Name: Een techniek om Screen Amerikaanse Beech voor Weerstand tegen de Beech Scale Insect ( Cryptococcus fagisuga Lind.) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 47 s
Description: Leer een protocol om Amerikaanse beuken te screenen op resistentie tegen de beukenschaal Cryptococcus fagisuga. Deze methode helpt onderzoekers resistente bomen te identificeren voor bosbeheer.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs zeer erkentelijk voor de financiering van de US Forest Service Bos gezondheidsbescherming Evaluatie Monitoring en Special Technology Development Programma&#39;s die de ontwikkeling, aanpassing en toepassing van de hier beschreven om bomen die resistent zijn en vatbaar voor de beuk schaal insect identificeren protocol hebben gesteund. We zijn ook dankbaar voor de Holden Arboretum, Kirtland, OH, voor hun voortdurende samenwerking en ondersteuning van onze Amerikaanse beuk weerstand bevolkingsonderzoek.

1 Plant Materiaal:. Mature gebied bomen, Ingemaakte Zaailingen, of ingegoten Enten <ol><li> Voor veldproeven, selecteert volwassen gezonde Amerikaanse beuk bomen die geen tekenen van grootschalige besmetting of ziekte voor het testen voor mogelijke weerstand te tonen. Zichtbaar gevoelig bomen zal ook moeten worden geïdentificeerd om te worden gebruikt als een controle (figuur 1). </li><li> Voor het testen van pot zaailingen of enten, verzamelen en ontkiemen beukennootjes zoals beschreven in Koch &amp; Carey, 2004 of transplantaat telg zoals beschreven in Carey et al., 2013. </li><li> Groeien zaailingen of transplantaten in potgrond mix gewijzigd met 47 g micronutriënten, 477 g slow-release meststof 15N-3,9 p-9.9K, 700 g grof perliet en 75 g aluminiumsulfaat per 2.8 cu. ft zak. Als later in het groeiseizoen nodig, bevruchten planten wekelijks met oplosbare 17N-1.3P-14.1K bij 200 ppm stikstof. </li><li> Tijdens het groeiseizoen, houden planten in een schaduw huis. Laat planten om slapende buiten te gaan in het najaar voorafgaand aan het verplaatseneen gecontroleerde temperatuur opslag (~ 4 ° C) van november tot april. </li></ol> 2. Verzameling van Beech Scale Eieren <ol><li> In een BBD-besmet stand, inspecteren zwaar besmette bomen (gemakkelijk te herkennen aan hun &#39;witte&#39; uiterlijk, figuur 1A) met een hand vergrootglas om de aanwezigheid van eieren, meestal overvloedig van half juli tot half augustus te bevestigen. </li><li> Gebruik een penseel om voorzichtig borstelen de witte wasachtige massa&#39;s van volwassen schildluizen, eieren en ander vuil, in een plastic afsluitbare een liter opvangzak (Figuur 1B). Verzamelen van minimaal drie bomen ten minste 12 m van elkaar. </li><li> Indien nodig, opslaan eieren in de verzegelde opvangzak maximaal twee weken bij 4 ° C. Tape een klein stukje (2,5 cm vierkant) van vochtige polyethyleenschuim aan de binnenkant van de zak te voorkomen dat de eieren uitdrogen. </li><li> Om de schaal eieren (0,15 x 0,25 mm) te scheiden van de volwassenen (0,60 mm) en debris, de bouw van een zeef met een kort stuk van 2 &quot;PVC pijp en een koppeling met een vierkant stuk van 250 micron nylon mesh (figuur 2) te ondersteunen. </li><li> Giet het mengsel van volwassenen, was, eieren en vuil van de opvangzak op de zeef met een kleine kwast zachtjes stimuleren de eieren door het gaas overgaan in een glazen petrischaal hieronder. Plastic petrischaaltjes moeten worden omdat ze hebben meer statische elektriciteit, waardoor het moeilijk om de eieren te verplaatsen. Eieren voor en na zeven zijn weergegeven in figuur 3. </li><li> Gezuiverd eieren kunnen worden opgeslagen in de petrischaal bij 4 ° C gedurende ten minste een week. Om te voorkomen dat de eieren uitdrogen, tape een vochtig stuk schuim om het deksel en afdichting met Parafilm. </li></ol> 