Name: Een muis Tumor Model of Surgical Stress aan Ontdek de Mechanismen van Postoperatieve Immuunsuppressie en evalueren Novel Perioperative Immuuntherapie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-12T19:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 37 s
Description: Ontdek een muistumormodel voor chirurgische stress om postoperatieve immuunsuppressie en perioperatieve immuuntherapie te evalueren. Deze methode helpt onderzoekers metastasevorming te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen dat jullie Kim Yates, Eileen Franklin en Rebecca Tjepkema (Dierverzorging en veterinaire diensten, Universiteit van Ottawa) bedanken voor hulp bij dieren ingrepen. Lee-Hwa Tai wordt ondersteund door een Fonds de recherche sante Quebec Fellowship. Dit werk werd ondersteund door exploitatiesubsidies van de Canadese Cancer Society Research Institute Innovatie Grant, Ontario ministerie van Onderzoek en Ontwikkeling Vroege Onderzoeker Award, en de Canadese Stichting voor Innovatie - Leader Grant Rebecca Auer.

1. Handhaving van 4T1 tumorcellen in vitro <ol><li> Cultuur ongewijzigde 4T1 tumorcellen in volledige DMEM (DMEM, 10% FBS, 1x penicilline / streptomycine) in 10 cm weefselkweek platen. Incubeer bij 37 ° C, 5% CO 2 weefselkweek incubator. </li><li> Split culturen 2-3 keer / week. Om optimaal te houden levensvatbaarheid cellen mag niet meer dan 80% samenvloeiing. Niet cellen voor het vaststellen van in vivo primaire tumoren gebruiken als culturen zijn in vitro gekweekt voor&gt; 1 maand omdat dit vermindert maligniteit en metastatische potentieel dan eerder gepasseerd cellen. </li></ol> 2. Oogsten 4T1 tumorcellen voor injectie <ol><li> Aspireren kweekmedium uit de weefselkweek plaat met behulp van een Pasteur pipet. </li><li> Voeg 10 ml 1x steriele PBS die 2 ml EDTA. Laat de PBS-oplossing incubeer de plaat bij 37 ° C, 5% CO 2 weefselkweek incubator gedurende 5-7 minuten. </li><li> Oogst PBS-oplossing uit plaat, rinsing de plaat 2-3x met de oplossing, overbrengen naar 15 ml conische buis. </li><li> Centrifugeer cellen gedurende 5 minuten bij 500 xg bij 4 ° C, in een bench-top centrifuge. </li><li> Zuig het supernatant en resuspendeer de celpellet in serumvrij DMEM. </li><li> Bepaal cel concentratie behulp van een mobiele balie. </li><li> Verdunnen cellen met serum-vrij medium tot 6 cells/500 ui (1x10 5 cellen/50 pi (voor injectie en plaats cellen op ijs 1x10. </li></ol> 3. Injecteren Muizen met 4T1 tumorcellen Alle dierproeven zijn uitgevoerd in overeenstemming waren met de institutionele richtlijnen bij de Animal Care veterinaire diensten van de Universiteit van Ottawa aanbevelingen voor alle dieren die orthotopic injecties of tumorimplantaten. <ol><li> Behandel muizen subcutaan buprenorfine (0,05 mg / kg) 1 uur vóór de operatie voor pijnbestrijding. </li><li> Induceren en handhaven muis onder verdoving met 2,5% isofluraan tijdens de duur van de injectietie. Knijp de voetzool van de muis om reflex reactie te detecteren. Als niets wordt gedetecteerd, worden effectieve verdoving niveaus bereikt. Steriele oogzalf wordt vervolgens op droog hoornvlies te voorkomen. </li><li> Laad een 30 G ½ in &quot;Ultra-fine&quot; Spuit met precies 50 pi cellen schorsing. Zorg ervoor dat alle luchtbellen worden verwijderd uit de kolom spuit door de zijkant van de injectiespuit te tikken om luchtbellen te verwijderen. </li><li> Plaats muis (onder verdoving) ventrale zijde naar boven. </li><li> Reinig de injectieplaats met een alcoholdoekje en de invoering van de naald horizontaal en direct in de 4e uiervet pad, langzaam afzien van het volume spuit. </li><li> Gebruik een wattenstaafje om eventuele lekkage te reinigen. </li><li> Laat muizen te herstellen van anesthesie. </li><li> Handhaaf Buprenorfine (0,05 mg / kg) voor pijnbestrijding subcutaan wordt toegediend om de 8 uur gedurende 2 dagen. </li></ol> 4. Toedienen van perioperatieve behandeling in 4T1 tumor dragende BALB / c muizen <ol><li> Op 13 dagen na de tumorcel injectie, het meten van de primaire tumor met behulp van een externe remklauw. Meet de grootste longitudinale diameter (lengte) en de grootste dwarse diameter (breedte) met de remklauw. De gemodificeerde ellipsvormig formule wordt gebruikt om het tumorvolume berekend (tumorvolume = 1/2 (lengte × breedte 2) </li><li> Op 13 dagen na de tumorcel injectie dient de primaire tumor ongeveer 1 cm 3 meten. Wanneer deze tumor meting wordt bereikt, bereiden perioperatieve therapie reagens. </li><li> Oncolytic virus is een innovatieve therapeutische die men kan toedienen in de perioperatieve periode. Bereid oncolytic virus (1x10 9 PFU / 1 ml) in 1x steriele PBS en leg ze op ijs voorafgaand aan de injectie. </li><li> Veilige en plaats muisin weerhouder voor intraveneuze staartaderinjectie. </li><li> Verwarm muis staart in warm kraanwater om laterale staartaders visualiseren. </li><li> Laad een 27 G ½ in &quot;insulinespuit&quot; met precies 100 pl oncolytic virus therapie. Zorg ervoor dat alle luchtbellen worden verwijderd uit kolom spuit. </li><li> Injecteer de muis met 1x10 8 PFU/100 ul / muis een van de laterale staartaders. Als de naald correct is ingebracht in een laterale ader dient geen weerstand wordt gevoeld bij het indrukken van de spuit. </li></ol> 5. Volledige resectie van de primaire tumor en Abdominale Links Nephrectomy <ol><li> 14 dagen na tumorcelinjectie initiëren routine peri-operatieve zorg navolging van het hoger Ottawa Dierenverzorging Veterinaire dienst erkende protocollen. Behandel muizen subcutaan buprenorfine (0,05 mg / kg) 1 uur vóór de operatie voor pijnbestrijding. Induceren en anesthesie te onderhouden met behulp van 2,5% isofluraan tijdens de operatie. Under gesteriliseerd voorwaarden en met steriele chirurgische instrumenten, wordt operatiegebied geschoren en geschrobd. Dieren worden toegediend subcutane vloeistoffen en oogzalf voorafgaand aan de operatie. </li><li> Maak een kleine incisie (1-2 cm lang) om voorzichtig en volledig verwijderen van de primaire tumor 4T1 van de uiervet pad. </li><li> Sluit de incisie met september 02-03 mm nietjes. </li><li> Expose de buik door het doorsnijden van de huid en het onderhuidse laag langs de ventrale middellijn van de muis. </li><li> Maak een insnijding in de linea alba (3-4 cm) om de muis buikvlies. </li><li> Expose de linker binnenkant van de buik door het verplaatsen van de bovenliggende darmen aan de kant. Zorg ervoor dat de darmen worden vochtig gehouden met een zoutoplossing gedrenkt steriel gaasje. </li><li> Met behulp van een botte paar chirurgische pincet, pak de linker nier zachtjes. </li><li> Met behulp van een 3-0 was beklede gevlochten zijden hechtdraad gebonden in een lus, afbinden van de navel van de linker nier en veilig met 3 chirurgische knopen. Verwijder de linker nier met surgical schaar. </li><li> Inspecteer de hechtdraad stropdas zorgvuldig om ervoor te zorgen dat er adequate hemostase is bereikt. </li><li> Sluit de onderhuidse laag met een continue lus hechting met behulp van 5-0 gevlochten absorbeerbare Vervolgens niet laag huid met behulp van 9 mm nietjes. Stappen 5,2-5,10 moet 10 min / dier nodig. </li><li> Handhaaf Buprenorfine (0,05 mg / kg) voor pijnbestrijding subcutaan wordt toegediend om de 8 uur gedurende 2 dagen. </li></ol> 6. Euthanizing Muizen en verwerking en kwantificering van longtumor Burden <ol><li> Op 28 dagen na 4T1 tumorinjectie euthanaseren muizen volgens Dierverzorging en veterinaire diensten protocol aan de Universiteit van Ottawa. </li><li> Spray neer muis met 70% ethanol. </li><li> Maak initiële incisie met een schaar net onder de ribbenkast. </li><li> Expose de thorax door te snijden door de huid en onderhuidse laag langs de ventrale middellijn van de borstholte van de muis. </li><li> Maak laterale incisies door de huid en weefsel aan elke kant tot aan de neck van de muis. </li><li> Ontleden de longen door voorzichtig grijpen de longen terwijl weg knippen bindweefsel boven en onder de longen. </li><li> Presoak gewonnen longen in koude PBS om resterende bloed te verwijderen, plaatst u in 10% gebufferde formaline dan. </li><li> Fotograferen elke long voor tumormetastasen assessment. Weeg longen voor tumorbelasting kwantificering. </li></ol>

