Name: Nucleosidetrifosfaten - Van Synthese tot biochemische karakterisering (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-03T16:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 22 s
Description: Leer de synthese en biochemische karakterisering van gemodificeerde nucleosidetrifosfaten via een vierstaps een-potprocedure. Deze methode omvat precipitatie, omgekeerde fase HPLC-zuivering en NMR/MALDI-TOF-analyse voor hoogzuivere verbindingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door de Zwitserse National Science Foundation (Subsidies n ° PZ00P2_126430 / 1 en PZ00P2_144595). Prof C. Leumann wordt hartelijk bedankt voor het verstrekken van het lab ruimte en apparatuur, evenals voor zijn voortdurende steun. Ms Sue Knecht is erkend voor vruchtbare discussies.

1. Synthese van de Modified nucleosidetrifosfaten De synthetische aanpak gekozen volgt de procedure ontwikkeld door Ludwig en Eckstein, aangezien deze methode over het algemeen betrouwbaar en leidt tot zeer weinig bijwerkingen-producten (Figuur 1A) 39. <ol><li> Coevaporate de geschikte 3&#39;-OAc-beschermde nucleoside (typisch 0,1 mmol) tweemaal met watervrij pyridine (2 ml) en vervolgens drogen onder vacuüm gedurende de nacht. Tegelijkertijd, droge tributylammonium pyrofosfaat (0,13 mmol) onder vacuüm gedurende de nacht. </li><li> Los het nucleoside in een minimale droge pyridine (0,2 ml) en voeg droge dioxaan (0,4 ml) als hulpoplosmiddel. Voeg als 2-chloor-1 ,3,2-benzodioxaphosphorin-4-on (0,11 mmol) en laten reageren bij kamertemperatuur gedurende 45 minuten. Opmerking: Het is opmerkelijk dat bijzondere aandacht moet worden genomen met de 2-chloor-1 ,3,2-benzodioxaphosphorin-4-een reagens. Sterker nog, zelfs de opslag van dit reagens onder een inert gas atmosphier niet voldoende is om de ontleding te voorkomen. Aldus, de witte vaste stof die wordt gevormd in deze ontwikkeling kan en moet worden afgeschraapt voor gebruik. </li><li> Bereid een oplossing van tributylammonium pyrofosfaat in droge DMF (0,17 ml) en vers gedestilleerd tributylamine (58 pl; nooit toe moleculaire zeven). Voeg de resulterende oplossing aan het reactiemengsel (een wit neerslag verschijnt maar snel verdwijnt) en laten reageren bij kamertemperatuur gedurende 45 minuten. </li><li> Bereid een oplossing van jood (0,16 mmol) in pyridine (0,98 ml) en H2O (20 pl) en voeg toe aan het reactiemengsel teneinde oxideren Pα (III) centrum. Laat de verkregen donkerrode oplossing geroerd bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten. </li><li> Gebruik een 10% oplossing van NaS 2 O 3 om de overmaat I 2 blussen. Verwijder het oplosmiddel onder vacuüm (de temperatuur van het waterbad van de roterende verdamper wordt onder 30 ° C gehouden). H 2 O (5 ml) toe te voegen en laat de mixture bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten staan ​​om de cyclische trifosfaat groep hydrolyseren. </li><li> In dit stadium worden de beschermende groepen meestal verwijderd (de 3&#39;-OAc en groepen op de zijketens van de nucleobase). Bijgevolg voeg NH4OH (30% in H2O, 10 ml) om het ruwe en roer gedurende 1,5 uur bij kamertemperatuur geroerd, en verwijder het oplosmiddel onder vacuüm. </li><li> Voeg 2 ml H 2 O en opgesplitst in 2 buizen. Voeg 12 ml van een 2% oplossing van NaClO 4 in aceton en gecentrifugeerd (1000 x g) gedurende 30 minuten. Deze procedure herhaalt zich nog een keer. Dit neerslag kan voor de scheiding van de oplosmiddelen en reagentia die bij de synthese van de trifosfaat (die precipiteren), waardoor vereenvoudiging van de daaropvolgende RP-HPLC zuivering aanzienlijk. </li><li> Na droging aan de lucht van de olieachtige residu, het opnemen van een 31P-NMR-spectrum van het ruwe (volgens standaardprocedures, zie ook Lijst van Materialen en figuur 3) enoplossen in 4 ml H2O Opmerking: Deze synthetische procedure richt zich voornamelijk op de productie van gemodificeerde desoxynucleosidetrifosfaten, maar een zeer gelijkaardige procedure kan worden toegepast voor hun RNA tegenhangers (door simpelweg met 2 &#39;, 3&#39;-bis-O-geacetyleerd voorlopers). </li></ol> 2. HPLC Zuivering van de Modified nucleosidetrifosfaten <ol><li> Bereiding van een 1 M voorraadoplossing van triethylammoniumbicarbonaat (TEAB): 40 <ol><li> Bereid een oplossing van 1 mol triethylamine (139 ml) bij ≈ 600 ml gedestilleerd en gefiltreerd H2O </li><li> Bubble CO 2 (via droogijs en een gas bubbler) in de oplossing onder krachtig roeren tot een pH van 7,6 is bereikt (dit ten minste 10 uur duren). Deze voorraadoplossing kan in de koelkast worden bewaard tot een maand. </li></ol></li><li> Zuivering: <ol><li> Bereid twee bufferoplossingen van de 1 M voorraad: 2 L van 50 mM TEAB in ultrapuur water (eluens A) eennd 1 liter 50 mM TEAB in 50% MeCN (eluens B). Ontgas beide eluaten onder vacuüm en roeren gedurende 20 min (aandacht vereist teneinde de pH niet te wijzigen door CO2 te verwijderen tijdens ontgassing). </li><li> Bereid een analytisch monster door het oplossen van 10 ul van de ruwe trifosfaat in 300 pl