Name: Bepaling van de Spontane bewegingsactiviteit in Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-10T16:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: Leer hoe je spontane bewegingsactiviteit kwantificeert in Drosophila melanogaster met infraroodbundelmonitors. Deze methode biedt een betrouwbare aanpak om gedrag en genetische interacties te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door een subsidie ​​van de National Institutes of Health (AG023088 naar BR).

Opmerking: Het kanton-S stam is de standaard wild-type achtergrond lijn verkregen uit de Bloomington Stock Center. 1. Voedselbereiding en Recept voor 1000 ml of Food Opmerking: Dit hoofdstuk beschrijft het protocol voor voedselbereiding. Grote metalen potten worden gebruikt voor de bereiding ongeveer 18 L voedsel tegelijk. De hier beschreven protocol wordt verkleind en gebruikt 1000 ml H2O Voedsel tweemaal geautoclaveerd. <ol><li> Meng 113 g sucrose en 28 g gist in 643 ml water. Verlaat ingrediënten op een hete plaat ingesteld op 25 ° C met een roerstaafje te mengen gedurende 15 minuten. </li><li> Autoclaaf voedsel oplossing gedurende 20 minuten. </li><li> Meng 49 g maïsmeel en 8,1 g agar in 268 ml water en voeg toe aan de geautoclaveerde voedsel mengsel in punt 1.2 beschreven. Meng goed met een grote lepel of een garde. </li><li> Autoclaaf voedsel mengsel nog eens 20 minuten. </li><li> Zet het gerecht op een bord en laat afkoelen met constante menging met een roerstaafje. Ikf aanvullende oplossingen moeten worden toegevoegd aan levensmiddelen, zoals mifepriston (RU486), houdt het eten op een hete plaat ingesteld op 60 ° C en voeg oplossing wanneer het voedsel de gewenste temperatuur bereikt. </li><li> Los op 2,4 g tegosept in 10,7 ml 100% EtOH en houden op een koude plaat met een roerder om volledig op te lossen en meng gedurende ongeveer 15 minuten. </li><li> Voeg tegosept oplossing voedsel wanneer de temperatuur van het voedsel is 60 ° C en meng. </li><li> Gebruik een pomp of een snackautomaat te gieten ongeveer 10 ml van voedsel in een grote flacon. Door een voedseldispenser kan eten gelijktijdig gieten in 100 breed, kunststof flesjes (1 tray) tegelijkertijd. </li><li> Bedek de flesjes met Kimwipes en kaasdoek en laat voedsel bij kamertemperatuur gedurende 12-24 uur afkoelen. Houd het voedsel bij 4 ° C en binnen 3-4 weken. Warm het voedsel tot kamertemperatuur vóór gebruik voor vlieg werk. </li></ol> 2. Voorbereiding van de glazen flesjes <ol><li> Bereid voedsel volgens het protocol in stap 1 genoemde. </li&gt; <li> Aliquot 5 ml van voedsel in elke smalle, glazen flesje, dat is de juiste maat voor de bevolking te monitoren. Deze hoeveelheid voedsel moet laag genoeg om onder de laagste ring van de bevolking monitor. </li><li> Na het eten afkoelt tot kamertemperatuur bedekken de vaatjes met spons pluggen en houden bij 4 ° C gedurende maximaal 2 weken. Omdat de hoeveelheid voedsel in een flacon is vrij laag, is het het beste om het voedsel te gebruiken binnen een week of twee aan een uitdroging te voorkomen. </li><li> Warm de injectieflacons op kamertemperatuur voor gebruik. </li></ol> 3. Onderhoud van de Parental Flies <ol><li> Groeien de vliegen in grote plastic flesjes met standaard laboratorium voedsel en houden de flesjes in een vochtige, temperatuur-gecontroleerde klimaatkamer bij 25 ° C op een 12 uur licht / donker-cyclus. De daglicht periode begint om 06:00 in dit laboratorium. </li><li> In de ochtend vliegt duidelijk volwassen uit de flesjes van het ouderschapsverlof vliegen zullen worden verzameld. </li><li> Verzamel nieuw eclosed flies in en scheid ze door het geslacht op een CO 2 pad binnen 8 uur na verpopping om ervoor te zorgen dat de vrouwelijke vliegen zijn maagden. Vliegen beginnen 8 uur na verpopping paren. </li><li> Toen de maagd mannelijke en vrouwelijke vliegen zijn tussen de 5 en 10 dagen oud, zet 10 mannetjes en 10 vrouwtjes in een flacon met standaard eten en enkele korrels van actieve gist bovenop. Opmerking: Regel de dichtheid van de larven met hetzelfde aantal vliegen en te houden in een flacon twee dagen. Toevoeging van actieve gist bevordert eiproductie. </li><li> Houd de vliegen om te paren en eieren leggen in een temperatuur-gecontroleerde klimaatkamer bij 25 ° C met een 12 uur licht / donker