Name: Heterotope Mucosal engrafting Procedure voor Direct Drug Delivery naar de hersenen in Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 25 s
Description: Leer heterotopische mucosale transplantatie voor directe geneesmiddelafgifte aan de hersenen bij muizen. Deze methode omzeilt de bloed-hersenbarrière en maakt onderzoek naar hoogmoleculaire therapeutica mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Deze studie werd gefinancierd door de Mcihael J. Fox Foundation voor onderzoek 2011 Rapid Response Innovations Parkinson Awards Program. De financiers hadden geen rol in onderzoeksopzet, gegevensverzameling en-analyse, besluit tot publicatie, of voorbereiding van het manuscript.

Voorafgaand aan de operatie te zorgen dat alle procedures die moeten worden gedaan zijn goedgekeurd door IACUC en eventuele aanvullende ethische of juridische autoriteiten en gebruik humane behandeling van dieren praktijken. Dit omvat het gebruik van steriele operatie voorwaarden, verlamming van de muis met behulp van IACUC goedgekeurde methode, smeren muizen ogen met dierenarts zalf tijdens de operatie, en het verstrekken van postoperatieve zorg. Ga niet verder met een operatie als er een vraag of aspecten van de procedure zijn goedgekeurd. Alle procedures die hierin uitgevoerd werden goedgekeurd door de Boston University Institutional Animal Care en gebruik Comite. 1. Voorbereiding van de dieren en Chirurgische Supplies <ol><li> Autoclaaf alle chirurgische instrumenten die worden gebruikt tijdens de operatie. </li><li> Zorg ervoor dat alle technieken die worden uitgevoerd zijn goedgekeurd door de regelgevende instanties dier. </li></ol> 2. Het oogsten van het mucosale Graft <ol><li> Koos voor een genetisch identieke muizen van dezelfde leeftijd alsde experimentele muis en euthanaseren het in een IACUC goedgekeurde methode (hier: isofluraan stikken gevolgd door cervicale dislocatie). </li><li> Met behulp van chirurgische schaar, verwijder de huid rond de neus regio muis hoofd blootstellen van de schedel. </li><li> Met een pneumatische zaaimachine, teken met drie lijnen waarvan er twee zijdelings flankeren de nasale gebied en een derde overeenkomstig de ogen die de twee lijnen loodrecht verbindt. </li><li> Drill down ventraal om het neustussenschot scheiden van het omringende weefsel. Een breder pad schade aan het slijmvlies vermijden maar het zal ook moeilijker om het membraan te isoleren. Een smalle snit dichter bij middellijn wordt aanbevolen. </li><li> Gebruik een schaar om het septum vrij gesneden van elk weefsel vastgehouden aan het en bewaar het op een steriele zoutoplossing. Op dit moment is het transplantaat kan worden schoongemaakt om alle aangesloten weefsel te verwijderen. De ideale situatie is om onbeschadigd mucosale membranen blootgesteld aan weerszijden van het kraakbeen septum. Een grachterschip leveren membraan voor twee muizen ontvangen het oppervlak van het membraan is voldoende om de craniotomie sites hebben. Aanbevolen wordt het implantaat zo snel mogelijk gebruikt waarbij de onderzoeker door naar stap 3 zodra het transplantaat wordt geïsoleerd. </li></ol> 3. Chirurgische Implantatie van Mucosal Graft <ol><li> Met behulp van standaard, aseptische muizen chirurgische procedures, verdoven en monteer een muis in de stereological frame. Gebruik ongeveer 2% isofluraan in zuivere zuurstof met behulp van een knaagdier anesthesieapparatuur. </li><li> Immobiliseer de muis in een stereotaxische apparaat met oor bars en een neus houder. Solliciteer oogzalf om de ogen en wrijf de hoofdhuid met betadine en 75% ethanol voor drie rondes. Met behulp van een schaar of een tondeuse, verwijder de vacht op het hoofd. Expose de schedel met een scheermesje en het niveau van de kop. Voer een craniotomie boven de plaats van de hersenen die worden gedoseerd. Wanneer bijvoorbeeld gericht op het striatum gesneden 1,25 mmdiameter rond gat in de schedel (gecentreerd op LD: 1,00 mm; ML: 0,88 mm) met behulp van een pneumatische boor. Bevochtig de geboorde gebied met een steriele zoutoplossing en gebruik een scheermesje om de schedel te