gedestilleerd H2O en injecteren in een HPLC systeem uitgerust met een semi-preparatieve RP-kolom (C18) en met een gradiënt variërend van 0-100% B in 40 min (Figuur 4). Stel de HPLC programma overeenkomstig de Rt van de trifosfaat (die meestal de hoofdpiek op het chromatogram) en difosfaat (die een iets lagere Rt is). Zuiver het ruwe mengsel met behulp van deze voorwaarden en door het verwijderen van de vroege fracties dat sommige difosfaat kunnen bevatten. </li><li> Combineer alle fracties die het product bevatten en vriesdrogen (die de voorkeur verdamping op de roterende verdamper om hydrolyse te minimaliseren ongewenste diphosphaten). Coevaporate meerdere malen met ultrapuur water (om overblijfsel triethylamine verwijderen uit de eluenten). Beoordeel de zuiverheid van het trifosfaat door NMR (zowel 1H en 31P NMR) en MALDI-TOF door toepassing van standaard protocollen (zie figuur 5). Typische opbrengsten verkregen door toepassing van dit protocol kenmerkend liggen in het traject van 30-70%, afhankelijk van de ondergrond. </li></ol></li></ol> 3. Primerverlengingsreacties en TdT Polymerisatie <ol><li> 5&#39;-uiteinde van de primer labeling <ol><li> Meng 30 pmol van de juiste primer (bijv. P1, lijst van materialen) met 4 pi 10x polynucleotidekinase (PNK) buffer, 3 pl γ-[32P]-ATP, 1 ui PNK en DDH 2 O (voor een totaal reactievolume van 40 pi). Incubeer het reactiemengsel bij 37 ° C gedurende 30 min en vervolgens warmte deactiveren kinase (10 min bij 70 ° C). </li><li> Tijdens de labelingsreactie voorbereidingeen column G10 Sephadex door de stekker een 1 ml pipet tip met gesilaneerde glaswol en het vullen van de tip met G10-oplossing (10% in DDH 2 O, geautoclaveerd). Spin down en was driemaal met 500 ul DDH 2 O en een laatste wasbeurt met 50 ul DDH 2 O. Voer het reactiemengsel door de G10 (de vrije radioactieve label te verwijderen). </li><li> Gel zuiveren (PAGE 20%) het radioactief gemerkte primer en herstellen door toepassing van de crush en geniet werkwijze (bijvoorbeeld elutie met 500 ul van een waterige oplossing die 1% LiClO 4 en 1 mM NEt3 (pH 8) bij 72 ° C gedurende 15 min). Ethanol neerslag en G10 ontzouten de geëlueerd oligonucleotide. </li></ol></li><li> Primerverlengingsreactie <ol><li> Anneal 1 pmol van radioactief gelabelde primer P1, 10 pmol primer P1, en ​​10 pmol template T1 (Lijst van Materialen) in 10x reactie buffer (geleverd door de leverancier van de polymerase te gebruiken) door het plaatsen van de tube in heet (90-95 ° C) water en doordat geleidelijk afkoelen tot kamertemperatuur (meer dan 45 min). </li><li> Zet de tube op ijs en voeg (op zijn beurt) de dNTP cocktail (die zowel de gewijzigde en de natuurlijke trifosfaten, 100 uM uiteindelijke concentratie) en 1 U van het DNA-polymerase (Vent (exo -), Klenow, Pwo of 9 ° N m) en compleet met water (voor een totaal reactievolume van 20 pi). Incubeer bij de optimale werktemperatuur van het enzym (bv. 60 ° C gedurende 30 min bij Vent (exo -) wordt gebruikt). </li><li> Voeg 20 gl stopoplossing (formamide (70%), ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA, 50 mM), broomfenol blauw (0,1%), xyleencyanol (0,1%)), verhit de monsters (95 ° C, 5 min), koel omlaag (0 ° C) en lossen denaturerende polyacrylamidegelelektroforese. Visualiseren door fosforimager. </li></ol></li><li> TdT polymerisatie <ol><li> Verdunnen 7 pmol van enkelstrengs, Ongelabelde primer P2 (Lijst van Materialen), 1 pmol van radioactief gelabelde primer in 1 pl TdT buffer 10x. </li><li> Zet de tube op ijs en voeg (op zijn beurt) de dNTP cocktail (op een voldoende concentratie tussen 10 en 200 uM) en de TdT polymerase (4 U). Incubeer bij 37 ° C gedurende 1 uur. Voeg 10 ul van de stopoplossing, verwarm de monsters (95 ° C, 5 min), afgekoeld (0 ° C) en lossen door denaturerende polyacrylamidegelelektroforese (PAGE 15%). Visualiseren door fosforimager. </li></ol></li></ol> 4. PCR met Gewijzigde nucleosidetrifosfaten <ol><li> Mix 8 pmol van zowel de voorwaartse en achterwaartse primers met 0,5 pmol van de template te amplificeren. Voeg 10x reaction buffer en de dNTP cocktail (voor een 200 uM uiteindelijke concentratie) en plaats de buis op ijs. Voeg 1 U van het DNA polymerase en compleet met H2O tot een eindvolume van 20 pl te bereiken. Breng het mengsel in een PCR flesje en uitvoeren 30 PCR cycli.</li><li> Verdun 6 pl met 6 pi 2x sucrose laadbuffer en lossen 2% agarose (gekleurd met ethidiumbromide) elektroforese. Visualiseren door fosforimager. </li></ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De opname van veranderingen in nucleïnezuren van belang voor tal van praktische toepassingen waaronder de ontwikkeling van antisense en antigeen middelen 42,43, etikettering en functionele tagging oligonucleotiden 41, en ​​pogingen om de genetische alfabet 44-46 breiden. Chemische veranderingen en functionele groepen zijn meestal ingebracht in nucleïnezuren door toepassing van standaard en geautomatiseerde vaste-fase synthese protocollen. Echter, de fosforamidiet bouwblokken bestand tege...

