Name: Visualiseren neuroblast Cytokinese Tijdens C. elegans Embryogenese (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-12T18:05:00.000+00:00
Duration: 9 min 52 s
Description: Leer neuroblastcytokinese visualiseren tijdens C. elegans-embryogenese met levende beeldvorming en RNAi. Deze methode onthult genfuncties essentieel voor celdeling in ontwikkelingsbiologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen graag erkennen dat dit werk werd ondersteund door de Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC) subsidie.

<ol><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li>
<li>Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K., Kostas, S. A., Driver, S. E., Mello, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391, 806-811 (1998).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+elegans+Sequencing+Consortium.+Genome+sequence+of+the+nematode+C.+elegans%3A+a+platform+for+investigating+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">C. elegans Sequencing Consortium. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology.</a> Science. 282, 2012-2018 (1998).</li>
<li>Pennisi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worming+secrets+from+the+C.+elegans+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Worming secrets from the C. elegans genome.</a> Science. 282, 1972-1974 (1998).</li>
<li>Tabara, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rde-1+gene%2C+RNA+interference%2C+and+transposon+silencing+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The rde-1 gene, RNA interference, and transposon silencing in C. elegans.</a> Cell. 99, 123-132 (1999).</li>
<li>Chisholm, A. D., Hardin, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChisholm%2C+AD+%22Epidermal+morphogenesis.+WormBook.+The+C.+elegans+Research+Community%22">Epidermal morphogenesis. WormBook. The C. elegans Research Community</a>. , 1-22 (2005).</li>
<li>Zhang, H., Gally, C., Labouesse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+morphogenesis%3A+how+multiple+cells+cooperate+to+generate+a+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue morphogenesis: how multiple cells cooperate to generate a tissue.</a> Curr. Opin. Cell Biol. 22, 575-582 (2010).</li>
<li>Kiehart, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing%3A+the+power+of+the+purse+string%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Wound healing: the power of the purse string.</a> Curr. Biol. 9, 602-605 (1999).</li>
<li>Ikegami, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semaphorin+and+Eph+receptor+signaling+guide+a+series+of+cell+movements+for+ventral+enclosure+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Semaphorin and Eph receptor signaling guide a series of cell movements for ventral enclosure in C. elegans.</a> Curr. Biol. 22, 1-11 (2012).</li>
<li>Chin-Sang, I. D., George, S. E., Ding, M., Moseley, S. L., Lynch, A. S., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ephrin+VAB-2%2FEFN-1+functions+in+neuronal+signaling+to+regulate+epidermal+morphogenesis+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22C.+elegans.+Cell%22%5BJournal%5D)">The ephrin VAB-2/EFN-1 functions in neuronal signaling to regulate epidermal morphogenesis in C. elegans.</a> C. elegans. Cell. 99, 781-790 (1999).</li>
<li>Wang, X., Roy, P. J., Holland, S. J., Zhang, L. W., Culotti, J. G., Pawson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+Ephrins+Control+Cell+Organization+in+C.+elegans+Using+Kinase-Dependent+and+-Independent+Functions+of+the+VAB-1+Eph%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Multiple Ephrins Control Cell Organization in C. elegans Using Kinase-Dependent and -Independent Functions of the VAB-1 Eph.</a> Mol. Cell. 4, 903-913 (1999).</li>
<li>Chin-Sang, I. D., Moseley, S. L., Ding, M., Harrington, R. J., George, S. E., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+divergent+C.+elegans+ephrin+EFN-4+functions+in+embryonic+morphogenesis+in+a+pathway+independent+of+the+VAB-1+Eph+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The divergent C. elegans ephrin EFN-4 functions in embryonic morphogenesis in a pathway independent of the VAB-1 Eph receptor.</a> Development. 129, 5499-5510 (2002).</li>
<li>Ghenea, S., Boudreau, J. R., Lague, N. P., Chin-Sang, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+VAB-1+Eph+receptor+tyrosine+kinase+and+SAX-3%2FRobo+neuronal+receptors+function+together+during+C.+elegans+embryonic+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The VAB-1 Eph receptor tyrosine kinase and SAX-3/Robo neuronal receptors function together during C. elegans embryonic morphogenesis.</a> Development. 132, 3679-3690 (2005).</li>
<li>Bernadskaya, Y. Y., Wallace, A., Nguyen, J., Mohler, W. A., Soto, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((UNC-40%2FDCC%2C+SAX-3%2FRobo%2C+and+VAB-1%2FEph+polarize+F-actin+during+embryonic+morphogenesis+by+regulating+the+WAVE%2FSCAR+actin+nucleation+complex%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">UNC-40/DCC, SAX-3/Robo, and VAB-1/Eph polarize F-actin during embryonic morphogenesis by regulating the WAVE/SCAR actin nucleation complex.</a> PLoS Genet. 8, (2012).</li>
<li>Piekny, A. J., Werner, M., Glotzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokinesis%3A+welcome+to+the+Rho+zone%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytokinesis: welcome to the Rho zone.</a> Trends Cell Biol. 15, 651-658 (2005).</li>
<li>Piekny, A. J., Maddox, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+myriad+roles+of+Anillin+during+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22Sem.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The myriad roles of Anillin during cytokinesis.</a> Sem. Cell Dev. Biol. 21, 881-891 (2010).</li>