<ol><li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventing+postoperative+metastatic+disease+by+inhibiting+surgery-induced+dysfunction+in+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Preventing postoperative metastatic disease by inhibiting surgery-induced dysfunction in natural killer cells.</a> Cancer Res. 73, 97-107 (2013).</li>
<li>Seth, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+Stress+Promotes+the+Development+of+Cancer+Metastases+by+a+Coagulation-Dependent+Mechanism+Involving+Natural+Killer+Cells+in+a+Murine+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Surgical Stress Promotes the Development of Cancer Metastases by a Coagulation-Dependent Mechanism Involving Natural Killer Cells in a Murine Model.</a> Ann. Surg. , (2012).</li>
<li>Shakhar, G., Ben-Eliyahu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+prophylactic+measures+against+postoperative+immunosuppression%3A+could+they+reduce+recurrence+rates+in+oncological+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Potential prophylactic measures against postoperative immunosuppression: could they reduce recurrence rates in oncological patients.</a> Ann. Surg. Oncol. 10, 972-992 (2003).</li>
<li>Shiromizu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+laparotomy+and+laparoscopy+on+the+establishment+of+lung+metastasis+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Effect of laparotomy and laparoscopy on the establishment of lung metastasis in a murine model.</a> Surgery. 128, 799-805 (2000).</li>
<li>Tsuchiya, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+surgical+stress+promotes+tumor+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Increased surgical stress promotes tumor metastasis.</a> Surgery. 133, 547-555 (2003).</li>
<li>Lanier, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NK+cell+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">NK cell recognition.</a> Annu. Rev. Immunol. 23, 225-274 (2005).</li>
<li>Espi, A., Arenas, J., Garcia-Granero, E., Marti, E., Lledo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+curative+surgery+on+natural+killer+cell+activity+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Colon+Rectum%22%5BJournal%5D)">Relationship of curative surgery on natural killer cell activity in colorectal cancer.</a> Dis. Colon Rectum. 39, 429-434 (1996).</li>
<li>Pollock, R. E., Lotzova, E., Stanford, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+surgical+stress+impairment+of+human+perioperative+natural+killer+cell+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Surg%22%5BJournal%5D)">Mechanism of surgical stress impairment of human perioperative natural killer cell cytotoxicity.</a> Arch. Surg. 126, 338-342 (1991).</li>
<li>Pollock, R. E., Lotzova, E., Stanford, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+stress+impairs+natural+killer+cell+programming+of+tumor+for+lysis+in+patients+with+sarcomas+and+other+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Surgical stress impairs natural killer cell programming of tumor for lysis in patients with sarcomas and other solid tumors.</a> Cancer. 70, 2192-2202 (1992).</li>
<li>Ben-Eliyahu, S., Page, G. G., Yirmiya, R., Shakhar, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+stress+and+surgical+interventions+promote+tumor+development+by+suppressing+natural+killer+cell+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Evidence that stress and surgical interventions promote tumor development by suppressing natural killer cell activity.</a> Int. J. Cancer. 80, 880-888 (1999).</li>
<li>Page, G. G., Blakely, W. P., Ben-Eliyahu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+postoperative+pain+is+a+mediator+of+the+tumor-promoting+effects+of+surgery+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Evidence that postoperative pain is a mediator of the tumor-promoting effects of surgery in rats.</a> Pain. 90, 191-199 (2001).</li>
<li>Glasner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+survival+rates+in+two+models+of+spontaneous+postoperative+metastasis+in+mice+by+combined+administration+of+a+beta-adrenergic+antagonist+and+a+cyclooxygenase-2+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Improving survival rates in two models of spontaneous postoperative metastasis in mice by combined administration of a beta-adrenergic antagonist and a cyclooxygenase-2 inhibitor.</a> J. Immunol. 184, 2449-2457 (2010).</li>
<li>Benish, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+use+of+beta-blockers+and+COX-2+inhibitors+may+improve+immune+competence+and+reduce+the+risk+of+tumor+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Perioperative use of beta-blockers and COX-2 inhibitors may improve immune competence and reduce the risk of tumor metastasis.</a> Ann. Surg. Oncol. 15, 2042-2052 (2008).</li>
<li>Goldfarb, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+postoperative+immune+status+and+resistance+to+cancer+metastasis%3A+a+combined+perioperative+approach+of+immunostimulation+and+prevention+of+excessive+surgical+stress+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Improving postoperative immune status and resistance to cancer metastasis: a combined perioperative approach of immunostimulation and prevention of excessive surgical stress responses.</a> Ann. Surg. 253, 798-810 (2011).</li>
<li>Tartter, P. I., Steinberg, B., Barron, D. M., Martinelli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prognostic+significance+of+natural+killer+cytotoxicity+in+patients+with+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Surg%22%5BJournal%5D)">The prognostic significance of natural killer cytotoxicity in patients with colorectal cancer.</a> Arch. Surg. 122, 1264-1268 (1987).</li>
<li>Fujisawa, T., Yamaguchi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+tumor+killing+activity+as+a+prognostic+factor+in+primary+resected+nonsmall+cell+carcinoma+of+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Autologous tumor killing activity as a prognostic factor in primary resected nonsmall cell carcinoma of the lung.</a> Cancer. 79, 474-481 (1997).</li>
<li>Guillot, B., Bessis, D., Dereure, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucocutaneous+side+effects+of+antineoplastic+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Drug+Saf%22%5BJournal%5D)">Mucocutaneous side effects of antineoplastic chemotherapy.</a> Expert Opin. Drug Saf. 3, 579-587 (2004).</li>
<li>Deehan, D. J., Heys, S. D., Ashby, J., Eremin, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-2+%28IL-2%29+augments+host+cellular+immune+reactivity+in+the+perioperative+period+in+patients+with+malignant+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Surg.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Interleukin-2 (IL-2) augments host cellular immune reactivity in the perioperative period in patients with malignant disease.</a> Eur. J. Surg. Oncol. 21, 16-22 (1995).</li>
<li>Houvenaeghel, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerance+and+feasibility+of+perioperative+treatment+with+interferon-alpha+2a+in+advanced+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Surg%22%5BJournal%5D)">Tolerance and feasibility of perioperative treatment with interferon-alpha 2a in advanced cancers.</a> Int. Surg. 82, 165-169 (1997).</li>
<li>Klatte, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+immunomodulation+with+interleukin-2+in+patients+with+renal+cell+carcinoma%3A+results+of+a+controlled+phase+II+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Perioperative immunomodulation with interleukin-2 in patients with renal cell carcinoma: results of a controlled phase II trial.</a> Br. J. Cancer. 95, 1167-1173 (2006).</li>
<li>Oosterling, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+IFN-alpha+to+avoid+surgically+induced+immune+suppression+in+colorectal+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Histol.+Histopathol%22%5BJournal%5D)">Perioperative IFN-alpha to avoid surgically induced immune suppression in colorectal cancer patients.</a> Histol. Histopathol. 21, 753-760 (2006).</li>
<li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+influenza+vaccination+reduces+post-operative+metastatic+disease+by+reversing+surgery-induced+dysfunction+in+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Perioperative influenza vaccination reduces post-operative metastatic disease by reversing surgery-induced dysfunction in natural killer cells.</a> Clin Cancer Res. , (2013).</li>
</ol>