<html> 5&#39;-nucleoside trifosfaten ((d) NTP&#39;s) vormen een klasse van belangrijke biomoleculen die betrokken zijn bij talloze processen en functies vinden dat de universele valuta van energie regelaars van celmetabolisme. Naast hun rol in deze fundamentele biologische veranderingen, hun gemodificeerde tegenhangers geavanceerd als veelzijdig en milde platform voor de introductie van functionele groepen in oligonucleotiden, een methodologie die goed vult de geautomatiseerde vaste-fase synthese die meestal wordt toegepast 1,2. Inderdaad, mits de (d) NTP&#39;s kunnen als substraten voor RNA en DNA polymerasen 3, een schat aan functionele groepen zoals aminozuren 4-13, boorzuren 14,15 nornbornene 16, diamondoid-achtige residuen 17, zijketens voor Organokatalyse 18, galzuren 19 en zelfs 20 oligonucleotiden kunnen worden geïntroduceerd in oligonucleotiden. _content &quot;&gt; Voorbij die een geschikte vector voor de functionalisering van nucleïnezuren kunnen gemodificeerd dNTP worden betrokken bij SELEX en andere verwante combinatorische werkwijzen voor in vitro selectie voor het genereren van gemodificeerde katalytische nucleïnezuren 21-30 en aptameren voor verschillende praktische toepassingen 10, 31-36. De extra zij ketens die worden geïntroduceerd door de polymerisatie van de gemodificeerde dNTP&#39;s worden beschouwd als de chemische ruimte die kunnen worden onderzocht in een selectie-experiment en vult de vrij slechte functionele arsenaal van nucleïnezuren 37 verhogen. Ondanks deze aantrekkelijke eigenschappen en de recente vooruitgang in de ontwikkeling van zowel synthetische en analytische methoden, geen universeel toepasbaar en hoogrentende procedure bestaat voor het vervaardigen van gemodificeerde nucleosidetrifosfaten 2,38. Het doel van deze huidige protocol is licht te werpen op de (soms) ingewikkelde procedures die to de synthese en biochemische karakterisatie van deze geactiveerde bouwstenen (Figuur 1B). Speciale aandacht zal worden gegeven op alle synthetische details die vaak moeilijk te vinden zijn of afwezig zijn in de experimentele afdelingen maar nog cruciaal voor de succesvolle afronding van de synthetische weg die leidt tot de isolatie van zuiver (d) NTP&#39;s (figuur 1).