<li>Zhao, W. M., Fang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin+is+a+substrate+of+anaphase-promoting+complex%2Fcyclosome+%28APC%2FC%29+that+controls+spatial+contractility+of+myosin+during+late+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Anillin is a substrate of anaphase-promoting complex/cyclosome (APC/C) that controls spatial contractility of myosin during late cytokinesis.</a> J. Biol. Chem. 280, 33516-33524 (2005).</li>
<li>Piekny, A. J., Glotzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin+is+a+scaffold+protein+that+links+RhoA%2C+actin+and+myosin+during+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Anillin is a scaffold protein that links RhoA, actin and myosin during cytokinesis.</a> Curr. Biol. 18, 30-36 (2008).</li>
<li>Hickson, G. R., O’Farrell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rho-dependent+control+of+anillin+behavior+during+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Rho-dependent control of anillin behavior during cytokinesis.</a> J. Cell Biol. 180, 285-294 (2008).</li>
<li>Fraser, A. G., Kamath, R. S., Zipperlen, P., Martinez-Campos, M., Sohrmann, M., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomic+analysis+of+C.+elegans+chromosome+I+by+systematic+RNA+interference%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional genomic analysis of C. elegans chromosome I by systematic RNA interference.</a> Nature. 408, 325-330 (2000).</li>
<li>Kamath, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+functional+analysis+of+the+Caenorhabditis+elegans+genome+using+RNAi%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Systematic functional analysis of the Caenorhabditis elegans genome using RNAi.</a> Nature. 421, 231-237 (2003).</li>
<li>Duerr, J. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDuerr%2C+JS+%22Immunohistochemistry.+WormBook%2C+The+C.+elegans+Research+Community%22">Immunohistochemistry. WormBook, The C. elegans Research Community</a>. , 1-61 (2006).</li>
<li>Maddox, A. S., Habermann, B., Desai, A., Oegema, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+two+C.+elegans+anillins+in+the+gonad+and+early+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for two C. elegans anillins in the gonad and early embryo.</a> Development. 132, 2837-2848 (2005).</li>
<li>Sulston, J. E., Schierenberg, E., White, J. G., Thomson, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+embryonic+cell+lineage+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The embryonic cell lineage of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol. 100, 64-119 (1983).</li>
<li>Chin-Sang, I. D., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Form+of+the+worm%3A+genetics+of+epidermal+morphogenesis+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">Form of the worm: genetics of epidermal morphogenesis in C. elegans.</a> Trends Genet. 16, 544-551 (2000).</li>
<li>Zhang, H., Labouesse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+through+mechanical+inputs+%E2%80%93+a+coordinated+process%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Signaling through mechanical inputs – a coordinated process.</a> J. Cell Sci. 125, 3039-3049 (2012).</li>
<li>Guenther, C., Garriga, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetric+distribution+of+the+C.+elegans+HAM-1+protein+in+neuroblasts+enables+daughter+cells+to+adopt+distinct+fates%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Asymmetric distribution of the C. elegans HAM-1 protein in neuroblasts enables daughter cells to adopt distinct fates.</a> Development. 122, 3509-3518 (1996).</li>
<li>Audhya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+complex+containing+the+Sm+protein+CAR-1+and+the+RNA+helicase+CGH-1+is+required+for+embryonic+cytokinesis+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A complex containing the Sm protein CAR-1 and the RNA helicase CGH-1 is required for embryonic cytokinesis in Caenorhabditis elegans.</a> J. Cell Biol. 171, 267-279 (2005).</li>
<li>Maddox, A. S., Lewellyn , L., Desai, A., Oegema, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin+and+the+septins+promote+asymmetric+ingression+of+the+cytokinetic+furrow%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">Anillin and the septins promote asymmetric ingression of the cytokinetic furrow.</a> Dev. Cell. 12, 827-835 (2007).</li>
<li>Dorn, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actomyosin+tube+formation+in+polar+body+cytokinesis+requires+Anillin+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Actomyosin tube formation in polar body cytokinesis requires Anillin in C. elegans.</a> Curr. Biol. 20, 2046-2051 (2010).</li>
<li>Calixto, A., Ma, C., Chalfie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+neuronal+RNAi+in+C.+elegans+using+SID-1%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Enhanced neuronal RNAi in C. elegans using SID-1.</a> Nat. Methods. 7, 554-559 (2010).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dit protocol beschrijft het gebruik van verschillende soorten microscopie beeld celdelingen tijdens mid embryogenese. In het bijzonder, dit protocol benadrukt hoe het imago van de afdeling van neuroblasts, cellen die epidermale morfogenese kan vergemakkelijken. Cel-cel communicatie is belangrijk voor de vorming van weefsel tijdens metazoan ontwikkeling en C. elegans is een uitstekend model voor de vorming van weefsel te bestuderen in vivo. Een gebeurtenis die mooi beeldt het samenspel van weefsels epid...

