Name: Compleet ruggenmergletsel en Brain Dissection Protocol voor Latere Wholemount In Situ Hybridisatie in Larvale Overzeese Lamprei (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: Leer complete ruggenmergdoorsnijding en hersendissectie bij zeelampreien voor axonale geleiding na letsel. Deze methode maakt visualisatie van het hele brein en regenererende neuronen mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ondersteund door NIH Grants NS14837, R01 NS38537, R24 HD050838 aan Dr. Michael E. Selzer; Shriners Research Grant SHC-85220 aan Dr. Michael E Selzer; en Shriners Research Grant SHC-85310 aan Dr. Michael I. Shifman. Dr. Antón Barreiro-Iglesias werd ondersteund door de Fundación Barrié (Spanje) en de Xunta de Galicia (Galicië, Spanje).

Zie tabel 1 voor alle in dit protocol gebruikte materialen. Experimenten werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite aan de Temple University. 1 Dieren <ol><li> Verkrijgen wildkleur larvale zee prikvissen (Petromyzon marinus L.), 10 - 14 cm lang (4-7 jaar oud) uit beken voeden van Lake Michigan, van zijrivieren van de Delaware River (Pennsylvania) of stromen in Maine. </li><li> In het laboratorium handhaven larven in groepen van 50 - 100 dieren in 50 gallon zoetwater tanks bij 16 ° C. Lijn de tanks met een centimeter van grind voor de larven te graven in, en het water wordt houtskool gefilterd en geconditioneerd met lucht stenen voor ten minste 48 uur aan chloor en andere onzuiverheden te verwijderen voordat u het prikken in hen. Het is niet nodig de dieren die hun afval recyclen tot de dag van gebruik voeden. </li></ol> 2 Compleet SpinalKoord doorsnijding <ol><li> Voor het ruggenmerg operatie stelt een lamprey Ringer oplossing met de volgende samenstelling: 110 mM NaCl, 2,1 mM KCI, 2,6 mM CaCl2, 1,8 mM MgCl2 en 10 mM Tris-buffer; pH 7.4. </li><li> Om het ruggenmerg doorsnijding voeren, plaatst de larven in een kleine houder zal worden verdoofd met 1% tricaïne methaansulfonaat in ijskoude Ringer oplossing. </li><li> Zodra verdoofde plaats de dieren in een petrischaal half gevuld met Sylgard (silicone) en gebruik 4 insecten kunnen (0,15 mm diameter) om de dieren in stand te houden voor de operatie (een is geplaatst op de snuit van het dier, een aan de staart en twee ter hoogte van de 5e gill). Vul de petrischaal bijna tot aan de top met Ringer-oplossing. Zet de schaal met de larve op het ijs tijdens het uitvoeren van de operatie onder de stereomicroscoop. </li><li> Om het ruggenmerg doorsnijding uitvoeren van een dorsale, middellijn, maak een longitudinale incisie met een scalpel (# 11) ter hoogte van de 5egill het ruggenmerg visualiseren. Aanvankelijk skin is geopend door de tip van de scalpel naar boven en het spierweefsel wordt gesneden zeer zacht tot ruggenmerg kan worden gezien van boven. Fashion twee haken van het insect pinnen en gebruik ze om te houden van het lichaam muren geopend tijdens het uitvoeren van het ruggenmerg doorsnijding. </li><li> Volledig doorsnijden van het ruggenmerg op het niveau van de 5 e kieuw met behulp van een schaar (Castroviejo 8 #), steek de schaar loodrecht op het ruggenmerg. Het ruggenmerg moet volledig worden doorsneden met een schone snede. Visualiseer het ruggenmerg