Name: Isolatie van kanker stamcellen uit menselijke stalen van prostaatkanker (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-14T18:32:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Leer de isolatie van prostaatkanker stamcellen uit menselijk weefsel met FACS en fluorescentie-antilichamen. Deze methode ondersteunt moleculaire karakterisering en xenotransplantatie-onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de Stichting Hariri Familie en de TJ Martell Foundation.

1. Oogsten en verwerken van menselijke prostaatkankerweefsel van Chirurgische Specimens <ol><li> Bereid twee 50 ml polystyreen conische buizen met 15 ml van Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 kweekmedium aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS) en 1% penicilline / streptomycine. </li><li> Pathologie onderhoudspersoneel oogsten primaire en metastatische prostaatkanker monsters van prostatectomie en palliatieve chirurgie exemplaren, respectievelijk, op grond van een Institutional Review Board goedgekeurde protocol. Metastatische monsters kunnen worden verkregen uit lymfklierdissecties bij de primaire operatie de wervels tijdens palliatieve chirurgische procedures, zoals ruggenmerg decompressie en de longen tijdens diagnostische verwijderen van enige metastatische laesies, onder anderen. <ol><li> Oogst overtollige massa weefsel niet noodzakelijk voor klinische diagnostiek in de eerste 50 ml polystyreen conische buis uit stap 1.1 en onmiddellijk bewaren bij 4 ° C. De harvested weefsel moet ten minste een 4-5 cm 2 in het gebied en 1-2 cm dikte te meten. </li></ol></li><li> Laboratoriumpersoneel verwerken bulk weefsel verkregen van de pathologie dienst ter voorbereiding op histologisch onderzoek en het genereren van cel suspensies. <ol><li> Verwerking van bulk weefsels mag niet meer dan 24 uur van chirurgische resectie om maximale levensvatbaarheid van de cellen te garanderen. </li><li> Werken in een bioveiligheid kast met een steriel scalpel en pincet, neem 2-4 mm dik horizontale coupes van macroscopische tumoren. Onmiddellijk slaan de secties in de tweede 50 ml polystyreen conische buis vanaf stap 1.1. </li><li> Bij macroscopische knobbeltjes niet worden gevisualiseerd van prostatectomie monsters, het verzamelen van willekeurige 2-4 mm dik horizontale coupes uit de achterste lobben en overgangszone. </li></ol></li><li> Scheid een gedeelte van de chirurgische weefsel met een steriele scalpel en pincet en repareren in 10% formaline voorafgaand aan generatie van celsuspensies. Archief analyseren dit materiaal histologisch de aanwezigheid van prostaatkanker weefsel bevestigen. </li></ol> 2. Generatie Cell Schorsingen van Tissue Secties <ol><li> Werken in een steriele bioveiligheid kast, breng een weefselsectie van een 60 x 15 mm kweekschaal met 1 ml steriele 1 x met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS). <ol><li> Mechanisch vermaal het monster met behulp van een steriel scalpel en pincet. </li><li> Geen enzymatische ontsluitingen zijn in dit protocol. </li></ol></li><li> Spoel de suspensie 1 ml in een steriele 50 ml conische buis. <ol><li> Voeg 1 ml om de cultuur schotel en herhaal de fijnwrijving stap totdat de sectie weefsel volledig wordt gescheiden, meestal 3-4x. </li><li> Herhaal deze procedure serieel totdat alle coupes zijn losgekoppeld. </li></ol></li><li> Resuspendeer de inhoud van 50 ml polystyreen conische buis met een 5 ml serologische piPette en vortex op maximale