Terwijl er protocollen beschrijven hoe afbeelding celdeling in de vroege C. elegans embryo, dit protocol wordt beschreven hoe u foto celdeling binnen een weefsel tijdens mid embryogenese. Een van de belangrijkste uitdagingen in de beeldvorming van organismen in ontwikkeling is hun gevoeligheid voor fototoxiciteit geweest. Echter, is toegenomen toegankelijkheid van draaiende schijf confocale microscopen of geveegd veld microscopen meer wijdverspreide beeldvorming toepassingen toegestaan. Beide systemen maken gebruik van solid state lasers en verstrooid licht, waardoor het niveau van UV die de organismen aan. Toch kan groothoek stands nog steeds worden gebruikt voor beeldvorming in vivo, vooral als ze zijn uitgerust met camera&#39;s met een hoge gevoeligheid (bijv. EMCCD), diafragma controle en lichtregeling (bijv. LED&#39;s of verstelbare kwik lampen). Dit protocol beschrijft hoe u ofwel een confocale gebaseerd systeem of een groothoek-systeem op de foto om de celdeling te gebruiken in ontwikkelingslanden C. elegans &lt;/ Em&gt; embryo&#39;s. Als voorbeeld beschrijven we hoe u het neuroblast celdeling. Neuroblasts kan epidermale morfogenese vergemakkelijken door chemische of mechanische signalen naar de bovenliggende epidermale cellen en verschaffen een uitstekend voorbeeld van het belang van intercellulaire communicatie in de vorming van weefsels. Caenorhabditis elegans is een ideaal modelorganisme voor microscopie op basis van studies door zijn transparantie en eenvoudige weefsel organisatie 1. Bovendien C. elegans vatbaar is voor genetische methoden en RNAi en omdat veel van de genen humane homologen, kan het gebruikt worden om geconserveerde moeten mechanismen voor weefselvorming 2-5. In C. elegans, vorming van de epidermis optreedt tijdens embryogenese midden, wanneer de embryo&gt; 300 cellen. Epidermale morfogenese bestaat uit verschillende hoofdfasen, waarbij het embryo is ingesloten in een laag epidermale cellen die vernauwen verlenen tot de embr transformerenyo uit een eivormige vorm in de langwerpige vorm van een worm 6. Ventraal behuizing beschrijft een van deze morfogenetische gebeurtenissen, wanneer de ventrale epidermale cellen migreren naar de ventrale middellijn aan het ventrale oppervlak van de embryo (figuur 1) omvat. Ten eerste, twee paar voorste gelegen voorrand cellen migreren naar de ventrale middellijn, waar zij zich en zekering met de contralaterale 6 buren. Dit wordt gevolgd door de migratie van de achterste gelegen pocket cellen, die wig vormen achtige vormen creëren van een ventrale pocket 6-7. Het mechanisme dat de zak gesloten is niet goed begrepen. Een mogelijkheid is dat een supracellular actine myosine contractiele structuur bindt de zak cellen samen in een tas string als mode, vergelijkbaar met wondgenezing 8. Interessant is migratie van enkele pocket cellen gemedieerd door specifieke subsets onderliggende neuroblasts 9 (neuronale precursors die worden gevonden onder de epidermis: Figuur 1B). Eerdere studies toonden aan dat de neuroblasts regelen ventrale epidermale celmigratie en ventrale behuizing. VAB-1 (Efrine receptor) en VAB-2 (Efrine ligand) zijn sterk uitgedrukt in de neuroblasts en sorteren van anterieure en posterieure neuroblasts vergemakkelijken van elkaar, en mutaties in VAB-1 of VAB-2 oorzaak ventrale behuizing fenotypen 10-13. Echter, promotor rescue experimenten toonden aan dat VAB-1 ook vereist in