Name: Muizen Heterotope Heart Transplant Techniek (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-08T23:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 27 s
Description: Leer de heterotope harttransplantatie bij muizen voor transplantatiebiologie met arteriële en veneuze anastomose. Deze methode omvat donorhart-oogst, implantaat en dagelijkse palpatie om de gezondheid van het transplantaat te beoordelen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen dr. Biagio Pietra bedanken voor zijn eerdere werk in ons lab.

Alle dieren werden gehuisvest onder-pathogeen-vrije omstandigheden aan de Universiteit van Colorado Barbara Davis Center Animal Facility onder IACUC goedkeuring en verzorgd volgens de NIH richtlijnen. Diepte van de anesthesie wordt beoordeeld door teen knijpen in eerste instantie en door de naleving van de ademhalingsfrequentie, zodra de procedure is begonnen. 1. Donorhart Harvest <ol><li> Verdoven van de donor muis door het injecteren van pentobarbital (60 mg / kg IP). </li><li> Immobiliseren de muis door het 4-way beperkingen en knip de vacht. Veeg de huid met alcohol. </li><li> Na het ontleden weg van de huid, opent de buikholte door een dwarse insnijding net inferieur aan het middenrif. </li><li> Snijd het middenrif posterior aan ribben inbrengen en til de voorste borstwand ventraal en superiorly blootstellen van het hart. </li><li> Verleng een volledige dikte verknipt de posterieure laterale borstholte aan de linker-en rechterkant van de borst. </li><li> Isoleer deonderste vena cava (IVC) en plaats een losse 5-0 zijden hechtdraad in de IVC naast de insertie in het rechter atrium. </li><li> Injecteer 1,0 cc van 4 ° C gehepariniseerde zoutoplossing (200 u / cc) in de IVC, dan afbinden het vat met de 5-0 zijden hechtdraad en delen. </li><li> Isoleer de rechter superieure vena cava (rSVC) op dezelfde manier en afbinden met 5-0 zijden hechtdraad en delen. </li><li> Schud het hart naar de rechterkant van de dieren en het isoleren van de linker vena cava superior (lSVC), afbinden met een 5-0 zijden hechtdraad en verdeel het blootstellen van de linker longslagader. </li><li> Beveilig het hart onder een natte gaasje terwijl de thymus is stomp verwijderd van de belangrijkste longslagader (PA) en de linker en rechter PA takken ontleed en oplopende aortaboog. </li><li> Blunt ontleden de aortaboog vrij van de omliggende weefsels. Micro-schaar worden gebruikt om de proximale aorta verdelen rechts brachialis-cefale arterie, dwz er mogen geen vertakkingen tussen het hart en de verdelingpunt van de aorta. </li><li> Dit gedeelte van de aorta-boog vormt de arteriële manchet voor het implantaat proces. </li><li> Afspiegeling van de aorta manchet inferiorly aan de PA romp en links en rechts takken van de PA bloot. </li><li> Stompe ontleden de linker en rechter PA takken van het omringende weefsels ver van het hart mogelijk. Dit maakt gemakkelijke ontleding van de PA stam van omringende weefsels. </li><li> Verdeel de PA romp zo distaal mogelijk, net proximaal van de splitsing. Dit gedeelte van de longslagader vormt de veneuze manchet voor het implantaat proces. </li><li> Plaats een 5-0 zijden hechtdraad rond de basis van het hart en stropdas. Het hart wordt dan vrij gesneden op de basis, en geplaatst in 4 ° C zoutoplossing. Totale oogst is ca.. 10-15 min. </li></ol> 2. Hart Implant Techniek <ol><li> Verdoven de ontvangende muizen met pentobarbital (60 mg / kg IP initiële dosis 25 mg / kg IP supplementaire dosis indien nodig). </li><li> Knip de vacht enimmobiliseren de muis door het 4-way beperkingen en prep de huid met povidonjood en laken in een steriele wijze. </li><li> Maak een 2 cm middellijn verticale incisie in de buik en vul de buikholte. </li><li> Trek de darm superieur en naar buiten gebracht op de borst. Houd verpakt in steriele vochtig gaas (steriele zoutoplossing) gedurende het geval. </li><li> Isoleer de abdominale aorta en inferior vena cava (IVC) in de niervaten en plaats 4-0 katoen banden rond de aorta en IVC beter dan inferieur aan de anastomosisplaats. </li><li> Elke lumbale schepen binnen het veld te identificeren en afbinden met 10-0 nylon hechtdraad. </li><li> Knoop de katoenen banden, eerst de inferieure, gevolgd door de leidinggevende. Zo bloed wordt vastgehouden in de aorta die de aortotomy vergemakkelijken. </li><li> Vorm het aortotomy met een 30 G naald in het lumen van de aorta voeren. Verleng de incisie met fijne micro schaar om een ​​lengte van ongeveer 2 mm. De incisie wordt gemaakt in een rechte lijn langs de langeitudinal as van het vat. </li><li> Maak een einde aan de zijkant anastomose van de donor aorta aan de ontvanger aorta in de volgende mode. Plaats een 10-0 nylon hechtdraad verblijf steek in de donor aorta en de inferieure hoek van de incisie in de ontvanger aorta en stropdas. Plaats een tweede 10-0 nylon tegenover de eerste in de donor aorta en de superieure hoek van de incisie in de abdominale aorta en stropdas. </li><li> Maak een draaiende hechting van superieur aan inferieure in de laterale wand van de aorta en stropdas tegen de eerder geplaatste verblijf steek. Zorg ervoor dat u de Intimas (oppervlakte binnenvat) bij elkaar te brengen als je steek. Hechten dan de mediale zijde in een lopende mode en stropdas. De eerste en laatste steek aan weerszijden dient zo verblijf steken mogelijk geplaatst. Probeer vervolgens 3 st gelijkmatig tussen beide tot een totaal van 5 hechtingen. </li><li> Maak een einde aan de zijkant anastomose van de donor longslagader naar de ontvanger IVC in de volgende mode. PunctUre het IVC met een 30 G naald en uitbreiden van de incisie voor ca. 2 mm met fijne micro schaar. De incisie wordt gemaakt in een rechte lijn langs de langsas van het vat. </li><li> Bind de donor longslagader naar de inferieure hoek van de incisie in de IVC met 10-0 nylon. Plaats een tweede 10-0 nylon tegenover de eerste in de donor slagader en de superieure hoek van de incisie in de IVC en stropdas. </li><li> Maak een draaiende hechting tussen de longslagader en de IVC en stropdas. De eerste en laatste steek aan weerszijden dient zo verblijf steken mogelijk geplaatst. Probeer vervolgens 5 st gelijkmatig tussen beide tot een totaal van 7 hechtingen. </li><li> Laat de distale 4-0 katoen tie het herstel van veneuze flow. </li><li> Zodra hemostase van de veneuze anastomose is waargenomen de proximale 4-0 katoen stropdas geleidelijk losgemaakt en de arteriële anastomose waargenomen voor hemostase. Wanneer beide anastomosen veilig worden beschouwd, verwijdert u de cotton banden van de muis. </li><li> De terugkeer van de darm naar de buik. De buikwand is gesloten in twee lagen met behulp van 5-0 zijden hechtdraad in een actieve manier. </li><li> Dien een 1,0 ml bolus van steriele, warme fysiologische zoutoplossing in de buik als vochttoediening bij het sluiten, en 0,8 ml normale fysiologische zoutoplossing wordt subcutaan postoperatief geïnjecteerd. Geen andere ondersteunende maatregelen nodig zijn tijdens de operatie. Recover het dier op een warmtedeken. Totaal implantaat is ca.. 90-120 min voor beginners, 45-60 min. met ervaring. Dien buprenorfine analgesie, 0,05 mg / kg, SC, 0,1-0,2 ml aan het begin van de procedure en elke 6-12 uur gedurende 72 uur na de operatie. </li></ol> 3. Graft assessment <ol><li> Beoordelen graft function dagelijks door trans-abdominale palpatie. </li><li> Houd de muis alsof het moeten worden om intraperitoneale injectie. </li><li> Druk zachtjes op het topje van een wijsvinger tegen de buikwand en na te gaan de kloppende strength en regelmatigheid van het transplantaat. </li><li> Geef palpatie kwaliteit een score van 4 (normale amplitude en frequentie) op 0 (niet-kloppend afgewezen graft). </li></ol> BELANGRIJKE OPMERKINGEN: Alle instrumenten worden gesteriliseerd, steriele handschoenen worden gedragen tijdens de gehele procedure en een steriel veld wordt gehandhaafd. De donor en ontvanger operaties worden uitgevoerd met gebruik van een operatiemicroscoop. Zorg ervoor dat de anastomosen zijn &quot;schone&quot;. Dat is, dat de achterwanden niet gevangen bij het plaatsen st. Dit zal leiden tot een significante vernauwing aan die zal meer dan waarschijnlijk resultaat vloeien in een mislukte ent en in extreme gevallen tot achterste ledematen verlamming. Het is ook van vitaal belang dat volledige dikte passeert waaronder de vasculaire adventitia en de intima van de hechtdraad naald worden bereikt. Evertion van de randen zorgt dat er intima-aan-intima contact, hetgeen helpt bij het afdichten en genezing van de anastomose. Een ander vitaal belang feitof is ervoor te zorgen dat de spanning van de anastomose sutuurlijnen is optimaal. Te los en er zal onomkeerbaar lekken zijn, te strak en vernauwing te stromen zal resulteren. Als aan de arteriële kant zal dit leiden tot een slechte doorbloeding van het transplantaat, indien aan de veneuze zijde een overbelaste hart zal leiden.