<table><tbody><tr><td>Tributylammonium pyrofosfaat&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8533</td><td>Hygroscopisch vast, bewaar onder Ar</td></tr><tr><td>2-Chloor-1,3,2-benzodioxafosforin-4-on&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>324124</td><td>Gevoelig voor vocht</td></tr><tr><td>Pyridine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>82704</td><td>Onder moleculaire zeven</td></tr><tr><td>Dioxaan</td><td>Sigma Aldrich</td><td>296309</td><td>Onder moleculaire zeven</td></tr><tr><td>Dimethylformamide (DMF)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>40248</td><td>Onder moleculaire zeven</td></tr><tr><td>Acetonitril&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td>HPLC-kwaliteit</td></tr><tr><td>Triethylamine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>90342</td><td></td></tr><tr><td>Tributylamine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>90781</td><td></td></tr><tr><td>ddH2O</td><td>Milli-Q</td><td></td><td>de-ioniseerde en gezuiverde water, geautoclaveerd in aanwezigheid van Diethylpyrocarbonaat (DEPC)</td></tr><tr><td>Diethylpyrocarbonaat (DEPC)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>159220</td><td></td></tr><tr><td>D2O</td><td>Cambridge Isotope Laboratories, Inc.</td><td>DLM-4-25</td><td></td></tr><tr><td>&#947;-[32P]-ATP</td><td>Hartmann Analytics</td><td>FP-301</td><td></td></tr><tr><td>Natuurlijke dNTP's</td><td>Promega</td><td>U1420</td><td></td></tr><tr><td>Vent (exo-) DNA polymerase</td><td>NEB</td><td>M0257S</td><td></td></tr><tr><td>DNA polymerase I, Large (Klenow) Fragment</td><td>NEB</td><td>MO210S</td><td></td></tr><tr><td>9&deg;Nm DNA polymerase</td><td>NEB</td><td>MO260S</td><td></td></tr><tr><td>Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)</td><td>Promega</td><td>M828A</td><td></td></tr><tr><td>Pwo DNA polymerase</td><td>Peqlab</td><td>01 01 5010</td><td></td></tr><tr><td>T4 PNK</td><td>Thermo Scientific</td><td>EK0032</td><td></td></tr><tr><td>Acrylamid/bisacrylamide (19:1, 40%)</td><td>Serva</td><td>10679.01</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Apollo Scientific</td><td>BIA1177</td><td></td></tr><tr><td>G10 Sephadex</td><td>Sigma</td><td>G10120</td><td></td></tr><tr><td>Urea</td><td>Apollo Scientific</td><td>BIU4110</td><td></td></tr><tr><td>Jupiter semipreparatieve RP-HPLC kolom (5&#956; C18 300 &Aring;)</td><td>Phenomenex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gene Q Thermal Cycler</td><td>Bioconcept</td><td>BYQ6042E</td><td></td></tr><tr><td>PCR-buisjes</td><td>Bioconcept</td><td>3220-00</td><td></td></tr><tr><td>HPLC-systeem</td><td>Amersham Pharmacia Biotech</td><td></td><td>&Auml;kta basic 10/100</td></tr><tr><td>Alle oligonucleotiden zijn aangeschaft van Microsynth en gezuiverd door PAGE</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5&#039;-CAAGGACAAAATAC 
CTGTATTCCTT P1</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5&#039;-GACATCATGAGAGA 
CATCGCCTCTGGGCTA 
ATAGGACTACTTCTAAT 
CTGTAAGAGCAGATCC 
CTGGACAGGCAAGGAA 
TACAGGTATTTTGTCCTTG T1</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5&#039;-GAATTCGATATCAAG P2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Meer informatie over experimentele procedures en apparatuur is te vinden in de volgende artikelen: 
Chem. Eur. J. 2012, 18, 13320-13330 
Org. Biomol. Chem. 2013, DOI: 10.1039/C3OB40842F</td></tr></tbody></table>

