Name: Systemische Injectie van neurale stamcellen / progenitorcellen in Muizen met chronische EAE (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-15T18:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: Leer een minimaal invasieve methode voor stamceltransplantatie bij muizen met experimentele auto-immuun encefalomyelitis, een model voor multiple sclerose. Dit protocol toont systemische injectie van neurale stam/progenitorcellen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs danken Jayden Smith voor kritisch beoordelen en bewijs het bewerken van het manuscript. Dit werk heeft steun van de National Multiple Sclerosis Society (NMSS, gedeeltelijke subsidies RG-4001-A1) ontvangen, de Italiaanse Multiple Sclerose Vereniging (AISM, verlenen 2010/R/31), het Italiaanse Ministerie van Volksgezondheid (GR08-7), Wings for Life, Banca Agricola Popolare di Ragusa (BAPR), de European Research Council (ERC) in het kader van de ERC-2010-StG subsidieovereenkomst geen 260.511-SEM_SEM en de Europese Gemeenschap (EG) 7e Kaderprogramma (FP7/2007-2013) onder subsidieovereenkomst n * deg; 280772 - Ione.

<ol><li>Ben-Hur, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplanted+multipotential+neural+precursor+cells+migrate+into+the+inflamed+white+matter+in+response+to+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Transplanted multipotential neural precursor cells migrate into the inflamed white matter in response to experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Glia. 41, 73-80 (2003).</li>
<li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+of+adult+neurospheres+induces+recovery+in+a+chronic+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Injection of adult neurospheres induces recovery in a chronic model of multiple sclerosis.</a> Nature. 422, 688-694 (2003).</li>
<li>Chu, K., Kim, M., Jeong, S. W., Kim, S. U., Yoon, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cells+can+migrate%2C+differentiate%2C+and+integrate+after+intravenous+transplantation+in+adult+rats+with+transient+forebrain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cells can migrate, differentiate, and integrate after intravenous transplantation in adult rats with transient forebrain ischemia.</a> Neurosci. Lett. 343, 129-133 (2003).</li>
<li>Bottai, D., Madaschi, L., Di Giulio, A. M., Gorio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viability-dependent+promoting+action+of+adult+neural+precursors+in+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Viability-dependent promoting action of adult neural precursors in spinal cord injury.</a> Mol. Med. 14, 634-644 (2008).</li>
<li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurosphere-derived+multipotent+precursors+promote+neuroprotection+by+an+immunomodulatory+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neurosphere-derived multipotent precursors promote neuroprotection by an immunomodulatory mechanism.</a> Nature. 436, 266-271 (2005).</li>
<li>Einstein, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraventricular+transplantation+of+neural+precursor+cell+spheres+attenuates+acute+experimental+allergic+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Intraventricular transplantation of neural precursor cell spheres attenuates acute experimental allergic encephalomyelitis.</a> Mol. Cell Neurosci. 24, 1074-1082 (2003).</li>
<li>Chu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cell+transplantation+reduces+spontaneous+recurrent+seizures+following+pilocarpine-induced+status+epilepticus+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cell transplantation reduces spontaneous recurrent seizures following pilocarpine-induced status epilepticus in adult rats.</a> Brain Res. 1023, 213-221 (2004).</li>
<li>Jeong, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cell+transplantation+promotes+functional+recovery+in+rats+with+experimental+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cell transplantation promotes functional recovery in rats with experimental intracerebral hemorrhage.</a> Stroke. 34, 2258-2263 (2003).</li>
<li>Aboody, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cells+display+extensive+tropism+for+pathology+in+adult+brain%3A+evidence+from+intracranial+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Neural stem cells display extensive tropism for pathology in adult brain: evidence from intracranial gliomas.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97, 12846-12851 (2000).</li>
<li>Muller, F. J., Snyder, E. Y., Loring, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy%3A+can+neural+stem+cells+deliver%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gene therapy: can neural stem cells deliver.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 75-84 (2006).</li>
<li>Martino, G., Pluchino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+therapeutic+potential+of+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The therapeutic potential of neural stem cells.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 395-406 (2006).</li>
<li>Deckert-Schluter, M., Schluter, D., Hof, H., Wiestler, O. D., Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+of+ICAM-1%2C+VCAM-1+and+their+ligands+LFA-1%2C+Mac-1%2C+CD43%2C+VLA-4%2C+and+MHC+class+II+antigens+in+murine+Toxoplasma+encephalitis%3A+a+light+microscopic+and+ultrastructural+immunohistochemical+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuropathol.+Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Differential expression of ICAM-1, VCAM-1 and their ligands LFA-1, Mac-1, CD43, VLA-4, and MHC class II antigens in murine Toxoplasma encephalitis: a light microscopic and ultrastructural immunohistochemical study.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 53, 457-468 (1994).</li>
<li>Hemmer, B., Archelos, J. J., Hartung, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+concepts+in+the+immunopathogenesis+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">New concepts in the immunopathogenesis of multiple sclerosis.</a> Nat. Rev. Neurosci. 3, 291-301 (2002).</li>