<ol><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplant Proc. 5 (1), 733 (1973).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D%2C+H-2K%2C+and+non-H-2+antigens+in+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343 (1973).</li>
<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+experience+of+3%2C000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3,000 operations by one surgeon.</a> J Heart Lung Transplant. 20 (10), 1123 (2001).</li>
<li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+decades+of+vascularized+heterotopic+cardiac+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Surg%22%5BJournal%5D)">Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse.</a> J Invest Surg. 26 (4), 223 (2013).</li>
<li>Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+suture+technique+in+a+mouse+heart+transplant+model%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Modified suture technique in a mouse heart transplant model.</a> Asian J Surg. 34 (2), 86 (2011).</li>
<li>Mao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+knotless+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">A novel and knotless technique for heterotopic cardiac transplantation in mice.</a> J Heart Lung Transplant. 28 (10), 1102 (2009).</li>
<li>Csencsits, K. L., Bishop, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+alloreactive+CD4%2B+and+CD8%2B+T+cells%3A+there%27s+more+to+it+than+MHC+restriction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Contrasting alloreactive CD4+ and CD8+ T cells: there's more to it than MHC restriction.</a> Am J Transplant. 3 (2), 107 (2003).</li>
<li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nat Protoc. 2 (3), 471 (2007).</li>
<li>Linfert, D., Chowdhry, T., Rabb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphocytes+and+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Rev%22%5BJournal%5D)">Lymphocytes and ischemia-reperfusion injury.</a> Transplant Rev. 23 (1), (2009).</li>
<li>Grazia, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+cardiac+allograft+rejection+by+directly+cytotoxic+CD4+T+cells%3A+parallel+requirements+for+Fas+and+perforin%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Acute cardiac allograft rejection by directly cytotoxic CD4 T cells: parallel requirements for Fas and perforin.</a> Transplantation. 89 (1), 33 (2010).</li>
<li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> J Vis Exp. (6), (2007).</li>
<li>Plenter, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22European+Society+for+Surgical+Research.+45th+Annual+Congress%22%5BJournal%5D)">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> European Society for Surgical Research. 45th Annual Congress. , (2010).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Deze chirurgische techniek is niet gemakkelijk onder de knie, maar eenmaal onder de knie is een krachtig onderzoeksinstrument. De onderzoeker / chirurg wordt beloond door de samenhang van techniek en door de aandacht voor detail. Geduld tijdens de leerfase is de sleutel. Zoals gepubliceerd door Niimi 3, met behulp van een video gebaseerde leermiddel duurt gemiddeld 11 pogingen om de eerste succesvolle behandeling en 78 pogingen om een 90% slagingspercentage behalen bereiken. Video&#39;s zijn een belangrijk leermiddel in de chirurgie 11,12 geworden. Problemen oplossen Bloeden uit de anastomose optreden en dit is waarschijnlijk te wijten aan een gebrek aan juiste spanning in de hechtingen of te weinig hechtingen. Terwijl een stolling inducerend middel zoals Gelfoam nuttig voor het verminderen van lekken kan zijn, raden wij aan dat de chirurg moet rekenen op een goede techniek. Overbelaste niet-kloppend hart is meestal te wijten aan anastomosen die te strak zijn, met name op de veneuze zijde. Een niet-beating niet-geperfundeerde transplantaat wordt meestal veroorzaakt door een luchtbel die bezocht in een van de kransslagaders. Het is belangrijk om een ​​damp-naar-nat handhaven; om de invoer van bellen in de vaten te voorkomen. Beperkingen van de Techniek Deze techniek is niet geschikt als een onderzoeker wil effecten op een volledig functionerend hart onderzoeken. Dat zou een orthotope transplantatie techniek die tot nu toe onmogelijk is gebleken voeren vereisen. Belang met betrekking tot bestaande methoden Wil men de effecten op een volledig gevasculariseerd, solide orgaantransplantatie in de muis te bestuderen, dan is het hart model is waarschijnlijk de eenvoudigste om te overmeesteren. Muismodellen van long-, nier-en levertransplantatie bestaan, maar zijn veel moeilijker te leren en perfect. Kritische stappen Binnen het Protocol Het is van vitaal belang dat volledige dikte pezels, waaronder het vasculaire adventitia en de intima van de hechtdraad naald worden bereikt. Evertion van de randen zorgt dat er intima-aan-intima contact, hetgeen helpt bij het afdichten en genezing van de anastomose. Een andere factor is van vitaal belang te waarborgen dat de spanning van de anastomose sutuurlijnen is optimaal. Te los en er zal onomkeerbaar lekken zijn, te strak en vernauwing te stromen zal resulteren. Als aan de arteriële kant zal dit leiden tot een slechte doorbloeding van het transplantaat, indien aan de veneuze zijde een overbelaste hart zal leiden. Boven alles, zal herhaling, consistentie van de procedure en de voortdurende aandacht voor detail goede resultaten en financierbaar en publiceerbaar maken van gegevens opleveren.