de bovenliggende ventrale epidermale cellen en receptoren voor andere begeleiding signalen afgescheiden door de neuroblasts zijn uitgedrukt in de ventrale epidermale cellen 9. Hoewel mutaties in een van deze receptoren leiden ventrale behuizing fenotypen, is het niet duidelijk of defecten ontstaan ​​door problemen neuroblast positioneren of door uitval van de ventrale epidermale cellen te reageren op leiding keuen 14. Het veranderen van de verdeling van neuroblasts without waardoor hun vermogen om leiding signalen te scheiden zou licht werpen op de rol van neuroblasts en hun vermogen om mechanische input te geven tijdens epidermale morfogenese. Onlangs bleek dat een celdeling gen, ani-1 (anillin) sterk uitgedrukt in neuroblasts (figuur 2A) en de uitputting veroorzaakt neuroblast divisie defecten. Interessant is dat deze embryo&#39;s tonen ventrale behuizing fenotypes (Fotopoulos, Wernike en Piekny, ongepubliceerde waarnemingen). Anillin nodig is voor celdeling, en met name voor cytokinese, waarbij het proces waarbij een moedercel fysiek verdeeld in twee dochtercellen beschreven. Cytokinesis wordt gedreven door de vorming van een actomyosine contractiele ring, die moet goed worden gecontroleerd in de ruimte en tijd om ervoor te zorgen dat deze goed is gekoppeld aan zusterchromatide segregatie. De meester regulator van metazoan cytokinesis is RhoA (RHO-1 in C. elegans), een klein GTPase dat is eenctive in zijn GTP-gebonden vorm. De GEF Ect2/ECT-2 activeert RhoA, waarna RhoA-GTP interageert met downstream effectoren dat de contractiele ring te vormen en te bemiddelen zijn binnentreden 15. Anillin is een multi-domein eiwit dat bindt aan RhoA via zijn C-terminus en actine en myosine via zijn N-terminus. Anillin nodig om de positie van de contractiele ring in zoogdier-of Drosophila S2 cellen 16 te stabiliseren. Anillin uitputting veroorzaakt contractie ringen om zijwaartse schommelingen die te ondergaan, en cytokinesis uiteindelijk faalt vormen meerkernige cellen 17-19. Interessant, hoewel C. elegans ani-1 coördinaten actomyosine contractiliteit in het vroege embryo, is het niet essentieel voor cytokinese. Zoals hierboven beschreven, ani-1 vereist voor neuroblast cytokinese in mid-embryogenese (Fotopoulos, Wernike en Piekny, ongepubliceerde waarnemingen). Cytokinesis mislukking zou het aantal en de positie van neuroblasts veranderen en kan invloed hebben op de locatie chemische begeleiding signalen, of het kan de mechanische eigenschappen van het weefsel te veranderen. Beide modellen benadrukken de nonautonomous rol van neuroblasts voor ventrale behuizing, en het belang van weefsel-weefsel communicatie tijdens de embryonale ontwikkeling. Deze experimentele protocol wordt beschreven hoe u foto celdeling tijdens C. elegans medio embryogenese met behulp van fluorescentie microscopie. De meeste experimenten bestuderen de mechanismen van celdeling werden in enkele cellen in kweekplaten (bijv.. HeLa of S2-cellen) of vroege embryo&#39;s met een beperkt aantal cellen (bijv. C. elegans eencellige embryo Xenopus of echinoderm embryo&#39;s). Het is echter belangrijk om tevens na celdeling in weefsels, er externe stimuli die de timing en plaatsing van het schot vliegtuig kan beïnvloeden. Verder kunnen cellen chemisch of mechanisch cues beïnvloeden de ontwikkeling van aangrenzende weefselss, en het is belangrijk te begrijpen hoe intercellulaire communicatie helpt weefsel te vormen tijdens de ontwikkeling.