<li>Butcher, E. C., Picker, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphocyte+homing+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Lymphocyte homing and homeostasis.</a> Science. 272, 60-66 (1996).</li>
<li>Rampon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanism+of+systemic+delivery+of+neural+precursor+cells+to+the+brain%3A+assembly+of+brain+endothelial+apical+cups+and+control+of+transmigration+by+CD44%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanism of systemic delivery of neural precursor cells to the brain: assembly of brain endothelial apical cups and control of transmigration by CD44.</a> Stem Cells. 26, 1673-1682 (2008).</li>
<li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cells+ameliorate+autoimmune+encephalomyelitis+in+non-human+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cells ameliorate autoimmune encephalomyelitis in non-human primates.</a> Ann. Neurol. 66, 343-354 (2009).</li>
<li>Martino, G., Pluchino, S., Bonfanti, L., Schwartz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+regeneration+in+physiology+and+pathology%3A+the+immune+signature+driving+therapeutic+plasticity+of+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Brain regeneration in physiology and pathology: the immune signature driving therapeutic plasticity of neural stem cells.</a> Physiol. Rev. 91, 1281-1304 (2011).</li>
<li>Aharonowiz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effect+of+transplanted+human+embryonic+stem+cell-derived+neural+precursors+in+an+animal+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effect of transplanted human embryonic stem cell-derived neural precursors in an animal model of multiple sclerosis.</a> PLoS ONE. 3, e3145(2008).</li>
<li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+regulatory+neural+stem%2Fprecursor+cells+protect+from+central+nervous+system+autoimmunity+by+restraining+dendritic+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Immune regulatory neural stem/precursor cells protect from central nervous system autoimmunity by restraining dendritic cell function.</a> PLoS One. 4, (2009).</li>
<li>Einstein, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+precursors+attenuate+autoimmune+encephalomyelitis+by+peripheral+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neural precursors attenuate autoimmune encephalomyelitis by peripheral immunosuppression.</a> Ann. Neurol. 61, 209-218 (2007).</li>
<li>Gritti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotential+stem+cells+from+the+adult+mouse+brain+proliferate+and+self-renew+in+response+to+basic+fibroblast+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Multipotential stem cells from the adult mouse brain proliferate and self-renew in response to basic fibroblast growth factor.</a> J. Neurosci. 16, 1091-1100 (1996).</li>
<li>Furlan, R., Pluchino, S., Marconi, P. C., Martino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+gene+delivery+into+the+central+nervous+system+using+intrathecally+injected+nonreplicative+viral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytokine gene delivery into the central nervous system using intrathecally injected nonreplicative viral vectors.</a> Methods Mol. Biol. 215, 279-289 (2003).</li>
<li>Constantin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+and+analysis+of+adhesive+events+in+brain+microvessels+by+using+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Visualization and analysis of adhesive events in brain microvessels by using intravital microscopy.</a> Methods Mol. Biol. 239, 189-198 (2004).</li>
<li>Politi, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic-resonance-based+tracking+and+quantification+of+intravenously+injected+neural+stem+cell+accumulation+in+the+brains+of+mice+with+experimental+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Magnetic-resonance-based tracking and quantification of intravenously injected neural stem cell accumulation in the brains of mice with experimental multiple sclerosis.</a> Stem Cells. 25, 2583-2592 (2007).</li>
<li>Melzi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-graft+of+allogeneic+immune+regulatory+neural+stem+cells+%28NPC%29+and+pancreatic+islets+mediates+tolerance%2C+while+inducing+NPC-derived+tumors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Co-graft of allogeneic immune regulatory neural stem cells (NPC) and pancreatic islets mediates tolerance, while inducing NPC-derived tumors in mice.</a> PLoS One. 5, (2010).</li>
<li>Amariglio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor-derived+brain+tumor+following+neural+stem+cell+transplantation+in+an+ataxia+telangiectasia+patient%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Donor-derived brain tumor following neural stem cell transplantation in an ataxia telangiectasia patient.</a> PLoS Med. 6, (2009).</li>
<li>Ben-Hur, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+proinflammatory+cytokines+on+the+growth%2C+fate%2C+and+motility+of+multipotential+neural+precursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Effects of proinflammatory cytokines on the growth, fate, and motility of multipotential neural precursor cells.</a> Mol. Cell Neurosci. 24, 623-631 (2003).</li>
<li>Giusto, E., Donega, M., Cossetti, C., Pluchino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuro-immune+interactions+of+neural+stem+cell+transplants%3A+From+animal+disease+models+to+human+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuro-immune interactions of neural stem cell transplants: From animal disease models to human trials.</a> Exp. Neurol. , (2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Somatische stamceltherapieën zijn in opkomst als een van de meest belovende strategieën voor de behandeling van chronische inflammatoire aandoeningen van het CZS zoals MS2 11. Hoewel de mechanismen die de ondersteuning van hun therapeutische effecten moeten nog volledig worden opgehelderd, is de aanzienlijke impact van NPC transplantatie in verschillende experimentele modellen van neurodegeneratieve ziekten aanleiding tot de ietwat provocerende overtuiging dat stamcellen kan binnenkort worden toegepast in men...

