Name: Verminderde Itraconazol Concentratie en duur succesvol zijn in het behandelen van Batrachochytrium dendrobatidis Infectie in Amfibieën (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-14T18:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Leer een effectieve behandeling voor Batrachochytrium dendrobatidis-infectie bij amfibieën met verlaagde itraconazolconcentratie en kortere duur. Deze methode minimaliseert bijwerkingen en verbetert het welzijn van de dieren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ik wil graag CL Richards-Zawacki bedanken voor hun hulp het conceptualiseren van de experimentele opzet en assisteren met materialen, A. Pessier om hulp oprichting van een behandelschema en necropsie analyses, MWH Chatfield, MJ Robak, K. Tasker en D. Lenger voor hulp in de laboratorium en ondersteuning en M. McFadden en P. Harlow in de Taronga Zoo voor het gebruik van hun ruimte tijdens het filmen. Het project werd gedeeltelijk door Louisiana Department of Wildlife and Fisheries gefinancierd door de Louisiana Environmental Education Commission subsidie ​​voor LA Brannelly en van Life Technologies.

Ethiek Goedkeuring: Dit onderzoek en de methoden zijn goedgekeurd door Animal Gebruik en onderhoud Comite Tulane University (protocol nr. 0407.). 1. Testen op Bd Infectie <ol><li> Zwabberen voor Bd <ol><li> Wattenstaafje dieren met een steriel wattenstaafje vijf maal op de ventrum, vijf keer op elke dij, elke kant, en elke ledemaat voor een totaal van 45 slagen. Zwabberen is een niet-invasieve methode voor de monsterneming voor Bd op amfibie huid. </li><li> Voorzichtig draai de swab tijdens en tussen slagen te zorgen voor de grootste hoeveelheid DNA wordt verzameld op het wattenstaafje. </li><li> WINKEL swabs in 1,5 ml microbuisjes bij -20 ° C. </li></ol></li><li> DNA-extractie en qPCR assay <ol><li> Uittreksel genomisch DNA van de uitstrijkjes met een commercieel verkrijgbare DNA isolatie kit, volgens de instructies van dierlijk weefsel. </li><li> Analyseer de geëxtraheerde DNA met behulp van kwantitatieve real time PCR (qPCR) volgende Boyle <em&gt; et al. 17, met de volgende wijzigingen.: </li><li> Verdunnen DNA-extractie monsters 01:10 met dubbele gedemineraliseerd water. </li><li> Voeg 0,7 ul van runderserumalbumine (BSA) PCR inhibitie voorkomen. </li><li> Zijn een interne positieve controle in elk monster te verzekeren PCR remming werd geen resultaten beïnvloeden. </li><li> Voer monsters met een positieve en negatieve controle en een reeks verdunning normen zoöspore (infectie) laad schatten. </li></ol></li></ol> 2. Enting <ol><li> Cultuur Bd <ol><li> Bereid trypton bouillon door toevoeging van 10 g trypton 1 L omgekeerde osmose of gedeïoniseerd water, autoclaaf (121 ° C gedurende 40 min.) en afgekoeld. Eenmaal afgekoeld tot 23 ° C, voeg 1 ml penicilline-streptomycine. </li><li> Grow Bd stam (JEL411 van J. Longcore, geïsoleerd van Guabal, Panama uit een Phyllomedusa maki) in een tryptone bouillon gedurende zeven dagen bij 23 ° C. </li></ol></li><li> Breng de broth cultuur trypton en agar platen. <ol><li> Platen, voeg 10 g trypton en 10 g agar 1 L omgekeerde osmose of gedeïoniseerd water en autoclaaf (121 ° C gedurende 40 min). </li><li> Zodra de geautoclaveerde mengsel is afgekoeld om te raken, maar voordat het stolt, giet in petrischaaltjes, 1/4-1/3 vol, in een laminaire stroming kap. </li><li> Wanneer agar volledig is gestold en afgekoeld, voeg 0,5 ml Bd bouillon aan elke plaat en verdeel gelijkmatig over de plaat. Laten drogen. </li><li> Zodra de platen worden geënt met Bd zoösporen, Seal-platen met Parafilm. </li><li> Laat platen geïncubeerd