cyclus voor 2 dagen. Opgezet 5-10 flesjes ouderlijke vliegen. </li><li> Passeer de vliegen in nieuw plastic flacon om de andere dag en houden de vaatjes met de eieren in een incubator bij 25 ° C. </li></ol> 4. Collectie Experimentele Flies <ol><li> Na 9 dagen vliegen begint te ESluit de flacons waar Parental vliegen eieren gelegd (beschreven in stap 3.6.). Duidelijke en gooi de vliegen die eclosed tijdens de eerste dag en de terugkeer van de flesjes te incubator. Het merendeel van de vliegen eclosed op dag 1 zijn vrouwtjes. Een gesynchroniseerde bevolking van vliegen zal ESluit op dag 2. </li><li> Binnen 24 uur plaats nieuw eclosed vliegen op de CO 2-pads en verzamel 25 mannelijke en 25 vrouwelijke vliegen per flacons met een penseel of een metalen lepel. Blijf vliegen op de CO 2-pads voor een korte periode van tijd om eventuele effecten van CO 2 te beperken. Noteer de dag van eclosion op de flacon. Monteer ten minste 5 repliceren flacons voor experimentele en de controle groepen. </li><li> De injectieflacons in temperatuurgecontroleerde klimaatkamers bij 25 ° C met een 12 uur licht / donker-cyclus. </li><li> Passeren de vliegen naar een nieuwe plastic flacon om de andere dag met behulp van een trechter. </li><li> De leeftijd van de vliegen tot de gewenste leeftijd voor experimenten is bereikt. </li></ol> 5. Instellen van de Mobiliteit Monitoren <ol><li> Plaats debevolking bewaakt in een temperatuur gecontroleerde incubator. </li><li> Sluit elke monitor met een 4-aderige telefoonkabel aan op de Power Supply Interface Unit (PSIU) via 5-weg splitters (meerdere lijnen), die kunt maximaal 5 individuele monitoren om een opening in de PSIU. Zie de figuren 1A en 2B. </li><li> Sluit de PSIU om een ​​lijn stopcontact (100-240 V). Steek de voeding uitgang connector in een van de 2 paring PSIU jacks. De aangrenzende groen licht groen als goed aangesloten. </li><li> Sluit de PSIU naar de Universal Serial Bus (USB)-hardware. Sluit de USB-kabel aan tussen de USB-hardware met een Macintosh of een Windows-pc voor gegevensregistratie. Het beste zou zijn om een ​​computer die uitsluitend voor het verzamelen van gegevens zijn sindsdien collectie loopt dagen per keer. </li><li> Download de USB-software (PSIUdrivers.zip). USB driver software wordt gebruikt door de voeding interface en moet slechts een keer worden gedownload. Synthetiseert eendataverbinding tussen het computerprogramma en de PSIU / activiteit monitoren. Voor een pc gebruik van een COM-poort en voor een Macintosh gebruiken een eenvoudige seriële poort. </li><li> Download het computerprogramma voor Macintosh OSX (Intel) of voor Windows PC (XP/Vista/7) programma&#39;s door de instructies die door de fabrikant Notes 308.pdf. </li><li> Start de computer programma en het opzetten van het programma door te klikken op de Voorkeuren, Lights of monitoren. Het programma loopt tot de gebruiker selecteert &quot;quit&quot; om het programma te stoppen. Als de computer programma of de computer is uitgeschakeld de monitoren zal blijven straal onderbrekingen tellen, maar de tellingen zullen niet worden opgenomen totdat het programma wordt opnieuw gelanceerd. In dat geval zal de eerste lezing omvatten alle tellingen sinds de laatste keer dat de PSIU stuurde de gegevens op een computer. </li><li> Selecteer het tabblad Voorkeuren en kies de seriële poort, PSIU voor Macintosh en COM voor de PC. </li><li> Selecteer het lezen interval dat varieert van seconden, minuten of een uur. </li> &lt;li&gt; Selecteer de monitoren: Elke monitor heeft een uniek nummer, dat wordt gegeven door de fabrikant. Selecteer de monitor bereik dat overeenkomt met de nummers aan de monitoren van de fabrikant. </li><li> The Lights doos: Zorg ervoor dat alle monitoren correct zijn aangesloten, die wordt gekenmerkt door een groen lampje naast de monitor nummer op de software. Een rood lampje geeft aan dat de verbinding verbroken wordt, en een zwart vakje geeft aan dat het systeem is uitgeschakeld of onjuiste plaatsing. </li></ol> 6. Instellen van de Experiment <ol><li> Verwijder de glazen flacons met voedsel van 4 ° C en laat ze opwarmen tot kamertemperatuur. </li><li> Aparte mannelijke en vrouwelijke vliegen van dezelfde leeftijd op de CO 2-pad. Voor veroudering studies is het mogelijk om mobiliteitsstudies zo vroeg