Sterke aanwijzingen ontstaan ​​van in vivo studies waaruit de therapeutische werking van de transplantatie van somatische neurale stam / voorlopercellen (NPC) in diermodellen van CNS stoornissen 1-8. Niettemin is een aantal kwesties met betrekking tot de levering van stamcellen in de gastheer dient een zorgvuldige afweging voordat deze experimentele resultaten kunnen worden vertaald in klinische toepassingen. Een bijzonder belangrijke hindernis voor de ontwikkeling van (nonhematopoietic) herstellende stamcel therapieën voor multifocale, chronische inflammatoire hersenziekten is de identificatie van de ideale route van NPC injectie. Een goed begrip van de pathofysiologie van de ziekte gerichte (focale of multifocale; primaire inflammatoire of primaire degeneratieve), en een voorzichtige analyse van de haalbaarheid en de risico&#39;s die samenhangen met de levering technieken zijn in de optimale protocol voor stamceltransplantatie levering identificeren. Terwijl het brandpunt ( <em&gt; Bijvoorbeeld. in het zenuwstelsel parenchym) stamceltransplantatie is een logische benadering voor de behandeling van CNS-ziekten gekenmerkt door plaatsgebonden beschadigingen (bv. Parkinson en ziekte van Huntington, de hersenen en het ruggenmerg traumatische verwondingen en beroerte), kan eenzelfde benadering bewijzen praktisch niet haalbaar zijn bij aandoeningen zoals MS, wanneer een multifocale, chronische en ruimtelijk verspreid CNS-letsel accumuleert tijd. In dit laatste geval richt focale cel injecties individuele laesies wordt ook belemmerd door de beperkte capaciteit van getransplanteerde NPC migreren over lange afstanden in het CZS parenchym, dus kwam de identificatie van alternatieve, meer geschikte werkwijzen CZS gericht op minder invasieve NPC transplantaties . Grote belofte kwam uit de waarnemingen die NPC&#39;s richten een intracraniële tumor (bijv.. Glioom) bij muizen wanneer intravasculair geïnjecteerd buiten de CNS9. Na deze rudimentairein vivo bewijs van de stamcel pathotrophism 10, zijn uitgebreide gegevens zijn verzameld met betrekking tot de haalbaarheid en de therapeutische werkzaamheid van de systemische transplantatie van NPC&#39;s in proefdieren met experimentele auto-immune encefalomyelitis (EAE), als een model van inflammatoire CNS schade, via ofwel intraveneuze (iv) of intracerebroventriculaire (ICV). NPC injectie 1,2,5,6,8 .. We hebben eerst aangetoond dat dit afhankelijk is van het vermogen van getransplanteerde NPC te richten en voer de ontstoken CZS, en vervolgens gaan meerdere intercellulaire communicatieprogramma&#39;s binnen bepaalde micro-omgevingen in vivo 11. Om specifiek op het CZS, zijn NPCs rechtstreeks in de cerebrospinale vloeistof (CSF) verkeer door ICV injectie of in de bloedstroom via iv injectie afgeleverd. Zodra het invoeren ofwel de bloedbaan of het CSF, getransplanteerde NPC actief communiceren metde bloed-hersenbarrière (BBB) ​​of