Name: Capsulaire Serotypering van Streptococcus pneumoniae De Queliung Reaction (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-24T15:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 25 s
Description: Leer capsulaire serotypering van Streptococcus pneumoniae met de Quellung-reactie. Deze gouden standaardmethode gebruikt antisera en microscopie om kapselzwelling te detecteren voor epidemiologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de Bill en Melinda Gates Foundation (PneuCarriage project, Grant 52.099) en operationele infrastructuur Support Program de Victoriaanse regering. Dankzij Eileen Dunne, Janet Strachan, en Kim Hazen voor het kritisch lezen van het manuscript.

1. Voorbereiding celsuspensie voor het typen <ol><li> Met behulp van een steriele 1 pi loop, neem een ​​kleine zwaai van verse nachts zuivere cultuur van pneumokokken gekweekt op vaste selectieve paard bloed agar en te enten 100 pl Heart Infusion (HI) bouillon. De schorsing moet verschijnen alleen zichtbaar troebel zijn. Schud voorzichtig de buis te emulgeren. Opmerking: Andere media zoals Brain Heart Infusion bouillon, geschikt kunnen zijn. Toevoeging van serum (bijv. een eindconcentratie van 10% (v / v) paardenserum) en incubatie bij 37 ° C gedurende ongeveer 1 uur voor gebruik worden gebruikt om de reactie verhogen. </li></ol> 2. Controleren Dichtheid celsuspensie De celsuspensie bereid in stap 1.1 wordt ook gebruikt als negatieve controle en worden gecontroleerd celdichtheid vóór toevoegen van de typen sera. <ol><li> Met een 1 pi lus overdracht een daling van de bereid in stap 1.1 inoculum op een glass microscoop glijbaan. </li><li> Met behulp van een tang, plaats een kleine ronde dekglaasje over de schorsing. </li><li> Met fasecontrast instelling acht het preparaat microscopisch onder 400X vergroting, de dichtheid van de suspensie (figuur 1A) controleren. <ol><li> Als het inoculum te zwaar (figuur 2A), voeg meer bouillon aan de celsuspensie in stap 1.1 te verdunnen. Meng opnieuw. </li><li> Als het inoculum te licht is, bijvoorbeeld, er &lt;50 cellen zichtbaar in het microscopische gebied (figuur 2B), voeg meer bacteriën aan de celsuspensie bereiding in stap 1.1 en meng. Opmerking: Met ervaring, kan de dichtheid van de celsuspensie worden beoordeeld door schudden en houden tegen het licht, waar zou blijken alleen zichtbaar troebel zijn. </li></ol></li><li> Herhaal stappen 2.1-2.3 totdat een geschikt aantal cellen zijn zichtbaar in het microscopische gebied. Opmerking: Glasplaten en coverslips vormen een gevaar slijpsel. Na gebruik worden dia&#39;s en dekglaasjes besmet met infectieus materiaal en moet worden afgevoerd in een biohazard naaldencontainer. </li></ol> 3. Typen <ol><li> Overdracht ~ 1 ui van het bereide inoculum (bijvoorbeeld met een 1 pi lus) op het microscoopglaasje. Gooi de lus in de biohazard naaldencontainer. </li><li> Voeg een gelijk volume (1 pl lusvol) van kamertemperatuur antiserum op de glijbaan en meng beide druppels goed met de lus. </li><li> Met behulp van een tang, plaats een kleine ronde dekglaasje over de schorsing, het verzorgen van de daling niet aan te raken. Plaats het dekglaasje op de suspensie onmiddellijk na toevoeging van antiserum te voorkomen dat de vloeistof in de dia uitdroogt. </li><li> Met behulp van een microscoop, observeert de opschorting op grond van fase-contrast met 400X vergroting. Een negatieve Queliung reactie wordt waargenomen bij onbelaste &quot;zwelling&quot; van het pneumococcen cellen kan worden gezien bij 400X vergroting, vergelijkbaar met wat wordt waargenomen in de pneumococcen celsuspensie zonder antiserum toegevoegd (negatieve controle). Een positieve Queliung reactie wordt waargenomen wanneer de cellen lijken vergrote of &quot;gezwollen en beter zichtbaar in vergelijking met de cellen in de negatieve controle. Opmerking: Bij onduidelijke reacties moet verder worden onderzocht, bijvoorbeeld door het onderzoeken van de reactie na 5-10 minuten incubatie bij kamertemperatuur of door herhaaldelijk reactie met meer antiserum. </li><li> Voeren pneumokokken serotypering met opeenvolgende tests van afzonderlijke antisera zwembaden tot een positieve reactie wordt waargenomen. Als alternatief kan zwembaden worden toegepast in &#39;rondes&#39;, afhankelijk van de lokale incidentie van serotypen. Opmerking: Tests &#39;rondes&#39; zodat de pools met antilichamen tegen de meest voorkomende serotypen eerst getest minimaliseren moeite en kosten. Gelijktijdig testen van verschillende zwembaden biedt ook extra negatieve controles, die nuttig kan zijn in interpretation. Als alle zwembaden in een bepaalde &#39;rond&#39; zijn negatief, test het isolaat met latere rondes van zwembaden. </li><li> Test het isolaat met behulp van het juiste type of groep antiserum vervat in de reactieve zwembad. In voorkomend geval, gebruiken factor antisera om verder te differentiëren het serotype. Opmerking: Sleutels tot pneumokokken antisera van de fabrikant worden gebruikt in de selectie van geschikte zwembad, type, groep of factor antisera en interpretatie van de resultaten (inclusief eventuele kruisreacties). </li><li> Indien negatieve resultaten worden verkregen met alle zwembaden, test het isolaat met Omniserum reagens (bevat antilichamen tegen 91 serotypes 21). Indien een positief Queliung reactie wordt nog niet waargenomen bij het testen van een pneumokokken te isoleren met de Omniserum reagens, kan dit zijn omdat de isolaat is de uiting van weinig of geen capsule, of dat antilichamen tegen het serotype zijn niet vertegenwoordigd in de Omniserum. Deze laatste categorie kan nieuwe serotypes. </li> &lt;/ Ol&gt;