verwijderen. </li><li> Verwijder de dura voorzichtig met de punt van een naald. Bovendien kan dit worden bereikt door een minimale hoeveelheid weefsel lijm op de vochtige durale oppervlak. Zodra deze laag is uitgehard kan laterale beweging met een scheermesje tip gebruikt worden om het membraan te verwijderen. </li><li> Plaats het slijmvlies boven de hersenen oppervlak nemen uiterste zorg aan de epitheliale zijde houden geconfronteerd weg van de wond. Dit kan het beste gebeuren door de overdracht van de gehele septum op het oppervlak van de schedel naast het craniotomie site met pincet. Gebruik de punt van een paar chirurgische schaar, trek het membraan af van het kraakbeen en op de schedel en de hersenen oppervlak. Laat je niet door het membraan uitdrogen of aanraken met enig absorberend materiaal. De ent moet goed overlappen alle benige randen van de craniotomie site. </li><li> Bedek het transplantaat met een steriel stuk nitril. Dit dient om de hechting van de huid tijdens heling voorkomen het transplantaat. De nitril moet groot genoeg zijn om het gehele slijmvlies te dekken. Trim overmatige membraan indien nodig. Vermijd beweging van het nitril zodra het in contact komt met het implantaat is gekomen. </li><li> Sluit de huid met een lopende 5-0 steriele hechtdraad en laat de muis te herstellen voor 3-7 dagen voordat u verder gaat met de volgende stap. Verzorgen het nitril barrière of de mucosale ent tijdens sluiting huid niet te verstoren. </li></ol> 4. Toediening van Doseren Solution <ol><li> Na het veiligstellen van de verdoofde muis in het stereotaxisch frame, snijd de hechtdraad met een schaar en verwijder de overtollige huid rond de schedel. </li><li> Verwijder het nitril barrière en reinig het oppervlak van de schedel. Gebruik steriele zoutoplossing en wattenstaafjes om het gebied schoon totdat het transplantaat zichtbaar. Het kan nodig zijn om het transplantaat snijden met een scheermesje of groter dan d gegroeidesired oppervlakte. </li><li> Als het experiment langer dan een paar dagen zal zijn, is het verstandig om te implanteren minstens twee schedel schroeven aan het hoofd implantaat versterken. </li><li> Plaats de ruim boven het implantaat zodat de randen in contact met de schedel. Solliciteer cyaanacrylaatlijm op de kruising tussen de put en de schedel. Vul het goed met een steriele zoutoplossing en controleer of er geen lekken zijn. Putten zijn gemaakt van gesneden injectienaalden. </li><li> Solliciteer botcement op de schedel naar de bron vast te zetten. </li><li> Verwijder de zoutoplossing uit de put met een pipet. Was het ook een paar keer om te controleren of lijm heeft niet gelekt inch Voeg de gewenste oplossing; in dit geval 50 pl fluorescerende dextran wordt gebruikt. Verwacht wordt dat water oplosbare verbindingen met een soortgelijke polariteit gelijk dextran zal gedragen. Levering van hydrofobe verbindingen of suspensies niet onderzocht met deze methode. </li><li> Cap de bovenkant van de put met een cirkelvormig stuk nitril bevestigd aan deboven het gebruik van cyaanacrylaatlijm. Controleer de lijm niet in contact met de inhoud goed. </li></ol> 5. Analyse van Transmucosale Levering <ol><li> Nadat de gewenste hoeveelheid tijd is verstreken, verdoven de muis en wisselen de inhoud goed met een oplossing van blauwe kleurstof Evan&#39;s. Deze kleurstof wordt gebruikt om te controleren of het transplantaat was intact. </li><li> Na 30 min, verdoven de muis zwaar, verwijder de kleurstof oplossing, en euthanaseren via onthoofding. </li><li> Handmatig verwijderen van het implantaat en verwijder de hersenen met behulp van chirurgische schaar. Wees voorzichtig om de graft op zijn plaats te houden. </li><li> Na verwijdering flash-bevriezen de hersenen in een oplossing van isobutaan gekoeld in een droog ijsbad. </li><li> De hersenen in te bedden in Optimal Cutting Temperatuur (oktober) oplossing en plak bij 50 micrometer. </li><li> Plaats de gewenste segmenten direct op een microscoopglaasje. </li><li> Afbeelding de plak met behulp van een fluorescentie microscoop zodra LGO oplossing gedroogd. </li></ol>