bloed hersenvocht (BCSFB) barrières en voer de CNS parenchym. Deze interactie tussen de NPC transplantaat en de BBB (of BCSFB) wordt geregeld door specifieke set van NPC oppervlak celadhesiemoleculen (CAM) en gefaciliteerd door de expressie van hoge niveaus van CAM contra-liganden op geactiveerde endotheliale / ependymale cellen 12-14. Voorbeelden van deze CAM&#39;s zijn de receptor voor hyaluronate, CD44, en de intercellulaire adhesie molecuul (ICAM) -1 ligand zeer laat antigeen (VLA) -4 5,15,16 (dat in leukocyten, zijn verantwoordelijk voor de interactie met geactiveerde ependymal en endotheliale cellen), en in veel mindere mate lymfocyt functie-geassocieerde antigen (LFA) -1 en P-selectine glycoproteïne ligand (PSGL) -1. NPCs ook express diverse chemokine receptoren, zoals CCR1, CCR2, CCR5, CXCR3 en CXCR4 (maar niet tot expressie CCR3 en CCR7), die functioneel actief zijn, zowel in vitro als in vivo 5,16. Aldus systemically geïnjecteerd NPCs gebruiken deze CAMs, samen met G-proteïne gekoppelde receptor (GPCR), te accumuleren op het niveau van de ontstoken CZS. Omgekeerd NPCs geïnjecteerd systemisch in gezonde muizen niet betreden het CZS via vasculaire of hersenvocht ruimte routes 2. CZS-ontsteking, of endotheliale / ependymale cel activatie na systemische cytokine of lypopolisaccharide (LPS) injectie als een model van chemisch geïnduceerde encefalitis, is daarom noodzakelijk voor de accumulatie van systemisch geïnjecteerd NPCs in de hersenen en het ruggenmerg 2. Aldus succesvolle targeting van het CZS systemische therapieën NPC is afhankelijk van de identificatie van ziektespecifieke tijdsspanne (Woo) waarbij de hersenen en het ruggenmerg omgeving bevorderlijk zijn voor de accumulatie en transendotheliale migratie van NPC. Een dergelijke regel komen de voorwaarden in het kader van acute en subacute ontsteking 17. Eenmaal binnengekomen de CNS, getransplanteerde ongedifferentieerde NPCsis aangetoond dat de klinisch-pathologische kenmerken van muizen als grotere, niet-humane primaten met EAE verbeteren. Dit staat beschreven afhankelijk van minimaal celvervanging 2 en opmerkelijke secretie van immuunregulatoire en neuroprotectieve paracriene factoren binnen perivasculaire CNS 2,5,6,18 versus niet-CNS ontstoken gebieden 19,20 (bijv. lymfeklieren) in antwoord op de te inflammatoire cell signaling uitgelokt door infiltrerende immuuncellen 5. Hierin beschrijven we de belangrijkste methodologische aspecten van de systemische injectie van somatische NPCs in een muismodel van chronische EAE. Meer specifiek, definiëren we de protocollen die we hebben opgericht om (i) af te leiden, uit te breiden en voor te bereiden voor transplantatie somatische NPCs uit de subventriculaire zone (SVZ) van volwassen C57BL / 6 muizen; (Ii) induceren chronische EAE in deze muizen en (iii) uitvoeren therapeutisch werkzame systemisch (iv of icv) NPC transplantatie into EAE muizen.