In een tijdperk waarin het mogelijk is om nier, long, lever en pancreas transplantaties uit te voeren in muizen, de hoeksteen van de fundamentele orgaantransplantatie en immunologie onderzoek sinds 1973 1-4 blijft heterotopisch harttransplantatie model in de muis. In de tussenliggende jaren zijn verschillende kranten zijn gepubliceerd detaillering verbeteringen / verfijningen 5,6 tot deze procedure. Als een model van solide orgaan voornamelijk vascularized transplantatie deze procedure is ongeëvenaard. Zodra knie procedure leent voor onderzoek naar allogene afstotingsreacties 7, de ontwikkeling van chronische vasculopathieën 8 en de mechanismen van ischemie reperfusie schade 9. De sleutels tot succesvol leren van deze procedure zijn net als elke andere operatie, geduld van de kant van de instructeur en de leerling en aandacht voor detail. Aan het begin van het proces de nieuwe chirurg dat they zal vele uren besteden aan elke transplantatie. Naarmate de ervaring toeneemt, zal chirurgische tijden, en dus ischemie, drastisch te verminderen. Met aandacht voor de details van elke stap zal vroeg of laat leiden tot succes. Terwijl de instructeur hun best kunnen doen om door te geven, en te anticiperen, alle mogelijke valkuilen die bij deze operaties kunnen worden aangetroffen, zal de &quot;creatieve&quot; trainee waarschijnlijk vinden sommige van hun eigen! De basis van de procedure zijn als volgt. De donor stijgend aortaboog end-to-side anastomose aan de ontvanger abdominale aorta en de longslagader donor end-to-side anastomose aan de ontvanger abdominale inferieure vena cava (IVC). Bloed stroomt van de begunstigde aorta retrograde wijze via donor aorta naar de coronaire slagaders. Nadat het bloed stroomde door het coronaire systeem het riool in het rechter atrium via de coronaire sinus wordt gepompt in de rechter ventrikel envervolgens via de longslagader naar de ontvanger IVC. Zo het coronaire systeem wordt geleverd arteriële en sinusritme terug naar het transplantaat in 1-2 minuten reperfusie. Aangezien de linker kamers van het hart zijn in wezen druk onder-loaded de linker ventrikel vrije wand zal verschrompelen na verloop van tijd.

<table><tbody><tr><td>Instrument</td><td>Roboz #</td><td>Fine Science Tools #</td><td>Arosurgical #</td></tr><tr><td>Straight micro-dissecting forcep #5</td><td>RS-5015</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Curved micro-dissecting forcep #7</td><td>RS-5047</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>Curved serrated forcep</td><td>RS-5137</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Vannas micro-dissecting scissors, short</td><td>RS-5610</td><td></td><td>09.140.08</td></tr><tr><td>Micro-dissecting scissors, straight, sharp, long</td><td></td><td>11.602.11</td><td></td></tr><tr><td>Micro spring handle needle holder</td><td></td><td></td><td>11.549.15</td></tr><tr><td>Straight mosquito forcep</td><td></td><td>91308-12</td><td></td></tr><tr><td>Micro-dissecting scissors, straight, blunt</td><td>RS-5962</td><td>14078-10</td><td></td></tr><tr><td>Micro-dissecting scissors, curved, blunt</td><td>RS-5981</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>Micro retractor</td><td>RS-6540</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Instrument tray, 10&rdquo; x 6 &frac12;&rdquo; x &frac34;&rdquo;</td><td>RT-1350S</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Silk suture, 5/0, 22.5 m spool</td><td></td><td>18020-50</td><td></td></tr><tr><td>10/0 nylon</td><td></td><td></td><td>T4A10Q07</td></tr><tr><td>5/0 silk</td><td></td><td></td><td>E19A05N</td></tr><tr><td>Gloves</td><td></td><td>Biogel from Medex Supply</td><td></td></tr><tr><td>Drapes</td><td></td><td>Precept, #64-9012-9</td><td></td></tr><tr><td>Syringes</td><td></td><td>B-D 1 cc insulin, #329424</td><td></td></tr><tr><td>Cotton applicators</td><td></td><td>Fisher-brand, #23-400-100</td><td></td></tr><tr><td>Povidone-Iodine swabs</td><td></td><td>PDI, #B40600</td><td></td></tr><tr><td>4/0 Cotton ties</td><td></td><td></td><td>Domestic cotton autoclaved with instruments</td></tr></tbody></table>