<ol><li>Cardoso, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Looking+at+the+blood-brain+barrier%3A+Molecular+anatomy+and+possible+investigation+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Rev%22%5BJournal%5D)">Looking at the blood-brain barrier: Molecular anatomy and possible investigation approaches.</a> Brain Res. Rev. 64, 328-363 (2010).</li>
<li>Pardridge, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+transport+across+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Drug transport across the blood-brain barrier.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 32, 1959-1972 (2012).</li>
<li>Chen, Y., Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modern+methods+for+delivery+of+drugs+across+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Modern methods for delivery of drugs across the blood-brain barrier.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 64, 640-665 (2012).</li>
<li>Cheng, F. -C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor+protects+against+1-methyl-4-phenyl-1%2C2%2C3%2C6-tetrahydropyridine+%28MPTP%29-induced+neurotoxicity+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Glial cell line-derived neurotrophic factor protects against 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP)-induced neurotoxicity in C57BL/6 mice.</a> Neurosci. Lett. 252, 87-90 (1998).</li>
<li>Grondin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((controlled+GDNF+infusion+promotes+structural+and+functional+recovery+in+advanced+parkinsonian+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">controlled GDNF infusion promotes structural and functional recovery in advanced parkinsonian monkeys.</a> Brain. 125, 2191-2201 (2002).</li>
<li>Kirik, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localized+striatal+delivery+of+GDNF+as+a+treatment+for+Parkinson+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Localized striatal delivery of GDNF as a treatment for Parkinson disease.</a> Nat. Neurosci. 7, 105-110 (2004).</li>
<li>Pardridge, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+and+gene+targeting+to+the+brain+with+molecular+trojan+horses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Drug and gene targeting to the brain with molecular trojan horses.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 1, 131-139 (2002).</li>
<li>Pardridge, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+delivery+of+protein+and+non-viral+gene+therapeutics+with+molecular+Trojan+horses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier delivery of protein and non-viral gene therapeutics with molecular Trojan horses.</a> J. Control. Release. 122, 345-348 (2007).</li>
<li>Bellavance, M. -A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+blood-brain+barrier+disruption+as+a+CNS+delivery+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22AAPS+J%22%5BJournal%5D)">Recent advances in blood-brain barrier disruption as a CNS delivery strategy.</a> AAPS J. 10, 166-177 (2008).</li>
<li>Merkus, F. H. M., Berg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+nasal+drug+delivery+bypass+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Drugs+R.+D%22%5BJournal%5D)">Can nasal drug delivery bypass the blood-brain barrier.</a> Drugs R. D. 8, 133-144 (2007).</li>
<li>Dhuria, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+delivery+to+the+central+nervous+system%3A+Mechanisms+and+experimental+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharm.+Sci%22%5BJournal%5D)">Intranasal delivery to the central nervous system: Mechanisms and experimental considerations.</a> J. Pharm. Sci. 99, 1654-1673 (2010).</li>
<li>Illum, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+drug+delivery-possibilities%2C+problems+and+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">Nasal drug delivery-possibilities, problems and solutions.</a> J. Control. Release. 87, 187-198 (2003).</li>
<li>Craft, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+insulin+therapy+for+alzheimer+disease+and+amnestic+mild+cognitive+impairment%3A+A+pilot+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Intranasal insulin therapy for alzheimer disease and amnestic mild cognitive impairment: A pilot clinical trial.</a> Arch. Neurol. 69, 29-38 (2012).</li>
<li>Freiherr, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+insulin+as+a+treatment+for+Alzheimer%27s+Disease%3A+A+review+of+basic+research+and+clinical+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Drugs%22%5BJournal%5D)">Intranasal insulin as a treatment for Alzheimer's Disease: A review of basic research and clinical evidence.</a> CNS Drugs. 27, 505-514 (2013).</li>
<li>Gill, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+brain+infusion+of+glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor+in+Parkinson+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Direct brain infusion of glial cell line-derived neurotrophic factor in Parkinson disease.</a> Nat. Med. 9, 589-595 (2003).</li>
<li>Love, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor+induces+neuronal+sprouting+in+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Glial cell line-derived neurotrophic factor induces neuronal sprouting in human brain.</a> Nat. Med. 11, 703-704 (2005).</li>
<li>Antunes, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+nasal+septa+for+respiratory+epithelial+air-liquid+interface+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Murine nasal septa for respiratory epithelial air-liquid interface cultures.</a> BioTechniques. 43, 195-204 (2007).</li>
<li>Bleier, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permeabilization+of+the+blood-brain+barrier+via+mucosal+engrafting%3A+implications+for+drug+delivery+to+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Permeabilization of the blood-brain barrier via mucosal engrafting: implications for drug delivery to the brain.</a> PLoS ONE. 8, (2013).</li>
<li>Bernal-Sprekelsen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Closure+of+cerebrospinal+fluid+leaks+prevents+ascending+bacterial+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22Rhinology%22%5BJournal%5D)">Closure of cerebrospinal fluid leaks prevents ascending bacterial meningitis.</a> Rhinology. 43, 277-281 (2005).</li>
<li>Bleier, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-assisted+cerebrospinal+fluid+leak+repair%3A+An+animal+model+to+test+feasibility%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol.+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">Laser-assisted cerebrospinal fluid leak repair: An animal model to test feasibility.</a> Otolaryngol. Head Neck Surg. 137, 810-814 (2007).</li>
</ol>