<ol><li>O'Brien, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+disease+caused+by+Streptococcus+pneumoniae+in+children+younger+than+5+years%3A+global+estimates%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Burden of disease caused by Streptococcus pneumoniae in children younger than 5 years: global estimates.</a> Lancet. 374, 893-902 (2009).</li>
<li>Bogaert, D., De Groot, R., Hermans, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+pneumoniae+colonisation%3A+the+key+to+pneumococcal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Streptococcus pneumoniae colonisation: the key to pneumococcal disease.</a> Lancet Infect. Dis. 4, 144-154 (2004).</li>
<li>Henrichsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Six+newly+recognized+types+of+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Six newly recognized types of Streptococcus pneumoniae.</a> J. Clin. Microbiol. 33, 2759-2762 (1995).</li>
<li>Calix, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical%2C+genetic%2C+and+serological+characterization+of+two+capsule+subtypes+among+Streptococcus+pneumoniae+Serotype+20+strains%3A+discovery+of+a+new+pneumococcal+serotype%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Biochemical, genetic, and serological characterization of two capsule subtypes among Streptococcus pneumoniae Serotype 20 strains: discovery of a new pneumococcal serotype.</a> J. Biol. Chem. 287, 27885-27894 (2012).</li>
<li>Hausdorff, W. P., Bryant, J., Paradiso, P. R., Siber, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Which+pneumococcal+serogroups+cause+the+most+invasive+disease%3A+implications+for+conjugate+vaccine+formulation+and+use%2C+part+I%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Which pneumococcal serogroups cause the most invasive disease: implications for conjugate vaccine formulation and use, part I.</a> Clin. Infect. Dis. 30, 100-121 (2000).</li>
<li>Johnson, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+evaluation+of+serotypes+causing+invasive+pneumococcal+disease+among+children+under+five%3A+the+pneumococcal+global+serotype+project%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Systematic evaluation of serotypes causing invasive pneumococcal disease among children under five: the pneumococcal global serotype project.</a> PLoS Med. 8, (2010).</li>
<li>Weinberger, D. M., Malley, R., Lipsitch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotype+replacement+in+disease+after+pneumococcal+vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Serotype replacement in disease after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 378, 1962-1973 (2011).</li>
<li>Obaro, S. K., Adegbola, R. A., Banya, W. A., Greenwood, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carriage+of+pneumococci+after+pneumococcal+vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Carriage of pneumococci after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 348, 271-272 (1996).</li>
<li>Mulholland, K., Satzke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotype+replacement+after+pneumococcal+vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Serotype replacement after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 379, 1388-1389 (2012).</li>
<li>Austrian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+quellung+reaction%2C+a+neglected+microbiologic+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Mt.+Sinai.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">The quellung reaction, a neglected microbiologic technique.</a> Mt. Sinai. J. Med. 43, 699-709 (1976).</li>
<li>Konradsen, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+serotyping+of+Streptococcus+pneumoniae+in+Europe%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Validation of serotyping of Streptococcus pneumoniae in Europe.</a> Vaccine. 23, 1368-1373 (2005).</li>
<li>Lovgren, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+an+international+external+quality+assurance+model+to+support+laboratory+investigation+of+Streptococcus+pneumoniae%2C+developed+for+the+SIREVA+project+in+Latin+America%2C+from%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evolution of an international external quality assurance model to support laboratory investigation of Streptococcus pneumoniae, developed for the SIREVA project in Latin America, from.</a> J. Clin. Microbiol. 45, 3184-3190 (2007).</li>
<li>Reasonover, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+International+Circumpolar+Surveillance+interlaboratory+quality+control+program+for+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The International Circumpolar Surveillance interlaboratory quality control program for Streptococcus pneumoniae.</a> J. Clin. Microbiol. 49, 138-143 (2011).</li>
<li>Hare, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%2334%3BDodgy+6As%26%2334%3B%3A+differentiating+pneumococcal+serotype+6C+from+6A+by+use+of+the+Quellung+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">#34;Dodgy 6As&#34;: differentiating pneumococcal serotype 6C from 6A by use of the Quellung reaction.</a> J. Clin. Microbiol. 47, 1981-1982 (2009).</li>
<li>Kong, F., Gilbert, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+cpsA-cpsB+sequence+polymorphisms+and+serotype-%2Fgroup-specific+PCR+to+predict+51+Streptococcus+pneumoniae+capsular+serotypes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Using cpsA-cpsB sequence polymorphisms and serotype-/group-specific PCR to predict 51 Streptococcus pneumoniae capsular serotypes.</a> J. Med. Microbiol. 52, 1047-1058 (2003).</li>
<li>Castillo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Methods+for+the+Diagnosis+of+Meningitis+caused+by+Neisseria+meningitidis%2C+Streptococcus+pneumoniae%2C+and+Haemophilus+influenzae.+2nd+ed%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of Streptococcus pneumoniae.</a> Laboratory Methods for the Diagnosis of Meningitis caused by Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae. 2nd ed. , World Health Organization. 73-86 (2011).</li>
