Name: Endothelial Cell Tube Formation Assay voor de In Vitro Studie Angiogenese (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Leer de tube formatie-assay voor in vitro angiogenesestudies met endotheelcellen. Deze snelle, kwantificeerbare methode visualiseert bloedvatnetwerken en helpt genen en signaleringsroutes te identificeren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit onderzoek werd mede ondersteund door de Intramurale Research Program van de National Cancer Institute van de National Institutes of Health, en door het NCI verlenen UA5CA152907.

1 Verzameling van geconditioneerde media te testen voor Angiogene Potentiële <ol><li> Grow primaire of geïmmortaliseerde cellen worden getest angiogene of anti-angiogene potentieel in natieve of lage serum media en laat de geconditioneerde media. <ol><li> Ook moet geconditioneerde media direct of in porties verdeeld en bewaard bij -80 ° C gedurende enkele maanden. Gebruik nonconditioned natieve of laag serum media als een negatieve controle, en gebruik maken van niet voorziene compleet groeimedium (10% FBS of geschikte concentratie) als een positieve controle. Als alternatief om potentiële stimulatoren van angiogenese te testen, aan te vullen houtskool gestript media ontbreekt groeifactoren met bekende concentraties van bepaalde eiwitten van belang en te vergelijken met alleen groeifactor vrije media. </li></ol></li></ol> 2 Bereiding van endotheelcellen Vóór Assay <ol><li> Twee dagen vóór de assay, passage 3B-11 cellen in een nieuwe T-75 kolf. Passage aantal cellen is belangrijk. Deze test werkt het beste wanneer cellen tussen de tweede en zesde passages. De assay werkt niet goed wanneer endotheelcellen worden gebruikt voor de tweede of na de tiende passage. </li><li> Kweek cellen gedurende 24 uur in DMEM gesupplementeerd met 10% FBS, 2 mM L-glutamine, 1 mM natriumpyruvaat, 100 U / ml penicilline, en 100 ug / ml streptomycine. </li><li> Een dag voorafgaand aan de test, serum verhongeren 3B-11 cellen als volgt: <ol><li> Zuig media uit de 3B-11 cellen. </li><li> Voeg verminderde serum media DMEM gesupplementeerd met 0,2% FBS, 2 mM L-glutamine, 1 mM natrium pyruvaat, 100 U / ml penicilline, en 100 ug / ml streptomycine. </li><li> Kweek cellen nog eens 24 uur. </li></ol></li></ol> 3 Bereiding van reagentia Vóór Assay OPMERKING: BME concentraties zijn zeer variabel afhankelijk van veel. BME werkt niet goed als de concentratie lager is dan 10 mg / ml, dus de BME fabrikant moet vóór de aankoop om ervoor te zorgen worden gecontacteerdverwerving van een voldoende geconcentreerde veel. <ol><li> Ontdooi verminderde groeifactor BME in de koelkast. BME stolt wanneer warm, dus het moet koud bewaard voor gebruik. BME kunnen in de koelkast worden bewaard gedurende enkele weken, of in porties verdeeld en bij -80 ° C ingevroren. </li><li> Een verminderde groei factor BME heeft de voorkeur ten opzichte van traditionele BME. Het ontbreken van angiogene factoren in de BME zal het gemakkelijker volgens welke factoren uit het geconditioneerde media op vaatvorming observeren. </li><li> Dooi media te testen. </li></ol> 4 Bereiding van endotheelcellen onmiddellijk voor Assay <ol><li> Wash 3B-11 cellen in DPBS. <ol><li> Als visualisatie met fluorescentie of confocale microscopie gewenst, vóór het wassen 3B-11 cellen, voeg calceïne AM aan de endotheelcellen in media bij een uiteindelijke concentratie van 2 ug / ml. Plaats calceïne gelabelde cellen in het donker bij 37 ° C en 5% CO2 vóór de start van de analyse. Ontbinden voorraad calceïneAM in DMSO en wanneer calceïne wordt in media eindconcentratie van DMSO verdund mag niet meer dan 0,1%. Na 30-45 min wasbeurt calceïne AM uit de cellen (stap 4.1 hierboven) en ga verder met het experiment volgt. </li></ol></li><li> Trypsinize cellen door toevoeging van 1 ml trypsine-EDTA-T-75 kolf. </li><li> Na behandeling met trypsine is voltooid, neutraliseren trypsine door resuspenderen cellen tot een eindvolume van 10 ml in DMEM, 10% FBS, 2 mM L-glutamine, 1 mM natrium pyruvaat, 100 U / ml penicilline, en 100 ug / ml streptomycine. </li><li> Filter cellen door 100 um cel zeef om klonten te verwijderen. </li><li> Tellen cellen en resuspendeer cellen om een eindconcentratie van 7,5 x 10 6 cellen / ml in DMEM, 10% FBS, 2 mM L-glutamine, 1 mM natriumpyruvaat, 100 U / ml penicilline, en 100 ug / ml streptomycine. </li></ol> 5 Tube Formation Assay <ol><li> Plaats 24-well plaat en 1 ml tips in koelkast of op ijs gedurende 20-30 minuten vóór het laden van de plaat, zodat de BME niet prematurely stollen. </li><li> Pipetteer 250 ul minder groei factor BME in elk putje van een 24-well plaat. Voorkomen dat er luchtbellen door niet het indrukken van de pipet om de laatste stop tijdens doseren. Zorg ervoor dat er voldoende BME blijft in het midden van het goed wanneer de meniscus vormen; Als de matrix is ​​te dun, zullen de cellen slechts een monolaag vormen. </li><li> Incubeer plaat met 24 putjes bij 37 ° C en 5% CO2 gedurende 30 minuten te stollen BME. </li><li> Zodra BME is ingesteld, meng ongeveer 300 ul geconditioneerde media met 10 pl geresuspendeerd 3B-11 cellen (ongeveer 75.000 cellen). <ol><li> Het volume van geconditioneerde media en aantal cellen uitgeplaat afhankelijk endotheliale gebruikte celtype, en test de seriële verdunningen van het geconditioneerde medium activiteit tonen. Als vergelijking cellen gekweekt onder verschillende omstandigheden normaliseren geconditioneerde media volume het aantal cellen die werden gebruikt om het medium conditioneren. </li></ol></li><li> Tubes Will beginnen te vormen binnen 2-4 uur. Afhankelijk angiogene factor concentratie in het geconditioneerde medium, kan Extra buisvorming optreden tussen 3 en 12 uur en de timing van de test moet worden geoptimaliseerd. Bij het werken met primaire endotheelcellen plaats van geïmmortaliseerde cellen kunnen initiële vaatvorming vertraagd door verscheidene uren. <ol><li> Buizen vaak beginnen afnemen binnen 18 uur en endotheliale cellen apoptose ondergaan. </li></ol></li><li> Bij de piek vaatvorming zorgvuldig aspireren media van de put naar de buis te verstoren netwerk op BME. <ol><li> Was elk putje met 1 ml DPBS, dan aspireren. <ol><li> Voor directe visualisatie, voeg 1 ml vers DPBS aan elk putje en beeld het buizennetwerk behulp van een omgekeerde microscoop gekoppeld aan een digitale camera, of fluorescentie / confocale microscoop als de cellen werden gekleurd met calceïne AM zoals in 4.1.1. </li><li> Aan de buis netwerk voor later visualisatie te repareren, en voeg 4% paraformaldehyde aan elkegoed afgezogen en incubeer gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur geroerd. <ol><li> Verwijder paraformaldehyde, tweemaal spoelen met DPBS, voeg 1 ml vers DPBS aan elk putje. </li><li> Microscopisch beeld van vóór de fixatie zo weinig buizen tijdens deze procedure kan breken. </li></ol></li></ol></li></ol></li></ol> 6 Kwantificering van Tube Netwerk <ol><li> Kwantificeer de buis netwerk op verschillende manieren, afhankelijk van de voorkeur van de onderzoeker en verscheidene computer programma&#39;s vermogen de volgende parameters gemeten: aantal buizen; aantal lussen / mazen; aantal filialen / knooppunten; lengte van buizen. </li><li> Gebruik vertegenwoordiger computerprogramma als Afbeelding J met het Angiogenese Analyzer plug 16 voor de kwantificering van de buis netwerken. </li></ol>