Benjamin S. Bleier MD is lood uitvinder van voorlopige octrooi voor methoden van drug delivery aan het centrale zenuwstelsel.

De lastigste stap van de hierin beschreven werkwijze is de succesvolle overdracht van een voldoende groot slijmvlies op het hersenoppervlak. Deze stap wordt aanzienlijk vergemakkelijkt indien het geoogste neustussenschot is groot genoeg en goed schoongemaakt. Als het ventrale gedeelte van het septum wordt afgekapt, moet een nieuw implantaat worden verkregen. De boorhoek moet loodrecht op de muis zijn hoofd dat de mucosale membraan niet beschadigd door de boor. Indien een groter dan aanbevolen boorbaan genomen zal het ve...

De behandeling van neurologische en psychiatrische ziekten wordt ernstig belemmerd door de aanwezigheid van de bloed-hersenbarrière (BBB) ​​dat meer dan 95% van alle mogelijke farmaceutische middelen voorkomt bereiken het centrale zenuwstelsel 1-3. Bijvoorbeeld, gliale afgeleide neurotrofe factor (GDNF) is effectief gebleken bij de behandeling van de ziekte van Parkinson als rechtstreeks geïnjecteerd in de hersenen te zijn, maar werkt niet als systemisch afgegeven, omdat deze niet kan doordringen de BBB 4-6. Talrijke benaderde zijn ontwikkeld om te proberen dit probleem te omzeilen. Verbetering van systemische toediening van neurotheraputics is aangetoond met geneesmiddel conjugaten met antilichamen selectief voor transporteiwitten op de hersenen capillaire endotheel; deze werkwijze echter niet aangetoond toepasbaar voor een breed scala van geneesmiddelen 7,8 te zijn. Daarnaast heeft osmotische opening van de BBB gebruikt kliniekally, maar deze methode lijdt aan systemische dosis van het geneesmiddel in tegenstelling tot een gerichte aflevering aan de hersenen interessegebied 9. Aanzienlijke inspanningen werden in het optimaliseren transnasal levering in de hoop direct gericht op de hersenen 10-12 zetten. Hoewel enig succes is geboekt, zijn overtuigende resultaten alleen verkregen voor geneesmiddelen met endogene receptoren, zoals insuline 13,14 bezitten. Verder is het mechanisme van transnasal levering is controversieel met aanwijzingen indirecte binnenkomst in de hersenen via olfactorische neuron opname of via de bloedbaan 11 geweest. Direct transcraniële productietijd middels implanteerbare katheters is bereikt, maar deze procedure is zeer invasief en geassocieerd met talrijke complicaties 15,16. Tot op heden is er geen algemeen minimaal invasieve methode hoog molecuulgewicht leveren in de hersenen. Die hierin is een muizen chirurgische ingreepdat zorgt voor een halfdoorlaatbare interface met de hersenen. Dit wordt bereikt door enten een slijmvlies explantaat 17 via een chirurgische craniotomie defect in een muis. Met deze procedure is aangetoond dat oplosbare verbindingen tot 500 kDa in het centrale zenuwstelsel (direct in het hersenparenchym en in cerebrospinale vloeistof) zowel tijd molecuulgewicht afhankelijke wijze 18 worden geleverd. Deze methode van het omzeilen van de BBB is een model voor schedelbasis defect reparaties bij mensen die vascularized mucosale enten gebruikt om gaten in de schedel te herstellen volgende transnasal endoscopische chirurgie 19,20.

