Name: Spinal Cord doorsnijding in het larvale zebravis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-21T14:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Leer een reproduceerbare methode voor ruggenmergdoorsnijding in larvale zebrafish met behulp van een geslepen micro-injectiepipet. Deze techniek maakt snel herstel van sensorische functie en C-bend beweging mogelijk voor regeneratief onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We zijn dank verschuldigd aan de Universiteit van Utah zebravis faciliteit voor veeteelt. RID werd ondersteund door NIH R56NS053897 en LKB was een predoctorale opleiding wordt ondersteund door de HHMI Med-Into-Grad initiatief.

Zebravis zijn gerezen en gefokt volgens standaardprocedures; experimenten werden goedgekeurd door de Universiteit van Utah Institutional Animal Care en gebruik Comite. 1. Voorbereiding van de Chirurgie Platen <ol><li> Maak chirurgie platen met behulp van 60 mm petrischaaltjes en Sylgard 184 siliconelastomeerfase Kit, na instructies van de fabrikant. Vul gerechten hoogste halfvol en laten polymeriseren. Opslag bij kamertemperatuur. </li></ol> 2. Bereiding van micropipetten <ol><li> Fabriceren micropipetten door verhitting en trekken dunwandige borosilicaatglas capillaire buis in een micropipet trekker met dezelfde instellingen voor het maken van micro-injectie naalden. </li><li> Onder een dissectie microscoop, breek punt van micropipet tot ongeveer 200 micrometer in doorsnede met een pincet. </li><li> Schuine gebroken rand met een microgrinder aanvankelijk 35 °, gevolgd door een tweede afschuining bij 25 °. Zorgen tip is scherp en SMOOTH. Store afgewerkt afgeschuind micropipet in een petrischaal op een kleine hoeveelheid klei. </li></ol> 3. Voorbereiding van de zebravis Larven <ol><li> 7 dagen vóór de ingreep, het opzetten van paring tanks van mannelijke en vrouwelijke zebravis. </li><li> Verzamel embryo&#39;s de volgende ochtend 3 uur na de lampjes gaan branden om maximaal rendement te garanderen. Bij gebruik van een transgene reporter lijn zoals Tg (elevl3: eGFP) knu3, sorteren bevruchte embryo&#39;s 100/100 mm plaat in 25 ml van de E3 op 28.5 ° C. Bij gebruik van wild-type, soort bevruchte embryo&#39;s 25/100 mm plaat in 25 ml van de E3 op 28.5 ° C. </li><li> Bij gebruik van een verslaggever lijn, screenen van embryo&#39;s voor fluorescentielampen expressie op 48 hpf. Laat geïdentificeerd embryo&#39;s rijpen bij een dichtheid van 25/100 mm plaat in 25 ml E3 28,5 ° C. </li><li> Als larven zijn 5 dpf, bereiden chirurgie plaat door het bedekken Sylgard met E2 + 10 mg / L gentamycinesulfaat (GS) + tricaïne. <ol><li> Bereid herstel gerecht door toevoeging van 25 ml E2 + GS om een ​​100 mm Petri dish. </li><li> Bereid scalpel met tape bij elkaar drie swabs. Dit zal een driehoekig instrument met drie groeven vormen. </li><li> Monteer een micropipet bereid op de zwabbers door met tape in een van de groeven. </li></ol></li><li> Als hergebruik micropipetten, spoelen totdat duidelijk met E2 + GS met behulp van een 1 ml spuit en een 27 G naald voorafgaand aan montage op swabs. </li></ol> 4. Chirurgie <ol><li> Verdoven 1 plaat van larven in een tijd (25 vissen) met tricaïne. Vis voldoende verdoofd als ze niet langer contact reactie vertonen. Het is belangrijk dat de vis volledig voorafgaand aan chirurgie worden verdoofd, anders zullen zij trillen wanneer de scalpel ze aanraakt. Operatie wordt uitgevoerd onder een dissectie microscoop. </li><li> Transfer larven aan de operatie plaat. <ol><li> Onder maximale vergroting, draai een larve in een tijd, zodat het ligt op zijn kant met zijn rug het dichtst bij de hand houden van de scalpel. </li><li> Positie tang zodat ze rusten op de Sylgard,schuin over de breedte van de larve. </li><li> Bracing de glazen scalpel tegen een van de armen van de tang, gesneden in de dorsale laterale vlak van de larve ter hoogte van de anale poriën, waarbij u niet te snijden dan de ventrale rand van de notochord. Draai de scalpel om het ruggenmerg te verbreken. </li><li> Herhaal met de rest larven. Opmerking: als een larve bloedt, zal het niet herstellen van de operatie. Verwijder direct de larve van de operatie bord en euthanaseren het via tricaïne overdosis. </li></ol></li><li> Zodra een operatie aan de partij van de larven is voltooid, overdracht gewonde dieren aan het herstel plaat. Dit is om de clearing van anesthesie ondersteunen. <ol><li> Let op: bij het verzamelen gewond larven voor de overdracht, zorg ervoor dat ze worden eerst verzameld kop of staart: niet de verwonding niet benadrukken door het buigen van de larven. Opmerking: Alle toestellen voor operatie kan worden hergebruikt, waaronder de micropipetten. </li></ol></li></ol> 5. Recovery <ol><li> Transfer gewonden larven van het herstel plaat 100 mm platen gevuld met 25 ml E2 + GS bij een dichtheid van 25/plate. Laat om te herstellen in een 28,5 ° C incubator. </li><li> Controleer platen dagelijks, het verwijderen van zieke en dode dieren. Laat de media niet veranderen totdat Coleps (zoetwater protozoa) zijn zichtbaar in de media. Bij het wijzigen van de media, hoeft de vis niet over te dragen aan een nieuwe plaat; in plaats daarvan, verwijder zoveel media mogelijk en overspoelen de zelfde plaat met nieuwe media. Herhalen als nodig is om Coleps bevolking te verminderen. </li><li> Dagelijks te voeden met een kleine hoeveelheid poeder bak eten. Opmerking: Levend voedsel (bv, pantoffeldiertjes of rotiferen) kan niet aan benadeelden larven worden gevoed nadat zij motoriek hebben hersteld. Anders wordt het levend voer de verwondingsplaats koloniseren en doodt de larven. </li></ol>