De auteurs verklaren geen concurrerende financiële belangen.

Chirurgische resectie is de steunpilaar van de therapie voor patiënten met gelokaliseerde solide maligniteiten. Zelfs met volledige resectie, veel patiënten ontwikkelen van een uitgezaaide recidief en uiteindelijk overlijden aan hun ziekte. De onmiddellijke postoperatieve periode een ideale omgeving voor de vorming van kankermetastasen, gemoduleerd, grotendeels door postoperatieve NK cel depressie. Desondanks blijft het een therapeutisch venster grotendeels genegeerd. Er zijn geen standaard perioperatieve anti-kanker therapieën die gericht zijn op het voorkomen van postoperatieve metastasen. De huidige uitdaging is om veilige en veelbelovende therapieën dat NK-cellen in de peri-operatieve periode aldus tot micrometastatische ziekte voorkomen wordt geactiveerd identificeren. Deze therapie moet rigoureus worden gekarakteriseerd voor de veiligheid en werkzaamheid in preklinische diermodellen en vervolgens vertaald naar zorgvuldig ontworpen klinische studies. De primaire verhoudingNale van het ontwikkelen van een muis tumor model van chirurgische stress is om mechanismen van onderdrukking van het immuunsysteem en metastatische verspreiding te verkennen na een operatie en innovatieve immuuntherapie evalueren met potentieel voor toekomstig gebruik bij kankerpatiënten die een operatie ondergaan om de primaire tumor te verwijderen. Om dit doel te bereiken, een 4T1 muis mammacarcinoom model in combinatie met chirurgische spanning werd ontwikkeld. Terwijl de 4T1 cellijn is een muizen &quot;borstcarcinoom&quot;, de reden om deze cellijn is de reproduceerbaarheid van spontane metastasen kunnen we de effecten van chirurgische stress in een realistisch kankermodel evalueren. In dit verband is de werkelijke oorsprong van de maligniteit is minder belangrijk dan het metastatische potentieel en tumorbiologie. De tweede essentiële component van ons model is de ontwikkeling van een dier chirurgische procedure lijken menselijke kanker chirurgie. In dit dier chirurgische stress-model, wordt de primaire 4T1 borsttumor weggesneden na 1 cm 3 bereikt. Omdatkanker operaties in menselijke patiënten te betrekken significante onderdrukking van het immuunsysteem, een open-buik nefrectomie in &quot;chirurgische spanning&quot; behandelingsgroepen is bovendien uitgevoerd. Zoals vergelijkt met meer conventionele resectie in mensen, het invasieve karakter van een volledig linker nefrectomie is zeer vergelijkbaar met vele soorten chirurgische behandelingen voor vaste tumoren, waaronder chirurgie voor colorectale kanker, eierstokkanker, nierkanker, alvleesklierkanker, longkanker en slokdarmkanker kanker. Bovendien zouden we stellen dat de diepgaande fysiologische veranderingen die peroperatief optreden, door laparotomie + nefrectomie voldoende reproduceert de overweldigende fysiologische veranderingen die optreden na invasieve chirurgie voor de meeste vaste tumoren. Om te bepalen voor PO factoren die kunnen leiden tot overmatige chirurgische stress en sterfte, de duur van de anesthesie en chirurgie en onderhouden van de lichaamstemperatuur tijdens de operatie wordt nauwkeurig gedefinieerd. Al deze parameters zijn precies een uitgevoerded omschreven in onze operatie protocol om routine peri-operatieve zorg bij patiënten kanker bij de mens weerspiegelen. De timing van de peri-operatieve behandelingen is een extra essentieel onderdeel van de perioperatieve redding model. 4T1 tumor dragende muizen zijn eerder behandeld met 3 regimes van griepvaccin: neo-adjuvante (gegeven 5 dagen vóór de ingreep), peri-operatieve (toegediend op dezelfde dag van de operatie) en perioperatieve + voor meervoudig gebruik (gegeven op de dag van de operatie, gevolgd door 2 bijkomende doses gegeven 5 dagen na elkaar). Opmerkelijk, alle 3 modi van vaccin behandeling aanzienlijk gedaald longmetastasen 22. Echter, griepvaccin peroperatief toegediend als een enkele dosis verlaagd uitzaaiingen het meest effectief. Tezamen zijn deze experimenten benadrukken het belang van de onmiddellijke perioperatieve periode als een nauw therapeutisch venster om in te grijpen in het metastatische proces. Perioperatieve gebruik van innovatieve immuuntherapie zoals oncolytic virus en vaccin is uitsluitend beperkt tot onze onderzoeksgroep. We aangetoond voor de eerste keer dat perioperatieve toediening van nieuwe oncolytic ORF en vacciniavirussen NK celonderdrukking kan omkeren na een operatie in diermodellen 1. Nog belangrijker, deze redding van immuunfunctie correleert met een vermindering in de postoperatieve vorming van metastasen. In menselijke studies, had postoperatieve kanker chirurgie patiënten NK-cel cytotoxiciteit verminderd en NK cel activiteit perioperatieve OV verhoogt aanzienlijk bij kankerpatiënten 1. Met behulp van commercieel beschikbare profylactische vaccins, hebben we aangetoond dat perioperatieve influenza vaccin administratie aanzienlijk verminderd tumormetastasen en verbeterde NK-cel cytotoxiciteit in preklinische tumormodellen. In menselijke studies, griepvaccin aanzienlijk verbeterd NK cel activiteit bij gezonde donoren en kanker chirurgie patiënten 22. Vele benaderingen worden gebruikt Canc verminderener herhaling, met inbegrip van chemotherapie en bestraling, maar deze therapieën worden meestal toegediend weken tot maanden voor het (neo-adjuvante) of na (adjuvans) chirurgie. Onderzoek op dit gebied blijkt dat de onmiddellijke postoperatieve periode is van cruciaal belang bij het bepalen van de lange termijn tumorherhaling tarieven. Daarom kunnen klinische interventies in de vorm van immuuntherapie tijdens deze kritieke periode aanzienlijke voordelen op lange termijn hebben. Onze studies met behulp van een muismodel van spontane longmetastase en chirurgische stress te bieden een unieke kans om nieuwe therapieën te onderzoeken en vast te stellen hun potentieel om perioperatieve immunosuppressie voorkomen bij darmkanker patiënten en daardoor ook kanker terugkeert te verlagen.

Chirurgie is een essentieel onderdeel in de curatieve behandeling van kanker van solide tumoren, maar ondanks volledige resectie, veel patiënten ontwikkelen van een uitgezaaide recidief en uiteindelijk overlijden aan hun ziekte. Steeds de postoperatieve periode als gevolg van de fysiologische stressrespons een operatie, zoals bloedstolling, afgifte van groeifactoren en immuunsuppressie, wordt als kritiek moment voor de ontwikkeling van metastasen. Onze groep 1,2 en anderen 3-5 blijkt dat de onmiddellijke postoperatieve periode is een uniek vatbaar tijd voor de vorming van metastasen. Een van de belangrijkste mechanismen die verantwoordelijk zijn voor de prometastatic effecten van de operatie is postoperatieve dysfunctie van Natural Killer (NK) cellen 1-3. NK cellen cytotoxische lymfocyten van het aangeboren immuunsysteem betrokken bij de regulering van groei en metastasen 6 tumor. NK-cel dysfunctie na chirurgie is i gedocumenteerdn zowel menselijke patiënten 1,7-9 en diermodellen 1,10,11. Postoperatieve NK celonderdrukking correleert met een verhoogde uitzaaiingen in diermodellen van spontane en geïmplanteerde metastasen 1,11-14, terwijl in menselijke studies, lage NK-activiteit tijdens de perioperatieve periode wordt geassocieerd met een hoger percentage van kanker terugkeert en mortaliteit 15,16. Ondanks dit, zijn er momenteel geen kanker therapieën die specifiek gericht zijn de prometastatic veranderingen die onmiddellijk optreden na kanker operatie. De perioperatieve periode vertegenwoordigt een therapeutisch window of opportunity om in te grijpen in het metastatische proces. Terwijl de traditionele kankertherapieën, zoals cytotoxische chemotherapie worden geacht te toxisch voor toediening aan patiënten die herstellen van een zware operatie 17, immune therapieën zijn ideale kandidaten voor PO toediening. Perioperatieve gebruik van recombinant IL-2 en IFN-Î ³ werden onderzocht in vroege fase klinische proeven aantonen hun potentieel om postoperatieve NK celonderdrukking voorkomen en verbeteren van progressie-vrije overleving 18-21. Helaas is de verdere ontwikkeling belemmerd door de tolerantie van deze niet-specifieke cytokine therapie gecombineerd met een grote operatie 17. Virussen zijn ook potente niet-specifieke activatoren van NK-cellen. Ons onderzoek heeft eerder aangetoond dat preoperatieve toediening van replicerende virussen, zoals nieuwe anti-kanker Oncolytic virussen (OV) en niet-replicerende virale vaccins, zoals influenza vaccin-geïnduceerde chirurgie NK-cel dysfunctie kan remmen en verminderen metastasen 1,22. De chirurgische model beschreven in dit document is ons begrip van de bij de verspreiding en groei van tumorcellen na operatie mechanismen gefaciliteerd en liet ons toe om nieuwe gerichte therapieën die in de peri-operatieve periode kan worden toegediend verkennen. Om dit doel te bereiken, een diermodel van chirurgische stress en spontane metastase wad ontwikkeld. Het model maakt gebruik van de muis mammacarcinoom tumoren (BALB / c - 4T1) die in staat zijn om spontaan uitzaaien uit de primaire borstklier meerdere verre plaatsen in het bijzonder de longen zijn. Op dag 0, worden borstkankercellen geïmplanteerd in de muis borst vet pad. Op dag 14 na tumor implantatie wordt een volledige resectie van de primaire borstkanker uitgevoerd bij alle dieren. Een subgroep van dieren ontvangt extra chirurgische stress in de vorm van een abdominale nefrectomie. Op dag 28, longtumor knobbeltjes in chirurgisch gestresst en geen operatie controle muizen vergeleken worden geïsoleerd en gekwantificeerd. In dit diermodel van kanker en chirurgie, worden de effecten van chirurgie op uitzaaiingen bestudeerd en werkzaamheid van perioperatieve toediening van innovatieve immuuntherapie, waaronder replicerende en niet-replicerende viraal gebaseerde immuun-stimulerende getest voor de eerste keer.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Corning Cell-Gro</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>Inactivated Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>HyClone</td><td>SH30396.03</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>1x Sterile Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Corning Cell Gro</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfine</td><td>Chiron, Guelph</td><td>RXN309968</td><td></td></tr><tr><td>Isofluraan</td><td>Baxter Corp</td><td>1001936040</td><td></td></tr><tr><td>1/2 Ultra-fijne spuit</td><td>Terumo</td><td>30 G, SS05M3009</td><td></td></tr><tr><td>9 mm Haakjes</td><td>Braintree</td><td>ACS BX</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Gevlochten absorbeerbare hechtingsdraad</td><td>Covidien</td><td>UL-202</td><td></td></tr><tr><td>3-0 Wax gevlochten zijde hechtingsdraad</td><td>Covidien</td><td>S-194</td><td></td></tr><tr><td>Formaline</td><td>Fisher</td><td>SF100-20</td><td></td></tr><tr><td>4T1 Tumorcellen</td><td>ATCC</td><td>CRL-2539</td><td></td></tr><tr><td>BALB/c muizen</td><td>Charles Rivers Labs</td><td>Strain Code:028</td><td></td></tr></tbody></table>