nucleosidetrifosfaten - van synthese tot biochemische karakterisering

Nucleoside Triphosphates - From Synthesis to Biochemical Characterization

De traditionele strategie voor de introductie van chemische functionaliteiten is het gebruik van vaste-fase synthese door het toevoegen van geschikte gemodificeerde fosforamidiet precursors naar het ontluikende keten. Echter, de gebruikte tijdens de synthese en de beperking tot vrij korte sequenties omstandigheden belemmeren de toepasbaarheid van deze methodiek. Anderzijds worden gemodificeerd nucleoside trifosfaten geactiveerd bouwstenen die zijn gebruikt voor de licht invoering van talrijke functionele groepen in nucleïnezuren, een strategie die de weg vrijmaakt voor het gebruik van gemodificeerde nucleïnezuren in een breed palet van praktische toepassingen zoals functionele tagging en genereren van ribozymen en DNAzymen. Een van de grote uitdagingen bevindt in de complexiteit van de methode leidt tot de isolatie en karakterisering van deze nucleoside analogen. In deze video artikel presenteren we een gedetailleerd protocol voor de synthese van These gemodificeerde analogen met fosfor (III)-gebaseerde reagentia. Bovendien is de procedure voor de biochemische karakterisatie openbaar gemaakt, met bijzondere aandacht voor primerverlengingsreacties en TdT tailing polymerisatie. Deze gedetailleerde protocol zal van nut zijn voor het vervaardigen van gemodificeerde dNTPs en het gebruik daarvan in de chemische biologie.