gesneden uiteinden onder de stereomicroscoop om te bevestigen dat het ruggenmerg volledig is doorgesneden. Daarna lijnt de afgesneden einden van het ruggenmerg na de doorsnijding met een pincet (# 5). </li><li> Na het uitvoeren van het ruggenmerg doorsnijding sluit de wond in de dorsale lichaamswand met een paar fijne pincet en zet de larven op ijs gedurende 1 uur tot de wond t toestaano drogen. Leg een stukje filtreerpapier tussen het ijs en de larven en laat deze met lamprei Ringer-oplossing. De lage temperatuur blijft de dieren in leven tegelijkertijd dat het de wond aan de lucht drogen en kunnen bijdragen tot infecties. </li><li> Overdragen dan de larven van kleine tanks (1 larve per tank) met ijskoud water gedurende 24 uur. </li><li> Onderzoek de laesie larven 1 dag na de spinale doorsnijding te gedragsmatig bevestigen dat er geen beweging caudaal van de plaats van letsel. Een ruggenmerg doorsnijding als voltooid wanneer de larve alleen de kop rostraal kan naar de plaats van letsel (ter hoogte van de 5e gill). Als dit het geval larven kan nu worden overgebracht naar tanks (1 larve per tank) met kraanwater bij kamertemperatuur (23 ° C) zodat zij terug voor de gekozen tijdstippen. </li><li> Tijdens de herstelperiode ververs het water om de 2 tot 3 dagen. </li></ol> 3 Brain Dissection en voorbereiding vanBrain in situ hybridisatie <ol><li> Op de gewenste tijdstippen na de blessure opnieuw verdoven het larvale zee prikvissen en plaats en zet ze in de petrischaal met Ringer-oplossing naar de hersenen dissectie als hierboven uit. </li><li> Naar de hersenen ontleden, eerst een dwarse insnijding met de scalpel tussen het neusgat en de pijnappelklier orgel. Hier begint het weefsel rond de hersenen afgesneden door een paar Castroviejo schaar terwijl het met een pincet. </li><li> Zodra de hersenen blootgesteld, verwijdert de choroid plexus met een pincet en gebruik de haken aan het hoofd van het dier verspreiden en bloot de craniale zenuwen. Snij vervolgens het ruggenmerg dwars met de Castroviejo schaar. Houd het ruggenmerg met een pincet terwijl u een ander paar pincetten om de craniale zenuwen gesneden om de hersenen ontleden. </li><li> Na dissectie, zet de hersenen op een klein stukje van siliconen en houd deze vast door het invoegen van 2 insect pinnen in de olfactorische bollen en 1 in het ruggenmerg. Snij vervolgens de achterste en cerebrotectal commissuren van de hersenen langs de dorsale middellijn met de schaar en afbuigen de alar platen lateraal en speld ze plat op de silicone met 4 insect pinnen (figuur 2). </li><li> Breng het stuk silicone met de hersenen om een ​​buis met 4% paraformaldehyde in fosfaat-gebufferde zoutoplossing (pH 7,4) bij kamertemperatuur temparature worden vastgesteld gedurende 3 uur op een rotator. </li><li> Na fixatie gebruik de hersenen wholemount voor in situ hybridisatie zoals eerder beschreven (Swain et al., 1994). Brains uit controle of sham geopereerde dieren moeten altijd parallel lopen met de hersenen van gewonde dieren. De wholemounted larvale hersenen kunnen worden onderzocht door in situ hybridisatie vanwege de platte en dunne vorm en ook door de afwezigheid van myeline 10, die in de hersenen relatief doorschijnend maakt. </li></ol>