als 3 dagen oud. </li><li> Zet 10 man of 10 vrouwtjes in elk glas flacon met voedsel. Gebruik ten minste drie flesjes voor alle behandelde en controle lijn van vliegen en voor elk geslacht. </li><li> Houd de viALS aan hun kant totdat de vliegen te herstellen van CO 2 naar de vliegen zorgen niet vast komen te zitten in het voedsel. Afzonderlijke vliegen rond 08:00 en laat ze gedurende 2 uur bij kamertemperatuur te herstellen van CO2. </li><li> Plaats de vaatjes in de bevolking monitoren gehuisvest in de incubators. </li><li> Gooi de binnen de eerste 24 uur verzamelde gegevens na de vliegen in de incubator gezet te laten aanpassen aan de nieuwe omgeving. </li><li> Passeer de vliegen na 3 of 4 dagen nieuwe flesjes om uitdroging van het voedsel. Als vliegen zijn gevoelig voor de dood of zijn leeftijd van 40 dagen of ouder, passeren de vliegen na 2 dagen en het gebruik van gegevens verzameld voor dag 2. Gebruik ook meer dan drie flesjes per groep voldoende herhalingen te garanderen. Moet worden genegeerd gegevens van flacons met dode vliegen en niet opgenomen in de analyse. </li></ol> 7. Het uitvoeren van de activiteit monitoren en berekening van de totale spontane activiteit <ol><li> Selecteer voorkeuren - het interval voor het verzamelen van gegevens &lt;.br /&gt; Opmerking: De computer programma kunt verzamelen van de gegevens met tussenpozen van 1 seconde tot 60 minuten. 10 en 30 minuten perioden zijn gevonden om goede informatie over mobiliteit te bieden, zonder dat een overweldigend aantal tijdstippen. Op de geselecteerde periode, zal het programma de huidige totale telling voor elke monitor naar de computer en opnieuw te beginnen tellen van nul. De computer programma slaat de gegevens op in een nieuwe map gecreëerd door de computer datasysteem. De in elke monitor verzamelde gegevens worden apart opgeslagen, en individuele tekstdocumenten zijn gemaakt voor elke flacon. De gegevens worden continu zolang het programma werkt verzameld. </li><li> Aan het einde van het experiment, scan de gegevens met behulp van de FileScan110X voor Macintosh OSX (Intel) of SystemMB108 voor Windows PC-programma (XP/Vista/7). Opmerking: De Scan programma elimineert dubbele lezingen en zorgt ervoor dat de opnames zijn voltooid. </li><li> Sla het binnen een bepaalde tijd en p verzamelde gegevenseriod dagen. Kies een experimentele naam en kopieer de bestanden van de computer map data voor analyse. NB: Op dit moment kan de activiteit intervallen worden veranderd en omgezet in verschillende. De oorspronkelijke gegevens blijven opgeslagen in de computer gegevens en kan zolang ze niet verwijderd worden opgehaald. </li></ol> 8. Data Analysis <ol><li> Kopieer de in de tekstbestanden verzamelde gegevens in kolommen van Excel-spreadsheets voor data-analyse. Gegevens door deze software verzameld zijn in de kolommen, welke nummers ofwel een totale activiteit in een enkele monitor over een periode van tijd door de onderzoeker geselecteerde bevatten. Opmerking: Gegevens verzameld voor elke monitor zijn in aparte tekstbestanden. Er zijn 32 kolommen voor elke monitor. De eerste zes kolommen leeg en moet bestaan ​​uit 0; drie volgende bevatten verzameld op de onderste ring gegevens, in het midden en aan de bovenste ring. De rest van de kanalen kan worden verwijderd omdat ze geen gegevens bevatten. Elke ring voert eenenkele waarde per keer. Zie screenshot van de ruwe gegevens in figuur 2. </li><li> Bereken de totale activiteit binnen een gewenste tijdsperiode voor elke monitor die de som van de activiteit verzameld op drie verschillende hoogtes van infraroodstralen vertegenwoordigt. Opmerking: De periode kan variëren van een paar uur, 24 uur of meerdere dagen. </li><li> Bepaal de gemiddelde bewegingsactiviteit en de standaardafwijking tussen de 3 monitoren die 3 biologische herhalingen vertegenwoordigen. Opmerking: De gegevens kunnen worden geanalyseerd op statistische significantie door een aantal tests. Een tweezijdige Students t-test, een variantieanalyse (ANOVA) en Tukey HSD post hoc test kan worden gebruikt om de effecten van verschillende milieu-of genetische manipulaties op 24 uur spontane locomotorische activiteit 16 bepalen. Er zijn een aantal andere programma&#39;s die kunnen worden gebruikt en zijn eerder gepubliceerd 17. </li></ol>