Gemodificeerde nucleosidetrifosfaten zijn verleidelijke synthetische doelen, omdat zij zorgen voor de gemakkelijke invoering van een breed scala van functionele groepen in nucleïnezuren 41. Echter, de isolatie en karakterisering van deze geactiveerde bouwstenen vaak lastig blijkt te zijn. Bijgevolg is de hierin getoonde resultaten worden verondersteld om een helpende hand te bieden aan de verschillende stappen binnen de genoemde synthetische en biochemische procedures (Figuur 1B) te volgen. <...

De hierin beschreven protocol heeft tot doel uit te leggen en verkorten de vele obstakels in de weg van de ingewikkelde route die leidt tot gewijzigde nucleosidetrifosfaten. Bijgevolg Dit protocol maakt zowel de synthese van deze geactiveerde bouwstenen en hun beschikbaarheid voor praktische toepassingen.

Nucleosidetrifosfaten - Van Synthese tot biochemische karakterisering

The  traditional strategy for the introduction of chemical functionalities is the  use of solid-phase synthesis by appending suitably modified ...

Het algemene doel van deze video is om de procedure te demonstreren van de synthese van de gemodificeerde nucleoside fosfaten tot hun volledige biochemische karakterisering. Dit wordt bereikt door eerst de geschikt beschermde nucleoside precursor om te zetten in het corresponderende trifosfaat door toepassing van een vierstappen eenpot procedure. De tweede stap is om het resulterende trifosfaat eerst te zuiveren door precipitatie en vervolgens door omkeerfase hoge prestatie vloeistof chromatografie.Vervolgens wordt het trifosfaat analoog gekarakteriseerd door nucleaire magnetische resonantie en matrix-geassisteerde laser DESORPTIE ionisatie tijd van vlucht of NMR en maloff om hoge zuiverheid te garanderen. De laatste stap is primerverlengingsreacties en terminale deoxy nucleotide transferase of TDT polymerisatiereacties. Uiteindelijk worden de reactieproducten, en dus de substraatacceptantie van het trifosfaat, geanalyseerd door gelelektroforese.Het voordeel van deze methode vergeleken met andere synthesestrategieën zoals de Borge-aanpak, is dat er minder nevenproducten worden gevormd en dus de zuivering gemakkelijker is. Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn in deze tec

nucleoside-triphosphates-from-synthesis-to-biochemical

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

Dit artikel geeft een gedetailleerde procedure voor de solide fase synthese, zuivering en karakterisering van dodecamers van RNA gemodificeerd op de C2'- O- positie. UV-vis en cirkelvormige dichroïstische fotometrische analyses worden gebruikt om structurele aspecten te kwantificeren en karakteriseren, dwz enkelstrengen of dubbelstrengen.

Protocol voor de vaste fase synthese van oligomeren van RNA die een 2&#39;-<em&gt; O</em&gt; -thiophenylmethylmodificatie en karakterisering via cirkelvormige dichroïsme

Hier presenteren we protocollen voor de synthese van disaccharide nucleosiden door de regioselectieve O- glycosylatie van ribonucleosides via een tijdelijke bescherming van hun 2', 3'-diol wordt met behulp van een cyclische ester van koppeling. Deze methode is van toepassing op verschillende onbeschermde nucleosiden zoals adenosine, calciumguanosine, cytosinetrifosfaat, uridine, 5-methyluridine en 5-fluorouridine te geven van de corresponderende disaccharide nucleosiden.

Regioselectieve O- glycosylatie van nucleosiden via de tijdelijke 2', 3'-Diol bescherming door een koppeling Ester voor de synthese van Disaccharide nucleosiden

NMR-based activiteit assays zijn ontwikkeld om te identificeren en te karakteriseren remmers van twee nucleoside ribohydrolase enzymen. De protocollen worden verstrekt voor aanvankelijke samenstellings analyses bij 500 μM en 250 μM, dosis-reactie analyses voor het bepalen van IC50 waarden, detergent tegen het scherm analyses, sprong-verdunnings tegen het scherm analyses, en analyses in de gehele cellen van E. coli .