een muis tumor model of surgical stress aan ontdek de mechanismen van postoperatieve immuunsuppressie en evalueren novel perioperative immuuntherapie

A Mouse Tumor Model of Surgical Stress to Explore the Mechanisms of Postoperative Immunosuppression and Evaluate Novel Perioperative Immunotherapies

Chirurgische resectie is een essentiële behandeling voor de meeste kankerpatiënten, maar chirurgie veroorzaakt disfunctioneren van het immuunsysteem en dat is gekoppeld aan de ontwikkeling van metastatische ziekte bij diermodellen en bij kankerpatiënten. Preklinische werk van onze groep en anderen heeft een diepgaande onderdrukking van aangeboren immuunsysteem, specifiek NK cellen in de postoperatieve periode aangetoond en dit speelt een belangrijke rol in de verbeterde ontwikkeling van metastasen na de operatie. Relatief weinig dierstudies en klinische studies hebben zich gericht op het karakteriseren en het omkeren van de nadelige gevolgen van kanker chirurgie. Met een rigoureuze diermodel spontaan metastaserende tumoren en chirurgische stress, de verbetering van kanker chirurgie op de ontwikkeling van longmetastasen werd aangetoond. In dit model worden 4T1 borstkankercellen geïmplanteerd in de muis uiervet pad. Op dag 14 na tumor implantatie, een volledige resectie van de primaire borsttumor is performed bij alle dieren. Een subgroep van dieren ontvangt extra chirurgische stress in de vorm van een abdominale nefrectomie. Op dag 28, zijn longtumor knobbeltjes gekwantificeerd. Bij immunotherapie direct preoperatief werd, werd een diepe activatie van immuuncellen die de ontwikkeling van metastasen voorkomen na chirurgie gedetecteerd. Terwijl de 4T1 borsttumor chirurgie model maakt de simulatie van de effecten van abdominale chirurgische spanning op tumormetastasen, de toepasbaarheid op andere tumortypes getest moet worden. De huidige uitdaging is om veilige en veelbelovende immuuntherapie in preklinische muismodellen te identificeren en te vertalen naar haalbare perioperatieve therapie te worden gegeven aan kanker chirurgie patiënten om herhaling van gemetastaseerde ziekte te voorkomen.