<ol><li>Ali, Y. O., Escala, W. E., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+Locomotor%2C+Learning%2C+and+Memory+Deficits+in+Drosophila+Models+of+Neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration.</a> J. Vis. Exp. 49, 2504(2011).</li>
<li>Jones, M. A., Grotewiel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+model+for+age-related+impairment+in+locomotor+and+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a model for age-related impairment in locomotor and behaviors.</a> Exp. Gerontol. 46 (5), 320-325 (2011).</li>
<li>Grotewiel, M. S., Martin, I., Bhandari, p, Cook-Wiends, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+senescence+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Res.+Rev%22%5BJournal%5D)">Functional senescence in Drosophila melanogaster.</a> Aging Res. Rev. 4 (3), 372-397 (2005).</li>
<li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Iterative+Negative+Geotaxis+%28RING%29%3A+a+New+Method+for+Assessing+Age-related+Locomotor+Decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Rapid Iterative Negative Geotaxis (RING): a New Method for Assessing Age-related Locomotor Decline in Drosophila.</a> Exp. Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).</li>
<li>Nichols, C. D., Bechnel, J., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+assay+Drosophila+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Methods to assay Drosophila behavior.</a> J. Vis. Exp. 61, 3791 (2012).</li>
<li>Long, T. A., Rice, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+locomotor+activity+mediates+Intralocus+sexual+conflict+in+a+laboratory-adapted+population+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Adult locomotor activity mediates Intralocus sexual conflict in a laboratory-adapted population of Drosophila melanogaster.</a> Proc. Biol. Sci. 274 (1629), 3105-3112 (2007).</li>
<li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+video+tracking+of+locomotor+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution video tracking of locomotor in adult Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. 24 (24), 1096 (2009).</li>
<li>Marden, J. H., Rogina, B., Montooth, K. L., Helfand, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+tradeoff+between+aging+and+organismal+performance+of+Indy+long-lived+mutant+flies%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Conditional tradeoff between aging and organismal performance of Indy long-lived mutant flies.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 100 (6), 3369-3372 (2003).</li>
<li>Grover, D., Yang, J., Tavaré, S., Tower, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+tracking+of+fly+movement+and+gene+expression+using+GFP%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Simultaneous tracking of fly movement and gene expression using GFP.</a> BMC Biotechnol. 8, 93(2008).</li>
<li>Grover, D., Yang, J., Tavaré, S., Tower, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+tracking+of+movement+and+gene+expression+in+multiple+Drosophila+melanogaster+flies+using+GFP+and+DsRED+fluorescent+reporter+transgenes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Res+Notes%22%5BJournal%5D)">Simultaneous tracking of movement and gene expression in multiple Drosophila melanogaster flies using GFP and DsRED fluorescent reporter transgenes.</a> BMC Res Notes. 2 (58), 1-11 (2009).</li>
<li>Ardekani, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+tracking+and+behaviour+monitoring+of+multiple+fruit+flies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+R.+Soc.+Interface%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional tracking and behaviour monitoring of multiple fruit flies.</a> J. R. Soc. Interface. 10 (78), (2013).</li>
<li>Branson, K. A., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nat Methods. 6 (6), 451-457 (2009).</li>
<li>Zou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recording+Lifetime+Behavior+and+Movement+in+an+Invertebrate+Model%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">Recording Lifetime Behavior and Movement in an Invertebrate Model.</a> PLOS One. 6 (4), (2011).</li>