<ol><li>Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+life%2C+disease+and+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in life, disease and medicine.</a> Nature. 438, 932-936 (1038).</li>
<li>Carmeliet, P., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+and+clinical+applications+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis.</a> Nature. 473, 298-307 (2011).</li>
<li>Potente, M., Gerhardt, H., Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+and+therapeutic+aspects+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Basic and therapeutic aspects of angiogenesis.</a> Cell. 146, 873-887 (2011).</li>
<li>Coultas, L., Chawengsaksophak, K., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells+and+VEGF+in+vascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells and VEGF in vascular development.</a> Nature. 438, 937-945 (2005).</li>
<li>Bouis, D., Kusumanto, Y., Meijer, C., Mulder, N. H., Hospers, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+pro-+and+anti-angiogenic+factors+as+targets+of+clinical+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+research+%3A+the+official+journal+of+the+Italian+Pharmacological+Society%22%5BJournal%5D)">A review on pro- and anti-angiogenic factors as targets of clinical intervention.</a> Pharmacological research : the official journal of the Italian Pharmacological Society. 53, 89-103 (2006).</li>
<li>Ausprunk, D. H., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration+and+proliferation+of+endothelial+cells+in+preformed+and+newly+formed+blood+vessels+during+tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+research%22%5BJournal%5D)">Migration and proliferation of endothelial cells in preformed and newly formed blood vessels during tumor angiogenesis.</a> Microvascular research. 14, 53-65 (1977).</li>
<li>Chung, A. S., Lee, J., Ferrara, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+tumour+vasculature%3A+insights+from+physiological+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Targeting the tumour vasculature: insights from physiological angiogenesis.</a> Nature reviews. Cancer. 10, 505-514 (2010).</li>
<li>Chung, A. S., Ferrara, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+and+pathological+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+cell+and+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Developmental and pathological angiogenesis.</a> Annual review of cell and developmental biology. 27, 563-584 (2011).</li>
<li>Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+journal+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Tumor angiogenesis.</a> The New England journal of medicine. 358, 2039-2049 (2008).</li>
<li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+angiogenesis%3A+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+journal+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Tumor angiogenesis: therapeutic implications.</a> The New England journal of medicine. 285, 1182-1186 (1056).</li>
<li>Kubota, Y., Kleinman, H. K., Martin, G. R., Lawley, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+laminin+and+basement+membrane+in+the+morphological+differentiation+of+human+endothelial+cells+into+capillary-like+structures%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Role of laminin and basement membrane in the morphological differentiation of human endothelial cells into capillary-like structures.</a> The Journal of cell biology. 107, 1589-1598 (1988).</li>
<li>Arnaoutova, I., George, J., Kleinman, H. K., Benton, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endothelial+cell+tube+formation+assay+on+basement+membrane+turns+20%3A+state+of+the+science+and+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">The endothelial cell tube formation assay on basement membrane turns 20: state of the science and the art.</a> Angiogenesis. 12, 267-274 (2009).</li>
<li>Arnaoutova, I., Kleinman, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+angiogenesis%3A+endothelial+cell+tube+formation+on+gelled+basement+membrane+extract%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+protocols%22%5BJournal%5D)">In vitro angiogenesis: endothelial cell tube formation on gelled basement membrane extract.</a> Nature protocols. 5, 628-635 (2010).</li>
<li>Walter-Yohrling, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+endothelial+cell+lines+as+models+of+tumor+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+cancer+research+%3A+an+official+journal+of+the+American+Association+for+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Murine endothelial cell lines as models of tumor endothelial cells.</a> Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research. 10, 2179-2189 (2004).</li>
<li>Connell, K. A., Edidin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+lymphoid+endothelial+cell+line+immortalized+by+simian+virus+40+binds+lymphocytes+and+retains+functional+characteristics+of+normal+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">A mouse lymphoid endothelial cell line immortalized by simian virus 40 binds lymphocytes and retains functional characteristics of normal endothelial cells.</a> Journal of immunology. , Baltimore, Md. 144-521 (1950).</li>
<li>Carpentier, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ImageJ+contribution%3A+Angiogenesis+Analyzer%5BTitle%5D)+AND+%22ImageJ+News%22%5BJournal%5D)">ImageJ contribution: Angiogenesis Analyzer.</a> ImageJ News. , (2012).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Angiogenese is betrokken bij zowel de fysiologische en pathologische processen. Bestuderen mechanismen betrokken bij angiogenese vereist het gebruik van testen die de belangrijkste stappen in angiogenese recapituleren. De endotheelcel vaatvorming assay biedt verscheidene voordelen boven andere assays. Het is gemakkelijk op te zetten, is relatief goedkoop, produceert buisjes binnen enkele uren, en is meetbaar. Verder kan in 24-of 96-well platen voltooid en kan dus worden gebruikt voor high throughput screening om factore...