muizen heterotope heart transplant techniek

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

Het is nu meer dan veertig jaar geleden dat deze techniek voor het eerst werd gemeld door Corry, Wynn en Russell. Hoewel het duurde een aantal jaren voor andere laboratoria bekwamen in te worden en gebruik maken van deze techniek, is het nu veel gebruikt door vele laboratoria over de hele wereld. Een belangrijke verfijning van de oorspronkelijke techniek werd ontwikkeld en gerapporteerd in 2001 door Niimi. Hier beschreven, zijn de technieken die in de loop van meer dan een decennium in de handen van drie chirurgen (Plenter, Grazia, Pietra) in ons centrum. Deze technieken worden nu doorgegeven aan een jongere generatie van chirurgen en onderzoekers. Grotendeels gebaseerd op de Niimi ervaring, hebben de procedures die vrijkomt bij de fijne details - details die we zullen trachten hier betrekking op zo&#39;n manier dat anderen in staat zijn om deze zeer bruikbaar model te gebruiken. Net Niimi, hebben we ontdekt dat een video hulpmiddel bij het leren is een onbetaalbare bron voor de beginner.

<html> Het gebruik van deze chirurgische techniek opent de weg voor zowel eenvoudige graft survival / afwijzing studies, of heel complexe experimentele protocollen. In het onderzoek kort beschreven in de onderstaande figuur, zochten we de betrokkenheid te bepalen, indien aanwezig, van Fas en / of perforine als mechanismen van CD4 T-cel gemedieerde cardiale afwijzing. Dit werd mogelijk gemaakt door de buitengewone reeks muis stammen die vandaag beschikbaar zijn. Resultaten tonen aan dat de directe afwijzing van cardiale allogene door CD4-effector-T-cellen nodig de alternatieve bijdrage van graft Fas expressie en T-cel perforine expressie. Voor zover ons bekend, is dit de eerste demonstratie dat cytolytische activiteit van CD4 T-cellen een obligaat rol voor primaire acute allograftafstoting in vivo kunnen spelen. 1.jpg &quot;/&gt; . Figuur 1 Perforine en Fas Represent Verplichte en Parallelle Wegen van CD4 T-cel gemedieerde Cardiac Afwijzing B6, B6 PFPKO (perforine knock-out), en B6 gld (Fas-ligand deficiënt) CD4 T-cellen werden gebruikt om B6 rag reconstrueren - / - ontvangers van C3H wild type of Fas-deficiënte C3H lpr cardiale transplantaten. Verwijdering van Fas alleen (♦, p = NS versus controle Wt C3H + B6 CD4 T-cellen) van de donor harten of verwijdering of perforine alleen van de CD4 T-cellen (■, p = NS versus controle Wt C3H + B6 CD4 T cellen) niet afschaffen afwijzing. Interessant is dat de verwijdering van FasL van effector CD4 T-cellen hebben vertraging afstoting aanzienlijk (●, p &lt;0,02 vs G C3H + B6 CD4 T-cellen, p &lt;0,01 vs G C3H + B6 PFPKO CD4 T-cellen en p &lt;0,01 vs . C3H lpr + B6 CD4 T-cellen). Echter, werden de meeste allografts steeds afgewezen (4 of 5). Aanzienlijk, de gelijktijdige verwijdering van donor Fas en CD4 T-cel perforinevolledig afgeschaft afwijzing (○, p &lt;0.002 versus controle Wt C3H + B6 CD4 T-cellen, Wt C3H + B6 PFPKO CD4 T-cellen, en C3H lpr + B6 CD4 T-cellen). Deze intrekking aanzienlijk robuuster dan de afzonderlijke verwijdering van CD4 T-cel FasL was (○, p &lt;0.003 versus controle Wt + B6 C3H gld CD4 T-cellen). Van Grazia et al. 10. Met toestemming overgenomen.