bij 23 ° C gedurende 5-7 dagen. Controleer zoospore beweging om de levensvatbaarheid te garanderen voor enting. </li></ol></li><li> Vloed platen voor zoospore enting oplossing <ol><li> Na de 5-7 dagen van Bd incubatie en groei, overstromen elk bord met 5 ml leidingwater leeftijd en laat zoösporen tot de media voor 10 min in te voeren. </li><li> Giet de zoospore Suspension in een draagbare container. </li><li> Schatting zoöspore concentratie met een hemocytometer. </li><li> Verdun het mengsel tot een concentratie van 1 x 10 6 per 3 ml met leidingwater leeftijd. </li></ol></li><li> Inoculeren dieren <ol><li> In individuele 50 ml containers, te enten elk dier door het gieten van 3 ml inoculum mengsel over haar ventrum. Laat extra inoculum te druppelen in de basis van de inoculatie container. </li><li> Elk dier zal in inenting container blijven gedurende 24 uur voor infecties zorgen. </li><li> Na 24 uur van inenting, terugkeren dieren aan individuele gedesinfecteerd terraria. </li><li> Laat infectie bouwen voor twee weken. Bevestig infectie met wattenstaafje en qPCR resultaten, en beginnen met de behandeling. </li><li> Voor Bd-negatieve controles, overstroming Bd-vrij agar platen met 5 ml jaar leidingwater, en mock enten de dieren met behulp van dezelfde methoden als hierboven. </li></ol></li></ol> 3. Behandelschema <ol><li> Prepare behandeling bad <ol><li> Voeg 2,50 ml waterige itraconazol (1% Trisporal OS) om 1 L Amphibian Ringer-oplossing (0,0025% itraconazol - de laagste effectieve behandeling concentratie). <ol><li> Amfibie Ringer&#39;s oplossing recept: 1 L omgekeerde osmose of gedeïoniseerd water, 6,6 g natriumchloride, 0,15 g kaliumchloride, 0,15 g calciumchloride en 0,2 g natriumbicarbonaat. Autoclaaf oplossing (121 ° C gedurende 40 min) en laat afkoelen tot kamertemperatuur. </li><li> Voor 0,01% itraconazol behandeling concentratie, voeg 10,00 ml waterige itraconazol (1% Trisporal OS) om 1 L Amphibian Ringer-oplossing </li><li> Voor 0,005% itraconazol behandeling concentratie, voeg 5,00 ml waterige itraconazol (1% Trisporal OS) om 1 L Amphibian Ringer-oplossing. </li></ol></li><li> Voor Bd-positieve en Bd-negatieve controles, baden dieren in Amphibian Ringer-oplossing zonder itraconazol. </li></ol></li><li> Behandeling &lt;ol&gt; <li> Plaats individuele amfibieën in gedesinfecteerd 50 ml containers met 35 ml van de behandeling oplossing. </li><li> Zorgen voor dieren zijn volledig gedekt gedurende vijf minuten onder voorzichtig schudden van de container. </li><li> Terug dieren ontsmet terraria. Herhaal dit voor zes dagen. </li></ol></li><li> Zorgen voor de behandeling succes <ol><li> Proefdieren voor Bd infectie op de dag dat de behandeling begint. </li><li> Proefdieren voor Bd infectie een week na de behandeling is voltooid, en een keer per week gedurende vier weken voor infecties zorgen heeft ontruimd. </li></ol></li></ol> 4. Bd als Biohazard <ol><li> Desinfecteren individuele terraria wekelijks. <ol><li> Baad de terraria en behandeling containers in een 10% bleekwater oplossing bad. </li><li> Tweemaal Spoel elk gebleekt container met stromend water. </li><li> Verpakking laten drogen voor 24 uur voor hergebruik. </li></ol></li><li> Draag schone nitril handschoenen bij het hanteren van dieren om kruisbesmetting te voorkomenvan Bd ziekteverwekker. Wijzig handschoenen tussen de behandeling van elk dier. </li><li> Desinfecteer alle vloeibare afvalstoffen voorafgaand aan verwijdering door het brengen van de oplossing tot 10% bleekmiddel. </li><li> Autoclaaf alle vaste afvalstoffen die mogelijk wordt blootgesteld aan Bd alvorens ze te verwijderen. </li></ol>