3. Egg levensvatbaarheid Testen <ol><li> Om ei levensvatbaarheid te beoordelen, gebruik dan een 10 cc spuit een dunne ring van vaseline rond de omtrek van de bodem van een 60 mm glazen petrischaal (Figuur 4A </strong&gt;). </li><li> Breng ongeveer 100 eieren aan het midden van de ring, plaats het deksel op de petrischaal en afdichting met Parafilm. Laat de afgesloten petrischaal ongestoord blijven bij kamertemperatuur gedurende 2 weken of 3 weken als eieren werden bewaard bij 4 ° C voor het begin van de test. </li><li> Gearceerde nymphomanes vast in de vaseline worden en kunnen gemakkelijk worden geteld en lege eieren gemakkelijk onderscheiden van uitgebroede eieren door hun kleur en glans (figuur 4B). Bereken levensvatbaarheid door het aantal van nimfen door de som van de lege eieren plus de resterende volledige eieren. Goede levensvatbaarheid moet in de 75% tot 90% uitgekomen eieren bereik. </li></ol> 4. Schaal Resistance Screening van grote volwassen beuken in het Veld <ol><li> Voor een kwantitatieve test, tellen 500 eieren met behulp van een dissectie microscoop en met een kleine spatel voorzichtig bestrooi ze over het midden van een predampened, open-cel 10 x 15 x 1.3 cm rechthoek van polyethyleen schuim. Aantemperen schuim, nat het dan knijp zoveel mogelijk water. Voor een kwalitatieve test, kan 500 eieren worden geteld en geplaatst in een klein glazen flesje en een &quot;vulling&quot; lijn die kan worden gebruikt om extra batches van ongeveer 500 eieren meten. </li><li> Plaats de foam pad op de proef boom met het ei zijde tegen de bast. Houd het kussen op zijn plaats met touw, touw, of geplastificeerd hardware draad. Kunststof of metaal gebaseerd materiaal moet worden gebruikt in plaats van natuurlijke vezel materialen die gemakkelijker weggevangen door wilde dieren. </li><li> Lijn de bovenkant en zijkanten van een voorgesneden 23 x 30 cm stuk dampopen waterdichte huis wrap met acetaat basis van siliconen lijm en plaats deze op het schuim testveld. Druk de randen van het huis wrap om de boom om een ​​waterdichte afdichting te creëren. Plaats nylon touw of geplastificeerd hardware draad rond de boom en het huis wrap, om het op zijn plaats terwijl de lijm sets (figuur 5). </li><li> Plaats minste tweetestblokken op elke test structuur, bij voorkeur aan weerszijden van de stam. Op elke locatie, te testen, pads op minstens 2 gevoelig bomen (met duidelijke natuurlijke schaal besmetting) als een controle. Voorafgaand aan het plaatsen van de test pads op controle bomen, moet elk natuurlijk voorkomend schaal insecten of eieren met een stevige borstel. Opmerking: Foam pads met eieren kan ook op bomen geplaatst worden voor het doel van opvoeding schaal eieren, die bijzonder nuttig kan zijn in gebieden waar de besmetting laag is. </li></ol> 5. Schaal Resistance Screening van Ingemaakte Zaailingen of Enten <ol><li> Voor het testen, selecteert ingemaakte bomen met een minimale diameter van 1 cm (remklauw 5 cm boven de grond lijn) die hoog genoeg om minstens 2 afzonderlijke testen elektroden die op hen zijn. Snoei kleine zijtakken wanneer dat nodig is om ruimte te maken voor de test pads. </li><li> Gebruik een dissectiemicroscoop te tellen 150 eieren en strooi ze over een voorgesneden en bevochtigd 2,5 x 7,6 x 1,3 cm met open cellen polyethlene foam pad. </li><li> Bevestig de foam pad om zaailing met het ei kant tegen de schors, met behulp van geplastificeerd draad. Wikkel een klein vierkant van huis wikkel rond de zaailing net boven het schuim en sluit deze af met acetaat basis van siliconen (zie figuur 6A). </li><li> Omvatten bekende vatbaar zaailing gezinnen of enten als controles. </li></ol> 6. Data Collection Opmerking: Ongeveer 52-57 weken na het plaatsen van de schuim en eieren op de