en het midden van de dag met behulp van een kwantum sensor. De PAR in de kamer was 31,5% lager dan de buitenkant wanneer de kamer lichten wwondermooi uit en 22% lager dan de buitenkant als de lichten waren. Aldus de kamerlichten helpen om aanzienlijke verhoging PAR penetratie binnen de kamer met 9,5% (P &lt;0,05). Onze continue labeling systeem was in staat om 2.759 g A. produceren gerardii biomassa, 37% daarvan was bovengrondse biomassa en 63% van die ondergrondse biomassa. We behaalden een 4,4% op atomaire 13C hele plant label in ons uniform plantmateriaal door de magneetventielen op de twee CO 2 tanks dienovereenkomstig (figuur 1, tabel 1). We bereikten een 6,7 atoom% 15 N hele plant label in ons uniform plantmateriaal door mengen 98 atoom% 15 N-KNO3 0,37 atoom% 15 N-KNO3 in de KNO3 subsolution van een gemodificeerde Hoagland&#39;s oplossing 23 (Tabel 1) . We drenkte de A. gerardii wekelijks met 750 ml totale vloeistof (water plus Hoagland&#39;s oplossing) gedurende het groeiseizoenzoon. We bemest met 200-500 ml 15 N gelabeld Hoagland&#39;s oplossing per week, afhankelijk van de productiviteit van planten. We gebruik het warme water extractie methode om te bepalen of er isotopische verschillen tussen de uniforme en verschillend gemerkte plantmateriaal. Voor de verschillend gemerkte planten, na de oogst hebben we verwijderd alle bladeren die helemaal dood waren en behandelde deze afzonderlijk als ze waren waarschijnlijk niet verschillend gemerkte. Wanneer we kijken naar 13 C gehalte, vier dagen opname significant verschillend van elkaar de hele plant en warm water verkregen, maar voor het warme water residu dag 14 en 22 waren niet significant verschillend van elkaar (tabel 1). Bij vergelijking van plantenweefsel fracties in elke dag, het warm water extract residu significant verschillend van elkaar vier dagen en 22 dagen de gehele plant extract, en residu waren significantly verschillend van elkaar (tabel 1). Voor de 15 N opname in plantaardige bestanddelen, waren er verschillen tussen de dagen van oprichting en plantenweefsel fracties. Voor de warm water extract alle vier de opneming dagen waren significant verschillend van elkaar 15 N, en de hele plant en warm water residu de kortere dagen statuten significant anders dan de langere tijd van opname (tabel 1). Het plantenweefsel fracties uniforme planten waren niet significant verschillend van elkaar 15 N, maar het hete water extract residu significant verschillend van elkaar 15 N voor de verschillend gemerkte nest. Alle isotopische waarden worden gerapporteerd volgens de atoomprocent (atoom%) notatie (vergelijking 1), hetgeen een nauwkeuriger notatie dan% te gebruiken hoge zwareisotoop verrijking 21. Bijvoorbeeld: <img alt="" height="54" src="/files/ftp_upload/51117/51117eq2.jpg" width="202" /> (1) Voor deze studie, liepen we statistische analyses met behulp van SAS versie 9.2. We testten de verschillen tussen de kamer binnen en buiten licht niveaus met behulp van een gepaarde t-test. We testten de verschillen tussen de 13 C en 15 N etikettering van heetwaterextracten en warm water resten met behulp van one-way variantie analyse (ANOVA) in PROC ANOVA. We gebruikten Duncan&#39;s multiple range test voor meervoudige vergelijkingen analyse. Significantie