Het manuscript beschrijft de stappen die nodig zijn om de heterotopische harttransplantatie uit te voeren in de muis.

Muizen Heterotope Heart Transplant Techniek

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

Het algemene doel van deze procedure is het uitvoeren en beoordelen van de vitaliteit van een heterotope harttransplantatie bij een muis. Dit wordt bereikt door eerst zorgvuldig het hart van de donor te oogsten. In de tweede stap wordt de graftplaats bij de ontvanger chirurgisch geprepareerd om voldoende ruimte te creëren voor de implantatie van het donorweefsel.Vervolgens wordt het donorhart getransplanteerd door het aanleggen van arteriële en veneuze anastomosen. In de laatste stap wordt de hemostase van de vasculaire hechtlijnen geverifieerd voordat de ontvanger wordt gesloten. Ten slotte kan de gezondheid van het transplantaat dagelijks worden gemonitord via palpatie om de effecten van verschillende factoren op de overleving van het donortransplantaat te evalueren.Een visuele demonstratie van deze methode is essentieel, aangezien de anastomotische stappen moeilijk aan te leren zijn. De spanning van de hechtingen moet precies goed zijn om lekkage en belemmering van de bloedstroom te voorkomen. Om het donorhart te oogsten, moet het geanestheseerde donordier eerst worden geïmmobiliseerd met vierpuntsbevestigingen.Veeg na het scheren van de vacht de huid af met alcohol. Maak na het wegsnijden van de huid een transversale incisie net onder het diafragma. Snijd ter opening van de buikholte het diafragma posterior van de costale aanhechting door.Maak een volledige incisie door de volledige dikte, snijd de posterolaterale borstholte open aan de linker- en rechterzijde van de borstkas, isoleer de vena cava inferior of IVC, en plaats vervolgens een losse 5-0 zijden hechting rond de IVC nabij de instroom in het rechteratrium. Injecteer 1 cc van 4 °C hepariniseerde saline in de IVC, ligeer het vat met de 5-0 zijden hechting en klem het af.Ligeer en hecht vervolgens de rechter vena cava superior op een vergelijkbare wijze, rol het hart voorzichtig naar de rechterkant van het dier en isoleer en ligeer de linker vena cava superior om de linker longslagader bloot te leggen. Fixeer het hart nu onder een nat gaasje en disseceer de thymus stomp weg van de hoofdlongslagader, de linker- en rechter longslagadertakken en de aortaboog. Disseceer de aortaboog vrij van het omringende weefsel en gebruik vervolgens microschaartjes om de aorta proximaal van de rechter arteria brachiocephalica door te snijden, totdat er geen vertakkingen meer zijn tussen het hart en het doorsnijpunt van de aorta.Dit deel van de aortaboog vormt de arteriële manchet voor het implantatieproces. Sla vervolgens de aortamanchet naar beneden om de truncus pulmonalis en de linker- en rechtertakken van de longslagader bloot te leggen. Disseceer vervolgens stomp de linker- en rechterlongslagadertakken zo ver mogelijk van het hart weg van het omliggende weefsel. Verdeel de stam van de arteria pulmonalis zo distaal mogelijk, net proximaal van de bifurcatie, om de veneuze cuff voor het implantatieproces te vormen. Knoop vervolgens een 5-0 zijden hechtdraad rond de basis van het hart. Snijd het weefsel bij de basis los en breng het weggesneden weefsel over naar zoutoplossing van 4 °C.De totale oogsttijd bedraagt ongeveer 10 tot 15 minuten om het donorhart te implanteren. Nadat het ontvangende dier is gebenestheseerd en geïmmobiliseerd, wordt de huid afgeveegd met povidonjodium en tussentijds afgespoeld met alcohol of steriel water. Herhaal dit drie keer en drapeer vervolgens de chirurgische plaats op steriele wijze.Begin vervolgens de procedure door een verticale abdominale incisie van twee centimeter in de middellijn te maken. Om de buikholte te betreden, wordt de darm superieur teruggetrokken en het weefsel op de borst geëxternaliseerd, waarbij het wordt omwikkeld met steriel gaas dat is bevochtigd met steriele zoutoplossing. Isoleer vervolgens de aorta abdominalis en de vena cava inferior onder de nieraanvloeden en plaats vier aught katoenen ligaturen rond het weefsel, eerst superieur en daarna inferieur ten opzichte van de anastomoseplaats.Identificeer alle lumbale vaten binnen het gezichtsveld en ligeer deze met 10 T nylon. Zet de hechtingen, waarbij eerst de inferieure katoenen knoop wordt