Een reproduceerbaar muismodel van chirurgische stress die resulteert in de dramatische verhoging van longmetastasen ontwikkeld. Op dag 28 na de 4T1 tumorinoculatie (en 14 dagen na resectie + / - abdominale nefrectomie), werden de longen geoogst en gevisualiseerd voor metastasen. Chirurgie verhoogt duidelijk het aantal longmetastasen in vergelijking met onbehandelde muizen aangetoond door long foto (figuur 1A), opsomming van longknobbeltjes (Figuur 1B) en longgewicht (figuur 1C). Preoperatieve toediening van repliceren oncolytic virus geïnactiveerd griepvaccin aanzienlijk redt de prometastatic gevolgen van kanker chirurgie (figuren 1A-C). Om te bepalen of NK-cellen spelen een bemiddelende rol bij het voorkomen van metastasen na vaccin behandeling werden cellen NK farmacologisch verarmd gebruik van anti-asialo-GM-1 in de tumor metastase model. Aangezien NKcellen zagen we een beëindiging van het therapeutische effect van PO immuuntherapie (Figuren 2A en 2B). Deze gegevens suggereren dat tumormetastasen verwijdering in onze chirurgische stress-model voornamelijk wordt gemedieerd door oncolytic virus en influenza vaccin activatie van NK-cellen en de daaropvolgende NK-gemedieerde tumorlysis. Om verder te karakteriseren NK celfunctie na perioperatieve toediening van oncolytic virus en griep vaccin, werd ex vivo NK celdood beoordeeld. Kort samengevoegd en gesorteerd DX5 + NK-cellen werden geïsoleerd van splenocyten van chirurgisch gestresst en controlemuizen. Ze werden gekweekt samen gedurende 4 uur met chroom gelabelde YAC-1 targetcellen, bij verschillende effector-tot-verhoudingen, gevolgd door meting van supernatant chroom release met een gammateller Target. Een belangrijke operatie veroorzaakte defect in NK-cel cytotoxiciteit samen met een significant herstel van NK doden na perioperatieve toediening van oncolytic virus en influenza vaccin vergeleken met chirurgie alleen (figuren 2C en 2D) werd waargenomen. Samengenomen tonen deze resultaten aan dat de perioperatieve NK cel depressie succes worden behandeld en metastasen gereduceerd met nieuwe immunostimulerende therapieën. <img alt="Figuur 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51253/51253fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51253/51253fig1.jpg" /> Figuur 1. Nieuwe anti-kanker oncolytic virus en influenza vaccin als perioperatieve therapie tegen-operatie veroorzaakte versterking van longmetastasen. Beoordeling van 4T1 longtumor metastasen op dag 28 van de aangewezen behandeling groepen op (A) foto&#39;s van representatieve longen, (B) opsomming van longtumor knobbeltjes en (C) long gewichten. Gegevens zijn representatief voor 3 soortgelijke experimenten met n = 5-10/group (*, p = 0,01, ** p &lt;0,0001;<html> ns, niet significant). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51253/51253fig1highres.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.</a> <img alt="Figuur 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51253/51253fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51253/51253fig2.jpg" /> Figuur 2. Chirurgische spanning verhoogt longtumor uitzaaiingen door afbreuk NK-cellen. (A, B) Kwantificering van longtumor metastasen chirurgisch benadrukte muizen behandeld met nieuwe perioperatieve therapie. (C, D) Het vermogen van gezuiverd DX5 + NK-cellen van chirurgisch benadrukt en onbehandelde controles om tumorcellen te doden. De gegevens worden weergegeven als het gemiddelde percentage (+ / - SD) van chromium afgifte uit drievoudige putjes voor de aangegeven E: T ratio. Gegevens zijn representatief voor 3 soortgelijke experimenten waarbij n = 4-5/group (*, p = 0,01, ** p &lt;0,005, ns, niet significant)./ Www.jove.com/files/ftp_upload/51253/51253fig2highres.jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; Klik hier voor een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

Een muis tumor model van chirurgische spanning wordt gebruikt om te onderzoeken hoe postoperatieve onderdrukking van het immuunsysteem bevordert gemetastaseerde ziekte en immuunstimulerende perioperatieve therapie te evalueren.

Een muis Tumor Model of Surgical Stress aan Ontdek de Mechanismen van Postoperatieve Immuunsuppressie en evalueren Novel Perioperative Immuuntherapie

Surgical resection is an essential treatment for most cancer patients, but surgery induces dysfunction in the immune system and this has been linked to ...