<ol><li>Houweling, D. A., Bär, P. R., Gispen, W. H., Joosten, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+injury%3A+bridging+the+lesion+and+the+role+of+neurotrophic+factors+in+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+brain+research%22%5BJournal%5D)">Spinal cord injury: bridging the lesion and the role of neurotrophic factors in repair.</a> Progress in brain research. 117, 455-471 (1998).</li>
<li>Mikami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+of+dendritic+cells+in+injured+adult+spinal+cord+results+in+activation+of+endogenous+neural+stem%2Fprogenitor+cells+leading+to+de+novo+neurogenesis+and+functional+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience+research%22%5BJournal%5D)">Implantation of dendritic cells in injured adult spinal cord results in activation of endogenous neural stem/progenitor cells leading to de novo neurogenesis and functional recovery.</a> Journal of neuroscience research. 76 (4), 453-465 (2004).</li>
<li>Chernoff, E. A. G., Sato, K., Corn, A., Karcavich, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+regeneration%3A+intrinsic+properties+and+emerging+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cell+%26+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Spinal cord regeneration: intrinsic properties and emerging mechanisms.</a> Seminars in Cell & Developmental Biology. 13 (5), 361-368 (2002).</li>
<li>Kuscha, V., Barreiro-Iglesias, A., Becker, C. G., Becker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+of+tyrosine+hydroxylase+and+serotonergic+systems+in+the+regenerating+spinal+cord+of+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+comparative+neurology%22%5BJournal%5D)">Plasticity of tyrosine hydroxylase and serotonergic systems in the regenerating spinal cord of adult zebrafish.</a> The Journal of comparative neurology. 520 (5), 933-951 (2012).</li>
<li>Becker, C. G., Lieberoth, B. C., Morellini, F., Feldner, J., Becker, T., Schachner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L1.1+is+involved+in+spinal+cord+regeneration+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%3A+The+Official+Journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">L1.1 is involved in spinal cord regeneration in adult zebrafish.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 24 (36), 7837-7842 (2004).</li>
<li>Hui, S. P., Dutta, A., Ghosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+response+after+crush+injury+in+adult+zebrafish+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%3A+An+Official+Publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">Cellular response after crush injury in adult zebrafish spinal cord.</a> Developmental Dynamics: An Official Publication of the American Association of Anatomists. 239 (11), 2962-2979 (2010).</li>
<li>Goldshmit, Y., Sztal, T. E., Jusuf, P. R., Hall, T. E., Nguyen-Chi, M., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf-dependent+glial+cell+bridges+facilitate+spinal+cord+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Fgf-dependent glial cell bridges facilitate spinal cord regeneration in zebrafish.</a> The Journal of neuroscience: the official journal of the Society for Neuroscience. 32 (22), 7477-7492 (2012).</li>
<li>Reimer, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+regeneration+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%3A+The+Official+Journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Motor neuron regeneration in adult zebrafish.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 28 (34), 8510-8516 (2008).</li>
<li>Hale, M. E., Ritter, D. A., Fetcho, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+confocal+study+of+spinal+interneurons+in+living+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+comparative+neurology%22%5BJournal%5D)">A confocal study of spinal interneurons in living larval zebrafish.</a> The Journal of comparative neurology. 437 (1), 1-16 (2001).</li>
<li>Bhatt, D. H., Otto, S. J., Depoister, B., Fetcho, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+AMP-induced+repair+of+zebrafish+spinal+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cyclic AMP-induced repair of zebrafish spinal circuits.</a> Science. 305 (5681), 254-258 (2004).</li>
<li>McClenahan, P., Troup, M., Scott, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fin-tail+coordination+during+escape+and+predatory+behavior+in+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Fin-tail coordination during escape and predatory behavior in larval zebrafish.</a> PloS one. 7 (2), (2012).</li>
<li>Kim, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repressor+activity+of+Headless%2FTcf3+is+essential+for+vertebrate+head+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Repressor activity of Headless/Tcf3 is essential for vertebrate head formation.</a> Nature. 407 (6806), 913-916 (2000).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Bij de eerste leren van deze techniek, raden we proberen niet meer dan 50-100 doorsnijdingen in een enkele sessie. Na het beheersen van deze techniek zijn we in staat om het doornemen tot 300 embryo&#39;s per uur; echter, dit niveau van throughput vereist een paar maanden van wekelijkse praktijk. We raden ook aan het oefenen met een verslaggever lijn en verifiëren volledige doorsnijding tot de incidentie van onvolledige ruggenmerg doorsnijding wordt teruggebracht tot minder dan 1%. Ruggenmer...