<ol><li>Stuart, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Status+and+trends+of+amphibian+declines+and+extinctions+worldwide%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Status and trends of amphibian declines and extinctions worldwide.</a> Science. 306 (5702), 1783-1786 (2004).</li>
<li>Skerratt, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spread+of+chytridiomycosis+has+caused+the+rapid+global+decline+and+extinction+of+frogs%5BTitle%5D)+AND+%22EcoHealth%22%5BJournal%5D)">Spread of chytridiomycosis has caused the rapid global decline and extinction of frogs.</a> EcoHealth. 4, 125-134 (2007).</li>
<li>Wake, D. B., Vredenburg, V. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colloquium+paper%3A+are+we+in+the+midst+of+the+sixth+mass+extinction%3F+A+view+from+the+world+of+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Colloquium paper: are we in the midst of the sixth mass extinction? A view from the world of amphibians.</a> PNAS. 105, 11466-11473 (2008).</li>
<li>Voyles, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrolyte+depletion+and+osmotic+imbalance+in+amphibians+with+chytridiomycosis%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Electrolyte depletion and osmotic imbalance in amphibians with chytridiomycosis.</a> Dis. Aquat. Org. 77 (2), 113-118 (2007).</li>
<li>Ramsey, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphibian+immune+defenses+against+Batrachochytrium+dendrobatidis%3A+A+war+between+host+and+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Amphibian immune defenses against Batrachochytrium dendrobatidis: A war between host and pathogen.</a> , (2011).</li>
<li>McMahon, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chytrid+fungus+Batrachochytrium+dendrobatidis+has+nonamphibian+hosts+and+releases+chemicals+that+cause+pathology+in+the+absence+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Chytrid fungus Batrachochytrium dendrobatidis has nonamphibian hosts and releases chemicals that cause pathology in the absence of infection.</a> PNAS. 110 (1), 210-215 (2013).</li>
<li>Berger, L., Speare, R., Pessier, A., Voyles, J., Skerratt, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+chytridiomycosis+requires+urgent+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Treatment of chytridiomycosis requires urgent clinical trials.</a> Dis. Aquat. Org. 92, 165-174 (2010).</li>
<li>Chatfield, M. W. H., Richards-Zawacki, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+temperature+as+a+treatment+for+Batrachochytrium+dendrobatidis+infection+in+captive+frogs%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Elevated temperature as a treatment for Batrachochytrium dendrobatidis infection in captive frogs.</a> Dis. Aquat. Org. 94 (3), 235-238 (2011).</li>
<li>Karbowski, M., et al. Free radical-induced megamitochondria formation and apoptosis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKarbowski%2C+M+%22Free+Rad.+Biol.+Med%22">Free Rad. Biol. Med</a>. 26 (98), 396-409 (1999).</li>
<li>Bishop, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elimination+of+the+amphibian+chytrid+fungus+Batrachochytrium+dendrobatidis+by+Archey%27s+frog+Leiopelma+archeyi%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Elimination of the amphibian chytrid fungus Batrachochytrium dendrobatidis by Archey's frog Leiopelma archeyi.</a> Dis. Aquat. Org. 84 (1), 9-15 (2009).</li>
<li>Pessier, A. P., Mendelson, J. A Manual For Control of Infectious Diseases in Amphibian Survival Assurance Colonies and Reintroduction Programs. , IUCN/SSC Conservation Breeding Specialist Group. Apple Valley, MN. (2009).</li>