Het algemene doel van deze procedure is om het effect van immunotherapie, toegediend in de perioperatieve periode, op het verminderen van metastase te observeren in een muismodel van tumor en chirurgische stress. Dit wordt bereikt door eerst vier T one-tumorcellen in het vetkussen van de muis te injecteren om een primaire tumor te vestigen. Op dag 13, of één dag vóór de kankeroperatie, wordt immunotherapie toegediend, waarvan wordt verondersteld dat het de postoperatieve metastatische ziekte op dag 14 na de implantatie van de tumorcellen vermindert.De primaire tumor wordt geresecteerd, gevolgd door aanvullende chirurgische stress in de vorm van een abdominale nefrectomie bij een subset van de muizen. De laatste stap is het opofferen van alle muizen en het kwantificeren van het aantal metastatische longtumornoduli. Uiteindelijk wordt dit muismodel van spontane metastasen en chirurgische stress gebruikt om het gunstige effect van perioperatieve immunotherapie aan te tonen.Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen op het gebied van de chirurgische oncologie, zoals de manier waarop grote chirurgische ingrepen het immuunsysteem beïnvloeden en bijgevolg de vorming van metastatische ziekte in de postoperatieve periode, en hoe immunotherapieën kunnen worden ingezet om dit effect te verminderen. Deze procedure zal worden gedemonstreerd door Christiano 10 dusa, een onderzoekstechnicus in het laboratorium van Dr. Rebecca s. Om de tumorcelcultuur op te zetten: begin met het plaatsen van ongemodificeerde 41 tumorcellen in compleet DMEM in 10 centimeter weefkweekplaten en incubeer deze bij 37 °C en 5% CO2 in een weefkweekincubator.Splits de culturen twee tot drie keer per week indien nodig, zodat de cellen een confluentie van 80% niet overschrijden. Begin binnen een maand na het opzetten van de celcultuur met het oogsten van de tumorcellen door het cultuurmedium uit de weefkweekplaat te aspireren. Voeg 10 milliliters van één X steriele PBS toe die twee milliliters EDTA bevat en incubeer de plaat bij 37 °C, 5% CO2 gedurende vijf tot zeven minuten.Verwijder vervolgens de PBS-oplossing uit de plaat, spoel de plaat twee tot drie keer met PBS en breng de cellen over naar een conische buis van 50 milliliter. Centrifugeer de cellen daarna in een tafelcentrifuge bij 500 Gs en vier graden Celsius gedurende vijf minuten. Aspireer de supernatanten en resuspendeer de celpellet in serumvrij DMEM.Gebruik vervolgens een cel teller om de celconcentratie te bepalen en verdun de cellen met serumvrij medium tot 1 × 10⁶ cellen per 500 µL en plaats de cellen één uur vóór de operatie op ijs. Injecteer een muis subcutaan met 0,05 mg/kg buprenorfine voor pijnbeheersing. Nadat de muis is geanestheseerd met 2,5% isofluraan, knijp dan in het voetkussentje om een adequate mate van anesthesie te controleren.Vul vervolgens een ultrafijne spuit van 30 gauge en een halve inch met precies 50 µL van de tumorcel-suspensie. Tik tegen de zijkant van de spuit om luchtbellen te verwijderen. Terwijl de ISO-fluoran anesthesie wordt voortgezet, wordt de muis met de ventrale zijde naar boven op de operatietafel geplaatst.Voer nu de naald horizontaal en direct in het vierde vetkussentje van het geheugen in en verdeel langzaam het volume van de spuit. Het injecteren zou ongeveer één minuut in beslag nemen. Gebruik een wattenstaafje om eventuele lekkage na de injectie te reinigen.Laat de muis herstellen van de anesthesie voordat deze terug in de kooi wordt geplaatst. Ga door met de pijnbestrijding door elke acht uur gedurende twee dagen 0,05 milligram per kilogram buprenorfine subcutaan toe te dienen op 13 dagen na de celinjectie. Gebruik een externe schuifmaat om de grootte van de primaire tumor te meten.Meet de grootste longitudinale diameter of lengte en de grootste transversale diameter of breedte met een schuifmaat. De aangepaste ellipsoïdale formule wordt gebruikt om het tumorvolume te berekenen als de helft van de lengte vermenigvuldigd met de breedte in het kwadraat. Op dit moment, uitgaande van een primaire tumor van ongeveer één kubieke centimeter, is het gekozen perioperatieve therapiereagens, in dit geval oncolytisch virus in 1x steriele PBS, klaargemaakt.Vul een insulinespuit van 27 gauge en een halve inch met precies 100 µL van de oncolytische virustherapie. Verwijder alle luchtbellen uit de spuit. Plaats vervolgens een muis in een fixatieapparaat, waarbij de staart toegankelijk blijft.Verwarm de staart voorzichtig met warm kraanwater. Om de laterale staartvenen zichtbaar te maken, selecteert u een laterale staartvene en injecteert u deze met het oncolytische virus. Als de naald correct in een laterale vene is ingebracht, mag er geen weerstand voelbaar zijn bij het indrukken van de spuit.Wanneer u klaar bent, plaatst u de muis gedurende de nacht terug in de kooi op 14 dagen na de Postum-celinjectie. Behandel de muis subcutaan met 0,05 milligram per kilogram buprenorfine één uur voor de operatie voor de pijnbestrijding; induceer en handhaaf de anesthesie met 2,5% ISO-fluorine. Maak een huidincisie van één tot twee centimeter en verwijder voorzichtig de gehele primaire four T one tumor uit het vetweefsel van de melkklier; de tumor en eventueel aanhechtend debris dienen in één stuk verwijderd te worden.Bewaar de tumor in Formin voor latere immunohistochemische analyse. Sluit na excisie van de tumor de incisie met twee tot drie nietjes van negen millimeter. De volgende stap is het uitvoeren van een grote chirurgische ingreep bij een subgroep van de muizen.Begin met een incisie in de ventrale middellijn door de huid en de subcutane laag. Maak vervolgens een incisie van drie tot vier centimeter bij de lineaire elleboog om toegang te krijgen tot het peritoneum. Verschuif nu de bovenliggende darmen naar