<li>Kaijalainen, T., Rintamaki, S., Herva, E., Leinonen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+gene-technological+and+conventional+methods+in+the+identification+of+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Evaluation of gene-technological and conventional methods in the identification of Streptococcus pneumoniae.</a> J. Microbiol. Methods. 51, 111-118 (2002).</li>
<li>SSIDiagnostica, Neufeld antisera. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.ssi.dk/ssidiagnostica">http://www.ssi.dk/ssidiagnostica</a> (2013).</li>
<li>Sorensen, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Typing+of+pneumococci+by+using+12+pooled+antisera%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Typing of pneumococci by using 12 pooled antisera.</a> J. Clin. Microbiol. 31, 2097-2100 (1993).</li>
<li>Diagnostica SSI, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+to+pneumococcal+factor+antisera%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Key to pneumococcal factor antisera.</a> , (2013).</li>
<li>Diagnostica SSI, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumococcal+antisera+for+in+vitro+diagnostic+use%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Pneumococcal antisera for in vitro diagnostic use.</a> , (2011).</li>
<li>Lund, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+diagnosis+of+Pneumococcus+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Bull.+World+Health+Organ%22%5BJournal%5D)">Laboratory diagnosis of Pneumococcus infections.</a> Bull. World Health Organ. 23, 5-13 (1960).</li>
<li>Satzke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+method+for+detecting+upper+respiratory+carriage+of+Streptococcus+pneumoniae%3A+Updated+recommendations+from+the+World+Health+Organization+Pneumococcal+Carriage+Working+Group%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Standard method for detecting upper respiratory carriage of Streptococcus pneumoniae: Updated recommendations from the World Health Organization Pneumococcal Carriage Working Group.</a> Vaccine. 32, 165-179 (2013).</li>
<li>Vernet, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory-based+diagnosis+of+pneumococcal+pneumonia%3A+state+of+the+art+and+unmet+needs%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Infect%22%5BJournal%5D)">Laboratory-based diagnosis of pneumococcal pneumonia: state of the art and unmet needs.</a> Clin. Microbiol. Infect. 17, 1-13 (2011).</li>
<li>Casewell, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experiences+in+the+use+of+commercial+antisera+for+the+capsular+typing+of+klebsiella+species%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Experiences in the use of commercial antisera for the capsular typing of klebsiella species.</a> J. Clin. Pathol. 25, 734-737 (1972).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Een kritische stap in deze techniek zorgen voor een zuivere kweek wordt gebruikt om de suspensie samen met het toevoegen van een geschikt aantal bacteriecellen op de bouillon. Opgemerkt moet worden dat de groei kolonie morfologie op agarplaten verschilt per pneumococcen isolaten. Sommige produceren droge en ruwe koloniën, die moeilijk kan zijn om af te halen met een lus en niet goed emulgeren in de bouillon. Daarom kan een groter bereik van bacteriën vereist bij het bereiden van de celsuspensie. In elk geval is het noodzakelijk dat individuele cellen en niet aggregaten, in de negatieve controle duidelijk dat de relatieve grootte kan worden vergeleken met de cellen met antisera toegevoegd. Bovendien kan te veel bacteriële cellen resulteren in een vals negatieve reactie, waarin een overschrijding van kapselvorming antigeen de Queliung reactie 10 kan remmen. Daarom is het belangrijk om een bacteriële suspensie met een geschikte celdichtheid (fig. 1) te creëren. De suspensioen kan gedurende enkele maanden worden bewaard door toevoeging van enkele druppels geconcentreerde formaline. Hierdoor kan gemakkelijker batch testen en ook steriliseert de bouillon verminderen van het risico van laboratorium verworven infecties, hoewel dit moet worden afgewogen tegen het veiligheidsrisico van de behandeling van formaline, dat is giftig, bijtend, kankerverwekkend, sensibiliserende en ontvlambaar. Bovendien hebben we opgemerkt dat sommige isolaten vertonen zwakke reacties in aanwezigheid van formaline (gegevens niet getoond). Queliung reacties worden onderzocht met behulp van een microscoop. Het gebruik van fasecontrast verhoogt de zichtbaarheid van de capsule. In sommige laboratoria wordt de reactie weergegeven met olie-immersie bij 1000-voudige vergroting 14, 16. Bovendien hebben sommige laboratoria een teller vlek (methyleenblauw) verder de zichtbaarheid van een positieve reactie 10, 16, 22. De hier gepresenteerde methode wordt bekeken zonder olie-immersion en onder 400X vergroting 15, 17. Deze methode is snel, eenvoudig en relatief gemakkelijk te lezen 23. Het is belangrijk om goede interne kwaliteitscontrole handhaven zorgen antisera en testprocedures volledig. Deelname aan een extern programma voor kwaliteitsbewaking is vaak heilzaam. Een belangrijke beperking van de Queliung reactie voor serotypering van pneumokokken is de hoge kosten van de antisera vereiste. Dit is echter geminimaliseerd bovengenoemde protocol vanwege de kleine hoeveelheid antiserum voor elke reactie. Verschillende andere werkwijzen zijn beschreven voor de serotypering pneumococcen 23, 24. Echter, Queliung blijft de gouden standaard en de ontwikkeling van nieuwe methoden vereist standaardisatie tegen de Queliung reactie 23. Met behulp van geschikte antisera, kan de Queliung reactie ook worden gebruikt om andere kappen identificeren en typule producerende bacteriën 25. De Queliung reactie is instrumenteel in de identificatie van de huidige en opkomende pneumokokkenserotypes, alsmede het verschaffen van informatie over de werkzaamheid van het vaccin en het effect op lange termijn van de vaccinatie op vervoer en ziekte.