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#AGR001.1</td><td>Voor het maken van C. elegans NGM en RNAi platen</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#9002-18-0</td><td>Voor het maken van bacteriën LB agar platen</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#AGA001.500</td><td></td></tr><tr><td>Anti-muis Alexa Fluor 488 antilichaam</td><td>Life Technologies Corporation (Invitrogen)</td><td>#A11029</td><td></td></tr><tr><td>Anti-muis anti-GFP antilichaam</td><td>Roche Applied Science</td><td>#11814460001</td><td></td></tr><tr><td>Anti-konijn Alexa Fluor 568 antilichaam</td><td>Life Technologies Corporation (Invitrogen)</td><td>#A11011</td><td></td></tr><tr><td>Ampicilline</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#AMP201.5</td><td>Bewaar poeder bij 4 &deg;C en opgelost ampicilline bij -20 &deg;C</td></tr><tr><td>Bactopeton&nbsp; (pepton-A)</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#G213</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 (calciumchloride)</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#C302.1</td><td></td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#CHL380.25</td><td>Oplossen in ethanol</td></tr><tr><td>DAPI&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#D9542</td><td>Gebruik voor het kleuren van nucleïnezuren (DNA)</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#GLY001.1</td><td></td></tr><tr><td>IPTG (isopropylthio-&beta;-galactoside)</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#367-93-1</td><td>Bewaar poeder en opgelost IPTG bij -20 &deg;C</td></tr><tr><td>KH2PO4 (kaliumfosfaat, monobasisch)</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#PPM666.1</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4 (kaliumfosfaat, dibasisch)</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#PPD303.1</td><td></td></tr><tr><td>L4440&nbsp; (voedingsvector)</td><td>Addgene</td><td>#1654</td><td>Bewaar als glycerol stock bij -80 &deg;C</td></tr><tr><td>MgSO4&nbsp;&nbsp; (magnesiumsulfaat)</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#MAG511.500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (natriumchloride)</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4 (natriumfosfaat, dibasisch)</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#7558-79-4</td><td></td></tr><tr><td>Normaal Ezelsserum (NDS)</td><td>Wisent Bioproducts</td><td>#035-110</td><td></td></tr><tr><td>n-Propyl-3,4,5-trihydroxybenzoaat (propylgallaat)</td><td>Alfa Aesar</td><td>#A10877</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-lysine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#P8920</td><td>Voor optimale resultaten bekleed microscoopglazen drie keer&nbsp;</td></tr><tr><td>Streptomycine</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#STP101.50</td><td>Bewaar poeder bij 4 &deg;C en opgelost streptomycine bij -20 &deg;C</td></tr><tr><td>Tetracycline</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#TET701.10</td><td>Bewaar poeder bij 4 &deg;C en opgelost tetracycline bij -20 &deg;C</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>CAS#9005-64-5</td><td></td></tr><tr><td>Trypton</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#TRP402.500</td><td></td></tr><tr><td>Gistextract</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#8013-01-2</td><td></td></tr></tbody></table>