één zijde om de linker binnenzijde van de abdomen bloot te leggen.Houd de darmen vochtig met een steriel gaasje gedrenkt in zoutoplossing. Pak vervolgens de linker nier voorzichtig vast met een stomp chirurgisch pincet. Gebruik daarna een met was gecoate, gevlochten zijden hechtdraad van 3.0, geknoopt in een lus, om het hilum van de linker nier af te binden.Zet de hechting vast met drie chirurgische knopen. Verwijder nu de linker nier met een chirurgische schaar. Controleer de hechting zorgvuldig om er zeker van te zijn dat er sprake is van adequate hemostase.Sluit vervolgens de subcutane laag met een continue lushechting met gebruik van 5-0 gevlochten absorbeerbare hechtdraden. Niet vervolgens de huidlaag met negen millimeter nietjes. De nefrectomie zou ongeveer 10 minuten per dier in beslag moeten nemen.Zodra het dier is hersteld, wordt het teruggeplaatst in de kooi en wordt de pijnbestrijding gedurende twee dagen voortgezet door elke acht uur 0,05 milligram per kilogram buprenorfine subcutaan toe te dienen. Op 28 dagen na de vier T one tumorinjecties wordt de muis geëuthanaseerd en besproeid met 70% ethanol. Begin met het verwijderen van de longen door met een schaar een eerste incisie net onder de ribbenkast te maken. Snijd door de huid en de subcutane laag langs de ventrale middellijn van de borstholte om de thorax bloot te leggen.Maak vervolgens laterale incisies door de huid en het weefsel aan beide zijden tot aan de nek. Pak nu voorzichtig de longen vast terwijl u het bindweefsel wegsnijdt totdat de longen vrij zijn. Snijd door de trachea boven de bifurcatie, waardoor de linker- en rechterkwab bij elkaar worden gehouden.Doop vervolgens de geëxtraheerde longen in koude PBS om eventueel resterend bloed te verwijderen en plaats ze in 10% gebufferde formaline. Sluit af door de longen te fotograferen voor de beoordeling van tumormetastasen en ze te wegen voor de kwantificering van de tumorlast. 14 dagen na de resectie van de T1-tumor werden de longen geoogst en gevisualiseerd op metastasen, hier getoond als de long van een muis die geen abdominale nefrectomie had ondergaan. Enkele gemetastaseerde tumoren zijn zichtbaar.In tegenstelling hiertoe leidde een chirurgische nefrectomie direct na de tumorresectie tot een zichtbare toename van het aantal longmetastasen. Deze foto toont de longen van een muis die na tumorresectie en nefrectomie is behandeld met een oncolytisch virus; hier getoond zijn de longen van een muis die na tumorresectie en nefrectomie is behandeld met een influenzavaccin. Het tellen van de longtumornoduli in elk van deze categorieën laat een duidelijke toename zien van het aantal longmetastasen bij muizen met een nefrectomie-operatie vergeleken met muizen zonder operatie, of muizen met een preoperatieve therapeutische interventie. De longen van de muizen met een nefrectomie-operatie, maar zonder preoperatieve therapie, wegen significant meer dan die in de andere testcategorieën.Zodoende redde de preoperatieve toediening van het replicerende oncolytische virus en het geïnactiveerde influenzavaccin aanzienlijk de prometastatische effecten van een grote operatie na tumorresectie. Deze grafieken tonen het aantal longtumoren bij muizen met normale of intacte aantallen NK-cellen en bij muizen bij wie de NK-cellen farmacologisch waren uitgeput met behulp van anasi ALO GM one. De NK-uitgeputte muizen vertoonden een verminderd therapeutisch effect van de perioperatieve immunotherapieën met oncolytisch virus of influenzavaccin.Dit suggereert dat de NK-cellen een mediërende rol spelen bij het voorkomen van metastasen na vaccinatiebehandeling. Om de NK-cel functie verder te karakteriseren, werd de ex vivo NK-cel killing beoordeeld; gezuiverde DX5-positieve cellen van chirurgisch gestreste en onbehandelde controles werden gecultiveerd met YAK-1-doelcellen. De zwarte ononderbroken lijn geeft het NK-cel killing vermogen van onbehandelde muizen aan en de zwarte stippellijn demonstreert het NK-cel killing vermogen van chirurgisch gestreste muizen.De afname in het percentage cytotoxiciteit, weergegeven door de neerwaartse verschuiving van de zwarte doorgetrokken lijn naar de zwarte stippellijn, demonstreert een defect in de cytotoxische functie van NK-cellen bij muizen na een chirurgische ingreep. De grijze doorgetrokken lijnen geven de doding door NK-cellen aan van muizen die immunotherapie ontvingen, in de vorm van een oncolytisch virus of een influenzavaccin, maar geen chirurgische ingreep ondergingen. De grijze stippellijnen geven het dodingvermogen van NK-cellen aan van muizen die zowel perioperatieve immunotherapie als een chirurgische ingreep ontvingen.De afname in het percentage cytotoxiciteit, weergegeven door de neerwaartse verschuiving van de grijze doorgetrokken lijn naar de grijze stippellijn, demonstreert een defect in de cytotoxische functie van NK-cellen bij muizen na de operatie, ondanks het ontvangen van perioperatieve immunotherapie. Het belangrijkste is dat de grijze stippellijnen nog steeds veel hoger liggen dan de zwarte stippellijnen. Dit suggereert dat het mogelijk kan zijn om de door chirurgie geïnduceerde cytotoxische dysfunctie van NK-cellen te herstellen met perioperatieve immunotherapie.Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u een diermodel van spontane metastasen en chirurgische stress creëert door primaire tumoren te vestigen. Het resecteren van de primaire tumoren induceert aanvullende chirurgische stress door nefrectomie, waarna aan het eindpunt de metastatische tumornoduli in de longen worden beoordeeld. Daarnaast zou u moeten begrijpen hoe dit model kan worden gebruikt om de suppressieve effecten van chirurgie op het aangeboren immuunsysteem en het vermogen van immunotherapieën om dit effect om te keren te bestuderen.