Streptococcus pneumoniae (pneumokok het) is verantwoordelijk voor de dood van naar schatting 800.000 kinderen onder de leeftijd van vijf jaar, met de last van de ziekte voornamelijk vallen in arme landen 1. Pneumokokken ziekten in ernst variëren van gelokaliseerde infecties zoals acute otitis media tot ernstige levensbedreigende infecties zoals sepsis, meningitis en longontsteking 2. Meer dan 90 capsulaire serotypen van pneumokokken beschreven 3, 4. Voor pneumococcen vaccins bieden bescherming tegen serotypen die van het merendeel van invasieve ziekten 5, 6 zijn. Echter, wijdverspreid gebruik van vaccins is geassocieerd met vervanging van serotypen in het vaccin door nonvaccine serotypen, zowel in nasofaryngeale vervoer en invasieve ziekte 7, 8. Dit benadrukt het belang van serotypering voor epidemiologischesurveillance en lange termijn vaccin impactstudies 9. De gouden standaard werkwijze voor pneumococcen typen is het capsulaire reactietest, bekend als de Queliung reactie, eerst beschreven door Neufeld in 1902 (zie Oostenrijkse 10). Een hoge mate van overeenstemming gevonden tussen laboratoria, en tussen de Queliung reactie en andere serotypering methoden 11-13. Er zijn verschillende variaties van de Queliung reactie 10, 14-16. De hier beschreven methode is het gebruik van een teller beits of olie immersie objectief vereisen, maar eerder een druppel voorbereide monster wordt gemengd met de typen serum onmiddellijk onder 400x vergroting onderzocht. De Queliung reactie wordt gewoonlijk uitgevoerd in de handel verkrijgbare antisera. De hier beschreven methode gebruikt minder antisera vergelijking met andere methoden 16, 17, waardoor het meer kosteneffectief. Zodra een isolat is geïdentificeerd als pneumococcus, is achtereenvolgens getest met antisera zwembaden tot een positieve reactie waargenomen. Elk zwembad antiserum bevat verschillende mengsels van antiserum opgewekt tegen 91 pneumokokkenserotypes 18. Wanneer de pool wordt vastgesteld, worden de afzonderlijke soort en groep antisera die zijn opgenomen in het reactieve pool individueel getest sequentie. Type antisera algemeen reageren met een serotype (bijv. type 1 antiserum reageert met serotype 1), terwijl groep antisera reageren met alle serotypen in een bepaalde groep (bv. Groep 22 antiserum reageert met serotypen 22F en 22A). Sommige serotypen binnen groepen zijn verder gedifferentieerd met behulp van factor antisera (bijv. serotype 22F reageert met factor 22b, maar niet 22c). In dit geval testen wordt voortgezet met alle relevante factor antisera tot serotype wordt bepaald 19, 20. De Queliung reactie is eenvoudig en snel 14 en kan in elke l worden uitgevoerdaboratory die is uitgerust met een goede kwaliteit microscoop en geschikte reeks van antiserum.