<li>Valente, D., Golani, I., Mitra, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+trajectory+of+Drosophila+melanogaster+in+a+circular+open+field+arena%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Analysis of the trajectory of Drosophila melanogaster in a circular open field arena.</a> PLoS One. 2 (10), 1083(2007).</li>
<li>Inan, O. T., Marcu, O., Sanchez, M. E., Bhattacharya, S., Kovacs, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+portable+system+for+monitoring+the+behavioral+activity+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A portable system for monitoring the behavioral activity of Drosophila.</a> J Neurosci. Methods. 202 (1), 45-52 (2011).</li>
<li>Parashar, V., Rogina, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((dSir2+mediates+the+increased+spontaneous+physical+activity+in+flies+on+calorie+restriction%5BTitle%5D)+AND+%22Aging%22%5BJournal%5D)">dSir2 mediates the increased spontaneous physical activity in flies on calorie restriction.</a> Aging. 1 (6), 529-541 (2009).</li>
<li>Kaneuchi, T., Togawa, T., Matsuo, T., Fuyama, Y., Aigaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+measurement+of+H2O2+resistance+in+Drosophila+using+an+activity+monitor%5BTitle%5D)+AND+%22Biogerontology%22%5BJournal%5D)">Efficient measurement of H2O2 resistance in Drosophila using an activity monitor.</a> Biogerontology. 4 (3), 157-165 (2003).</li>
<li>Carey, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-specific+and+lifetime+behavior+patterns+in+Drosophila+melanogaster+and+the+Mediterranean+fruit+fly%2C+Ceratitis+capitata%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Age-specific and lifetime behavior patterns in Drosophila melanogaster and the Mediterranean fruit fly, Ceratitis capitata.</a> Exp. Gerontol. 41 (1), 93-97 (2006).</li>
<li>Rhodenizer, D., Martin, I., Bhandari, P., Pletcher, S. D., Grotewiel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+environmental+factors+impact+age-related+impairment+of+negative+geotaxis+in+Drosophila+by+altering+age-dependent+climbing+speed%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Genetic and environmental factors impact age-related impairment of negative geotaxis in Drosophila by altering age-dependent climbing speed.</a> Exp. Gerontol. 43 (8), 739-749 (2008).</li>
<li>Osterwalder, T., Yoon, K. S., White, B. H., Keshishian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conditional+tissue-specific+transgene+expression+system+using+inducible+GAL4%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">A conditional tissue-specific transgene expression system using inducible GAL4.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98 (22), 12596-12601 (2001).</li>
<li>Dietzl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li>
<li>Chiu, J. C., Low, K. H., Pike, D. H., Yildirim, E., Edery, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+locomotor+activity+to+study+circadian+rhythms+and+sleep+parameters+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assaying locomotor activity to study circadian rhythms and sleep parameters in Drosophila.</a> J. Vis. Exp. 43, 2157(2010).</li>
<li>Pfeiffenberger, C., Lear, B. C., Keegan, K. P., Allada, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locomotor+activity+level+monitoring+using+the+Drosophila+Activity+Monitoring+%28DAM%29+System%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protoc%22%5BJournal%5D)">Locomotor activity level monitoring using the Drosophila Activity Monitoring (DAM) System.</a> Cold Spring Harbor Protoc. 11, (2010).</li>
<li>Pfeiffenberger, C., Lear, B. C., Keegan, K. P., Allada, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPfeiffenberger%2C+C+%22Processing+circadian+data+collected+from+the+Drosophila+Activity+Monitoring+%28DAM%29+System.+Protoc%22">Processing circadian data collected from the Drosophila Activity Monitoring (DAM) System. Protoc</a>. 11, Cold Spring Harbor. (2010).</li>
<li>Ardekani, R., Tavaré, S., Tower, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+senescence+in+Drosophila+using+video+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Assessing senescence in Drosophila using video tracking.</a> Methods Mol. Biol. 965, 501-516 (2013).</li>
</ol>