<li>Page, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloramphenicol+1.+Hazards+of+use+and+the+current+regulatory+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Aus.+Vet.+J%22%5BJournal%5D)">Chloramphenicol 1. Hazards of use and the current regulatory environment.</a> Aus. Vet. J. 68 (1), 1-2 (1991).</li>
<li>Yoon, H. -J., Seo, M. H., Kim, J. -K. Pharmaceutical formulations for itraconazole. , (2005).</li>
<li>Garner, T. W. J., Garcia, G., Carroll, B., Fisher, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+itraconazole+to+clean+Batrachochytrium+dendrobatidis+infection%2C+and+subsequent+depigmentation+of+Alytes+muletensis+tadpoles%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Using itraconazole to clean Batrachochytrium dendrobatidis infection, and subsequent depigmentation of Alytes muletensis tadpoles.</a> Dis. Aquat. Org. 83, 257-260 (2009).</li>
<li>Brannelly, L. A., Richards-Zawacki, C. L., Pessier, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+trials+with+itraconazole+as+a+treatment+for+chytrid+fungal+infections+in+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Clinical trials with itraconazole as a treatment for chytrid fungal infections in amphibians.</a> Dis. Aquat. Org. 101 (2), 95-104 (2012).</li>
<li>Jones, M. E. B., Paddock, D., Bender, L., Allen, J. L., Schrenzel, M. S., Pessier, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+chytridiomycosis+with+reduced-dose+itraconazole%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Treatment of chytridiomycosis with reduced-dose itraconazole.</a> Dis. Aquat. Org. 99 (3), 243-249 (2012).</li>
<li>Boyle, D. G., Boyle, D. B., Olsen, V., Morgan, J. A. T., Hyatt, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+quantitative+detection+of+chytridiomycosis+%28Batrachochytrium+dendrobatidis%29+in+amphibian+samples+using+real-time+Taqman+PCR+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Rapid quantitative detection of chytridiomycosis (Batrachochytrium dendrobatidis) in amphibian samples using real-time Taqman PCR assay.</a> Dis. Aquat. Org. 60 (2), 141-148 (2004).</li>
<li>Martel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+a+safe+antifungal+treatment+protocol+to+eliminate+Batrachochytrium+dendrobatidis+from+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Mycol%22%5BJournal%5D)">Developing a safe antifungal treatment protocol to eliminate Batrachochytrium dendrobatidis from amphibians.</a> Med. Mycol. 49 (2), 143-149 (2011).</li>
<li>Bowerman, J., Rombough, C., Weinstock, S. R., Padgett-Flohr, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Terbinafine+hydrochloride+in+ethanol+effectively+clears+Batrachochytrium+dendrobatidis+in+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Herpetol.+Med.+Surg%22%5BJournal%5D)">Terbinafine hydrochloride in ethanol effectively clears Batrachochytrium dendrobatidis in amphibians.</a> J. Herpetol. Med. Surg. 20 (1), 24-29 (2010).</li>
<li>Young, S., Speare, R., Berger, L., Skerratt, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloramphenicol+with+fluid+and+electrolyte+therapy+cures+terminally+ill+green+tree+frogs+%28Litoria+caerulea%29+with+chytridiomycosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Zoo+Wildlife+Med%22%5BJournal%5D)">Chloramphenicol with fluid and electrolyte therapy cures terminally ill green tree frogs (Litoria caerulea) with chytridiomycosis.</a> J. Zoo Wildlife Med. 43 (2), 330-337 (2012).</li>
</ol>