snelheid (ongeveer 3200 rpm) gedurende 1 minuut. </li><li> Filter de resulterende suspensie door een 35-um cel zeef en verzamelen in een tweede steriele 50 ml polystyreen conische buis. </li><li> Genereer een pellet door centrifugeren bij 450 g gedurende 10 minuten. </li><li> Verwijder het supernatant, resuspendeer de pellet met 5 ml rode bloedcel lysisbuffer en incubeer de oplossing gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur. Verwijder de rode bloedcel lysisbuffer door centrifugatie gedurende 5 min bij 450 x g bij kamertemperatuur. </li><li> Verwijder het supernatant, resuspendeer de pellet in 1 x PBS aangevuld met 5% FBS en kwantificeren van het aantal levensvatbare (trypan blauw-negatieve) cellen met een hemocytometer of geautomatiseerde celteller. Genereer een 1x10 6 cellen / ml suspensie en op te slaan op ijs niet langer dan 1 uur. <ol><li> De levensvatbaarheid en het rendement van de cellen kan sterk tussen tumorspecimens variëren. In de prostatectomie instelling, kan levensvatbaarheid variëren tussen 45-70%, en five 2-4 mm kan worden verwacht dikke horizontale coupes van een macroscopische tumor knobbeltje ongeveer 3x10 6 levensvatbare cellen opleveren. </li></ol></li></ol> 3. Antilichaam kleuring van cellen voor FACS <ol><li> Label vijf 15 ml conische buizen van polystyreen zoals hieronder getoond. Gebruik CD45 en CD31-antigeen etikettering om hematopoietische en endotheelcellen elementen respectievelijk uitsluiten. <ol><li> Onbevlekt </li><li> IgG2a κ-PE + IgG 1 κ-FITC </li><li> HLAI-PE + IgG 1 κ-FITC </li><li> IgG2a κ-PE + CD31-FITC + CD45-FITC </li><li> HLAI-PE + CD45-FITC + CD31-FITC </li></ol></li><li> Verdeel de gekwantificeerde celsuspensie uit de vorige paragraaf (stap 2.7) in de vijf buizen in stap 3.1. Voeg de antilichamen in een verdunning van 1:250, en incubeer de celsuspensies op ijs gedurende 30 minuten. </li><li> Centrifugeer de cellen bij 450 g gedurende 3 min bij 4 ° C en gooi de supernatanten. </li&gt; <li> Was de cellen door resuspenderen elk pellet 1x met steriel PBS gesupplementeerd met 10% FBS, gevolgd door centrifugatie bij 450 xg gedurende 3 min bij 4 ° C. </li><li> Resuspendeer de cellen in een 1 ml oplossing van 1x PBS met 4 &#39;,6-diamidino-2-fenylindool (DAPI) bij een concentratie van 10 ug / ml. </li><li> Filter de uiteindelijke oplossing door 35 micrometer zeef caps in 12 mm x 75 mm polystyreen buizen. </li></ol> 4. Isolatie van Prostaat CSC door FACS <ol><li> Gebruik een doorstroomcytometer voor celsortering. </li><li> Temperatuurregelknoppen compensatie cuvetten van buizen # 1, # 2, # 3 en # 4. </li><li> Maak poorten die puin en clusters van cellen uit te sluiten met behulp van forward-en side-scatter parameters. </li><li> Bepaal de FITC en PE-poorten met behulp van de schorsingen van buis # 3 en # 4 buis, respectievelijk. </li><li> Gate levensvatbare (DAPI-negatief) cellen met behulp van de Pacific Blue-A-kanaal. </li><li> Met behulp van buis # 5 discard CD31-positieve en CD45-positieve cellen enverzamelen zowel HLAI-negatieve en HLAI-positieve populatie in steriele 15 ml polystyreen conische buizen met 2 ml RPMI aangevuld met 10% FBS. </li><li> Centrifugeer de gesorteerde celsuspensies bij 450 xg gedurende 5 minuten en vervolgens resuspendeer de pellets in 200-500 ul RPMI gesupplementeerd met 10% FBS. </li><li> Kwantificeren levensvatbare (trypaanblauw-negatief) cellen met behulp van een hemocytometer of geautomatiseerde celgetalmeter. </li></ol>