Belangrijke trauma aan het menselijke ruggenmerg resulteert vaak in permanente verlamming en gevoelsverlies onder het niveau van schade als gevolg van het onvermogen om axons teruggroeien of hervatten neurogenese 1,2. In tegenstelling tot zoogdieren, echter anamniotes waaronder salamanders en zebravis (Danio rerio) tonen krachtig herstel, zelfs na volledige ruggenmerg doorsnijding 3,4. De volwassen zebravis is een goed uitgewerkt model voor het bestuderen van het herstelproces na dwarslaesie 5-7. Na volledige ruggenmerg doorsnijding, is herstel van sensorische en locomotief functie waargenomen in de volwassen zebravissen met 6 weken na het letsel 8. Om het regeneratieve proces in vivo onderzoeken we kwamen de transparante larvale zebravis 9. Hier presenteren we een methode om het ruggenmerg van een 5 dagen na de bevruchting (DPF) larvale zebravis usi doorsnijdenng een afgeschuinde micro-injectie pipet als een scalpel, gewijzigd van Bhatt, et al.. 10 Deze methode ondersteunt high throughput, lage sterfte en reproduceerbaarheid. Met de praktijk, kan 300 larven / uur worden doorsneden, en meer dan 6 maanden van doorsnijdingen, waaronder meer dan 3600 dieren, 98.75% ± 0,72% overleefde tot 7 dagen na het letsel (dpi). Onze gegevens blijkt snel herstel van de sensorische en motoriek ook: op 1 dpi, wordt alle verkeer door de gewonde vis gedreven door slechts borstvin motoriek. Echter, larven beginnen te reageren op de naald contact caudaal wolfraam te doorsnijden met 2 dpi, herstel de C-bocht beweging door 3 dpi, en weer roofzuchtige zwemmen met 5 dpi 11. Met behulp antilichaamkleuring tegen geacetyleerd tubuline, hebben we bevestigd dat axonen afwezig zijn van het letsel site op 1 dpi, maar het letsel website hebben doorkruist door 5 dpi. Wij geloven dat dit protocol een waardevolle methode voor de studie van axonale hergroei en neurogenese in het ruggenmerg na verwonding. </p&gt;