De auteur verklaart geen concurrerende financiële belangen.

Met behulp van dit protocol konden we de behandeling dosering en het tijdstip van itraconazol behandeling voor Bd bij amfibieën veilig en effectief te verminderen. De laagste behandelingsdosering en tijd (0,0025% voor zes dagen) was een succesvolle behandeling voor subklinisch geïnfecteerde I. nebulifer. De effectiviteit van zowel een lagere dosering en duur van de behandeling tonen de noodzaak van klinische behandeling proeven voor Bd infectie behandelingen, want er zijn geen veilige en effec...

Amfibieën zijn momenteel de grootste afname van de biodiversiteit van alle gewervelde taxa 1. Chytridiomycose, een huidziekte veroorzaakt door de chytrid schimmelpathogeen Batrachochytrium dendrobatidis (Bd), is een van de belangrijkste oorzaken van deze dramatische dalingen 2 Bd is de slechtste pathogeen op verslag voor het veroorzaken van het verlies aan biodiversiteit. Infecteert meer dan 600 soorten amfibieën en heeft veroorzaakte daling in meer dan 300 soorten, waarvan maar liefst 200 soorten bedreigde of uitgestorven 2,3 zijn geworden. De amfibie chytrid schimmel is niet gastheerspecifiek en het is onduidelijk welke kwaliteiten van de host kan voor Bd infectie tot vooruitgang leidt tot een ernstige ziekte. Chytridiomycose veroorzaakt dood door verstoren ionenkanalen in de huid, waardoor verlies aan elektrolyten en hartfalen 4. Ook, Bd supernatant (die geen Bd zoosporen) veroorzaakt een immuunreactie kikkerlarven 5 leading onderzoekers geloven Bd produceert een giftig bijproduct 6. Omdat veel soorten zijn snel dalende, captive assurance koloniën en fokprogramma&#39;s zijn belangrijk instandhoudingsmaatregelen, en kan de enige levensader voor sommige soorten. Opzetten en onderhouden van ziektevrije kolonies is een uitdaging voor amfibie beheer faciliteiten. De huidige chemotherapeutische werkwijzen voor het behandelen Bd infecties, hoewel effectief, schadelijk voor de dieren die behandeld kunnen worden, en geen enkele behandeling methode is succesvol tussen soorten en leeftijdsgroepen amfibieën 7 geweest. Enkele klinische proeven van behandelingen voor Bd infectie zijn uitgevoerd 7. De drie meest gebruikte behandelmethoden zijn warmte therapie, chlooramfenicol en itraconazol. Warmte therapie is een nonchemotherapeutic behandeling die lijkt weinig bijwerkingen, kan op verschillende levensstadia en is algebondgenoot effectief. In een behandelingsproef, Chatfield en Richards-Zawacki 8 vonden dat 96% van de behandelde dieren infecties na gehuisvest bij 30 ° C gedurende 10 dagen had gewist. Hoewel deze proef was niet 100% succes, het dient als referentie voor anderen om warmtetherapie hun eigen soort beoordelen. Warmte therapie, hoewel effectief voor veel soorten onpraktisch voor vele alpine soorten die niet bij hoge temperaturen gedurende lange tijd. Chlooramfenicol, antibacterieel, is met succes gebruikt om Bd in vele soorten behandeling, en remt schimmelgroei in vitro. Als antibacteriële, de chlooramfenicol niet de schimmel specifiek aanvallen, maar is bekend apoptose te veroorzaken in eukaryote cellen 9. Er wordt gespeculeerd dat chlooramfenicol therapie apoptose veroorzaakt in de huid, het doden van intracellulaire sporangia, hoewel het exacte werkingsmechanisme is niet bekend. Hoewel er geen klinisch onderzoek is uitgevoerd, en daaromdosis en duur van de behandeling zijn niet onderzocht, huidige behandelprotocollen vergen doorgaans onderdompeling gedurende 2-4 weken 10,11, waardoor deze behandeling onpraktisch voor terrestrische amfibieën. Chlooramfenicol is ook beperkt in sommige landen diergeneeskundig gebruik omdat de blootstelling is geassocieerd met een zeldzame vorm van aplastische anemie 12. Itraconazol, een azole antifungale, is de meest gebruikte voor de behandeling van Bd-infectie bij amfibieën in gevangenschap. Het meest gebruikte protocol baden dieren in een 0,01% itraconazol oplossing gedurende vijf minuten per dag gedurende 11 opeenvolgende dagen. Dit protocol werd afgeleid van standaarden voor zoogdierlijke toediening en, terwijl effectief voor amfibieën, is niet gebaseerd op klinische studies amfibieën 11,13. Dit protocol kan negatieve bijwerkingen in bepaalde soorten veroorzaken, vooral in het genus Rana en kikkervisjes en de recente Metamorphs 11.Tadpole behandeling succesvol is geweest met een veel lagere concentratie (0,0005%) van itraconazol, maar werd geassocieerd met depigmentatie 14. Deze zelfde concentratie werd uitgetest op recente Metamorphs en vond succesvol bij de behandeling van infectie 15 te zijn. Omdat er risico van negatieve bijwerkingen van itraconazol behandeling, hebben sommige beoefenaars ene helft van de gebruikelijke concentratie (0,005%) gedurende 11 opeenvolgende dagen gebruikt en vond dit succesvol te zijn in het genezen van Bd infecties 16 te zijn. De huidige studie is een samenvatting van een klinisch onderzoek naar de behandeling met behulp van itraconazol aan Bd infectie 15 te behandelen. Het protocol beschrijft een poging om de laagste dosis en behandelingstijd die zowel veilig als effectief voor de behandeling Bd besmette dieren met itraconazol vinden. Dieren die in deze studie waren recente Metamorphs van golf kust padden, Incilius nebulifer.