<ol><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cancer%3A+the+next+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li>
<li>Magee, J. A., Piskounova, E., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+impact%2C+heterogeneity%2C+and+uncertainty%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: impact, heterogeneity, and uncertainty.</a> Cancer Cell. 21, 283-296 (2012).</li>
<li>Nguyen, L. V., Vanner, R., Dirks, P., Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+an+evolving+concept%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: an evolving concept.</a> Nat. Rev. Cancer. 12, 133-143 (2012).</li>
<li>Valent, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cell+definitions+and+terminology%3A+the+devil+is+in+the+details%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cell definitions and terminology: the devil is in the details.</a> Nat. Rev. Cancer. 12, 767-775 (2012).</li>
<li>Visvader, J. E., Lindeman, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+current+status+and+evolving+complexities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: current status and evolving complexities.</a> Cell Stem Cell. 10, 717-728 (2012).</li>
<li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367, 645-648 (1994).</li>
<li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 3983-3988 (2003).</li>
<li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432, 396-401 (2004).</li>
<li>Collins, A. T., Berry, P. A., Hyde, C., Stower, M. J., Maitland, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+prostate+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic prostate cancer stem cells.</a> Cancer Res. 65, 10946-10951 (2005).</li>
<li>Domingo-Domenech, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+acquired+docetaxel+resistance+in+prostate+cancer+through+depletion+of+notch-+and+hedgehog-dependent+tumor-initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Suppression of acquired docetaxel resistance in prostate cancer through depletion of notch- and hedgehog-dependent tumor-initiating cells.</a> Cancer Cell. 22, 373-388 (2012).</li>
<li>Patrawala, L., Calhoun-Davis, T., Schneider-Broussard, R., Tang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hierarchical+organization+of+prostate+cancer+cells+in+xenograft+tumors%3A+the+CD44%2Balpha2beta1%2B+cell+population+is+enriched+in+tumor-initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Hierarchical organization of prostate cancer cells in xenograft tumors: the CD44+alpha2beta1+ cell population is enriched in tumor-initiating cells.</a> Cancer Res. 67, 6796-6805 (2007).</li>
<li>Qin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+PSA%28-%2Flo%29+prostate+cancer+cell+population+harbors+self-renewing+long-term+tumor-propagating+cells+that+resist+castration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">The PSA(-/lo) prostate cancer cell population harbors self-renewing long-term tumor-propagating cells that resist castration.</a> Cell Stem Cell. 10, 556-569 (2012).</li>
<li>Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2013%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J.+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2013.</a> CA Cancer J. Clin. 63, 11-30 (2013).</li>
<li>Patrawala, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+purified+CD44%2B+prostate+cancer+cells+from+xenograft+human+tumors+are+enriched+in+tumorigenic+and+metastatic+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Highly purified CD44+ prostate cancer cells from xenograft human tumors are enriched in tumorigenic and metastatic progenitor cells.</a> Oncogene. 25, 1696-1708 (2006).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Dit protocol beschrijft de isolatie van CSC uit verse menselijke prostaatkankercellen weefsels. Een aantal belangrijke overwegingen invloed op de succesvolle afloop van dit protocol. Het herstel van de hoge aantallen levensvatbare prostaatkankercellen is afhankelijk van een zorgvuldige bruto evaluatie van chirurgische monsters. In onze ervaring, is de succesvolle isolatie van tumorigenic prostaatcellen best gegarandeerd wanneer macroscopische tumoren worden waargenomen en verwerkt 10.</...