visualiseren neuroblast cytokinese tijdens<em&gt; c. elegans</em&gt; embryogenese

Visualizing Neuroblast Cytokinesis During C. elegans Embryogenesis

Dit protocol beschrijft het gebruik van fluorescentie microscopie afbeelding delende cellen in ontwikkelingslanden Caenorhabditis elegans embryo. Vooral dit protocol gericht op het afbeelden verdelen neuroblasts, die zich bevinden onder de epidermale cellen en kan belangrijk zijn voor epidermale morfogenese zijn. Weefsel vorming is cruciaal voor metazoan ontwikkeling en vertrouwt op externe stimuli uit naburige weefsels. C. elegans is een uitstekend model organisme om weefsel morfogenese bestuderen in vivo vanwege de transparantie en eenvoudige organisatie, waardoor de weefsels gemakkelijk om te studeren via microscopie. Ventrale behuizing is het proces waarbij het ventrale oppervlak van het embryo is bedekt met een enkele laag van epitheelcellen. Deze gebeurtenis wordt gedacht te worden vergemakkelijkt door de onderliggende neuroblasts, die chemische begeleiding cues migratie van de bovenliggende epitheliale cellen mediëren. De neuroblasts zeer proliferatieve en ook kunnen fungerenals mechanische substraat voor de ventrale epidermale cellen. Studies met dit experimentele protocol kan het belang van intercellulaire communicatie ontdekken tijdens weefselvorming en kunnen worden gebruikt om de rol van genen betrokken bij celdeling in ontwikkelende weefsels te onthullen.

Deze experimentele protocol wordt beschreven hoe u foto celdeling in C. elegans embryo&#39;s tijdens de mid embryogenese. In het bijzonder wordt beschreven hoe u foto neuroblasts, die epidermale morfogenese kan vergemakkelijken. Epidermale morfogenese optreedt als gevolg van een combinatie van epidermale celvorm veranderingen, migratie en adhesie, maar ook afhankelijk van chemische of mechanische signalen van de onderliggende neuroblasts (Figuur 1B). De neuroblasts scheiden Praktische signalen ...

Dit protocol beschrijft hoe u het delende cellen binnen een weefsel in Caenorhabditis elegans embryo. Terwijl verschillende protocollen beschrijven hoe afbeelding celdeling in de vroege embryo, dit protocol wordt beschreven hoe u foto celdeling binnen een zich ontwikkelende weefsel tijdens midden late embryogenese.

Visualiseren neuroblast Cytokinese Tijdens<em&gt; C. elegans</em&gt; Embryogenese

This protocol describes the use of fluorescence microscopy to image dividing cells within developing Caenorhabditis elegans embryos. In particular, this ...

Het algemene doel van het volgende experiment is om delende cellen in een ontwikkelend weefsel tijdens de embryogenese van C. elegans te observeren. Om genen te bestuderen die de celdeling controleren, wordt dit bereikt door een C. elegans-stam te creëren of te verkrijgen die stabiel transgene markers tot expressie brengt die de cellen van belang labelen. Als tweede stap wordt een specifiek gen van belang uitgeschakeld (knock down) door gedurende 24 tot 48 uur dsRNA aan L4-larven te voeren.De RNAI-embryo's worden verzameld van grafische hermafrodieten en overgebracht naar een agarosepad voor live-imaging. Vervolgens worden de embryo's met wide-field of confocale microscopie afgebeeld om celdelingsfenotypen te visualiseren. De resultaten zullen laten zien hoe neuroblasten delen tijdens de embryogenese van sea elgin en de rol van genen die vereist zijn voor hun deling.Deze methode kan helpen bij het blootleggen van kernvragen in het vakgebied van de ontwikkelings- en celbiologie. Zo kan deze methode genen en mechanismen onthullen die betrokken zijn bij de regulatie van mitose tijdens weefselontwikkeling, cel-celcommunicatie, celmigratie of celpolariteit. Gebruik transgene wormen die

visualizing-neuroblast-cytokinesis-during-c-elegans-embryogenesis

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Beschrijven we de procedure voor te bereiden...