<table><tbody><tr><td>0.1% Aqueous Itraconazole, Sporonox</td><td>Janssen Pharmaceutica Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S640-500</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP366-1</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP510-100</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP328-500</td><td></td></tr><tr><td>Steriele wattenstaafjes</td><td>Medical and Wire Equipment</td><td>MW113</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml Microtubes</td><td>Sarstedt</td><td>73.703.217</td><td></td></tr><tr><td>Qiagen DNEasy Blood and Tissue Kit</td><td>Qiagen</td><td>69581</td><td></td></tr><tr><td>7500 Real-time PCR</td><td>Applied Biosystems</td><td>4351104</td><td></td></tr><tr><td>VIC IPC</td><td>Applied Biosystems</td><td>4308323</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Applied Biosystems</td><td>AM2618</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Invitrogen</td><td>30391023</td><td></td></tr><tr><td>Tryptone</td><td>Invitrogen</td><td>Q10029</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin</td><td>Invitrogen</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>Petrischaal</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CLS430589</td><td></td></tr></tbody></table>

verminderde itraconazol concentratie en duur succesvol zijn in het behandelen van<em&gt; batrachochytrium dendrobatidis</em&gt; infectie in amfibieën

Reduced Itraconazole Concentration and Durations Are Successful in Treating Batrachochytrium dendrobatidis Infection in Amphibians

Amfibieën ervaren de grootste daling van alle gewervelde klasse en een belangrijke oorzaak van deze daling is een pathogene schimmel, Batrachochytrium dendrobatidis (Bd), die de ziekte chytridiomycose veroorzaakt. Captive verzekering kolonies zijn belangrijk wereldwijd bedreigde soorten amfibieën en kan de enige levensader voor die in kritieke uitsterven bedreigd zijn. Handhaving van ziektevrije kolonies is een prioriteit van captive-managers, nog veilige en effectieve behandelingen voor alle soorten en heel levensstadia niet geïdentificeerd. De meest gebruikte chemotherapeutische behandeling itraconazol, hoewel de dosering gebruikelijke schadelijk sommige individuen en soorten kunnen worden. We voerden een klinische behandeling proef om te beoordelen of een lager en veiliger, maar effectieve dosis itraconazol kan worden gevonden om Bd infecties te genezen. We vonden dat door het verminderen van de behandeling concentratie ,01-,0025% en beperking van de behandelingsduur van 11-6 Dagen van 5 min baden, kon kikkers worden genezen van Bd infectie met minder bijwerkingen en minder-behandeling gerelateerde mortaliteit.

Itraconazol behandeling werd als succesvol beschouwd indien alle dieren waren Bd-negatieve vier weken na de behandeling beëindigd. Voorafgaand aan de behandeling begonnen, twee weken na de inenting, alle BD-geënte dieren werden besmet, met een gemiddelde zoospore belasting van 1,121.7 (± 17.34), terwijl vier weken na de behandeling beëindigd, de Bd-positieve controle dieren een gemiddelde zoospore belasting van 16,765.12 gehad ( ± 14.643,08). Behandeling van In...