Intratumorale heterogeniteit wordt beschouwd als een merker voor kanker 1 zijn. Inderdaad hebben verscheidene mechanismen van intratumorale heterogeniteit beschreven, waaronder genetische mutatie en interacties met de micro. Bovendien kunnen sommige kankers cellulair hiërarchie bevatten met een subpopulatie van kanker stamcellen (CSC) de eigenschappen van tumor-initiërende capaciteit en zelfvernieuwing seriële transplantatie assays 2-5 vertoont. Aanvankelijk beschreven in hematologische 6, 7 borst en hersenen 8 maligniteiten zijn CSC ook onderzocht bij prostaatkanker 9-12 en andere tumortypes 2-5. CSC wordt algemeen beschouwd als een cellulaire fractie bij een heterogene populatie 2-5. Daarom is de functionele en moleculaire karakterisering van CSC is afhankelijk van hun verrijking van bulk populaties. Dienovereenkomstig, tijdens de laatste twee decennia verschillende voldaanhodologies CSC verrijking zijn ontwikkeld die gewoonlijk uit de scheiding van gemerkte populaties door flowcytometrie. Daarnaast is een belangrijke overweging in de studie van CSC is dat de hiërarchische organisatie van weefsels kan worden verstoord door experimentele manipulaties zoals seriële passages in kweek of immunodeficiënte muizen. Hierdoor heeft de directe isolatie van CSC uit humane weefsels ontwikkeld tot een belangrijke methode in het veld CSC. Prostaatkanker is een belangrijke oorzaak van kanker morbiditeit en sterfte in de Verenigde Staten en over de hele wereld 13. Daarom is de isolatie en biologische karakterisering van de prostaat CSC is van significant belang. Prostaat CSC zijn eerder verrijkt uit cellijnen, patiënt afgeleid xenotransplantaten, en de patiënt afgeleid lage passage suspensiekweken 9,10,12,14. We hebben onlangs meldde de isolatie van prostaat CSC direct uit menselijke chirurgische samples op grond van hun HLAI-negatieve celoppervlak fenotype 10. Hier hebben we detail de voor het isoleren van deze cellen procedures. Prostaattumoren worden geoogst van chirurgische specimens en maakte in cel suspensies. De cellen worden vervolgens gekleurd met antilichamen tegen HLAI en stromale en levensvatbaarheid markers en CSC worden geïsoleerd door fluorescentie geactiveerde celsortering (FACS). Geïsoleerde CSC kan vervolgens worden gebruikt voor assays die levensvatbare cellen.

```html
<table><tbody><tr><td>RPMI</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>Fetaal bovien serum</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin Streptomycin</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning Cell Gro</td><td>21-031-CM</td><td></td></tr><tr><td>60 mm, 15 mm Celkweker</td><td>Corning</td><td>3295</td><td></td></tr><tr><td>35 &micro;m Celzeef</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>50 ml conische buis</td><td>Crystalgen</td><td>23-2263</td><td></td></tr><tr><td>15 ml conische buis</td><td>Crystalgen</td><td>23-2265</td><td></td></tr><tr><td>Rode bloedcel lyseringsbuffer</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>HLA klasse I (W6/32) PE antilichaam</td><td>Abcam</td><td>ab43545</td><td></td></tr><tr><td>CD31 FITC antilichaam</td><td>eBioscience</td><td>11-0319-42</td><td></td></tr><tr><td>CD45 FITC antilichaam</td><td>Abcam</td><td>ab27287</td><td></td></tr><tr><td>IgG2a&kappa; PE antilichaam</td><td>BD Pharminogen</td><td>555574</td><td></td></tr><tr><td>IgG1&kappa; FITC antilichaam</td><td>BD Pharminogen</td><td>551954</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>d3571</td><td></td></tr><tr><td>12 mm x 75 mm Polystyreen buizen met celzeef dop</td><td>BD Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Vortex Mixer</td><td>Crystalgen</td><td>CG-BV1000</td><td></td></tr><tr><td>10% Neutraal Buffer Formaline</td><td>Fisher</td><td>RBBP-0480</td><td></td></tr></tbody></table>
```

isolatie van kanker stamcellen uit menselijke stalen van prostaatkanker

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

De kanker stamcellen (CSC) model is aanzienlijk herzien in de afgelopen twee decennia. Gedurende deze tijd CSC geïdentificeerd en rechtstreeks geïsoleerd uit humane weefsels en serieel gepropageerd in immunodeficiënte muizen, meestal via antilichaamidentificatie subpopulaties van cellen en fractionering door flowcytometrie. Echter, de unieke klinische kenmerken van prostaatkanker aanzienlijk de studie van de prostaat CSC uit verse stalen van menselijke tumoren beperkt. We hebben onlangs gemeld de isolatie van prostate CSC rechtstreeks uit humane weefsels door hun HLA klasse I (HLAI)-negatief fenotype. Prostaatkankercellen worden geoogst van chirurgische specimens en mechanisch gescheiden. Een celsuspensie gegenereerd en gelabeld met fluorescent geconjugeerd HLAI en stromale antilichamen. Subpopulaties van HLAI-negatieve cellen eindelijk geïsoleerd met behulp van een flowcytometer. De belangrijkste beperking van dit protocol is het vaak microscopische en multifocale aard vanprimaire kanker in prostatectomie exemplaren. Toch geïsoleerde levende prostaat CSC zijn geschikt voor de moleculaire karakterisatie en functionele validatie door transplantatie in immunodeficiënte muizen.