<table><tbody><tr><td>Muizen</td><td>Taconic</td><td>C57BL/6</td><td></td></tr><tr><td>Isofluraan</td><td>Piramal Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Student schaar</td><td>Fine Science Tools</td><td>91461-11</td><td></td></tr><tr><td>Pneumatische boor</td><td>MTI Dental</td><td>333-CB</td><td></td></tr><tr><td>Boorkop</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pincet</td><td>Fine Science Tools</td><td>91106-12</td><td></td></tr><tr><td>0,9% natriumchloride-injectie USP</td><td>Abbott Laboratories</td><td>4925</td><td></td></tr><tr><td>Polystyreen petrischaal</td><td>Fisher</td><td>08-757-12</td><td>voor tijdelijk opslag van transplantaat</td></tr><tr><td>Kralensterilisator</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>Zuurstof/isofluraan systeem</td><td>SurgiVet</td><td>V720100</td><td></td></tr><tr><td>Temperatuurregelsysteem</td><td>Physitemp</td><td>TCAT-2LV</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxisch instrument voor kleine dieren</td><td>KOPF</td><td>Model 940</td><td></td></tr><tr><td>Oogzalf</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elektrisch scheerapparaat</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wattenstaafjes</td><td>Fisher</td><td>23-400-106</td><td></td></tr><tr><td>7,5% Providon-jood</td><td></td><td></td><td>Betadine chirurgische scrub</td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische blad roestvrij</td><td>Feather</td><td>2976#10</td><td></td></tr><tr><td>Scalpelgreep - #3</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>3% Hydogenperoxide</td><td></td><td></td><td>voor het schoonmaken van de schedel</td></tr><tr><td>Vetbond weefselkleefstof</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Naalden</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305176</td><td>naaldtip afgesneden en gebruikt alsmede</td></tr><tr><td>Spuiten</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>309597</td><td></td></tr><tr><td>Nitril handschoenen</td><td>Denville Scientific Inc</td><td>G4162</td><td>voor goede sluiting en bescherming van transplantaat</td></tr><tr><td>5-0 Nylon hechtdraad</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Student Halsey naaldhouder</td><td>Fine Science Tools</td><td>91201-13</td><td></td></tr><tr><td>Cyanoacrylaatkleefstof</td><td></td><td></td><td>commercieel verkrijgbare superlijm</td></tr><tr><td>Tandartskit, 1 lb, roze ondoorzichtig</td><td>Stoelting</td><td>51458</td><td></td></tr><tr><td>Isobutaan (2-methylbutaan)</td><td>Aldrich</td><td>M32631</td><td>voor droogijsbad</td></tr><tr><td>Droogigs</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

heterotope mucosal engrafting procedure voor direct drug delivery naar de hersenen in muizen

Heterotopic Mucosal Engrafting Procedure for Direct Drug Delivery to the Brain in Mice