Batrachochytrium dendrobatidis infectie bij amfibieën kan worden geëlimineerd met behulp van een verminderde concentratie (0.0025%) en de kortere duur (vijf minuten baden voor zes dagen) van itraconazol dan algemeen wordt gebruikt. Minder sterfte en minder negatieve bijwerkingen werden waargenomen met behulp van deze aangepaste behandeling protocol.

Verminderde Itraconazol Concentratie en duur succesvol zijn in het behandelen van<em&gt; Batrachochytrium dendrobatidis</em&gt; Infectie in Amfibieën

Amphibians are experiencing the greatest decline of any vertebrate class and a leading cause of these declines is a fungal pathogen, Batrachochytrium ...

Het algemene doel van deze procedure is om amfibieën die besmet zijn met de amfibieën-chytridschimmel, Bera key tridium, dendro, he of BD, te behandelen met de antifungale chemotherapie triazole. Dit wordt bereikt door eerst BD-culturen te kweken en dieren te inoculeren met de schimmelpathogeen. De tweede stap is om de dieren te testen met behulp van DNA-extractie en QPCR op huidswabs om BD-infectie te bevestigen.Vervolgens worden de geïnfecteerde dieren behandeld door ze vijf minuten per dag gedurende zes dagen te baden in een 0,0025% econazol-oplossing. De laatste stap is het monitoren van de infectiestatus van de behandelde dieren door middel van QPCR-analyse van huidswaps gedurende minimaal vier weken na voltooiing van de behandeling om een succesvolle behandeling van het dier te garanderen; deze procedure aantoont dat een lagere concentratie en een kortere behandelingstijd van het antischimmelmiddel itraconazol effectief zijn voor de behandeling van dieren die geïnfecteerd zijn met bd. Het belangrijkste voordeel van dit behandelingsschema ten opzichte van de aanbevolen behandelingsdosis, namelijk een 0,01% itraconazol-oplossing gedurende 11 dagen, is dat een gereduceerde conce

reduced-itraconazole-concentration-durations-are-successful-treating

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Deze studie omvat werkwijzen effecten op een modelvis gastheer na verandering van de huid en darmen microbiome gemeenschappen compositie van een antibioticum onthullen.

Onderzoek van Host Phenotypes in<em&gt; Gambusia affinis</em&gt; Na een behandeling met antibiotica

Systemische en lokale infectiemodellen met zebravissen voor humaan influenza A-virus worden gedemonstreerd. Met behulp van een systemisch infectiemodel kunnen zebravissen worden gebruikt om antivirale geneesmiddelen te screenen. Met behulp van een lokaal infectiemodel kunnen zebravissen worden gebruikt om reacties van gastheer immuuncellen te karakteriseren.

Met behulp van zebravis modellen van menselijke influenza A-virus infecties op Bleken antivirale middelen en karakteriseren Host Immune Cell Responses

We hebben een modulair high-throughput screening ontwikkeld voor het ontdekken van nieuwe verbindingen tegen Mycobacterium tuberculosis, intracellulaire targeting en-bouillon kweken bacteriën en cytotoxiciteit tegen de zoogdiergastheercel.

Systeem voor de werkzaamheid en cytotoxiciteit Screening van inhibitoren voor intracellulaire<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em

Dit protocol beschrijft het gebruik van sump swabs en slib analyse van zebravis systemen, die tot verhoogde detectie in vergelijking met het exclusieve gebruik van sentinels leidt te detecteren ziekteverwekkers zoals Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. en  Pseudocapillaria tomentosa. Een systeem om te controleren van P. tomentosa eieren in quarantaine wordt ook voorgesteld.

Milieu Screening van Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. en Pseudocapillaria tomentosa in Zebrafish systemen

In dit artikel wordt een samenvatting gemaakt van de ontwerpkenmerken en de effectiviteit van behandelingssystemen die de afvoer van stedelijke stormwater en landbouw irrigatie behandelen om pesticiden en andere verontreinigingen die verband houden met aquatische toxiciteit te verwijderen.