test bomen, kunnen de gegevens worden verzameld. Het is belangrijk dat dit niet gebeurt nadat volwassenen begonnen om eieren te leggen zodat hun voortplantingsvermogen worden bepaald. Op sommige resistente bomen is het niet ongebruikelijk om te zien een klein aantal volwassenen te vestigen, maar met geen voortplanting plaatsvindt. <ol><li> Verwijder voorzichtig de foam pad en tel het aantal volwassen schildluizen gevestigd op de schors met een loupe of vergrootglas (10X). </li><li> Wanneer de foam pad wordt verwijderd, is het u nietncommon voor sommige volwassenen en meest ei clusters af van de boom te trekken met het schuim (zie figuur 7). Met behulp van een microscoop ontleden, tel het ei clusters en volwassenen die zijn gebleven verbonden aan de foam pad. </li></ol>

<ol><li>Houston, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+to+artificially+infest+beech+bark+with+the+scale%2C+Cryptococcus+fagisuga+%28Lindinger%29%5BTitle%5D)+AND+%22U.S.+Forest+Service%22%5BJournal%5D)">A technique to artificially infest beech bark with the scale, Cryptococcus fagisuga (Lindinger).</a> U.S. Forest Service. , Northeastern Forest Experiment Station. Broomhall, PA. (1982).</li>
<li>Houston, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+beech+resistance+to+Cryptococcus+fagisuga%5BTitle%5D)+AND+%22Proceeding%2C+IUFRO+beech+bark+disease+working+party+conference%22%5BJournal%5D)">American beech resistance to Cryptococcus fagisuga.</a> Proceeding, IUFRO beech bark disease working party conference. , U.S. Department of Agriculture, Forest Service, Northeastern Forest Experiment Station. Washington, D.C. 38-42 (1983).</li>
<li>Ehrlich, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+beech+bark+disease%3A+a+nectria+disease+of+Fagus%2C+following+Cryptococcus+fagi%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The beech bark disease: a nectria disease of Fagus, following Cryptococcus fagi.</a> 10, 593-692 (1934).</li>
<li>Papaik, M. J., Canham, C. D., Latty, E. F., Woods, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+an+introduced+pathogen+on+resistance+to+natural+disturbance%3A+beech+bark+disease+and+withdrow%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Effects of an introduced pathogen on resistance to natural disturbance: beech bark disease and withdrow.</a> 35, 1832-1843 (2005).</li>
<li>Miller-Weeks, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+of+beech+bark+disease+in+New+England+and+New+York%5BTitle%5D)+AND+%22Proceeding%2C+IUFRO+beech+bark+disease+working+party+conference%22%5BJournal%5D)">Current status of beech bark disease in New England and New York.</a> Proceeding, IUFRO beech bark disease working party conference. , U.S. Department of Agriculture, Forest Service, Northeastern Forest Experiment Station. Washington, D.C. 21-23 (1983).</li>
<li>Houston, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beech+bark+disease%3A+The+aftermath+forests+are+structured+for+a+new+outbreak%5BTitle%5D)+AND+%22J.+For%22%5BJournal%5D)">Beech bark disease: The aftermath forests are structured for a new outbreak.</a> J. For. 73, 660-663 (1975).</li>
<li>Twery, M. J., Patterson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variations+in+beech+bark+disease+and+its+effects+on+species+composition+and+structure+of+northern+hardwood+stands+in+central+New%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Variations in beech bark disease and its effects on species composition and structure of northern hardwood stands in central New.</a> 14, 565-574 (1984).</li>