a-mouse-tumor-model-surgical-stress-to-explore-mechanisms

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Een orthotope Model van sereuze eierstokkanker in immunocompetente muizen voor In vivo Tumor Imaging en Bewaking van de Tumor Immuunrespons

This video illustrates testing of adjuvant or additional therapy in a mouse model with incompletely resected subcutaneous tumors. The partially tumor-resected mouse is treated with an antibody targeting the anti-cytotoxic protein of T regulatory cells, potentially reducing tumor regrowth and suggesting effective adjuvant therapy.

An Adjuvant Therapy in a Mouse Model with an Incompletely Resected Subcutaneous Tumor

Een orthotope borstkanker primaire tumor model en chirurgische verwijdering van de primaire tumor de muis het leven uit te breiden tot spontane metastase genereren beschreven. De tumorgroei en progressie worden gecontroleerd en gekwantificeerd luciferase fluorescentiebeeldvorming.

Een orthotope Muis Model van Spontane uitzaaiing van borstkanker

Het meerstaps proces van peritoneale verspreiding van ovariumcarcinoom verduidelijken de huidige studie beschrijft een murine experimenteel model van originele tumorontwikkeling en metastase via orthotope peritoneale inoculatie met deze tumorcellen.

Murine Experimental Model van de oorspronkelijke tumor Ontwikkeling en peritoneale metastase<em&gt; via</em&gt; Orthotope Inenting met ovariumcarcinoom Cells

Dit protocol beschrijft een muismodel van de orthopedische chirurgie die is gebruikt voor het bestuderen van de mechanismen van postoperatieve neuroinflammation en gedragsveranderingen, en wanneer deze wordt gecombineerd met parabiosis, om te studeren weefselregeneratie tijdens veroudering.

Een muismodel van orthopedische chirurgie te bestuderen Weefselregeneratie en postoperatieve cognitieve dysfunctie

In dit protocol beschrijven we een muismodel van onvolledige chirurgische resectie van weke delen sarcoom voor het testen van (neo)adjuvante therapieën.

Een muismodel van onvolledig gereseceerde weke delen Sarcoom voor het testen van (Neo)adjuvante therapieën

Hier presenteren we een tumortransplantatieprotocol voor de karakterisering van tumor-inherente en periferie-afgeleide tumor-geïnfiltreerde lymfocyten in een muistumormodel. Specifieke tracering van de instroom van van de ontvanger afgeleide immuuncellen met flowcytometrie onthult de dynamiek van de fenotypische en functionele veranderingen van deze cellen tijdens antitumorimmuunresponsen.

Tumortransplantatie voor het beoordelen van de dynamiek van tumorinfiltrerende CD8 + T-cellen bij muizen

Het doel van dit manuscript is om het KitV558Δ/+ muismodel en technieken voor succesvolle dissectie en verwerking van muismonsters te beschrijven.

Moleculaire en immunologische technieken in een genetisch gemanipuleerd muismodel van gastro-intestinale stromale tumor

Dit protocol schetst de generatie van muizen van het menselijk immuunsysteem (HIS) voor immuno-oncologische studies. Instructies en overwegingen bij het gebruik van dit model voor het testen van menselijke immunotherapeutica op menselijke tumoren die in dit model zijn geïmplanteerd, worden gepresenteerd met de nadruk op het karakteriseren van de reactie van het menselijk immuunsysteem op de tumor.

Testen van kankerimmunotherapeutica in een gehumaniseerd muismodel met menselijke tumoren

Hier hebben we een methode om de werkzaamheid van drugs testen met chirurgische exemplaren van hersentumoren, aangeduid als "tumor explant methode". Met deze methode kunnen we werkzaamheid van het geneesmiddel te evalueren zonder het breken van de micro-omgeving van solide tumoren. Te valideren betrouwbaarheid van deze methode, beschrijven we representatieve gegevens met onze glioom monster behandeld met de huidige eerste lijn chemotherapeuticum, temozolomide.

Methode voor het nieuwe anti-kanker medicijn ontwikkeling met behulp van Tumor Explantaten van Chirurgische Specimens

Ontdek een muistumormodel voor chirurgische stress om postoperatieve immuunsuppressie en perioperatieve immuuntherapie te evalueren. Deze methode helpt onderzoekers metastasevorming te bestuderen.

Een muis Tumor Model of Surgical Stress aan Ontdek de Mechanismen van Postoperatieve Immuunsuppressie en evalueren Novel Perioperative Immuuntherapie (Video) | JoVE Journal

Een muis Tumor Model of Surgical Stress aan Ontdek de Mechanismen van Postoperatieve Immuunsuppressie en evalueren Novel Perioperative Immuuntherapie

Meer video's verkennen