NMR-based activiteit assays voor het bepalen van samengestelde remming, IC50 waarden, artefactuele activiteit, en de hele cel activiteit van nucleoside Ribohydrolases

Een nauwkeurige en reproduceerbare methode voor in vivo nucleosiden/nucleotiden kwantificering in planten wordt hier beschreven. Deze methode maakt gebruik van een HPLC-MS/MS.

Plantmonstervoorbereiding voor nucleoside/nucleotide-inhoudsmeting met een HPLC-MS/MS

Oligonucleotide 5′-trifosfaten zijn alomtegenwoordige componenten in essentiële biologische routes en worden steeds vaker gebruikt in biotechnologische toepassingen. Hier beschrijven we technieken voor de routinematige synthese en zuivering van oligonucleotide-5′-trifosfaten, uitgaande van oligonucleotiden bereid door standaard geautomatiseerde synthesetechnieken.

Chemische trifosforylering van oligonucleotiden

Peptide tertiaire amides (PTA) zijn een superfamilie van peptidomimetica die omvatten maar zijn niet beperkt tot, peptiden, peptoïden en N-gemethyleerd peptiden. Hier beschrijven we een synthetische methode die zowel split-en-zwembad en sub-monomeer strategieën combineert tot een kraal een-verbinding bibliotheek van PTA synthetiseren.

Split-en-zwembad Synthese en karakterisatie van peptide Tertiaire amide Bibliotheek

Synthese, activering, en karakterisering van opzettelijk ontworpen metaal-organische raamwerk materialen is een uitdaging, vooral als bouwstenen onverenigbaar zijn of ongewenste polymorfe zijn thermodynamisch bevoordeeld ten opzichte van de gewenste vormen. We beschrijven hoe toepassingen van oplosmiddelhoudende bijgestaan ​​linker uitwisseling, poeder röntgendiffractie in haarvaten en activering via superkritische CO 2 drogen, kan een aantal van deze uitdagingen aan te pakken.

Synthese en karakterisering van gefunctionaliseerde metaal-organische roosters

Het doel van dit manuscript is om een eenvoudige methode te demonstreren voor de bereiding van ynonen uit acylchloride en kaliumalkynyltrifluorboraat zout uitgangsmaterialen. De one-pot reactie verloopt snel in de aanwezigheid van boortrichloride zonder uitsluiting van lucht en vocht.

Metaalvrije Synthese van Ynones uit acylchlorides en Kalium Alkynyltrifluoroborate Zouten

Ruthenium fosfine complexen worden veel gebruikt voor homogene katalytische reacties zoals hydrogeneringen. De synthese van een reeks nieuwe drietandige ruthenium complexen met het N -triphos ligand N (CH2 PPh 2) 3 gerapporteerd. Bovendien wordt de stoichiometrische reactie van een dihydride Ru- N -triphos complex met levulinezuur beschreven.

De Synthese, karakterisering en reactiviteit van een serie van ruthenium<em&gt; N</em&gt; -triphos<sup&gt; Ph</sup&gt; Complexen

De synthese van uniforme goudnanodeeltjes bedekt met halfgeleiderschelpen van CdS of ZnS wordt uitgevoerd. De halfgeleidercoating wordt uitgevoerd door eerst een zilversulfidelaagje af te zetten en de zilverkationen uit te wisselen voor zink- of cadmiumkationen.

Synthese, karakterisering en functionalisering van de hybride AU / CdS en Au / ZnS Core / Shell Nanodeeltjes

Leer de synthese en biochemische karakterisering van gemodificeerde nucleosidetrifosfaten via een vierstaps een-potprocedure. Deze methode omvat precipitatie, omgekeerde fase HPLC-zuivering en NMR/MALDI-TOF-analyse voor hoogzuivere verbindingen.

Nucleosidetrifosfaten - Van Synthese tot biochemische karakterisering

Meer video's verkennen