<li>Jakubus, W. J., McLaughlin, C. R., Jensen, P. G., McNulty, S. A., et al. Alternate year beechnut production and its influence on bear and marten populations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJakubus%2C+WJ+%22Beech+Bark+Disease%3A+Proceedings+of+the+Beech+Bark+Disease+Symposium%22">Beech Bark Disease: Proceedings of the Beech Bark Disease Symposium</a>. Evans, C. A., et al. , U.S. Forest Service, Northern Research Station. Newtown Square, PA. 79-87 (2005).</li>
<li>Koch, J. L., Carey, D. W., Mason, M. E., Nelson, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+beech+scale+resistance+in+full-+and+half-sib+families%5BTitle%5D)+AND+%22Can.+J.+For.+Res%22%5BJournal%5D)">Assessment of beech scale resistance in full- and half-sib families.</a> Can. J. For. Res. 40, 265-272 (2010).</li>
<li>Koch, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beech+bark+disease%3A+The+oldest+%E2%80%9Cnew%E2%80%9D+threat+to+American+beech+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Outlooks+Pest+Manag%22%5BJournal%5D)">Beech bark disease: The oldest “new” threat to American beech in the United States.</a> Outlooks Pest Manag. 21, 64-68 (2010).</li>
<li>Koch, J. L., Mason, M. E., Carey, D. W., et al. Screening for resistance to beech bark disease: improvements and results from seedlings and grafted field selections. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKoch%2C+JL+%22Proceedings+of+the+4th+International+Workshop+on+Genetics+of+Host-Parasite+Interactions+in+Forestry%22">Proceedings of the 4th International Workshop on Genetics of Host-Parasite Interactions in Forestry</a>. Palmieri, K., et al. , U.S. Forest Service, Pacific Southwest Research Station. Albany, CA. (2012).</li>
<li>Leak, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fifty+year+impacts+of+the+beech+bark+disease+in+the+Bartlett+Experimental+Forest%2C+New+Hampshire%5BTitle%5D)+AND+%22Northern+J.+Appl.+For%22%5BJournal%5D)">Fifty year impacts of the beech bark disease in the Bartlett Experimental Forest, New Hampshire.</a> Northern J. Appl. For. 23, 141-143 (2006).</li>
<li>Koch, J. L., Carey, D. W., et al. Controlled cross-pollinations with American beech trees that are resistant to beech bark disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKoch%2C+JL+%22Proceedings+of+the+14th+Central+Hardwood+Forest+Conference%22">Proceedings of the 14th Central Hardwood Forest Conference</a>. Yaussy, D. A., et al. , U.S. Forest Service, Northeastern Research Station. 358-364 (2004).</li>
<li>Carey, D. W., Mason, M. E., Bloese, P., Koch, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hot+callusing+for+propagation+of+American+beech+by+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22HortSci%22%5BJournal%5D)">Hot callusing for propagation of American beech by grafting.</a> HortSci. 48, 620-624 (2013).</li>
<li>Koch, J. L., Carey, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+resistance+of+American+beech+to+beech+bark+disease%3A+knowledge+through+2004%5BTitle%5D)+AND+%22Beech+Bark+Disease%3A+Proceedings+of+the+Beech+Bark+Disease+Symposium%22%5BJournal%5D)">The genetics of resistance of American beech to beech bark disease: knowledge through 2004.</a> Beech Bark Disease: Proceedings of the Beech Bark Disease Symposium. Evans, C. A., et al. , U.S. Forest Service, Northern Research Station. Newtown Square, PA. 98-105 (2005).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.

De kritische stappen nodig zijn voor succes van deze test omvatten het uitvoeren van een levensvatbaarheidstest op de eieren en het gebruik van gevoelige controles op elke locatie getest en met gepot materialen. Het is ook belangrijk om meer dan een testveld per boom of zaailing gebruiken. Wij hebben gevonden dat zowel het veld als in meer gecontroleerde proeven met potplanten, een frequente bron van fouten kan pad mislukking. Bijvoorbeeld, in het veld, zelfs met onze wijziging van de dekking van het testveld met huis w...