We hebben niets te onthullen.

Spontane bewegingsactiviteit van vliegen wordt beïnvloed door vele factoren, zoals leeftijd, genetische achtergrond, 2,13,18,19 en geslacht. Daarnaast kunnen omgevingsfactoren zoals calorie-inhoud van het voedsel, de temperatuur van de omgeving, toevoeging van verschillende drugs, en dag / nacht licht cyclus fly activiteit beïnvloeden. Zo mannelijke vliegen van dezelfde leeftijd een hogere spontane fysieke activiteit dan bij vrouwen (figuur 1). Daarom moet vliegen van dezelfde leeftijd en ges...

Fruitvliegen, Drosophila melanogaster, zijn gebruikt als een waardevol model organisme om onderliggende mechanismen van complexe gedragingen, zoals leren en geheugen, sociale interactie, agressie, druggebruik, slaap, sensorische functies, verkering, en paring 1,2 bestuderen. Een gedrag dat is onderzocht door middel van meerdere protocollen is spontane bewegingsactiviteit. Negatieve geotaxis was een van de eerste methoden ontwikkeld voor het meten Drosophila activiteit en dit protocol omvat het meten van het percentage van vliegen die een bepaalde hoogte van de flacon bereiken na vliegen werden geschud om de bodem van de houder 1,3. Deze methode heeft voordelen dat ze eenvoudig, goedkoop, en omdat het geen speciale apparatuur kan in elk laboratorium worden verricht. Het is gebruikt als een waardevolle screening instrument om de effecten van verschillende genetische manipulaties op vlieg mobiliteit 3 bestuderen. Het is echter tijd en arbeidsintensief eennd de mogelijkheid van vertekening door variabele schudden van de flesjes en menselijke opnamen. De negatieve geotaxis methode werd verbeterd door de ontwikkeling van de negatieve methode Rapid Iterative geotaxis (RING) 4,5, die foto&#39;s van de vlieg flesjes na het schudden van de vliegen naar de bodem neemt. Het voordeel van dit protocol is de gevoeligheid en de mogelijkheid van het testen van een groot aantal vliegen flacons tegelijkertijd. Echter, dit protocol heeft nog steeds het potentieel voor menselijke fouten, en alleen meet negatieve geotaxis. Andere laboratoria hebben eenvoudige observatie gebruikt in cultuur flesjes om bewegingsactiviteit 6 bepalen. Recent zijn ontwikkeld verschillende video-opname systemen voor het meten van fly bewegingsactiviteit. Een video-monitoring protocol voorziet tijd voor aanpassing voor de opname 7. De methode beschreven door Slawson et al.. Maakt ook gebruik van een lucht-puls naar movemen stoppent tot de start van de opname, die mogelijk een stressor de dieren 7 zijn. Deze methode geeft informatie over gemiddelde snelheid, maximum snelheid, tijd doorbrengen in beweging, enz. Een andere driedimensionale tracking systeem meet de maximale snelheid van individuele vliegen tijdens ~ 0.2 seconden van de vrije vlucht opstijgen 8. Een drie-dimensionale videobewaking protocol gebruikt vliegen die GFP en meerdere camera&#39;s uitgerust met filters waardoor detectie van fluorescentie te vliegen mobiliteit 9 bepalen. Vliegen in dit protocol meestal cilindrisch vluchtpatronen, die potentieel vertonen door de vorm van Drosophila cultuur flacons 10. Deze werkwijze werd verbeterd door een koepel, waardoor metingen spontane beweging van twee vliegen 11. Een high-throughput werkwijze die een camera gebruikt om automatisch volgen en kwantificeren individuele en sociale gedrag van Drosophila is ook beschreven 12. Zou etal.. ontwikkelde een gedrags-monitor systeem (BMS) dat twee computerondersteunde camera&#39;s gebruikt om de levensduur gedrag en bewegingen zoals rust nemen, bewegen, vliegen, eten, drinken, of dood van individuele Tephritid fruitvliegen 13. Verscheidene andere video systemen zijn ontwikkeld om fly gedragsactiviteit 14,15 bewaken. Hier beschrijven we een methode voor het kwantificeren van Drosophila activiteit die bevolking monitoren gebruikt. Deze monitors zijn gehuisvest in temperatuur en vochtigheid gecontroleerde incubator bij 25 ° C op een 12 uur dag-nacht lichtcyclus. Elke populatie monitor heeft infraroodstralen geplaatst in ringen zich op drie verschillende hoogtes. Telkens een vlieg beweegt over de ringen onderbreekt de infraroodstraal die wordt geregistreerd door een microprocessor die onafhankelijk platen en telt de activiteit van vliegen in de flacon. Een microprocessor uploadt de totale activiteit in de flacon om de computer op door de gebruiker gedefinieerde intervaIs dat kan variëren van 1 seconde tot 60 minuten. De hier beschreven methode biedt voldoende tijd voor vliegen te passen aan de nieuwe omgeving en toelaten om gelijktijdig meten van de spontane bewegingsactiviteit van wel 120 populaties vliegen. Daarnaast beschrijven we de bereiding van het eten, vliegen onderhoud, het opzetten van de mobiliteit van de bevolking monitoren in temperatuur gecontroleerde incubators, en mogelijke factoren die de resultaten kunnen beïnvloeden. Deze methode kan worden gebruikt om te bestuderen hoe verschillende modificaties milieu of genetische invloed spontane locomotorische activiteit van de vliegen.