werd op een P-niveau van 0,05 aanvaard. We gebruikten een Wilcoxon rank sum test om te testen of de data voldoet aan de uitgangspunten van de analyse. <img alt="Figuur 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51117/51117fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51117/51117fig1.jpg" /> Figuur 1. Schematic diagram van de 40 pot capaciteit continue multi-isotoop labeling kamer van eye view van een vogel. Stippellijnen elektrische bedrading, terwijl volle lijnen stellen gas of water tubing. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51117/51117fig1highres.jpg" target="_blank">Klik hier voor grotere afbeelding.</a> <img alt="Figuur 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51117/51117fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51117/51117fig2.jpg" /> . Figuur 2 A) gemiddelde CO 2-concentratie (ppm) (+ / -. SE) over een periode van vierentwintig uur voor een heel groeiseizoen B) Gemiddelde temperatuur (º C), open cirkels, en vochtigheid (%), gesloten cirkels . (+ / - SE) over een periode van vierentwintig uur voor een heel groeiseizoen <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51117/51117fig2highres.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere im bekijken</a>leeftijd. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="559"><colgroup><col /><col /><col /><col /><col span="2" /></colgroup><tbody><tr height="17"><td height="17" style="height:17px;width:77px;"></td><td style="width:85px;"></td><td style="width:92px;"> Uniform (0) </td><td style="width:97px;"> Differential (7) </td><td style="width:104px;"> Differential (14) </td><td style="width:104px;"> Differential (22) </td></tr><tr height="19"><td height="38" rowspan="2" style="height:38px;width:77px;"> Hele nest </td><td> 13 C Atom% </td><td> 4.46 ± 0.02 Aab </td><td> 3,93 ± 0,05 Ba </td><td> 3.64 ± 0.03 Ca </td><td> 3.35 ± 0.06 Db </td></tr><tr height="19"><td height="19" style="height:19px;"> 15 N Atom% </td><td> 6.69 ± 0.07 Aa </td><td> 6.72 ± 0.01 Aa </td><td> 6,33 ± 0,06 Ba </td><td> 6.41 ± 0.07 Ba </td></tr><tr height="19"><td height="38" rowspan = &quot;2&quot; style = &quot;height: 38px; width: 77px;&quot;&gt; Hot Water Extract </td><td> 13 C Atom% </td><td> 4.59 ± 0.04 Aa </td><td> 3.35 ± 0.06 Bb </td><td> 2.79 ± 0.06 Cb </td><td> 2.37 ± 0.03 Dc </td></tr><tr height="19"><td height="19" style="height:19px;"> 15 N Atom% </td><td> 6.69 ± 0.03 Aa </td><td> 6.43 ± 0.01 Bb </td><td> 5.89 ± 0.07 Db </td><td> 6.16 ± 0.05 Cb </td></tr><tr height="19"><td height="38" rowspan="2" style="height:38px;width:77px;"> Hot Water Residu </td><td> 13 C Atom% </td><td> 4.37 ± 0.06 Ab </td><td> 4.1 ± 0.03 Ba </td><td> 3.79 ± 0.10 Ca </td><td> 3.66 ± 0.05 Ca </td></tr><tr height="19"><td height="19" style="height:19px;"> 15 N Atom% </td><td> 6.57 ± 0.04 Ba </td><td> 6.71 ± 0.02 Aa </td><td> 6.45 ± 0.02 Ca </td><td> 6.44 ± 0.03 Ca </td></tr></tbody></table> Tabel 1. <strong&gt; Isotoopsamenstelling en zwerfvuil chemie voor uniforme en verschillend gemerkte nest. Dagen van differentiële labeling buiten de kamer staan ​​tussen haakjes. Vergelijkingen tussen dag van oprichting zijn in hoofdletters (over rijen) en tussen strooisel fracties zijn in kleine letters (beneden kolommen) voor elke variabele.