<ol><li>Rodicio, M. C., Barreiro-Iglesias, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lampreys+as+an+animal+model+in+regeneration+studies+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Neurol%22%5BJournal%5D)">Lampreys as an animal model in regeneration studies after spinal cord injury.</a> Rev Neurol. 55, 157-166 (2012).</li>
<li>Davis, G. R. Jr, McClellan, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extent+and+time+course+of+restoration+of+descending+brainstem+projections+in+spinalcord-transected+lamprey%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Extent and time course of restoration of descending brainstem projections in spinalcord-transected lamprey.</a> J Comp Neurol. 344, 65-82 (1994).</li>
<li>Jacobs, A. J., Swain, G. P., Snedeker, J. A., Pijak, D. S., Gladstone, L. J., Selzer, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+of+neurofilament+expression+selectively+in+regenerating+reticulospinal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Recovery of neurofilament expression selectively in regenerating reticulospinal neurons.</a> J Neurosci. 17, 5206-5220 (1997).</li>
<li>Shifman, M. I., Selzer, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+netrin+receptor+UNC-5+in+lamprey+brain+modulation+by+spinal+cord+transection%5BTitle%5D)+AND+%22Neurorehabil+Neural+Repair%22%5BJournal%5D)">Expression of the netrin receptor UNC-5 in lamprey brain modulation by spinal cord transection.</a> Neurorehabil Neural Repair. 14, 49-58 (2000).</li>
<li>Barreiro-Iglesias, A., Laramore, C., Shifman, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sea+lamprey+UNC5+receptors+cDNA+cloning%2C+phylogenetic+analysis+and+expression+in+reticulospinal+neurons+at+larval+and+adult+stages+of+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The sea lamprey UNC5 receptors cDNA cloning, phylogenetic analysis and expression in reticulospinal neurons at larval and adult stages of development.</a> J Comp Neurol. 520, 4141-4156 (2012).</li>
<li>Shifman, M. I., Yumu, lR. E., Laramore, C., Selzer, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+repulsive+guidance+molecule+RGM+and+its+receptor+neogenin+after+spinal+cord+injury+in+sea+lamprey%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Expression of the repulsive guidance molecule RGM and its receptor neogenin after spinal cord injury in sea lamprey.</a> Exp Neurol. 217, 242-251 (2009).</li>
<li>Busch, D. J., Morgan, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synuclein+accumulation+is+associated+with+cell-specific+neuronal+death+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Synuclein accumulation is associated with cell-specific neuronal death after spinal cord injury.</a> J Comp Neurol. 520, 1751-1771 (2012).</li>
<li>Shifman, M. I., Zhang, G., Selzer, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+death+of+identified+reticulospinal+neurons+after+spinal+cord+injury+in+lampreys%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Delayed death of identified reticulospinal neurons after spinal cord injury in lampreys.</a> J Comp Neurol. 510, 269-282 (2008).</li>
<li>Swain, G. P., Jacobs, A. J., Frei, E., Selzer, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+in+situ+hybridization+in+wholemounted+lamprey+brain+neurofilament+expression+in+larvae+and+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">A method for in situ hybridization in wholemounted lamprey brain neurofilament expression in larvae and adults.</a> Exp. Neurol. 126, 256-269 (1994).</li>
<li>Bullock, T. H., Moore, J. K., Fields, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+myelin+sheaths%3A+both+lamprey+and+hagfish+lack+myelin%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Evolution of myelin sheaths: both lamprey and hagfish lack myelin.</a> Neurosci Lett. 48, 145-148 (1984).</li>
<li>Cohen, A. H., Kiemel, T., Pate, V., Blinder, J., Guan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+can+alter+the+function+outcome+of+spinal+cord+regeneration+in+larval+lampreys%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Temperature can alter the function outcome of spinal cord regeneration in larval lampreys.</a> Neuroscience. 90, 957-965 (1999).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