<table><tbody><tr><td>60 mm Petri dish</td><td>VWR</td><td>82050-544</td><td></td></tr><tr><td>100 mm Petri dish</td><td>VWR</td><td>89038-968</td><td></td></tr><tr><td>PDMS, Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9644388</td><td></td></tr><tr><td>borosilicate capillary tubing: OD 1.00 mm, ID 0.78 mm</td><td>Warner Instruments Inc.</td><td>64-0778</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Fine Scientific Tools Inc.</td><td>11252-30</td><td></td></tr><tr><td>Disssection microscope</td><td>Nikon</td><td>SMZ6454</td><td></td></tr><tr><td>Microgrinder</td><td>Narishige</td><td>EG-44</td><td></td></tr><tr><td>Gentamycin Sulfate</td><td>Amresco Inc.</td><td>0304-5G</td><td>dissolve in water 10 mg/ml, store at -20 &deg;C</td></tr><tr><td>Tricaine</td><td>Acros Organics</td><td>118000100</td><td></td></tr><tr><td>Cotton tipped applicator, wood, 6-inch</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-101</td><td></td></tr><tr><td>1 ml syringe</td><td>BD</td><td>309625</td><td></td></tr><tr><td>27 G needle</td><td>BD</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Fry food</td><td>Argent Labs</td><td>F-ARGE-PTL-CN</td><td>store at -20 &deg;C</td></tr><tr><td>Micropipette puller</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>Model P-97</td><td>Box Filament FB330B</td></tr><tr><td colspan="4">20x E2 (1 L); store at RT</td></tr><tr><td>17.5 g NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S671-500</td><td></td></tr><tr><td>0.75 g KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217-500</td><td></td></tr><tr><td>2.90 g CaCl2&middot;2H2O</td><td>Sigma</td><td>C7902-500G</td><td></td></tr><tr><td>4.90 g MgSO4&middot;7H2O</td><td>Merck</td><td>MX0070-1</td><td></td></tr><tr><td>0.41 g KH2PO4</td><td>Fisher Scientific</td><td>P285-500</td><td></td></tr><tr><td>0.12 g Na2HPO4</td><td>Sigma</td><td>S0876-500G</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">500x NaCO3 (10 ml); make fresh, discard extra</td></tr><tr><td>0.35 g NaCO3</td><td>Sigma</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">1x E2 (1 L); store at RT</td></tr><tr><td>50 ml 20x E2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 ml fresh 500x NaCO3</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