Levering van geneesmiddelen in de hersenen wordt belemmerd door de aanwezigheid van de bloed-hersenbarrière (BBB) ​​die de doorgang van polaire en hoog molecuulgewicht uit de bloedbaan en in het hersenweefsel beperkt. Sommige directe levering succes bij mensen is bereikt via de implantatie van transcraniële katheters; maar deze methode is zeer invasief en geassocieerd met talrijke complicaties. Een minder invasief alternatief zou zijn om de hersenen te doseren via een chirurgisch geïmplanteerde, semipermeabel membraan zoals neusslijmvlies die wordt gebruikt om schedelbasis gebreken te herstellen na endoscopische transnasal tumorverwijdering chirurgie in mensen. Geneesmiddeloverdracht hoewel dit membraan zou effectief omzeilen de BBB en diffuse direct in de hersenen en de cerebrospinale vloeistof. Geïnspireerd door deze aanpak, een chirurgische benadering in muizen ontwikkeld die een donor septum slijmvlies geënt op een extracraniale chirurgische BBB defect gebruikt. Dit model is aangetoond effectieflaten de passage van verbindingen met hoog molecuulgewicht in de hersenen. Aangezien vele kandidaat-geneesmiddelen zijn in staat die de BBB, dit model is waardevol voor preklinisch testen van nieuwe therapieën voor neurologische en psychiatrische ziekten.

Het verkrijgen van een voldoende grote neustussenschot explantaat is cruciaal voor de volgende stappen. Dit kan worden bereikt door het boren ter plaatse van de donor muis schedel figuur 1a. Snijden langs dit pad een explantaat voldoende de grootte te produceren zoals getoond in figuur 1b. Wanneer de boordiepte niet diep genoeg is, zal het transplantaat afgekapt en het zal moeilijk zijn om een ​​voldoende grote membraan naar de hersenen bedekken verkrijgen. Boren meer lateraal dan de vo...

Een muis model van menselijke endoscopische schedelbasis reconstructie is ontwikkeld dat een semi-permeabel interface tussen de hersenen en de neus met behulp van nasale mucosale enten creëert. Deze methode staat onderzoekers aflevering aan het centrale zenuwstelsel van hoogmoleculaire geneesmiddelen die anders zijn uitgesloten door de bloed-hersenbarrière bij systemisch toegediend bestuderen.

Heterotope Mucosal engrafting Procedure voor Direct Drug Delivery naar de hersenen in Muizen

Delivery of therapeutics into the brain is impeded by the presence of the blood-brain barrier (BBB) which restricts the passage of polar and high ...

Het algemene doel van deze procedure is het succesvol uitvoeren van een heterotrofe mucosa-transplantatie voor het afleveren van verbindingen in de hersenen. Dit wordt bereikt door eerst een neustussenschottransplantaat te isoleren van een donormuis. De tweede stap is het transplanteren van het slijmvlies van het neustussenschot naar een schedeldefect bij een recipiënte muis.Vervolgens wordt het brein gedurende een gewenste periode gedoseerd via het transplantaat. De laatste stap is het analyseren van het gevolg van de doseringsprocedure in het brein door middel van fluorescentie, microscopie of immunohistochemie om de diffusie van de toegediende verbindingen in het hersenparenchym aan te tonen. Het gebruik van neurofarmaceutica is sterk beperkt vanwege de aanwezigheid van de bloed-hersenbarrière.We hebben een techniek ontwikkeld gebaseerd op humane endoscopische transnasale chirurgie, waarbij we mucosa kunnen transplanteren in een opening in de bloed-hersenbarrière en dit kunnen gebruiken als kanaal voor het direct toedienen van geneesmiddelen aan de hersenen. Hier gaat Richie Komen, een postdoctoraal onderzoeker in het laboratorium van Han aan de Boston University, deze techniek

heterotopic-mucosal-engrafting-procedure-for-direct-drug-delivery-to

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Source: Zamboni, M., et al., Induction of Leptomeningeal Cells Modification Via Intracisternal Injection. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the procedure of delivering an inducer drug into the cisterna magna of an anesthetized mouse. The injection selectively induces fluorescent marker expression in brain surface cells accessible via cerebrospinal fluid, confirmed by fluorescence imaging.

Targeted Drug Delivery in a Mouse Model via Cisterna Magna Injection

In this video, we describe the procedure to deliver human-derived tumor cells into the cisterna magna of a mouse’s brain. The orthotopic mouse model can be used to study metastatic spread of cancer to the cranial meninges.

Surgical Cisterna Magna Injection: A Method for Administering Tumor Cells Directly into Central Nervous System of Murine Model

This video demonstrates ommaya mediated intracerebroventricular injection in a mouse model. The method enables localized delivery of potential drug candidates and evades the blood-brain barrier.