vastgezet, gevolgd door de superieure knoop, om wat bloed in de aorta te behouden zodat de autotomie van de aorta gemakkelijker uit te voeren is. Nadat de knopen zijn vastgezet, wordt het lumen van de aorta gepenetreerd met een naald van 30 gauge.Gebruik vervolgens fijne microschaartjes om de incisie in een rechte lijn langs de longitudinale as van het vat te verlengen tot een lengte van ongeveer twee millimeter. Plaats nu een 10 aut nylon hechtdraad. Zet een steek in de donor-aorta en in de onderste hoek van de incisie in de recipient-aorta om een end-to-side anastomose van de donor-aorta naar de recipient-aorta te maken.Nadat de hechting is geknoopt, plaatst u een tweede 10 T nylon hechting tegenover de eerste in de aorta van de donor en in de superieure hoek van de incisie en de abdominale aorta, en knoopt u ook deze hechting. Wanneer de tweede hechting is geplaatst, maakt u een doorlopende hechting van superieur naar inferieur in de laterale wand van de aorta, waarbij u er nauwkeurig op toeziet dat de intima tegen elkaar worden gebracht en worden vastgezet aan de eerder geplaatste stay-hechting. Hecht vervolgens de mediale zijde op een doorlopende wijze en knoop deze vast, waarbij de eerste en laatste steken aan elke zijde zo dicht mogelijk bij de stay-hechtingen worden geplaatst.Streef ernaar om drie gelijkmatig verdeelde hechtingen tussen deze twee te plaatsen, zodat er in totaal vijf hechtingen zijn. Om vervolgens een zijdelings-uiteinde anastomosis te maken van de longslagader van de donor naar de IVC van de ontvanger, doorboort u eerst de IVC met een naald van 30 gauge en gebruikt u daarna de fijne microschaar om de incisie in een rechte lijn langs de longitudinale as van het vat met ongeveer twee millimeter te verlengen. Bind daarna de longslagader van de donor met nylon 10-0 vast aan de onderste hoek van de incisie in de IVC.Plaats een tweede 10 oh nylonhechting tegenover de eerste in de donorarterie en de superieure hoek van de incisie in de abdominale Vena Cava Inferior (VCI) en knoop deze vast. Maak vervolgens een doorlopende hechtlijn tussen de arteria pulmonalis en de VCI en knoop deze vast, waarbij de eerste en laatste steken aan elke zijde zo dicht mogelijk bij de fixatiehechtingen worden geplaatst. Streef naar vijf gelijkmatig verdeelde steken tussen deze twee, wat neerkomt op in totaal zeven steken.Maak nu de distale four OTT katoenen knoop los om de veneuze doorbloeding te herstellen. Zodra de hemostase van de veneuze anastomose is vastgesteld, wordt de proximale four OTT katoenen knoop geleidelijk losgemaakt, waarna de arteriële anastomose op hemostase wordt gecontroleerd. Wanneer beide anastomosen als stabiel worden beschouwd, worden de katoenen knopen bij de muis verwijderd, de darm teruggeplaatst in de buikholte en wordt de buikwand in twee lagen gesloten met five aught zijde.Dien direct na het sluiten, in een continue stroom, een bolus van 1 mL steriele, warme normale zoutoplossing toe in de buikholte ter vochtresuscitatie en injecteer 0,8 mL normale zoutoplossing subcutaan. Om tot slot de graftfunctie via dagelijkse transabdominale palpatie te beoordelen, wordt de muis gefixeerd zoals bij een intraperitonele injectie. Druk vervolgens voorzichtig met de top van de wijsvinger tegen de buikwand om de slagkracht en regelmaat van de graft vast te stellen.Geef de palpatiekwaliteit een score van vier voor een normale amplitude en frequentie tot nul voor een niet kloppend, afgestoten transplantaat. Deze chirurgische techniek faciliteert zowel eenvoudige studies naar de overleving van transplantaten als complexe experimentele protocollen. In dit representatieve experiment werd bijvoorbeeld de betrokkenheid van fast en/of perforine als mechanismen van CD4-positieve T-cel-gemedieerde cardiale afstoting onderzocht.De resultaten tonen aan dat de directe afstoting van de cardiale allografts door CD4-positieve effector-T-cellen de alternatieve bijdrage vereist van graftfast-expressie en T-cel-perran-expressie, wat voor het eerst aangeeft dat cytolytische activiteit door CD4-positieve T-cellen een verplichte rol kan spelen bij primaire acute allograftafstoting in vivo. Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht moeten hebben in hoe u de hechtingen in uw anastomose moet plaatsen om tot een gezond kloppend cardiaal graft te komen.