<table><tbody><tr><td>Pneumococcus (Neufeld) antisera</td><td>SSI Diagnostica</td><td></td><td><a href="http://www.ssi.dk/ssidiagnostica">http://www.ssi.dk/ssidiagnostica</a> Breng alle antisera op naar kamertemperatuur voor gebruik</td></tr><tr><td>Pneumococcus (Omni) antiserum</td><td>SSI Diagnostica</td><td>2438</td><td>Breng alle antisera op naar kamertemperatuur voor gebruik</td></tr><tr><td>Optical Microscope</td><td>Leica Microsystems</td><td>Leica DML</td><td></td></tr><tr><td>Gekalibreerde wegwerp inoculantielussen 1 &micro;l</td><td>Copan</td><td>CD175S01</td><td></td></tr><tr><td>Paardenbloed Agar (HBA) platen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PP2001</td><td><a href="http://www.thermofisher.com.au/">http://www.thermofisher.com.au/</a> Breng op naar kamertemperatuur voor gebruik</td></tr><tr><td>Heart Infusion (HI) bouillon</td><td>Media Preparation Unit (MPU), The University of Melbourne</td><td>40HIN</td><td>Breng op naar kamertemperatuur voor gebruik</td></tr><tr><td>Glazen microscoopglaasjes 76 mm x 26 mm</td><td>Lomb Scientific</td><td>7101</td><td>Gevaar voor scherpe punten: Wegdoen in een biogevaar container voor scherpe punten</td></tr><tr><td>Circulaire glazen dekglasjes</td><td>NeuVitro</td><td>GG-5</td><td></td></tr><tr><td>*Uitgezonderd de antisera, kunnen alle andere materialen bij alternatieve leveranciers worden aangeschaft</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>*Platen bereid uit gedefibrينةerde schapenbloed zijn geschikt, maar bloedplaten bereid uit gecitreerde bloed of menselijk bloed zijn dat niet</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