Deze methode wordt uitgelegd hoe op te bouwen en exploiteren van een continue 13 C en 15 N isotooplabelen kamer voor uniforme of differentiële plantenweefsel etikettering. Representatieve resultaten van metabole en structurele kenmerken van Andropogon gerardii worden besproken.

Opzet en werking van een continue<sup&gt; 13</sup&gt; C<sup&gt; 15</sup&gt; N Labeling Kamer voor Uniform of Differentieel, Metabole en structurele, Plant isotooplabelen

Tracing rare stable isotopes from plant material through the ecosystem provides the most sensitive information about ecosystem processes; from CO2 fluxes ...

Het algemene doel van deze procedure is het produceren van plantmateriaal dat uniform door de gehele plant of differentieel in structurele en metabolische weefsels sterk is verrijkt met koolstof 13 en stikstof 15. Dit wordt bereikt door eerst een luchtdichte kamer voor plantengroei te construeren. De tweede stap is het controleren van de temperatuur, luchtvochtigheid en koolstofdioxideniveaus in de kamer om geschikte groeiomstandigheden voor de planten te handhaven.Vervolgens worden de planten gekweekt in de afgesloten kamer met lucht die $^{13}\text{C}$-koolstofdioxide bevat, en irrigatie en bemesting met $^{15}\text{N}$. De laatste stap is het stoppen van de markering door de differentieel gemarkeerde planten weken voor de oogst uit de kamer te verwijderen, zodat hun metabole materiaal minder verrijkt raakt met koolstof 13 en stikstof 15. In vergelijking met de structurele plantcomponenten na het oogsten van het plantmateriaal, worden extractie met heet water en isotopenverhoudingsmassaspectrometrie gebruikt om de algehele isotopenmarkering en verschillen in markeringssterkte te meten.Het belangrijkste voordeel van continue markering ten opzichte van andere methoden, zoals bladapplicatie of herhaalde pulsmarkering, is dat het uniform gemarkeerd plantmateriaal oplevert waarvan de metabole of structurele componenten differentieel gemarkeerd kunnen worden. Om deze procedure te starten, bouwt u de markeringskamer zoals beschreven in het bijbehorende tekstprotocol door transparante acryl wanden van 3,18 millimeter dik en een transparant acryl plafond van 6,35 millimeter dik te monteren op een aluminium frame met een wit geverfde stalen vloer; de afmetingen van de kamer kunnen worden aangepast aan specifieke behoeften voor plantengroei. De hier getoonde kamer meet 1,2 bij 2,4 bij 3,6 meter en biedt plaats aan 40 potten van 15 liter; zorg ervoor dat de kamer luchtdicht is door alle naden af te dichten met voldoende siliconenkit.Bevestig de deur op machineschroeven, die kunnen worden aangedraaid en losgedraaid met afneembare vleugelmoeren. Afdicht de deur met tochtstrips om luchtlekkage te voorkomen in het gebied direct naast de labelkamer. Bevestig het controlecentrum aan de monitor en stel de temperatuur, luchtvochtigheid en koolstofdioxide in de kamer in.Zorg ervoor dat de elektrische bedrading en gasleidingen die de kamer binnenkomen goed zijn afgedicht met siliconen om luchtlekkage te voorkomen. Voeg optioneel lampen toe aan de kamer om de lichtpenetratie te verhogen en de daglengte te regelen om de temperatuur in de kamer te beheersen. Installeer een commerciële split-unit airconditioner waarbij de verdamperspoelen zich in de kamer bevinden en de compressor en condensorspoelen buiten de kamer zijn geplaatst om de warmte af te voeren.Installeer vervolgens een kleine kamerontvochtiger in de kamer. Boor een gat door de vloer naast de ontvochtiger en leid de afvoerslang van de ontvochtiger door het gat in een pot die is voorbereid met water. Dit creëert een luchtdichte afsluiting voor de afvoer en maakt drukstabilisatie mogelijk. Reguleer de luchtvochtigheid in de kamer door een programmeerbare controller, zoals een omega eye-serie met een vochtigheidssensor, aan te sluiten op de ontvochtiger.Installeer vervolgens een infraroodgasanalysator of ER a met een membraanpomp die continu lucht uit de kamer door de ER A en terug naar de kamer zuigt. Dit houdt een gesloten systeem in stand terwijl de koolstofdioxideconcentratie in de kamer continu wordt gemonitord. Sluit daarna twee tanks met zuivere koolstofdioxidegas aan op het koolstofdioxide-controlesysteem.Eén van de tanks moet 10 atoomprocent 13 C koolstofdioxide of hoger bevatten, en de andere moet natuurlijk voorkomende 13 C koolstofdioxide bevatten. Stel de tankregelaars in op 20 PSI; plaats na de regelaars magneetventielen in de gasleidingen om de injecties van koolstofdioxide via de Ergo-software te regelen.Beheers het openen en sluiten van de magneetventielen door deze via een solid-state relaisprogramma aan de ER rga te koppelen, met een laag alarm in de ergas-software om het openen van de magneetventielen te triggeren wanneer de koolstofdioxideconcentratie in de kamer onder een bepaalde waarde daalt, en een deadband om de ventielen te sluiten zodra de koolstofdioxideconcentratie een bovenste ingestelde waarde bereikt. Plaats na de magneetventielen een doseerventiel in elk van de twee gastankleidingen en stel deze zorgvuldig af op het gewenste koolstof 13-verrijkingsniveau in de atmosfeer.Hier maken we gebruik van een koolstof-13 verrijking van 4,4 atoomprocent. Verbind de uitlaten met elkaar en leid de slang