Angiogenese, de ontwikkeling van nieuwe bloedvaten uit reeds bestaande schepen, is essentieel voor een verscheidenheid van werkwijzen waaronder orgaangroei, embryonale ontwikkeling en wondgenezing 1-3. Nieuw ontwikkelde bloedvaten, bekleed met endotheelcellen, toevoer van zuurstof en voedingsstoffen naar weefsels bevorderen immuunbewaking door hematopoietische cellen en afvoer van afvalproducten 2,4. Angiogenese is van groot belang tijdens de embryonale en foetale ontwikkeling. Dit proces blijft slapende in de volwassen behalve in tijden van wondheling, skeletopbouw, zwangerschap of tijdens de menstruele cyclus 1-3. In de afgelopen twee decennia de belangrijkste moleculaire mechanismen die angiogenese reguleren zijn begonnen te ontstaan. Angiogenese is een strak gereguleerde evenement, in evenwicht gehouden door pro-en anti-angiogene signalen waaronder integrines, chemokines, angiopoietinen, zuurstof sensing agenten, junctionele moleculen en endogene remmers 5. Zodra proangiogenic signalen zoals basis fibroblast groeifactor (bFGF), vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF), van bloedplaatjes afgeleide groeifactor (PDGF), en epidermale groeifactor (EGF) activeert endotheliale celreceptoren de endotheelcellen proteasen de basale membraan degraderen. De endotheelcellen vervolgens prolifereren en migreren, die kiemen met een snelheid van enkele millimeters per dag 6,7. Angiogenese is geassocieerd met verschillende pathologische aandoeningen zoals kanker, psoriasis, diabetische retinopathie, artritis, astma, auto-immuunziekten, infectieziekten en atherosclerose 8-10. Vanwege het belang van angiogenese in verschillende ziekten, het begrijpen van de genen en pathways die regelen dit proces is cruciaal voor de ontwikkeling van een beter therapeutica. De buisvorming assay is een snelle en kwantitatieve werkwijze voor het bepalen van genen of routes die betrokken zijn bij angiogenese. Voor het eerst beschreven in 1988,de uitgangspunten van deze test zijn dat endotheelcellen behouden de mogelijkheid om te delen en snel migreren naar aanleiding van angiogene signalen 11-13. Verder worden endotheelcellen geïnduceerd te differentiëren en vormen buisvormige structuren indien gekweekt op een matrix van basaal membraan extract (BME). Deze buizen bevatten een lumen omringd door endotheelcellen elkaar verbonden door junctional complexen. Tube vorming gebeurt snel met de meeste buizen vormen in deze test binnen 2-6 uur, afhankelijk van de hoeveelheid en de aard van de angiogene stimuli. Verschillende soorten endotheelcellen kan voor deze test zowel primaire cellen geïmmortaliseerde cellijnen 14,15. De cellijn die voor dit artikel was mouse 3B-11, maar dezelfde methode kan worden toegepast met andere endotheliale cellijnen zoals SVEC4-10 (muis) of primaire endotheelcellen zoals HUVEC (humane) cellen. Afhankelijk van de cellijn wordt gebruikt en of de endotheliale cells worden omgezet of niet-getransformeerde, zal optimalisatie moeten worden uitgevoerd om de ideale tijd nodig voor een goede vaatvorming identificeren.