<img alt="Figuur 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51332/51332fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51332/51332fig1.jpg" /> Figuur 1. Human prostaatkanker tumor oogsten en flowcytometrie grafiek, die illustreert specifieke populaties uit een menselijke prostaatkanker. (A) Tumor knobbeltjes worden geoogst om een celsuspensie te genereren. Tumor inhoud van het verwerkte monster wordt bevestigd middels conventionele hematoxyline en eosine kleur...

De isolatie van kankerstamcellen (KSC) rechtstreeks van menselijke weefsels is voorwaarde voor hun biologische karakterisering. Dit manuscript beschrijft een methode voor de isolatie van prostaat CSC van menselijk weefsel, terwijl ook het verstrekken van tips over het oplossen van moeilijke stappen.

Isolatie van kanker stamcellen uit menselijke stalen van prostaatkanker

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Het algemene doel van deze procedure is om de isolatie van prostaatkankerstamcellen uit menselijk weefsel via FACS te beschrijven. Dit wordt bereikt door eerst prostaatkankerweefsel te verwerken dat is gewonnen uit chirurgische preparaten. In de tweede stap wordt er een cel-suspensie gegenereerd uit de weefselcoupes en worden de cellen gelabeld met fluorescerende antilichamen.In de laatste stap worden de prostaatkankerstamcellen gesorteerd op basis van kenmerken. Uiteindelijk kunnen de moleculaire en functionele eigenschappen van de geïsoleerde cellen worden gekarakteriseerd door middel van xenotransplantatie en genexpressieprofielanalyse. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het vakgebied van prostaatkanker door de moleculaire en functionele karakterisering van kankerstamcellen uit menselijke monsters te faciliteren.De procedure wordt gedemonstreerd door Samuel Vidal, een MD PhD-student, Aiden Quinn, een masterstudent, en jania. Ons onderzoek A vanuit het laboratorium. Begin met het oogsten van overtollig bulkweefsel uit de kankerstalen die niet nodig zijn voor klinische diagnostiek in een conische buis van 50 milliliter met 15 milliliter medium. Bewa

isolation-of-cancer-stem-cells-from-human-prostate-cancer-samples

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Kankerstamcellen (CSCs) zijn geïdentificeerd in een aantal maligniteiten. In dit protocol beschrijven we een flowcytometrische methode waarbij aldehyde dehydrogenase activiteit en CD44 en CD24 expressie CSCs isoleren van menselijke pancreas adenocarcinoom xenotransplantaten. Deze levensvatbare cellen kunnen vervolgens worden gebruikt in functionele en analytische studies.

Isolatie van stamcellen uit menselijke pancreaskanker xenotransplantaten

In dit rapport beschrijven we een protocol voor het isoleren van zeer zuivere populaties van leucocyten dat tumoren te infiltreren. Dit protocol is een bewerking van de Miltenyi Biotech-protocol om opbrengst en zuiverheid voor het isoleren van cellen van complexe tumorweefsel te verbeteren.

Isolatie van immuuncellen van primaire tumoren

This article describes the technique for isolating pancreatic cancer stem cells (CSCs) from human pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) tissue. These CSCs are used to study the functional effects of drug treatment on the in vitro self-renewal capacity of CSCs for developing more efficient cancer treatments.