<table><tbody><tr><td>Sucrose FCC Food Grade 100 LB,</td><td>Fisher Scientific MP Biomedicals</td><td>ICN90471380</td><td></td></tr><tr><td>Brewer&rsquo;s Yeast</td><td>Fisher Scientific MP Biomedicals</td><td>ICN90331280</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila Agar Fine</td><td>SciMart</td><td>DR-820-25F</td><td></td></tr><tr><td>Cornmeal</td><td>Fisher Scientific MP Biomedicals</td><td>ICN90141125</td><td></td></tr><tr><td>Methyl4-hydroxybenzoate, tegosept</td><td>Sigma</td><td>H5501-5KG</td><td></td></tr><tr><td>EtOH</td><td>Pharmco-AAPER</td><td>111000200</td><td></td></tr><tr><td>Active Dry Yeast</td><td>Fisher Scientific</td><td>ICN10140001</td><td></td></tr><tr><td>Fly CO2 pad</td><td>LabScientific</td><td>BGSU-7</td><td></td></tr><tr><td>Stereo Microscope</td><td>Olympus</td><td>SZ40</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila carbon dioxide (CO2) tank</td><td>Airgas</td><td>UN1013</td><td></td></tr><tr><td>Small paint brush for pushing the flies</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Shell vial wide</td><td>Fischer Scientific</td><td>AS519</td><td></td></tr><tr><td>Buzzplugs for wide plastic vials</td><td>Fischer Scientific</td><td>AS275</td><td></td></tr><tr><td>Glass vials (25 x 95 mm)</td><td>Fischer Scientific Kimble 60931-8</td><td>AS-574</td><td></td></tr><tr><td>Sponge plugs for glass vials</td><td>SciMart</td><td>DR-750</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila Food Dispenser</td><td>Applied Scientific (Fischer Scientific)</td><td>AS780Q</td><td></td></tr><tr><td>DPM Drosophila Population Monitor</td><td>Trikinetics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DC Power Supply with line cord</td><td>Trikinetics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PSIU9 The Power Supply Interface Unit</td><td>Trikinetics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Telephone cables and 5 way splitters</td><td>Trikinetics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Universal Serial Bus (USB) hardware</td><td>Trikinetics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Macintosh or Windows PC with UCB port</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAMSystem308X Data Acquisition Software for Macintoch OSX (Intel)</td><td>www.trikinetics.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAMSystem308 Data Acquisition Software for Windows PC (XP/Vista/7)</td><td>www.trikinetics.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td>DAMFileScan108X software for Macintosh</td><td>www.trikinetics.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAMFileScan108X software for Windows PC (XP/Vista/7)</td><td>www.trikinetics.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>USB software (PSIUdrivers.zip)</td><td>www.trikinetics.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAMSystem Notes 308</td><td><a href="http://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Notes%20308.pdf">(http://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Notes%20308.pdf</a></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bepaling van de spontane bewegingsactiviteit in<em&gt; drosophila melanogaster</em

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is gebruikt als een uitstekend modelorganisme milieu en genetische manipulaties die beïnvloedende bestuderen. Een dergelijk gedrag is spontaan bewegingsactiviteit. Hier beschrijven we ons protocol dat Drosophila bevolking monitoren en een tracking systeem dat continue monitoring van de spontane bewegingsactiviteit van vliegen zorgt voor meerdere dagen tegelijk gebruikt. Deze methode is eenvoudig, betrouwbaar en objectieve kunnen worden gebruikt om de effecten van veroudering, geslacht, veranderingen in calorische voedsel toevoeging van drugs, of genetische manipulaties die menselijke ziekten nabootsen onderzoeken.

<html> De spontane bewegingsactiviteit in Drosophila hangt af fly geslacht (figuur 3A), calorie-inhoud van het voedsel (Figuur 3B) en de licht / donker-cyclus. Zodra het licht wordt uitgeschakeld fly activiteit drastisch afneemt. Figuur 3A toont 24 uur van bewegingsactiviteit opnames van mannelijke en vrouwelijke vliegen. Een sterretje op de x-as geeft de tijd dat het licht werd uitgeschakeld en de overgang naar donker cyclus. Figuur 3B illustre...

Drosophila melanogaster zijn nuttig bij het ​​bestuderen van genetische of ecologische manipulaties die gedrag zoals spontane motorische activiteit beïnvloeden. Hier beschrijven we een protocol dat monitoren met infrarood stralen en data analyse software om spontane bewegingsactiviteit kwantificeren gebruikt.

Bepaling van de Spontane bewegingsactiviteit in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Het algemene doel van deze procedure is het kwantificeren van de spontane locomotorische activiteit van fruitvliegen. Dit wordt bereikt door eerst experimentele vliegen te verzamelen en te laten verouderen. De tweede stap is het opstellen van populatiemonitoren in een temperatuurgecontroleerde incubator en het downloaden van de bijbehorende software.Vervolgens worden de vliegen overgebracht naar glazen flesjes en daarna geplaatst in populatiemonitoren waar de activiteitsmonitoren worden uitgevoerd. De laatste stap is het analyseren van de gegevens. Uiteindelijk worden populatiemonitoren gebruikt om verschillen in de spontane fysieke activiteit van vliegen aan te tonen.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals de negatieve geo-as, is dat het eenvoudige, betrouwbare en objectieve continue registraties mogelijk maakt van de spontane fysieke activiteit van meerdere populaties vliegen. Deze methode kan ons helpen bepalen hoe verschillende manipulaties de vliegen beïnvloeden. De spontane fysieke activiteit ter demonstratie van de procedure zal worden uitgevoerd door Suzanne Kowski, een laboratoriumassistent. Begin met het bereiden van het voe

determination-spontaneous-locomotor-activity-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

De studie van complexe locomotorisch gedrag...