Hier presenteren we een gedetailleerd protocol om een ​​complete ruggenmerg doorsnijding en posterieure hersenen dissectie in larvale zee prikvissen voeren. Deze procedure maakt analyse verschillen in genexpressie tussen identificeerbare ruggenmerg neuronen projecteren ruggenmergschade door geheel-mount in situ hybridisatie brain. De kritische stap in de procedure is het correct uitvoeren van een volledige doorsnijding ruggenmerg, die 24 uur later worden bestuurd door het observeren van de afgesneden einden van het rugg...

Bij zoogdieren ruggenmergletsel (SCI) is een verwoestende aandoening die leidt tot permanent verlies van de functie onder de plaats van het letsel, omdat gewonde axonen niet regenereren door het trauma zone en opnieuw te verbinden met hun geschikte doelwitten. In tegenstelling tot zoogdieren, lampreys herstellen voortbeweging na volledig ruggenmergletsel. 1 Interessant lampreys een set van 36 ruggenmerg projecteren neuronen die afzonderlijk identificeerbare geheel-mount brain preparaten wegens hun grote omvang 2,3 (figuur 1) . Al deze spinale-projecterende neuronen axotomized door een hoog-niveau volledig ruggenmerg doorsnijding. Eerdere studies van onze groep en anderen hebben aangetoond dat zelfs bij aanwezigheid van functioneel herstel na SCI, sommige neuronen vertonen een zeer lage regeneratieve capaciteit (ze worden beschouwd als &quot;slecht regeneratoren&quot;), terwijl andere gewoonlijk vernieuwt axon door de plaats van letsel (ze worden beschouwd als &quot;good regeneratoren &quot;). 2,3 Deze eigenschap maakt lampreys interessant vertebrate modellen om de verschillen in genexpressie tussen goed en slecht regenerator spinale-projecterende neuronen die op hun beurt leiden tot verschillen in de intrinsieke regeneratieve vermogen van neuronen die proberen te bestuderen regenereren hun axonen in dezelfde extrinsieke milieu. 1 Met behulp van dit model dat we hebben eerder aangetoond dat spinale-projecteren neuronen met lage regeneratieve vermogen tonen uitdrukking van axonale begeleiding molecuul receptoren zoals UNC5 4,5 en neogenin, 6, die de remmende werking van netrine en RGM respectievelijk bemiddelen. Bovendien met deze methode onze fractie is ook gebleken dat alleen de goede regeneratoren tonen een herstel van de expressie van neurofilamenten na het letsel en tijdens het regeneratieproces. Onlangs, Busch en Morgan 7 hebben aangetoond door immunofluorescentie dat de slechte regenerators tonen een Increased expressie van synucleïne na beschadiging, die is verbonden door de auteurs dat de &quot;slechte regenerator&quot; spinal-projecterende neuronen langzaam sterven na volledig ruggenmerg doorsnijding 5,7,8. Dus, de lamprei model van een complete dwarslaesie heeft ontpopt als een zeer bruikbaar model om te begrijpen wat maakt een ruggemerg projecteren neuron een &quot;slechte regenerator&quot; na axotomy. Om onze studies voeren we volledig ruggenmerg doorsnijding chirurgie protocol en een achterste hersenen dissectie op de gewenste tijdstippen na letsel wholemount voeren in situ hybridisatie. In de huidige methodologische artikel stellen we een gedetailleerd protocol voor de goede uitvoering van een complete dwarslaesie chirurgie in larvale prikken, het verdere onderhoud van de dieren en de uiteindelijke hersenen dissectie en de voorbereiding van de hersenen voor een wholemount in situ hybridisatie. Een gedetailleerd protocol te perform de wholemount in situ hybridisatie in de hersenen van larven prikken is eerder gemeld. 9 Daarnaast heeft dit protocol voor ruggenmergletsel en hersenen dissectie kunnen ook gebruikt dan verwerken de hersenen voor immunohistochemie of andere histologische methoden.

<table><tbody><tr><td>Tricaine methaan sulfonaat</td><td>Spectrum</td><td>TR108</td><td>Benzocaïne verzadigde oplossing in PBS voor opoffering</td></tr><tr><td>Scalpel #3</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Bladen voor scalpel: #11</td><td>Fine Science Tools&nbsp;</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo schaar #8</td><td>Fine Science Tools&nbsp;</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>Pincetten #4 & #5</td><td>Dumont, Zwitserland</td><td>Roboz RS4955</td><td>#4 voor het dissekeren van het ruggenmerg; #5 voor het strippen van de meninges</td></tr><tr><td>Dissectiemicroscoop</td><td>Olympus</td><td>SZ51</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard</td><td>Dow Corning Co.</td><td>184</td><td></td></tr><tr><td>Insectenpins 0.15, 0.20 mm</td><td>Austerlitz</td><td>Geen catalogus #</td><td>0.15 mm voor het vastpinnen van hersenen en ruggenmerg; 0.20 mm voor het lichaam</td></tr><tr><td>7 ml HDPE Scintillatiebuisjes met doppen</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-337-1</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde 16%</td><td>Electron Microscopy Science (EMS)</td><td>19210</td><td>Verdun tot 4% in PBS</td></tr></tbody></table>

compleet ruggenmergletsel en brain dissection protocol voor latere wholemount<em&gt; in situ</em&gt; hybridisatie in larvale overzeese lamprei

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Na een complete dwarslaesie, zijn zee lampreys eerst onder het niveau van doorsnijding verlamd. Echter, ze herstellen locomotie na enkele weken en dit gepaard met korte afstand regeneratie (enkele mm) van propriospinal axonen en spinale-projecterende axons van de hersenstam. Onder de 36 grote identificeerbare spinale-projecteren van neuronen, sommige zijn goed regenerators en anderen zijn slecht regenerators. Deze neuronen kunnen het gemakkelijkst worden geïdentificeerd wholemount CNS preparaten. Om de neuron-intrinsieke mechanismen bevorderen begrijpen of remmen axon regeneratie na verwonding in de gewervelde CZS, bepalen we de verschillen in genexpressie tussen de goede en slechte regeneratoren en hoe de expressie beïnvloed door ruggenmerg doorsnijding. Dit document illustreert de technieken voor huisvesting larvale en onlangs omgebouwd volwassen zee prikken in zoet water tanks, de fabricage van volledig ruggenmerg doorsnijdingen onder microscopische visie, en het voorbereiden van brain en het ruggenmerg wholemounts voor in situ hybridisatie. In het kort worden gehouden dieren 16 &#160; ° C en verdoofd in 1% benzocaïne in lamprei Ringer. Het ruggenmerg wordt doorsneden met iridectomiescharen via een dorsale benadering en het dier kan herstellen in zoet water tanks bij 23 ° C. Voor in situ hybridisatie, worden de dieren reanesthetized en de hersenen en koord verwijderd via een dorsale benadering.