vervolgens naar het midden van de kamer tussen de ventilatoren, wat helpt om het gelabelde koolstofdioxide gelijkmatig over de kamer te verspreiden om het irrigatiesysteem op te stellen. Maak eerst één druppelirrigatiering per pot en voer de irrigatieslang via een klein gat in de wand van de kamer naar buiten.Dicht vervolgens de gaten rond de irrigatieslangen af met siliconenkit om luchtlekkage aan de buitenkant van de kamer te voorkomen. Verbind de irrigatieslangen met de slangen van de peristaltische pomp en plaats er een kleine slangklem op om luchtlekkage tussen de bewateringstermijnen te voorkomen. Laat de zaden kiemen vóór het planten in potten om de levensvatbaarheid te garanderen en inoculeer de zaailingen met een verse bodemslurry. Om gunstige microben te introduceren, vult u de potten met een grondvrije potgrond om de introductie van niet-gelabelde koolstof en stikstof uit de bodem uit te sluiten.Hier maken we gebruik van een mengsel van zand, vermiculiet en een poreuze keramische profielplaat. Zodra de zaden zijn ontkiemd, worden de zaailingen voorzichtig overgeplant naar potten met een minimale hoeveelheid potgrond. Plaats de potten vervolgens in de kamer en verbind elke pot met een individuele irrigatieslang.Sluit tenslotte de deur van de kamer en verwijder de externe koolstofdioxide door een soda lime scrubber aan de luchtpomp te koppelen, totdat de koolstofdioxideconcentratie is gedaald tot minimaal 200 tot 250 parts per million. Vul de kamer vervolgens weer aan tot 400 parts per million met behulp van het $^{13}\text{C}$ koolstofdioxide-tankmengsel. Probeer de kamer gedurende het hele groeiseizoen gesloten te houden om contaminatie door koolstofdioxide van natuurlijke abundantie te minimaliseren.Label eerst een mestoplossing van het type Hyland met nitrogen-15 door 98 atoomprocent nitrogen-15 kaliumnitraat te mengen met kaliumnitraat met een natuurlijke nitrogen-15 abundantie, om dit vervolgens toe te voegen aan de rest van de Hookin-oplossing. In dit geval gebruiken we een oplossing met 7 atoomprocent nitrogen-15 voor de bemesting. Gebruik een peristaltische pomp om de met nitrogen-15 gelabelde mestoplossing via de irrigatiebuizen toe te dienen.Klem de irrigatieslangen af en doseer variërende hoeveelheden meststof aan de individuele planten volgens de behoefte en het experimentele ontwerp. Pomp vervolgens water door de slangen om de meststof uit de irrigatieslangen te spoelen. De totale hoeveelheid toegevoegde vloeistof mag de waterhoudende capaciteit van de potten niet overschrijden om meststofverspilling te minimaliseren.Draai de klem aan en controleer alle slangen na fertilisatie en irrigatie om luchtlekkage uit de kamer te elimineren. Voor differentiële markering van structurele en metabole componenten moeten de planten één tot drie weken vóór de oogst uit de markeringskamer worden gehaald. Behoud de planten die uniform gemarkeerd moeten worden tot de oogst in de kamer.Om senescentie te induceren, wordt de irrigatie simpelweg gestaakt wanneer men klaar is. Oogst de planten door eerst de bovengrondse biomassa af te knippen.Giet na het oogsten van de bovengrondse biomassa het potteer-substraat en de wortels door een zeef met een maaswijdte van zes millimeter om de wortels van het substraat te scheiden. Spoel de wortels vervolgens door een zeef met een maaswijdte van twee millimeter om alle resterende potmateriaal te verwijderen. Gebruik indien nodig een pincet om eventueel aan de wortels klevend substraat te verwijderen en laat de wortels daarna aan de lucht drogen ter voorbereiding op toekomstige experimenten.Gedurende drie groeiseizoenen van gebruik heeft de kamer de temperatuur succesvol tussen 26 en 29 °C, de luchtvochtigheid tussen 36 en 56% en de kooldioxideconcentraties tussen 360 en 400 ppm gehouden, zoals ingesteld in het controlecentrum. Hier worden representatieve resultaten getoond van het groeiseizoen 2011 van Andra Pogon Girard di. De opbouw van kooldioxide tijdens de nachtelijke respiratie lijkt de groeiende planten niet te beschadigen en wordt na zonsopgang snel opgenomen.De stikstof-15 markering via de beoogde 7 atoomprocent stikstof-15 Höglund-oplossing produceerde sterk gemarkeerd plantmateriaal met 6,7 atoomprocent stikstof-15; een lichte verdunning ten opzichte van de beoogde stikstof-15 markering kan worden veroorzaakt door natuurlijke abundantie van stikstof in het potgrondmengsel of door de inenting met natuurlijke bodem. De koolstof-13 markering met behulp van beoogde 4,4 atoomprocent 13C-koolstofdioxide resulteerde in 4,46 atoomprocent koolstof-13. Gedurende de gehele strooisellaag van het uniform gemarkeerde plantmateriaal vertoonden de differentieel gemarkeerde planten, die 7, 14 of 22 dagen vóór de oogst uit de kamer werden verwijderd, een significant verschil in koolstof-13 en stikstof-15.Inhoud in metabole componenten verkregen als warmwaterextracten en structurele componenten verkregen als residuen van warmwaterextracten, wat wijst op differentiële labeling van metabole en structurele plantmaterialen. Na de ontwikkeling heeft continue dubbele isotooplabeling de weg vrijgemaakt voor onderzoekers in de biogeochemie om het lot en de transformatie van plantcomponenten in het milieu op macro- en nanoschaal te onderzoeken.