<table><tbody><tr><td>Costar 24-well tissue culture-treated plate</td><td>Corning</td><td>3524</td><td></td></tr><tr><td>BD Matrigel basement membrane matrix, growth factor reduced</td><td>BD Biosciences</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>Gibco 0.05% trypsin-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>Gibco L-glutamine 200 mM (100x)</td><td>Life Technologies</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Gibco pen strep</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Gibco DMEM (1x)</td><td>Life Technologies</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>Gibco DPBS (1x)</td><td>Life Technologies</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Atlas Biologicals</td><td>F-0500-A</td><td></td></tr><tr><td>Calcein AM</td><td>Life Technologies</td><td>C3100MP</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>ATCC</td><td>4-X</td><td></td></tr></tbody></table>

endothelial cell tube formation assay voor de<em&gt; in vitro</em&gt; studie angiogenese

Endothelial Cell Tube Formation Assay for the In Vitro Study of Angiogenesis

Angiogenese is een belangrijke werkwijze voor normale ontwikkeling weefsel en wondgenezing, maar wordt ook geassocieerd met een verscheidenheid aan pathologische aandoeningen. Met dit protocol kan angiogenese worden gemeten in vitro in een snelle, kwantificeerbare wijze. Primaire of geïmmortaliseerde endotheel cellen gemengd met geconditioneerd medium en uitgeplaat op basale membraan matrix. De endotheliale cellen vormen capillaire structuren in reactie op angiogene signalen in geconditioneerd medium. De buis formatie optreedt snel met endotheelcellen beginnen zich aan te sluiten binnen 1 uur en-lumen met buisjes beginnen te verschijnen binnen 2 uur. Buizen kunnen worden gevisualiseerd met behulp van een fase-contrast omgekeerde microscoop, of de cellen worden behandeld met calceïne AM vóór de assay en pijpen gevisualiseerd door fluorescentie of confocale microscopie. Het aantal filialen / nodes, lussen / meshes of het aantal of lengte van buizen gevormde gemakkelijk worden gekwantificeerd als maat in vitro angiogenese. Samenvattend, kan deze test gebruikt worden om genen en routes die betrokken zijn bij de bevordering of remming van angiogenese in een snelle, reproduceerbare en kwantitatieve wijze identificeren.

Mouse 3B-11 endotheelcellen werden gezaaid op gestolde verlaagde growth factor BME - in deze assay, werd het product Matrigel bouw - en tijd gevolgd. Zoals getoond in figuur 1, angiogene factoren afgescheiden door een muis keratinocyten of fibroblasten kunnen induceren buisvorming tijd. Endotheelcellen migreren en beginnen om kleine takken binnen 1-2 uur in de platen te vormen. Maximale vorming buis werd bereikt met 4-6 uur met geconditioneerde media eerder verkregen uit keratinocyten. Door 24 uur, somm...

De buisvorming assay is een snelle, meetbare werkwijze voor het meten in vitro angiogenese. Endotheelcellen worden gecombineerd met geconditioneerd medium en uitgeplaat op basale membraan extract. Tube vorming gebeurt binnen enkele uren en nieuw gevormde buisjes gemakkelijk gekwantificeerd.

Endothelial Cell Tube Formation Assay voor de<em&gt; In Vitro</em&gt; Studie Angiogenese

Angiogenesis is a vital process for normal tissue development and wound healing, but is also associated with a variety of pathological conditions. Using ...

Het algemene doel van deze procedure is het bepalen van genen of pathways die betrokken zijn bij angiogenese door middel van een snelle en kwantitatieve in vitro methode. Dit wordt bereikt door primair of geïmortaliseerde endotheliale cellen de dag vóór de assay serumvrij te laten groeien. De tweede stap bestaat uit het incuberen van de endotheliale cellen met calcine gedurende 30 minuten, gevolgd door het wassen van de cellen met PBS.Vervolgens worden de endotheelcellen getrypsiniseerd, gefilterd om klonters te verwijderen en geteld. De laatste stap is het combineren van de endotheelcellen met geconditioneerd medium dat mogelijke angiogene factoren bevat en het uitpipetteren hiervan over een gestold basaalmembraanextract. Ten slotte wordt licht- of fluorescentiemicroscopie gebruikt om de buisnetwerken te visualiseren, die vervolgens kunnen worden gekwantificeerd met gespecialiseerde computerprogramma's.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van andere methoden voor het analyseren van angiogenese is dat deze eenvoudig op te zetten is, relatief goedkoop is, binnen enkele uren tubuli produceert en kwantificeerbaar is bij het demonstreren van deze techniek. Is Erica

endothelial-cell-tube-formation-assay-for-vitro-study

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Deze video toont het protocol van een in vitro angiogenese test die recapituleert verschillende stadia van angiogenese. Time-lapse beelden van kiemen, lumen vorming, vertakking en anastomose - belangrijkste kenmerken van angiogenese - worden weergegeven.