Hoge-resolutie video-Tracking van Locomotion in Adult Drosophila melanogaster

We beschrijven de procedures voor de registratie van de dagelijkse bewegingsactiviteit ritmes...

Het testen van de locomotorische activiteit te circadiaanse ritmes Studie en parameters Sleep in Drosophila</em

Deze video beschrijft een eenvoudige methode om vliegbeweging te kwantificeren en toont de uitgevoerde klimtest.  De vliegklimtest is een algemene test van de motorische functie die afhankelijk is van een negatieve geotaxis-respons.

Fly Climbing Assay: een methode om algemene voortbeweging in Drosophila melanogaster te testen

Deze video beschrijft hoe je vrij lopende vliegen kunt volgen om hun algemene bewegingsvermogen te beoordelen. Het aanbevolen protocol demonstreert de installatie en gegevensanalyse van de test met behulp van videotrackingsoftware.

Vrij lopende vliegen volgen: een methode om voortbeweging in Drosophila te beoordelen

Deze video beschrijft het Drosophila activity monitor (DAM) systeem dat wordt gebruikt om de motorische activiteit te volgen. Onderzoekers gebruiken activiteitsgegevens verzameld van de DAM om circadiaanse ritmes bij fruitvliegen te bestuderen. De aanbevolen protocolclip laat zien hoe u vliegen in het apparaat laadt en activiteitsgegevens opneemt voor circadiane experimenten.

Drosophila Activity Monitor (DAM): een methode om de motorische activiteit bij vliegen te meten

Met behulp van een webcam en een combinatie van gratis en goedkope software programma's, kan locomotief patronen in Drosophila melanogaster worden geanalyseerd om verschillen in de snelheid, afstand en tijd van de verschillende motorische activiteiten op te sporen.

Een Low-cost methode voor het analyseren van de inbeslagneming-achtige activiteit en beweging in<em&gt; Drosophila</em

Ziekte van Parkinson is een neurodegeneratieve aandoening die resulteert uit de degeneratie van dopaminerge neuronen in het centrale zenuwstelsel, waardoor voortbeweging defecten. Rotenone modellen ziekte van Parkinson in Drosophila. In dit document worden twee testen die zowel spontaan en schrikken geïnduceerde motoriek gebreken veroorzaakt door rotenon karakteriseren.

Methoden te karakteriseren Spontane en Schrik-geïnduceerde Locomotion in een-Rotenon geïnduceerde Parkinson&#39;s Disease Model van<em&gt; Drosophila</em

Dit rapport beschrijft een methode voor het meten van Drosophila larvenactiviteit met behulp van de TriKinetics Drosophila Activiteitsmonitor. Het apparaat gebruikt infraroodstralen om bewegingen van maximaal 16 individuele dieren te detecteren. Gegevens kunnen worden geanalyseerd om bewegingsparameters weer te geven, inclusief snelheden en de posities van de dieren binnen de testkamers.

Meting van larvale activiteit in de<em&gt; Drosophila</em&gt; Activity Monitor

Het huidige protocol beoordeelt de locomotorische activiteit van Drosophila door de beweging van vliegen in een handgemaakte arena te volgen en te analyseren met behulp van open-source software Fiji, compatibel met plug-ins om pixels van elk frame te segmenteren op basis van high-definition video-opname om parameters van snelheid, afstand, enz. Te berekenen.

Een eenvoudige techniek om locomotorische activiteit in Drosophila te testen

Het protocol presenteert een high-throughput, kosteneffectieve methode voor het beoordelen van neurotoxiciteit in de fruitvlieg door middel van de kwantificering van locomotorische disfunctie als alternatief voor traditionele zoogdiermodellen. Het heeft tot doel de neurotoxische effecten van farmaceutische verbindingen, milieuagentia of genetische modificaties te evalueren met behulp van een gevoelig, reproduceerbaar en ethisch gunstig model.

Gedragsanalyse van locomotorische disfunctie bij Drosophila melanogaster als uitlezing voor neurotoxiciteit

Dit protocol biedt een kader voor het beoordelen van door stress veroorzaakte gedragsveranderingen in Drosophila melanogaster. Door complementaire assays te combineren kunnen we activiteit, verkenning en besluitvorming voor individuele vliegen kwantificeren. De aanpak is flexibel en kan worden aangepast aan een breed scala aan studies die stressbiologie, metabolisme en neurogedragsfunctie onderzoeken.

Multimodale gedragsfenotypering van stress-geïnduceerde depressie-achtige toestanden bij Drosophila melanogaster

Leer hoe je spontane bewegingsactiviteit kwantificeert in Drosophila melanogaster met infraroodbundelmonitors. Deze methode biedt een betrouwbare aanpak om gedrag en genetische interacties te bestuderen.

Bepaling van de Spontane bewegingsactiviteit in

Meer video's verkennen