<table><tbody><tr><td>Celcultuur</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EBSS</td><td>Sigma</td><td>E2888</td><td></td></tr><tr><td>L-Cysteïne</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C7352</td><td></td></tr><tr><td>Papaïne</td><td>Worthington</td><td>30H11965</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Scientific</td><td>D/0700/50</td><td></td></tr><tr><td>Mouse NeuroCult basaal medium</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>05700</td><td></td></tr><tr><td>NeuroCult proliferatie supplementen</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>05701</td><td></td></tr><tr><td>Heparine</td><td>Sigma</td><td>H3393</td><td></td></tr><tr><td>Basic fibroblast growth factor</td><td>Peprotech</td><td>100-18B-1000</td><td></td></tr><tr><td>Epidermal growth factor</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15-1000</td><td></td></tr><tr><td>Pen/Strep</td><td>Invitrogen</td><td>1514012</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel (coating solution)</td><td>BD Biosciences</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>NeuroCult&reg; Differentiatiekit (Muis)</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>05704</td><td></td></tr><tr><td>Accumax</td><td>eBioscience</td><td>00-4666-56</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's PBS (DPBS) (10x) zonder Ca en Mg</td><td>PAA Laboratories</td><td>H15-011</td><td></td></tr><tr><td>Myco trace</td><td>PAA Laboratories</td><td>Q052-020</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfaat (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Immunofluorescence</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normaal geitenserum</td><td>PAA Laboratories</td><td>B11-035</td><td></td></tr><tr><td>Polyethyleenglycol p-(1,1,3,3-tetramethylbutyl)-fenylether</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Muis anti Nestin</td><td>Abcam</td><td>ab11306</td><td></td></tr><tr><td>Konijn anti GFAP</td><td>DAKO</td><td>203344</td><td></td></tr><tr><td>Muis anti Histon H3 (fosfo S10)&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab14955</td><td></td></tr><tr><td>Konijn anti MAP-2</td><td>Abcam</td><td>ab32454</td><td></td></tr><tr><td>Rat anti MBP</td><td>AbD SEROTEC</td><td>MCA409S</td><td></td></tr><tr><td>Anti-O4 Antilichaam, clone 81 | MAB345</td><td>Millipore</td><td>MAB345</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Montage oplossing</td><td>DAKO</td><td>S3023</td><td></td></tr><tr><td>EAE</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Freund's Adjuvans Incompleet</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F5506</td><td></td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis</td><td>DIFCO</td><td>H37Ra</td><td></td></tr><tr><td>MOG(35&ndash;55)&nbsp;</td><td>Espikem</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pertussis toxine</td><td>List Biological Laboratories</td><td>181</td><td></td></tr><tr><td>Weefselverwerking</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Iris schaar recht</td><td>Fine Sciences Tools</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>Blunt/gebogen pincetten</td><td>Fine Sciences Tools</td><td>11080-02</td><td></td></tr><tr><td>Hernsneder</td><td>Zivic Instruments</td><td>BSMAS005-1</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische messen</td><td>Swann-Morton</td><td>324</td><td></td></tr><tr><td>P200, P1000 pipetten</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamine (Vetalar)</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td>01LC0030</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin (Rompun)</td><td>Bayer</td><td>32371</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxisch frame</td><td>KOPF</td><td>Model 900</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton spuit</td><td>Hamilton</td><td>7762-04</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde (PFA)</td><td>Sigma</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>VECTASTAIN Elite ABC Kit</td><td>Vector Laboratories</td><td>PK-6100</td><td></td></tr></tbody></table>