Als voorbeeld van de resultaten die kunnen worden verkregen bij gebruik van deze methode, representatieve beelden van wholemounted hersenen die de expressie van de neogenin transcripten in identificeerbare ruggenmerg neuronen uitstekende controle en 2 weken na lesie larvale zee lampreys zijn getoond in figuur 2. De lezers worden verwezen naar een eerdere studie 6 rapportage van de relatie tussen de expressie van neogenin na een complete ruggenmerg doorsnijding en het regeneratieve vermogen va...

Prikken herstellen motoriek na een complete dwarslaesie. Sommige spinale-projecterende neuronen goed regeneratoren en andere niet. Dit document illustreert de technieken voor huisvesting zeeprik larven (en onlangs omgebouwd volwassenen), het produceren van volledige ruggenmerg doorsnijdingen en het voorbereiden wholemount hersenen en ruggenmerg voor in situ hybridisatie.

Compleet ruggenmergletsel en Brain Dissection Protocol voor Latere Wholemount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie in Larvale Overzeese Lamprei

After a complete spinal cord injury, sea lampreys at first are paralyzed below the level of transection. However, they recover locomotion after several ...

Het algemene doel van deze procedure is om een volledige doorsnijding van het ruggenmerg en een dissectie van de hersenen uit te voeren voor de studie van axonale geleiding na letsel. Dit wordt bereikt door eerst het ruggenmerg van een lampreet door te snijden op het niveau van de vijfde kieuw. Vervolgens worden de hersenen gedissecteerd en met spelden op Sylgard vastgezet.Na het fixeren van de hersenen kunnen deze worden bewaard in methanol of direct worden gebruikt voor in situ hybridisatie; uiteindelijk kunnen veranderingen in de expressie van axonale geleidingsreceptoren worden waargenomen in een regenererende wervelkolom na een dwarslaesie. Het voordeel van de techniek die we vandaag gaan demonstreren ten opzichte van meer conventionele paraffine-insnijding of cryostaatsnijden, is dat het mogelijk maakt om de gehele hersenen te zien, inclusief de grote en geïdentificeerde neuronen die projecteren naar het ruggenmerg.De procedure wordt gedemonstreerd door Dr. Kathy Zang, een onderzoeker in ons laboratorium. Wilde larven van de lamposse uit de soort Petromyzon marinus werden verkregen uit beken die uitmonden in zijrivieren van Lake Michigan, de Delaware River in Pennsylvania of

complete-spinal-cord-injury-brain-dissection-protocol-for-subsequent

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

This video demonstrates a method to investigate zebrafish larval brain injury using large-scale scanning transmission electron microscopy (STEM), a technique that combines elements of both scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (TEM) to produce high-resolution images. It outlines the steps involved in preparing samples and the acquisition of high-resolution STEM images to identify brain injury.

Investigating a Zebrafish Larval Brain Injury Using Large-Scale Scanning Transmission Electron Microscopy

Processen als proliferatie, patroon, differentiatie en axon begeleiding kan gemakkelijk worden gemodelleerd in de zebravis ruggenmerg. In dit artikel beschrijven we een montageprocedure voor zebravis embryo's die visualisatie van deze gebeurtenissen optimaliseert.

Dissectie en horizontale bevestiging van de zebravis embryo&#39;s: Analyse van Spinal Cord Development

Na spinale doorsnijding, volwassen zebravissen hebben functioneel herstel van zes weken na het letsel. Om te profiteren van larvale transparantie en sneller herstel nemen, presenteren we een methode voor het doorsnijden van de larvale ruggenmerg. Na doorsnijding, zien we zintuiglijke herstel vanaf 2 dagen na het letsel, en C-bocht beweging door 3 dagen na het letsel.