Plantaardige Behandeling Systemen voor het verwijderen van verontreinigingen geassocieerd met oppervlaktewater toxiciteit in Landbouw en Urban Runoff

We kwantificeren epidermale celdood in kikkers met chytridiomycosis met twee methoden. Ten eerste, we gebruiken terminal transferase-gemedieerde dUTP nick einde-etikettering (TUNEL) in situ histologie om verschillen tussen klinisch besmette en niet-geïnfecteerde dieren te bepalen. Ten tweede, wij voeren een tijdreeksanalyse van apoptosis over infectie met behulp van een caspase-3/7 eiwit analyse.

Met behulp van Terminal Transferase-gemedieerde dUTP testen Nick einde-etikettering (TUNEL) en Caspase-3/7 aan maatregel epidermale celdood in kikkers met Chytridiomycosis

De studie van de biologie geeft waardevolle informatie over de reproductieve, fysiologische, embryologische en ontwikkelingsprocessen die organismen van vele taxonomische groepen aandrijgen. Hier presenteren we een uitgebreide gids over verschillende methodologieën die kunnen worden gebruikt om ovariële controle en monitoring in amfibieën te bestuderen.

Voortplantingstechnieken voor het monitoren en beheersen van de eierstokken in amfibieën

Een 96-well microtiter plaat-gebaseerd protocol met behulp van een 2,3-bis (2-methoxy-4-nitro-5-sulfofenyl)-5-carboxanilide-2H-tetrazolium (XTT) reductietest wordt hierin beschreven, om de effecten van antilichamen op biofilms gevormd door C. tropicalis te bestuderen. Dit in vitro protocol kan worden gebruikt om het effect van potentiële nieuwe antischimmelverbindingen op de metabole activiteit van Candida-soortencellen in biofilms te controleren.

Een oplosbare tetrazolium-gebaseerde reductietest om het effect van antilichamen op Candida tropicalis biofilms te evalueren

Dit is een methode voor het bemonsteren en isoleren van kweekbare bacteriën uit de huidmicrobiota van Europese plethodontide salamanders (geslacht Speleomantes). Hier presenteren we een protocol voor het bemonsteren van salamanderhuid met wattenstaafjes en het verwerken ervan met behulp van kweekbare benaderingen. We beschrijven bemonstering, isolatie en vestiging van axenische cultuur met karakterisering van bacteriestammen.

Isolatie en identificatie van bacteriestammen uit de huid van terrestrische amfibieën

Eiwitontwerp omvat de constructie van aminozuursequenties en de opname van specifieke motieven om functionele varianten te creëren. Deze aanpak is van cruciaal belang voor de ontwikkeling van antimicrobiële peptiden (AMP's) om antibioticaresistente ziekteverwekkers te bestrijden. Dit artikel presenteert een procedure voor eiwitconstructie met behulp van verschillende bio-informaticahulpmiddelen.

Toepassing van I TASSER, trRosetta, UCSF Chimera, HADDOCK-server en HEX-loria voor De Novo en In Silico Design of Proteins

Dit protocol biedt een geoptimaliseerde, gedetailleerde gids voor het gebruik van de planarian Schmidtea mediterranea als modelsysteem om gastheer-pathogeen interacties tijdens schimmelinfecties te bestuderen. De methode bouwt voort op de vorige procedure voor het infecteren van planarians met de menselijke schimmelziekteverwekker Candida albicans, en biedt gedetailleerde richtlijnen om de reproduceerbaarheid en experimentele consistentie te verbeteren.

Een geoptimaliseerd protocol voor Candida albicans-infectie in Schmidtea mediterranea om schimmelpathogenese en gastheerverdediging te bestuderen

Leer een effectieve behandeling voor Batrachochytrium dendrobatidis-infectie bij amfibieën met verlaagde itraconazolconcentratie en kortere duur. Deze methode minimaliseert bijwerkingen en verbetert het welzijn van de dieren.

Verminderde Itraconazol Concentratie en duur succesvol zijn in het behandelen van Batrachochytrium dendrobatidis Infectie in Amfibieën (Video) | JoVE Journal

Verminderde Itraconazol Concentratie en duur succesvol zijn in het behandelen van

Meer video's verkennen