systemische injectie van neurale stamcellen / progenitorcellen in muizen met chronische eae

Systemic Injection of Neural Stem/Progenitor Cells in Mice with Chronic EAE

Neurale stamcellen / voorlopercellen (NPC) zijn een veelbelovende stamcelbron voor transplantatie benaderingen die gericht zijn op de hersenen reparatie of restauratie in regeneratieve neurologie. Deze richtlijn is ontstaan ​​uit de vele bewijzen dat de hersenen reparatie wordt bereikt na focale of systemische NPC transplantatie in verschillende preklinische modellen van neurologische aandoeningen. Deze experimentele gegevens hebben de cel levering route geïdentificeerd als een van de belangrijkste obstakels van het herstelrecht stamcel therapieën voor hersenziekten die dringende evaluatie vereist. Intraparenchymateuze stamcel transplantatie is een logische benadering voor de pathologieën gekenmerkt door geïsoleerde en toegankelijke hersenletsels zoals ruggemergverwondingen en Parkinson. Helaas, dit principe is slecht van toepassing op aandoeningen die worden gekenmerkt door een multifocale, inflammatoire en verspreid (zowel in tijd en ruimte) de natuur, met inbegrip van multiple sclerose (MS). Als zodanig, hersenen targeting door systemische NPC productietijd is een lage invasieve en therapeutisch effectief protocol cellen leveren aan de hersenen en ruggenmerg van knaagdieren en niet-menselijke primaten die door experimentele chronische inflammatoire beschadiging van het centrale zenuwstelsel (CZS). Deze alternatieve methode cel levering berust op de NPC pathotropism specifiek hun aangeboren vermogen om (i) het detecteren omgeving via functionele celadhesie moleculen en inflammatoire cytokine en chemokine receptoren; (Ii) steekt de lekkende anatomische barrières na intraveneuze (iv.) Of intracerebroventriculaire (ICV) injectie; (Iii) accumuleren op het aantal meervoudige perivasculaire plaats (en) van inflammatoire hersenen en ruggenmerg schade; en (iv) uitoefenen opmerkelijke weefsel trofische en immuunregulatoire effecten op andere host doelcellen in vivo. Hier beschrijven we de methoden die we hebben ontwikkeld voor de iv. en &lt;em&gt; icv levering van syngenetische NPCs in muizen met experimentele auto-immune encefalomyelitis (EAE), als model van chronische CNS inflammatoire demyelinisatie, en overwegen de systemische stamcel levering als een waardevolle techniek voor het selectief richten van de ontstoken hersenen in de regeneratieve neurologie.

NPC afleiding en karakterisering SVZ dissecties uitgevoerd op pools (n = 5-7 muizen / pool) van 6-8 weken oude C57BL / 6 muizen door middel van mechanische en enzymatische dissociatie (Figuur 1A). Na een paar dagen kweken in CGM, vrij zwevende neurosferen beginnen vormen (Figuren 1A en 1B). Primaire werelden worden verzameld en mechanisch gepasseerd om de 4-5 DIV. Bij passage, zijn aantallen levende en dode cellen vastgesteld en cumulatief aantal cellen uitgezet ...