Spinal Cord doorsnijding in het larvale zebravis

Het opnemen van Ca2+ stromen op het presynaptische afgiftevlak van het membraan is essentieel voor een nauwkeurig begrip van Ca2+-intrede en neurotransmitterafgifte. We presenteren een acute dissociatie van het rugsmerg van de kaakhaai die functionele geïsoleerde reticulospinale axonen oplevert, waardoor opname direct vanaf het afgiftevlak van het membraan van individuele presynaptische terminalen mogelijk is.

Acute Dissociatie van Lamprey Reticulospinal Axonen naar Opnemen inschakelen van de Release Gezicht Membraan van individuele functionele Presynaptische Terminals

We presenteren een protocol dat gebruikmaakt van twee-foton excitatie time-lapse microscopie om gelijktijdig de dynamica van axon- en myeline-verwondingen in real time te visualiseren. Dit voorgestelde protocol maakt studies mogelijk van zowel intrinsieke als extrinsieke factoren die het lot van centrale gemyeliniseerde axonen na verwonding kunnen beïnvloeden en kunnen bijdragen aan permanente klinische handicaps.

Een Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model Mechanismen van axonale degeneratie Beoordeel in real-time

Demyeliniserende ziekten kunnen worden gemodelleerd bij dieren door lokale toepassing van lysolecithin in het CZS. Een enkele injectie van lysolecithin in het ruggenmerg van muizen produceert een laesie die zich na verloop van tijd spontaan herstelt. Het doel is om factoren te bestuderen die betrokken zijn bij de- en remyelinisatie en middelen te testen om het herstel te verbeteren.

Experimentele Demyelinisatie en Remyelinisatie van Muriene Spinal Cord door Focal Injectie van lysolecithine

Grootschalige 2D elektronenmicroscopie (EM), of nanotomy, is de toepassing van EM met nanoschaalresolutie op weefselbreed niveau. Hier beschrijven we een universele methode voor nanotomy toegepast om de larvale hersenen van de zebravis te onderzoeken in gezondheid en bij niet-invasieve hersenletsels.

Grootschalige Scanning Transmission Electron Microscopy (Nanotomy) van gezonde en beschadigde hersenen zebravis

Dit manuscript beschrijft werkwijzen voor elektrofysiologische opnames van spinale neuronen van zebravis embryo's en larven. Het preparaat handhaaft neuronen in situ en vaak gaat om minimale dissectie. Deze werkwijzen maken het elektrofysiologisch onderzoek van verschillende spinale neuronen van de initiële elektrische prikkelbaarheid overname door de vroege larvale stadia.

zebravis<em&gt; In Situ</em&gt; Spinal Cord Voorbereiding voor elektrofysiologische registraties van Spinal sensorische en motorische neuronen

We hebben het Marmarou-gewichtsverliesmodel voor volwassen zebravissen aangepast om een breed scala aan pathologieën te onderzoeken na traumatisch hersenletsel met stompe kracht (TBI) en de mechanismen die ten grondslag liggen aan de daaropvolgende neuronale regeneratie. Dit Botte kracht TBI-model is schaalbaar, induceert een milde, matige of ernstige TBI en vat heterogeniteit van letsel samen die wordt waargenomen bij menselijke TBI.

Een schaalbaar model om de effecten van blunt-force letsel bij volwassen zebravissen te bestuderen

Het huidige protocol beschrijft een methode om weefselspecifieke en zeer reproduceerbare verwondingen bij zebravislarven te induceren met behulp van een laserlaesiesysteem in combinatie met een geautomatiseerd microfluïdisch platform voor het hanteren van larven.

Gecontroleerde semi-geautomatiseerde lasergeïnduceerde verwondingen voor het bestuderen van spinale regeneratie bij zebravislarven

Xenopus laevis kikkervis ruggenmergtranssectie is een relevante letselmethode om dwarslaesie en regeneratie te bestuderen door een dwarse snede te maken die het ruggenmerg volledig doorsnijdt op thoracale niveau.

Ruggenmerg transsectie in Xenopus laevis Kikkervis

Leer complete ruggenmergdoorsnijding en hersendissectie bij zeelampreien voor axonale geleiding na letsel. Deze methode maakt visualisatie van het hele brein en regenererende neuronen mogelijk.

Compleet ruggenmergletsel en Brain Dissection Protocol voor Latere Wholemount

Meer video's verkennen