murine-heterotopic-heart-transplant-technique

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De muis heterotope harttransplantatie model is bewezen door vele onderzoekers een belangrijke methode voor het bestuderen van de mechanismen van de afwijzing en immuunrespons worden. Echter, de betrokken technieken zijn nog steeds uitdagend. Door het wijzigen van standaard technieken die we hebben succes gehad met meer dan 1000 transplantaties.

Heterotope harttransplantatie in Muizen

Het murine cervicale harttransplantatie model is geschikt voor immunologische en ischemie-reperfusie schade studies. We pasten de procedure met een niet-hechtingsmanchet techniek en uitgevoerd meer dan 1000 succesvolle transplantaties met deze benadering.  Hierin geven we meer details van deze techniek om de video te vullen.

Muizen Baarmoederhalskanker harttransplantatie Model met een aangepaste manchet Techniek

Er wordt een techniek gedemonstreerd voor de microchirurgische procedure voor heterotope transplantatie van harten bij muizen, inclusief vereenvoudigde methoden voor donoroogst en anastomose van de bloedvaten van de ontvanger.

Een gewijzigde methode voor Heterotope Mouse Hart transplantatie

De manchettechniek verkort en vergemakkelijkt het model van heterotope cervicale harttransplantatie bij muizen door technisch uitdagende hechtingsanastomosen van kleine bloedvaten te vermijden. De technische details die in dit videopapier worden getoond, zouden onderzoekers in staat moeten stellen dit model in hun laboratoria tot stand te brengen.

Heterotopische Cervical harttransplantatie in Muizen

We introduceren een binnenband benadering van de manchettechniek voor muis cervicale heterotopische harttransplantatie om evert het vat over de manchet te helpen. We ontdekten dat de samenwerking tussen twee ervaren chirurgen de operatietijd aanzienlijk verkort.

Optimalisatie van de Cuff Techniek voor Murine Heart Transplantation

Een nieuwe techniek voor bloedcircuitreconstructie in een heterotopisch abdominale muisharttransplantatiemodel wordt gedemonstreerd.

Bloedcircuitreconstructie in een abdominale muis harttransplantatiemodel

In het huidige protocol wordt een muisharttransplantatiemodel gebruikt voor het onderzoeken van het mechanisme van cardiale allograftafstoting. In dit heterotope harttransplantatiemodel wordt de operatie-efficiëntie verbeterd en wordt de overleving van harttransplantaten verzekerd door een cervicale end-to-end anastomose van hartimplantatie met behulp van een gemodificeerde Cuff-techniek.

Een aangepaste manchettechniek voor muis cervicaal heterotopisch harttransplantatiemodel

Harttransplantatiemodellen bij muizen vertegenwoordigen waardevolle onderzoeksinstrumenten voor het bestuderen van de immunologie van transplantaties. Het huidige protocol beschrijft muis heterotopische cervicale harttransplantatie waarbij manchetten op de gemeenschappelijke halsslagader van de ontvanger en de longslagaderstam van de donor worden geplaatst om laminaire bloedstroom mogelijk te maken.

Muis heterotopische cervicale harttransplantatie met behulp van vasculaire manchetten

Dit artikel beschrijft een aangepaste techniek voor heterotope gevasculariseerde harttransplantatie met bijgewerkte aseptische techniek, analgesie en anesthesie.

Een gemodificeerd muizen heterotopisch harttransplantatieprotocol dat overeenkomt met hedendaagse normen voor aseptische techniek, anesthesie en analgesie

Dit protocol presenteert een vereenvoudigde, end-to-side hechtingsanastomosetechniek voor muis-cervicale harttransplantatie, en biedt een robuust en reproduceerbaar model voor het bestuderen van transplantatie-immunologie.

Cervicale heterotopische muisharttransplantatie met behulp van end-to-side anastomosetechniek om transplantatie-immunologie te bestuderen

Leer de heterotope harttransplantatie bij muizen voor transplantatiebiologie met arteriële en veneuze anastomose. Deze methode omvat donorhart-oogst, implantaat en dagelijkse palpatie om de gezondheid van het transplantaat te beoordelen.

Muizen Heterotope Heart Transplant Techniek

Meer video's verkennen