capsulaire serotypering van<em&gt; streptococcus pneumoniae</em&gt; de queliung reaction

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Er zijn meer dan 90 verschillende capsulaire serotypes van Streptococcus pneumoniae (pneumokok het). Maar ook als een instrument voor het begrijpen van pneumokokken epidemiologie, kan kapselvorming serotypering nuttige informatie voor een werkzaamheid van het vaccin en de impact studies. De Queliung reactie is de gouden standaard methode voor het pneumokokken capsulaire serotypering. De werkwijze omvat het testen van een pneumococcen celsuspensie met gepoolde en specifieke antisera gericht tegen het capsulaire polysaccharide. De antigeen-antilichaam reacties worden microscopisch waargenomen. Het protocol bestaat uit drie stappen: 1) bereiding van een bacteriële celsuspensie, 2) mengen van cellen en antisera op een glasplaatje, en 3) het lezen van de Queliung reactie met behulp van een microscoop. De Queliung reactie is redelijk eenvoudig uit te voeren en kan worden gebruikt wanneer een geschikte microscoop en antisera beschikbaar.

<html> Een positieve Queliung reactie optreedt bij typespecifieke antilichaam aan de capsule van de pneumococcus, wat leidt tot een verandering in de brekingsindex 10. Wanneer bekeken onder een microscoop, de bacteriën lijken &#39;gezwollen en zichtbaarder 14. Figuur 1A toont pneumococcen cellen HI bouillon. Wanneer typespecifieke anti-serum wordt toegevoegd aan de bacteriële suspensie, pneumokokken lijken &quot;gezwollen&quot;, refractie en meer afgerond (Figuur 1B). Te veel bacteriële cellen toegevoegd aan de bouillon kan leiden tot aggregatie van cellen of een vals negatieve reactie. Figuur 2 toont inocula van pneumokokken cellen in HI bouillon die &#39;te zwaar&#39; (Figuur 2A) of &#39;te licht&#39; (Figuur 2B). 08fig1highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/51208/51208fig1.jpg &quot;/&gt; Figuur 1. Negatieve en positieve Queliung reactie. Bereidingen van serotype 9V pneumococcen isolaat zonder antiserum (1A) en groep 9 antiserum (1B), werden bekeken onder 400 x vergroting. Dit laatste geeft de &#39;zwelling&#39; en afronding van bacteriële cellen meestal gezien in een positieve Queliung reactie. <img alt="Figuur 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51208/51208fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51208/51208fig2.jpg" /> Figuur 2. Te zwaar en te licht inocula. Bereidingen van pneumokokken cel suspensies die te zwaar (2A) of te licht (2B) zijn, wanneer bekeken onder 400X vergroting.

De Queliung reactie is de gouden standaardtechniek voor de serotypering Streptococcus pneumoniae. Deze techniek maakt gebruik van een microscoop en specifieke pneumokokken antisera en wordt vaak gebruikt in referentie-en onderzoekslaboratoria wereldwijd.

Capsulaire Serotypering van<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; De Queliung Reaction