design-operation-continuous-13c-15n-labeling-chamber-for-uniform-or

Research

JoVE Journal

Environment

Milieu

13 C-isotoop labeling is een nuttige techniek voor het bepalen van de cel centrale metabolisme voor verschillende soorten micro-organismen. Na de cellen zijn gekweekt met een specifiek gelabeld substraat, kunnen GC-MS metingen onthullen functionele metabole routes op basis van unieke patronen in de etikettering proteïnogene aminozuren.

Metabole route Bevestiging en Discovery door 13 C-etikettering van proteïnogene aminozuren

Stabiele isotoop labeling workflows in...

Protease-en Acid-gekatalyseerde Labeling Werkstromen Gebruikmakend<sup&gt; 18</sup&gt; O verrijkte Water

Hier beschrijven we een robuuste werkwijze voor de fractionering van plantaardige plasmamembranen in reinigingsmiddelenbestendige en detergent oplosbare membranen gebaseerd op een mengsel van gelabelde en in vivo volledig 15N gemerkt Arabidopsis thaliana celculturen. De procedure wordt toegepast voor vergelijkende proteomics studies om signalering processen te begrijpen.

Metabole Labeling en Membrane Fractionation for Comparative Proteomic analyse van<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Schorsing Celkweken

In planta meting van nutriënten en toxische stroom is essentieel voor de studie van plantenvoeding en toxiciteit. Hier bespreken we protocollen met radiotracers voor de bepaling van influx en efflux in intacte plantenwortels, met behulp van kalium (K+) en ammoniak/ammonium (NH3/NH4+) stromen als voorbeelden. De voordelen en beperkingen van dergelijke technieken worden besproken.