spinal cord doorsnijding in het larvale zebravis

Spinal Cord Transection in the Larval Zebrafish

Zoogdieren falen in sensorische en motorische herstel na dwarslaesie door gebrek aan axonale hergroei onder het niveau van zowel de schade als een onvermogen om spinale neurogenese hervatten. Sommige anamniotes waaronder de zebravis Danio rerio vertonen zowel sensorische en functioneel herstel zelfs na volledige doorsnijding van het ruggenmerg. De volwassen zebravis is een gevestigde modelorganisme voor het bestuderen van regeneratie na dwarslaesie, met sensorische en motorische herstel van 6 weken na het letsel. Om te profiteren van in vivo analyse van het regeneratieve proces in de transparante larvale zebravis en genetische hulpmiddelen niet in de volwassen toegankelijke nemen, gebruiken we de larvale zebravis regeneratie studie na ruggenmerg doorsnijding. Hier laten we een methode voor het reproduceerbaar en verifieerbaar transecting het larvale ruggenmerg. Na doorsnijding, uit onze gegevens blijkt zintuiglijke recovery begin op 2 dagen na het letsel (dpi), with de C-bocht beweging detecteerbaar met 3 dpi en hervatting van de gratis zwemmen met 5 dpi. Zo stellen wij de larvale zebravis als een metgezel instrument om de volwassen zebravissen voor de studie van herstel na dwarslaesie.

Om de ernst van de beschadiging van het weefsel rondom de verwonding te verminderen, een goede afschuining van de micropipet is van cruciaal belang. Figuur 1A toont een correct afgeschuinde punt. Het gebruik van een tip die te breed (figuur 1B) meestal in hogere doden vanwege de verhoogde kans op knikken de dorsale aorta, terwijl een tip die te smal (figuur 1C) neigt blik van de huid in plaats van snijden weefsel. Om deze techniek te oefenen...

Na spinale doorsnijding, volwassen zebravissen hebben functioneel herstel van zes weken na het letsel. Om te profiteren van larvale transparantie en sneller herstel nemen, presenteren we een methode voor het doorsnijden van de larvale ruggenmerg. Na doorsnijding, zien we zintuiglijke herstel vanaf 2 dagen na het letsel, en C-bocht beweging door 3 dagen na het letsel.

Spinal Cord doorsnijding in het larvale zebravis

Mammals fail in sensory and motor recovery following spinal cord injury due to lack of axonal regrowth below the level of injury as well as an inability ...

Het algemene doel van deze procedure is om een volledige doorsnijding van het ruggenmerg bij zebravislarven te waarborgen via een relatief hoog-doorvoer en reproduceerbare methode, terwijl de overlevingskans wordt gemaximaliseerd. Dit wordt bereikt door eerst volwassen vissen van het juiste genotype te paren en waar nodig te screenen. De tweede stap is het opkweken van de embryo's tot vijf dagen na de bevruchting.Voer vervolgens de transectie uit met een micro-injectiepipet met een schuine opening. Ten slotte krijgen de gewonde vissen de kans om te herstellen in met antibiotica behandeld medium tot het einde van het experiment. Uiteindelijk wordt immunofluorescentiemicroscopie gebruikt om de respons van neurale progenitorcellen op het letsel aan te tonen.De belangrijkste voordelen van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals die zijn ontwikkeld door de laboratoria van Becker en Fetcher, zijn onder meer een groter aantal dieren voor onderzoek, een kortere hersteltijd en het gebruik van genetische instrumenten die anders niet beschikbaar zijn in de volwassen zebravis. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het vakgebied van regeneratie, zoa

spinal-cord-transection-in-the-larval-zebrafish

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

De werkwijze omvat de hier gepresenteerde precieze schade van levende zebravis embryo's met hoge energie laserpulsen en de analyse van deze letsels en hun herstel met de tijd. We laten ook zien hoe genetisch enkel label of groepen van skeletspiercellen kunnen worden gevolgd tijdens en na de laser-licht veroorzaakte schade.

Laser toegebrachte schade van zebravis Embryonale skeletspier

Processen als proliferatie, patroon, differentiatie en axon begeleiding kan gemakkelijk worden gemodelleerd in de zebravis ruggenmerg. In dit artikel beschrijven we een montageprocedure voor zebravis embryo's die visualisatie van deze gebeurtenissen optimaliseert.