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

Het algemene doel van deze procedure is het uitvoeren van capsulaire stereotypering van streptococcus pneumoniae of de pneumokok door middel van de quelling-reactie. Dit wordt bereikt door eerst hartinfusiebouillon te inoculeren met een verse, overnight zuivere kweek van pneumokokken. In de tweede stap wordt een druppel van het inoculum overgebracht naar een glazen microscopische objectglas.Vervolgens wordt een gelijk volume antiserum op het objectglas toegevoegd. In de laatste stap worden beide druppels gemengd en wordt er een dekglas over de suspensie geplaatst. Ten slotte kan de suspensie onder fasecontrast worden bekeken om de positieve of negatieve Quellung-reactie waar te nemen.Deze methode demonstreert de gouden standaard voor de pneumokokken-serotypering. De methode is eenvoudig, gemakkelijk uit te voeren en makkelijk te interpreteren. Een visuele demonstratie van deze methode is belangrijk, omdat personen die nieuw zijn met deze techniek moeite kunnen hebben om te herkennen welke celdichtheid geschikt is voor het uitvoeren van de Quellung-test.Begin met het gebruik van een steriele wegwerplus van 1 µL om een kleine hoeveelheid van een verse, overnight zuivere kweek van pneumokokken af te nemen, gegroeid op een vaste, niet-selectieve paardenbloedagarplaat; ent de pneumokokken in 100 µL hartinfusiebouillon. De suspensie moet net zichtbaar troebel zijn; schud de buis voorzichtig om de celoplossing te emulgeren. Gebruik een nieuwe lus van 1 µL om een druppel van het inoculum over te brengen naar een glazen microscoopglas.Plaats vervolgens een klein rond dekglas over de suspensie op het objectglas en controleer de dichtheid van de suspensie onder fasecontrast bij een 400-voudige vergroting. Als het inoculum te zwaar is, verdun de celsuspensie dan met meer bouillon en meng de cellen voorzichtig opnieuw; als het inoculum te licht is, voeg dan meer bacteriën toe aan de celsuspensie en meng voorzichtig opnieuw. Indien er bijvoorbeeld minder dan 50 cellen zichtbaar zijn, voeg dan meer bacteriën toe aan de celsuspensie en meng deze opnieuw voorzichtig.Met ervaring kan de dichtheid van de celsuspensie worden beoordeeld door de suspensie te schudden en tegen het licht te houden, waarbij deze net zichtbaar troebel moet zijn. Wanneer deze onder de microscoop wordt bekeken, moet de celoplossing ongeveer deze dichtheid hebben.Zodra de optimale bacteriële celverdunning is bereikt, brengt u ongeveer 1 µL van het inoculum over op het glazen microscoopglas. Gebruik vervolgens een nieuwe loot om een gelijk volume op kamertemperatuur toe te voegen.Antiserum op het objectglas aanbrengen en beide druppels goed mengen. Plaats vervolgens onmiddellijk met de lus een klein dekglas op de suspensie, waarbij u er op let dat u de druppel niet met de pincet aanraakt. Bekijk de suspensie daarna onder fasecontrast, zoals zojuist gedemonstreerd.Een negatieve Quellung-reactie wordt waargenomen wanneer er weinig tot geen zwelling van de pneumokokken-cellen zichtbaar is. Dit is vergelijkbaar met de negatieve controle, een suspensie van pneumokokken-cellen zonder toevoeging van antisera. Een positieve Quellung-reactie treedt op wanneer type-specifieke antilichamen binden aan de capsule van de pneumokok, wat leidt tot een verandering in de brekingsindex.Wanneer ze onder fasecontrast worden bekeken, lijken de bacteriën opgezwollen en zijn ze beter zichtbaar. Houd er bij het uitvoeren van deze procedure rekening mee dat u werkt met levende micro-organismen. Daarom dient u voorzichtig te zijn en goede laboratoriumpraktijken te volgen, beschermende kleding en de juiste laboratoriumuitrusting te dragen, en alle apparatuur en reagentia aan het einde van het proces veilig af te voeren.Zodra deze techniek onder de knie is, kan deze in ongeveer 10 minuten worden uitgevoerd als dit correct gebeurt. Na het bekijken van deze procedure zou u een goed beeld moeten hebben van hoe de pneumokok geserotypt kan worden met behulp van de Quellung-reactie. Deze techniek is belangrijk voor het begrijpen van de pneumokokkenepidemiologie, zowel bij nasofaryngeale kolonisatie als bij een invasieve ziekte.

capsular-serotyping-streptococcus-pneumoniae-using-quellung

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Een efficiënte methode om het oppervlak-blootstelling van leptospiral eiwitten te bepalen is beschreven. De methode is speciaal ontworpen om verstoring van de kwetsbare buitenste membraan van leptospiral cellen te voorkomen. Deze techniek vergt inzet van een aantal negatieve controles te beoordelen van de integriteit van de buitenste membraan en de specificiteit van de antistof reactie.

Immuno Assay-fluorescentie van Leptospiral Surface-blootgesteld Eiwitten

Beschrijven we een multiplex-PCR voor de snelle detectie van Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, en Typhimurium. Specifieke Salmonella serovars kunnen worden geïdentificeerd door zich te richten een multiplex PCR om genen en sequenties die uniek zijn voor het O-antigen biosynthese cluster en flagelline van een bepaalde serovar. Serovar wordt vervolgens toegewezen aan een Salmonella isoleren op basis van het optreden van de specifieke, grootte amplicons (PCR-product) die...