Het meten van stromen van minerale nutriënten en toxische stoffen in planten met radioactieve tracers

Dit protocol beschrijft een experimentele procedure voor het kwantitatief en uitgebreid onderzoek naar het metabolisme van meerdere nutriënten bronnen. Deze werkstroom, gebaseerd op een combinatie van isotopische tracerproeven en een analytische procedure, kan het lot van verbruikte voedingsstoffen en de metabole oorsprong van moleculen synthetized door micro-organismen te bepalen.

Workflow gebaseerd op de combinatie van isotopische tracerproeven te onderzoeken van de microbiële metabolisme van meerdere nutriënten bronnen

Visualiseren en meten wortel groei in situ is zeer uitdagend. We presenteren een aanpasbare rhizobox methode voor het bijhouden van de ontwikkeling van de wortel en proliferatie na verloop van tijd in reactie op de voedingsstoffen verrijking. Deze methode wordt gebruikt voor het analyseren van maïs genotypische verschillen in wortel plasticiteit in reactie op een organische stikstofbron.

Een geoptimaliseerde Rhizobox Protocol bij het visualiseren van de wortelgroei en responsiviteit gelokaliseerde nutriënten

Een microplot ontwerp voor 15N tracer onderzoek wordt beschreven om meerdere in-season plant en bodem bemonstering gebeurtenissen tegemoet te komen. Voor de analyse van 15 N worden bodem- en verwerkingsprocedures voor monsters, met inbegrip van slijp- en weegprotocollen, voor 15N-analyse naar voren gebracht.

Microplot Ontwerp en Plant en Bodem Monster Voorbereiding voor 15Stikstof Analyse

De ontwikkelde methode van 13C 6-Glucose-etikettering in combinatie met vloeistofchromatografie met hoge resolutie massaspectrometrie is veelzijdig en legt de basis voor toekomstige studies naar de primaire organen en routes die betrokken zijn bij de synthese van secundaire metabolieten in medicinale planten, evenals het uitgebreide gebruik van deze secundaire metabolieten.

13 okt.C 6-glucose-etikettering geassocieerd met LC-MS: identificatie van primaire organen van planten in secundaire metabolietsynthese

Dit protocol bevat een gedetailleerde procedure voor de bereiding van vier koolstof-11 radiotracers door middel van de "lusmethode" [11C] methylering. We beschrijven de procedure om [11C]ER-176 te synthetiseren, met gegevens voor drie extra radiotracers: [11C]MRB, [11C]m HED en [11C]PiB. De lusmethode zorgt voor een efficiënte synthese met verhoogde radiochemische opbrengsten tegen traditionele methylering van reactievaten [11C].

Verbetering van de efficiëntie en radiolabelingopbrengsten van koolstof-11 radioliganden voor klinisch onderzoek met behulp van de lusmethode

Het gebruik van een naaldinjectiemethode om maïs- en teosinteplanten te enten met de biotrofe ziekteverwekker Ustilago maydis wordt beschreven.  De inentingsmethode voor naaldinjectie vergemakkelijkt de gecontroleerde afgifte van de schimmelpathogenese tussen de bladeren van de plant waar de ziekteverwekker de plant binnenkomt door de vorming van appresoria. Deze methode is zeer efficiënt, waardoor reproduceerbare inentingen met U. maydis mogelijk zijn.

Een snelle en efficiënte methode voor het beoordelen van pathogeniteit van Ustilago maydis op maïs- en teosintelijnen

Leer hoe u een continue 13C 15N isotopenlabelingskamer bouwt en bedient voor uniforme of differentiële labeling van plantenweefsels. Deze methode maakt nauwkeurige metabole en structurele studies mogelijk.

Opzet en werking van een continue 13 C 15 N Labeling Kamer voor Uniform of Differentieel, Metabole en structurele, Plant isotooplabelen (Video) | JoVE Journal

Opzet en werking van een continue

Meer video's verkennen