Dissectie en horizontale bevestiging van de zebravis embryo&#39;s: Analyse van Spinal Cord Development

Prikken herstellen motoriek na een complete dwarslaesie. Sommige spinale-projecterende neuronen goed regeneratoren en andere niet. Dit document illustreert de technieken voor huisvesting zeeprik larven (en onlangs omgebouwd volwassenen), het produceren van volledige ruggenmerg doorsnijdingen en het voorbereiden wholemount hersenen en ruggenmerg voor in situ hybridisatie.

Compleet ruggenmergletsel en Brain Dissection Protocol voor Latere Wholemount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie in Larvale Overzeese Lamprei

Om licht te werpen op de cellulaire en moleculaire mechanismen van neurogenese en regeneratie bij volwassen zebravissen, ontwikkelden we een protocol voor invasieve chirurgie dat mechanische verwondingen veroorzaakt in het volwassen telencephalon van de zebravis en daaropvolgend bewaken van veranderingen in de 'gestoken' hemisfeer door middel van immunohistochemie of in situ hybridisatie.

Steekwond Letsel van de zebravis Adult Telencephalon: Een methode om Onderzoek gewervelde Brain Neurogenese and Regeneration

Dit manuscript beschrijft werkwijzen voor elektrofysiologische opnames van spinale neuronen van zebravis embryo's en larven. Het preparaat handhaaft neuronen in situ en vaak gaat om minimale dissectie. Deze werkwijzen maken het elektrofysiologisch onderzoek van verschillende spinale neuronen van de initiële elektrische prikkelbaarheid overname door de vroege larvale stadia.

zebravis<em&gt; In Situ</em&gt; Spinal Cord Voorbereiding voor elektrofysiologische registraties van Spinal sensorische en motorische neuronen

We beschrijven een protocol om veranderingen in de activiteit van het afferente neuron te volgen tijdens motorische commando's in een model gewerveld haarcelsysteem.

Activiteit van Posterior Lateral Line Afferent Neurons tijdens het zwemmen in Zebrafish

Volwassen zebravis is in staat tot functioneel herstel na een dwarslaesie en is een vooraanstaand modelsysteem om aangeboren mechanismen van neurale regeneratie op te helderen. Hier beschrijven we zwemuithoudingsvermogen en zwemgedragstests als functionele uitlezingen van regeneratie van het ruggenmerg.

Beoordeling van zwemuithoudingsvermogen en zwemgedrag bij volwassen zebravissen

Het huidige protocol beschrijft een methode om weefselspecifieke en zeer reproduceerbare verwondingen bij zebravislarven te induceren met behulp van een laserlaesiesysteem in combinatie met een geautomatiseerd microfluïdisch platform voor het hanteren van larven.

Gecontroleerde semi-geautomatiseerde lasergeïnduceerde verwondingen voor het bestuderen van spinale regeneratie bij zebravislarven

Xenopus laevis kikkervis ruggenmergtranssectie is een relevante letselmethode om dwarslaesie en regeneratie te bestuderen door een dwarse snede te maken die het ruggenmerg volledig doorsnijdt op thoracale niveau.

Ruggenmerg transsectie in Xenopus laevis Kikkervis

Dit protocol beschrijft een cryoinjury-model om diepgaande schade aan verschillende caudale myomeren bij volwassen zebravissen te induceren. Deze methode biedt een nieuwe benadering voor het bestuderen van skeletspierregeneratie na ernstig verlies van weefsel bij gewervelde dieren van niet-zoogdieren.

Een cryoletselmodel voor het bestuderen van skeletspierregeneratie van de caudale steel bij volwassen zebravissen

Hier presenteren we een protocol voor het transplanteren van cellen met een hoge ruimtelijke en temporele resolutie in zebravisembryo's en -larven in elk stadium tussen ten minste 1 en 7 dagen na de bevruchting.

Celtransplantatie met hoge resolutie bij embryonale en larvale zebravissen

Leer een reproduceerbare methode voor ruggenmergdoorsnijding in larvale zebrafish met behulp van een geslepen micro-injectiepipet. Deze techniek maakt snel herstel van sensorische functie en C-bend beweging mogelijk voor regeneratief onderzoek.

Spinal Cord doorsnijding in het larvale zebravis

Meer video's verkennen