De transplantatie van neurale stamcellen / progenitorcellen (NPC) houdt grote beloften in de regeneratieve neurologie. De systemische toediening van NPCs is in efficiënte, lage invasief en therapeutisch zeer effectief protocol om stamcellen te leveren in de hersenen en ruggenmerg van knaagdieren en niet-menselijke primaten die door experimentele chronische inflammatoire schade aan het centrale zenuwstelsel.

Systemische Injectie van neurale stamcellen / progenitorcellen in Muizen met chronische EAE

Neural stem/precursor cells (NPCs) are a promising stem cell source for transplantation approaches aiming at brain repair or restoration in regenerative ...

Het algemene doel van dit protocol is om neurale stamcelvoorlopers in het CZS te brengen via intraveneuze injectie bij muizen met experimentele autoïmmuunencefalomyelitis, een ziektemodel dat multiple sclerose nabootst. Dit wordt bereikt door eerst neurale stamcelvoorlopers, of NPC's, af te leiden uit de subventriculaire zone van de hersenen van volwassen muizen. De tweede stap is het genetisch labelen van de NPC's met virale vectortechnologie voor in vivo celidentificatie en tracking.Vervolgens worden de prolifererende neurosferen gedissocieerd tot een enkelcellige suspensie, opnieuw gesuspendeerd op de gewenste dichtheid en geïnjecteerd in de staartvene van EAE-muizen op het hoogtepunt van de ziekte. Uiteindelijk worden postmortale pathologische onderzoeken van organen en weefsels en immunohistochemie uitgevoerd om de overleving, distributie en integratie van de geïnjecteerde stamcellen te identificeren en te karakteriseren. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een minimaal invasieve, veilige en effectieve methode biedt om stam- en progenitorcellen in het ontstoken zenuwstelsel te transplanteren.Deze methode helpt bij het beantwoorden van drie kernvragen met be

systemic-injection-neural-stemprogenitor-cells-mice-with-chronic

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Sommige muizenstammen in staat zijn om de inductie van experimentele auto-immuun encefalomyelitis (EAE) te weerstaan ​​met myeline basisch eiwit. Hier beschreven is een eenvoudige immunisatieprotocol dat het niet-reageren omkeert en induceert verlammende ziekte in een aantal typische EAE resistent muis vlekken.

Het overwinnen van reageert niet in experimentele autoimmune encefalomyelitis (EAE) Resistant muizenstammen door adoptieve overdracht en Antigene Challenge

This video demonstrates the method of inducing experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) by injecting myelin-derived peptides with an adjuvant to activate autoreactive T cells, which migrate to the brain. Pertussis toxin is administered to increase blood-brain barrier permeability, allowing these T cells and other immune cells to enter the brain. These immune cells cause demyelination, leading to impaired nerve transmission and development of EAE.

Generation of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in a Mouse Model

In this video, a mouse model of multiple sclerosis is established using experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). The mouse is injected with an emulsion containing a neuronal peptide and an adjuvant, triggering an immune response that activates autoreactive T cells. This is followed by an injection of pertussis toxin (PTX) to increase blood-brain barrier permeability, allowing the autoreactive T-cells to infiltrate the brain. This infiltration initiates a signaling cascade that...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in a Mouse Model

We beschrijven een methode voor het implanteren en onderhouden van glazen ramen over de blootgestelde ruggenmerg van volwassen muizen voor het bestuderen van experimentele auto-immuun encefalomyelitis. Deze ramen bieden chronische optische toegang tot het ruggenmerg voor het monitoren van celdynamica op subcellulair niveau in levende dieren met behulp van twee-foton microscopie.

Implantatie van glazen ruggenmergvensters bij volwassen muizen met experimentele auto-immuun encefalomyelitis

Experimentele autoimmuun encefalomyelitis (EAE) is een gevestigde diermodel voor multiple sclerose. C57BL / 6 muizen worden geïmmuniseerd met myeline oligodendrocyt glycoproteïne (MOG) peptide 35-55 (MOG 35-55), wat resulteert in een oplopende zwakke verlamming veroorzaakt door autoreactieve immuuncellen in het centrale zenuwstelsel. Protocollen voor de ziekte van inductie en toezicht zal worden besproken.