Intracerebroventricular Injection in Mouse: An Ommaya Mediated Direct Drug Administration Method to Deliver Drugs to Cerebral Ventricles of Mouse Brain

This video presents a procedure for intracranial cannula implantation in a brain tumor mouse model, to facilitate the administration of an immunotherapeutic agent. The delivery of glypican-2-specific chimeric antigen receptor T cells in the tumor microenvironment triggers T cell activation, resulting in tumor lysis and tumor regression.

Intracranial Cannular Implantation in a Mouse to Deliver Therapeutic Agents to Brain Tumors

Source: Leda, A. R., et al. Mouse Microsurgery Infusion Technique for Targeted Substance Delivery into the CNS via the Internal Carotid Artery. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates a microsurgical procedure designed to facilitate the targeted infusion of a test substance into the brain via the internal carotid artery (ICA). The procedure involves precise suturing and vascular manipulation to temporarily restrict blood flow, ensuring controlled delivery. A capillary tube is inserted into...

Targeted Substance Delivery to the Mouse Brain via Infusion into the Internal Carotid Artery

Het huidige protocol beschrijft een microchirurgie-infusietechniek bij muizen, die stoffen effectief rechtstreeks in de hersenen afgeeft via de interne halsslagader.

Mouse Microchirurgie Infusion Techniek voor gerichte afgifte van een substantie in het centraal zenuwstelsel via De interne halsslagader

Stamcellen zijn veelbelovende therapeutische dragers om hersentumoren te behandelen als gevolg van hun intrinsieke tumor tropisme. Niet-invasieve intranasale stamcelafgifte omzeilt de bloedbreinbarrière en toont een sterk potentieel voor klinische vertaling. In dit artikel worden de basisprincipes van intranasale stamcellen in een muismodel van glioma samengevat.

Intranasale Levering van Therapeutische Stamcellen aan Glioblastoma in een Muis Model

Hier presenteren we een protocol met behulp van een muis positionerings apparaat dat de juiste plaatsing van muizen mogelijk maakt voor de intranasale toediening van een hersen gerichte peptide-siRNA-formulering die effectieve gen-uitschakeling in het centrale zenuwstelsel toelaat.

Een positionerings apparaat voor de plaatsing van muizen tijdens intranasale siRNA levering aan het centrale zenuwstelsel

Hier beschrijven we een murine xenograft model dat functioneel lijkt op een Ommaya reservoir bij patiënten. We ontwikkelden de Murine Ommaya om nieuwe therapieën te bestuderen voor de universeel fatale leptomeningeale ziekte.

Een Murine Ommaya Xenograft-model om direct-gerichte therapie van leptomeningeale ziekte te bestuderen

Het hier gepresenteerde protocol maakt de transplantatie van geïnduceerde pluripotente van stamcellen afgeleide menselijke microglia (iPSMG) in de hersenen mogelijk via een transnasale route bij immunocompetente muizen. De methode voor de bereiding en transnasale transplantatie van cellen en de toediening van cytokinemengsel voor het onderhoud van iPSMG wordt getoond.

Transplantatie van door de mens geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide microglia in immunocompetente muizenhersenen via niet-invasieve transnasale route

De ontwikkeling van orthotope pediatrische hersentumormodellen vereist nauwgezette precisie, waarbij een stereotactisch apparaat wordt gebruikt om kankercellen nauwkeurig te implanteren. De hier gepresenteerde methodologie schetst de stappen die betrokken zijn bij het voorbereiden van hersentumorcellen, het uitvoeren van intracraniële injecties en het implementeren van een postoperatief monitoringsysteem om implantatie van hersentumoren te beoordelen.

Opstelling van orthotope patiënt-afgeleide xenotransplantaatmodellen voor hersentumoren met behulp van een stereotactisch apparaat

Leer heterotopische mucosale transplantatie voor directe geneesmiddelafgifte aan de hersenen bij muizen. Deze methode omzeilt de bloed-hersenbarrière en maakt onderzoek naar hoogmoleculaire therapeutica mogelijk.

Heterotope Mucosal engrafting Procedure voor Direct Drug Delivery naar de hersenen in Muizen

Meer video's verkennen