PDAC Stem Cell Isolation: A Method to Isolate Cancer Stem Cells from Pancreatic Tumors

Alvleesklierstamcellen (CSC's) kunnen worden uitgebreid in vitro met behulp van de verankeringsonafhankelijke sfeercultuurtechniek, wat een krachtig hulpmiddel is om CSC-biologie te bestuderen en kan dienen als de eerste stap om nieuwe CSC-gerichte therapieën te ontwikkelen. Hier wordt de methodologie voor het uitbreiden, analyseren en targeten van pancreas-CSC's geboden.

Studeren alvleesklier- Stamcel Kenmerken voor het ontwikkelen van nieuwe behandelingsstrategieën

Dit manuscript beschrijft een methode die wordt gebruikt om xenografts (PDX's) van prostaatkankerpatiënten te genereren vanuit circulerende tumorcellen (CTC's). Het genereren van PDX-modellen uit CTC's biedt een alternatief experimenteel model om prostaatkanker te bestuderen; de meest vaak gediagnosticeerde tumor en een frequente doodsoorzaak door kanker bij mannen.

Generatie van prostaatkanker Patiënt Afgeleid xenotransplantaatmodellen van circulerende tumorcellen

De aanwezigheid van kanker stamcellen (CSC) in bot sarcomen Onlangs is gekoppeld aan de pathogenese. In dit artikel presenteren we de isolatie van CSCs van primaire celculturen verkregen uit humane biopten van conventionele osteosarcoom (OS) met de mogelijkheid van CSCs groeien onder hechtende omstandigheden.

Oprichting van Cancer Stem Cell Cultures van Human Conventionele Osteosarcoom

Het begrijpen van de rol van kanker-stamcel-achtige cellen bij tumorrecidieven en resistentie tegen therapieën is in het afgelopen decennium een onderwerp van groot belang geworden. Dit artikel beschrijft de isolatie en karakterisering van de subpopulatie van kanker-stamcel-achtige cellen uit hoofd-hals-plaveiselcelcarcinoom cellijnen (HNSCC).

Isolatie en karakterisering van een hoofd en de nek plaveiselcelcarcinoom subpopulatie hebben van Stem Cell Kenmerken

Het doel van deze methodologie is om kankercellen (CSC) te identificeren in kankercellijnen en primaire menselijke tumormonsters met het bolvormende protocol, op een robuuste manier, met behulp van functionele testen en fenotypische karakterisering met stroomcytometrie en westerse Vlek.

Het verkrijgen van kanker stamcelbollen van gynaecologische en borstkankertumoren

Met behulp van humane primaire prostaat Epitheelcellen, rapporteren we een nieuwe biomarker-vrije methode van functionele karakterisering van stam-achtige cellen door een spheroid-gebaseerde label-retentie test. Een stap-voor-stap protocol wordt beschreven voor BrdU, CFSE of far Red 2D Cell labeling; driedimensionale spheroid-formatie; Label-behoud stam-achtige celidentificatie door immunocytochemie; en isolatie door FACS.

Isolatie van stam-achtige cellen uit 3-dimensionale Spheroid-culturen

Dit experimentele protocol beschrijft de isolatie van BCSC's uit borstkankercel- en weefselmonsters, evenals de in vitro en in vivo assays die kunnen worden gebruikt om bcsc-fenotype en -functie te beoordelen.

Isolatie en functionele beoordeling van menselijke borstkankerstamcellen uit cel- en weefselmonsters

Dit protocol biedt een uitgebreide procedure om fibroblasten te isoleren, uit te breiden en onsterfelijk te maken van radicale prostatectomieën. Bovendien beschrijft het tests die zijn ontwikkeld om de functionele effecten van overspraak tussen fibroblast en tumorcellen te beoordelen, waarbij gebruik wordt gemaakt van zowel behandeling met geconditioneerd medium als co-kweek.

Isolatie, kweek en karakterisering van prostaatkanker-geassocieerde fibroblasten

Leer de isolatie van prostaatkanker stamcellen uit menselijk weefsel met FACS en fluorescentie-antilichamen. Deze methode ondersteunt moleculaire karakterisering en xenotransplantatie-onderzoek.

Isolatie van kanker stamcellen uit menselijke stalen van prostaatkanker

Meer video's verkennen