Geoptimaliseerde fibrinegel Bead Assay voor de Studie van Angiogenese

Een buis formatie test wordt gebruikt om de vasculaire activiteit van tumorcellen te evalueren.

Een Matrigel-Based Tube Formation Assay aan de vasculogene activiteit van tumorcellen beoordelen

De neonatale muizen netvlies biedt een goed gekarakteriseerd fysiologisch model van angiogenese, die onderzoeken van de rol van de verschillende genen of medicijnen die angiogenese moduleren in een...

Hele Mount immunofluorescentiekleuring van de Neonatale Mouse Retina naar Angiogenese Onderzoek<em&gt; In vivo</em

Dit manuscript beschrijft een buisvormingstest om de effecten van een bepaalde verbinding of omstandigheid op angiogenesis te kwantificeren door gebruik te maken van de vorming van endotheelcellen in een gecontroleerde omgeving.

Strategische endotheelcellen Tube Formation Assay: Het vergelijken van extracellulaire matrix en Growth Factor Verlaagde extracellulaire matrix

We presenteren een protocol voor humane endotheliale pericyte-interacties in muizen te bestuderen onder toepassing van een variatie van de matrix gel plug angiogenese assay.

In vivo studie van humane endotheliale-pericyte Interaction Met behulp van de Matrix Gel Plug Assay in Mouse

Hier evalueren we de effecten van het water extract van Ruta graveolens op de vorming van een vat netwerk door gebruik te maken van een buis vormings test op een opgestijfde kelder matrix.

HUVEC-buis-formatie test om de impact van natuurlijke producten op angiogenese te evalueren

Het doel van deze methode is om fibroblast-afgeleide 3D-matrices te verkrijgen als een natuurlijke steiger voor volgende cellulaire assays. Fibroblasten worden in een voorbehandelde kweek plaat geseeid en gestimuleerd met ascorbinezuur voor matrix generatie. Matrices zijn decellularized en geblokkeerd voor de kweek van relevante cellen (bijv. endotheel cellen).

Fibroblast-afgeleid 3D-matrix systeem dat van toepassing is op endotheliale buis vorming assay

Hier gepresenteerd is een protocol voor whole-mount in situ RNA hybridisatie analyse in zebravis en buisvorming test in patiënt-afgeleide geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide endotheelcellen om de rol van endoglin in vasculaire vorming te bestuderen.

Whole-Mount In Situ Hybridisatie in Zebrafish Embryo's en Tube Formation Assay in iPSC-ECs om de rol van Endoglin in vasculaire ontwikkeling te bestuderen

Deze test maakt gebruik van embryonale stamcellen van muizen gedifferentieerd in embryoïde lichamen gekweekt in 3D-collageengel om de biologische processen te analyseren die kiemende angiogenese in vitro beheersen. De techniek kan worden toegepast voor het testen van medicijnen, het modelleren van ziekten en voor het bestuderen van specifieke genen in de context van deleties die embryonaal dodelijk zijn.

In vitro Driedimensionale kiemtest van angiogenese met behulp van embryonale stamcellen van muizen voor vaatziektemodellering en drugstests

Het huidige protocol maakt het herstel mogelijk van buisachtige structuren die zijn gevormd in de klassieke in vitro angiogenese-buisvormingstest waarbij cellen, zoals trofoblastcellen, zich organiseren in capillaire structuren over een laag extracellulaire basaalmembraanmatrix. De teruggevonden structuren worden gebruikt voor RNA- en eiwitisolatie voor verschillende biochemische analyses.

Trofoblastcelherstel van angiogenese-buisvormingstest voor analyse van differentiatiemarkerexpressie

Leer de tube formatie-assay voor in vitro angiogenesestudies met endotheelcellen. Deze snelle, kwantificeerbare methode visualiseert bloedvatnetwerken en helpt genen en signaleringsroutes te identificeren.

Endothelial Cell Tube Formation Assay voor de

Meer video's verkennen