Myeline Oligodendrocyte glycoproteïne (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Geïnduceerde experimentele autoimmuun encefalomyelitis (EAE) in C57BL / 6 muizen

Dit manuscript beschrijft de methoden voor inductie en scoren van het experimentele auto-immuunencefalomyelitis (EAE) model, samen met de beoordeling van immuunceldistributie en mRNA-cytokineniveaus in lymfeklieren, milt, bloed en ruggenmerg met behulp van flowcytometrie en kwantitatieve PCR, respectievelijk, in verschillende fasen van de ziekte.

Inductie van experimentele auto-immune Encefalomyelitis in Muizen en evaluatie van de ziekte-afhankelijke Verdeling van immuuncellen in verschillende weefsels

Dit protocol beschrijft hoe te bepalen of farmacologische behandelingen voor experimentele auto-immuun encefalomyelitis CNS-bescherming vertonen als gevolg van het onderdrukken van immuuncel-infiltratie of neuroprotectief zijn tijdens de aanval van immuuncel-infiltratie.

Het bepalen van onderdrukking van het immuunsysteem versus CNS Bescherming voor farmacologische interventies bij auto-Demyelinisatie

De getoonde techniek voor in vivo bioluminescentie levende en nabije infrarood beeldvorming van optische neuritis en encefalitis bij de experimentele autoimmune encefalomyelitis (EAE) model voor multiple sclerose in SJL / J muizen.

Bioluminescentie en nabij-infrarood beeldvorming van oogzenuwontsteking en hersenontsteking in de EAE Model van Multiple Sclerose in Muizen

Hier presenteren we protocollen om te onderzoeken op bijzondere waardeverminderingen van de neurovasculaire eenheid tijdens de experimentele autoimmune encefalomyelitis in vivo. Wij ingaan specifiek op het bepalen van de bloed - hersenbarrière permeabiliteit en gelatinase activiteit die betrokken zijn bij migratie van leukocyten in de glia-limitans.

Visualiseren van de waardevermindering van het endotheel en gliale belemmeringen van de neurovasculaire eenheid tijdens de experimentele Autoimmune encefalomyelitis In Vivo

Tot op heden zijn protocollen voor de gelijktijdige isolatie van alle belangrijke celtypen van het centrale zenuwstelsel uit dezelfde muis een onvervulde vraag. Het protocol toont een procedure die toepasbaar is bij naïeve en experimentele auto-immuun encefalomyelitis-muizen om complexe cellulaire netwerken tijdens neuro-inflammatie te onderzoeken en tegelijkertijd het vereiste aantal muizen te verminderen.

Gelijktijdige isolatie van de belangrijkste celtypen van het centrale zenuwstelsel van volwassen auto-immuun encefalomyelitis-muizen

Experimentele auto-immuun encefalomyelitis (EAE) dient als een diermodel van multiple sclerose. Dit artikel beschrijft een benadering voor het scoren van ruggenmergontsteking, demyelinisatie en axonaal letsel bij EAE. Daarnaast wordt een methode gepresenteerd om oplosbare neurofilamentlichtniveaus in het muizenserum te kwantificeren, waardoor de beoordeling van axonaal letsel bij levende muizen wordt vergemakkelijkt.

Scoren van ontsteking, demyelinisatie en axonletsel van het centrale zenuwstelsel bij experimentele auto-immuunencefalomyelitis

Leer een minimaal invasieve methode voor stamceltransplantatie bij muizen met experimentele auto-immuun encefalomyelitis, een model voor multiple sclerose. Dit protocol toont systemische injectie van neurale stam/progenitorcellen.

Systemische Injectie van neurale stamcellen / progenitorcellen in Muizen met chronische EAE

Meer video's verkennen