Visualisatie van de embryonale zenuwstelsel in zijn geheel-mount Drosophila Embryo&#39;s

Dit artikel beschrijft een techniek voor de visualisatie van de vroege gebeurtenissen van embryogenese in de...

Time-lapse microscopie van de vroege embryogenese in Caenorhabditis elegans

Source: Williams, A. L., et al. Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (2017)This video showcases a multi-photon time-lapse imaging protocol to visualize the migration of neural crest cells in a zebrafish embryo in real-time with high resolution.

Visualizing Neural Crest Cell Migration in a Zebrafish Embryo Using Multi-Photon Time Lapse Imaging

Progenitorceltransplanten mitose is een kritische parameter van neurogenese. Veel van onze kennis van neurale voorlopercellen mitose is gebaseerd op de analyse van vaste weefsel. Live-beeldvorming in de embryonale hersenen plakjes is een veelzijdige techniek om mitose te beoordelen met een hoge temporele en ruimtelijke resolutie in een gecontroleerde omgeving.

Live-Imaging van mitose in het ontwikkelen van muis embryonale Cortex

Hier wordt getoond hoe ontwikkelingsprocessen in C. elegans kunnen worden gevolgd en gekwantificeerd. De gepresenteerde methoden zijn gebaseerd op open-source tools die gemakkelijk kunnen worden geïmplementeerd. Het wordt gedemonstreerd hoe 3D-celvormmodellen kunnen worden gereconstrueerd, hoe subcellulaire structuren handmatig kunnen worden gevolgd en hoe corticaal contractiele stroom kan worden geanalyseerd.

Tracking en kwantificeren van ontwikkelingsprocessen in<em&gt; C. elegans</em&gt; Het gebruik van open-source tools

Dit werk bevat een standaard immunohistochemie methode om motorische neuron projecties van late-16 Drosophila melanogaster embryo's te visualiseren . De gefiltreerde bereiding van vaste embryo's die gekleurd zijn met FasII antilichaam, biedt een krachtig instrument om de genen die nodig zijn voor motor axon pathfinding en target recognition tijdens neurale ontwikkeling te karakteriseren.

Visualisatie van het Axonal Projectiepatroon van Embryonische Motor Neuronen in<em&gt; Drosophila</em

Hier presenteren we een combinatie benadering met behulp van hoge-resolutie microscopie, computationele tools, en single-cell etikettering in levende C. de embryo's van de neurologische om de enige cel dynamiek te begrijpen.

Isotrope licht-vel microscopie en geautomatiseerde Cell Lineage analyses catalogus Caenorhabditis embryogenese met subcellulaire resolutie

Dit werk beschrijft een semi-High-throughput protocol dat gelijktijdige 3D time-lapse beeldvorming van embryogenese in 80 – 100 C. elegans embryo's in een enkele nachtelijke run toestaat. Daarnaast worden tools voorbeeld verwerking en visualisatie meegeleverd om de gegevensanalyse te stroomlijnen. De combinatie van deze methoden met aangepaste reporter stammen maakt gedetailleerde controle van embryogenese.

Een semi-High-throughput imaging methode en data visualisatie Toolkit om C. elegans embryonale ontwikkeling te analyseren

Hier presenteren we een protocol voor het voorbereiden en monteren van Caenorhabditis elegans-embryo's , het registreren van de ontwikkeling onder een 4D-microscoop en het traceren van de cellijn.

4D-microscopie: Caenorhabditis elegans embryonale ontwikkeling ontrafelen met behulp van Nomarski-microscopie

Hier presenteren we protocollen en hulpmiddelen voor het visualiseren van calcium tijdens bevruchting en vroege embryogenese met behulp van een genetisch gecodeerde calciumreporter die tot expressie komt in de kiembaan van de modelnematode C. elegans.

In vivo visualisatie van calciumtransiënten tijdens bevruchting en vroege ontwikkeling in C. elegans

Leer neuroblastcytokinese visualiseren tijdens C. elegans-embryogenese met levende beeldvorming en RNAi. Deze methode onthult genfuncties essentieel voor celdeling in ontwikkelingsbiologie.

Visualiseren neuroblast Cytokinese Tijdens

Meer video's verkennen