Een Allelotyping PCR voor het vaststellen van Salmonella enterica Serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, en Typhimurium

Kolonisatie van de muriene nasopharynx met Streptococcus pneumoniae en de daaropvolgende extractie van aanhangende of gerekruteerde cellen wordt beschreven. Deze techniek omvat het spoelen van de nasopharynx en het opvangen van de vloeistof door de nares en is aanpasbaar voor verschillende uitlezingen, waaronder differentiële celkwantificering en analyse van mRNA-expressie in situ.

Karakterisering van inflammatoire reacties tijdens intranasale kolonisatie met Streptococcus pneumoniae

We demonstreren een eenvoudige multiplex PCR-test voor snel screenen en typeren van Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) typen I-V voor methicilline-resistente Staphylococcus aureus, en bieden enkele van de essentiële stappen en procedurele nuances die het succesvol maken om deze test aan te passen aan individuele laboratoria.

Multiplex PCR-test voor het typen van Staphylococcus Cassette Chromosome Mec Types I tot en met V in Methicilline-resistente<em&gt; Staphylococcus aureus</em

Latex agglutinatie test is een eenvoudige, snelle en goedkope werkwijze voor serotypering Streptococcus pneumoniae en ook grote schaal toegepast in diagnostische microbiologie. Dit manuscript beschrijft de in-house productie van latex agglutinatie reagentia, procedures voor kwaliteitscontrole en de toepassing van deze techniek om pneumokokken serotypering.

Capsulaire Serotypering van<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Door Latex Agglutinatie

Streptococcus pneumoniae vormt discrete niet-purulente microscopische laesies in het hart. Beschreven wordt het protocol voor een muismodel van hartmicrolaesievorming. Er wordt instructie gegeven over microlaesievisualisatie met behulp van microscopie, onderscheid tussen vroege en late microlaesies en methoden om cardiale remodellering in harten van herstellende dieren te detecteren.

Visualisatie van<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Binnen Cardiac microverwondingen en Latere Cardiac Remodeling

Deze opsonophagocytic doden test wordt gebruikt om te vergelijken het vermogen van fagocytische immuuncellen reageren op en doden van de bacteriën op basis van verschillende behandelingen en/of voorwaarden. Klassiek, dient deze bepaling als de gouden standaard voor het beoordelen van effector functies van antilichamen tegen een bacterie als opsonin aan de orde gesteld.

Opsonophagocytic doden Assay te beoordelen van de immunologische reacties tegen bacteriële pathogenen

Genetische code uitbreiding wordt toegepast voor de introductie van een onnatuurlijk aminozuur met een biorthogonale functionele groep op een drager eiwit op een gedefinieerde site. De biorthogonale functie wordt verder gebruikt voor de plaatsselectieve koppeling van een koolhydraatantgeen om een homogeen glycoconjugaatvaccin te bieden.

Homogene Glycoconjugaat geproduceerd door gecombineerde onnatuurlijke aminozuur integratie en click-chemie voor vaccindoeleinden

Hier beschrijven we een S. pneumoniae serotype 1 stam 519/43 die genetisch kan worden gemodificeerd door gebruik te maken van zijn vermogen om op natuurlijke wijze DNA en een zelfmoordplasmide te verkrijgen. Als proof of principle werd een isogene mutant in het pneumolysine (ply) gen gemaakt.

Constructing Mutanten in Serotype 1 Streptococcus pneumoniae stam 519/43

Bij Mycoplasma pneumoniae-infectie kunnen serologische tests goede resultaten opleveren, maar met een lage specificiteit vanwege immunologische kruisreactie. De in-house antigeenvangst ELISA, beschreven in dit artikel, garandeert een hoge soortspecificiteit en is een betrouwbare screeningstest gebleken voor een nauwkeurige diagnose van M. pneumoniae.

Antigeen-Capture Enzyme-Linked Immunosorbent Assay voor specifieke detectie van Mycoplasma pneumoniae

Leer capsulaire serotypering van Streptococcus pneumoniae met de Quellung-reactie. Deze gouden standaardmethode gebruikt antisera en microscopie om kapselzwelling te detecteren voor epidemiologisch onderzoek.

Capsulaire Serotypering van

Meer video's verkennen