Beuken schors ziekte (BBD) heeft een nadelig effect op Amerikaanse beuk in Noord-Amerika al sinds de introductie van de invasieve beuken schaal insect, Cryptococcus fagisuga, in de Canadese provincie Nova Scotia in de late jaren 1890 3. Dit insect-ziekte complex wordt gestart wanneer de beuk schaal insect steekt zijn voeding stilet in de bast creëren kleine scheurtjes die ingang voor infectie door een van de Neonectria soort schimmel (Neonectria ditissima of Neonectria faginata). Als de schimmel mycelium groeien, kunnen grote delen van het weefsel sterft, uiteindelijk volledig girdling de boom. De schade van de ziekte verzwakt de boom, waardoor het gevoelig voor breuk bij hoge windsnelheden 4. Sterfte niveaus in de eerste golf van de ziekte zijn gemeld zo hoog als 50% 5 te zijn. Overleven bomen worden vaak ernstig misvormd als kankers vormen verminderen waarde van de boom als een houtproduct.0; Dergelijke bomen hebben een neiging voor root-kiemen die leidt tot de vorming van &quot;beuken struikgewas&quot; die voorkomen dat andere, meer gewenste soorten uit de instelling, het verminderen van de economische en ecologische waarde van de stand 6. Hoewel beuk schors ziekte is niet waarschijnlijk leiden tot het uitsterven van de Amerikaanse beuk, het verandert staan ​​samenstelling en gezondheid leidt tot een afname van voedsel en leefgebied voor wilde dieren 7,8. In stands beïnvloed door BBD jaren hebben bomen die vrij zijn van symptomen van de ziekte blijft gerapporteerd. Kunstmatige enting studies hebben aangetoond dat deze bomen zijn bestand tegen de schildluis 2. Zonder schaal besmetting, is er weinig kans voor Neonectria infectie, het minimaliseren van de impact van de schimmel. Grootschalige sterfte in Amerikaanse beuk door Neonectria infectie zonder voorafgaande schaal besmetting nooitgemeld, zodat de weerstand tegen de beuk schildluis resulteert in resistentie tegen BBD. Recent onderzoek naar het beheer van de BBD is gericht op de identificatie, vermeerdering, teelt, en het behoud van de Amerikaanse beuken met resistentie tegen de beuk schaal insect. Genetische studies hebben aangetoond dat de resistentie tegen de schildluis erfelijk en zorgvuldige selectie en kweken van resistente bomen kunnen leiden tot aanzienlijke verbetering in een enkele generatie 9. Deze bevinding heeft de inspanningen van de staat en de nationale bosbeheerders in de Verenigde Staten om de regionale zaadgaarden van resistente Amerikaanse beuk vast te stellen om een bron van genetisch diverse BBD-resistente zaad voor restauratie aanplant 10,11 aangewakkerd. Onderzoek heeft ook aangegeven dat bosbouwkundige manipulatie van stand genetica door het verwijderen van gevoelige bomen en het behoud van resistente bomen kunnen resulteren in verbeterings 9,12. &lt;/ P&gt; Beheer van BBD door boom verbeteractiviteiten of via het verrichten van bosbouwkundige voorschriften vereist het vermogen om te kiezen voor en te onderscheiden tussen beuken schaal-resistente en vatbare bomen. De hier gepresenteerde methoden zijn aangepast van een methode voor het eerst geïntroduceerd door Dave Houston om kunstmatig te enten zaailingen met beuken schaal eieren 1. De methode kan worden gebruikt als onderzoekshulpmiddel kwantitatieve trait loci (QTL) geassocieerd met resistentie of onderscheid te maken tussen resistente en vatbare gepot zaailingen of geënt ramets in genetische studies identificeren. Alternatief kan het worden gebruikt voor het screenen van bomen in het veld om resistente bomen identificeren zaadgaard ontwikkeling of retentie in het veld. Vatbare bomen kunnen worden geïdentificeerd en verwijderd om de effecten ziekte minimaliseren.

<table><tbody><tr><td>Nylon gaasvel, 250 micron</td><td><a href="http://www.amazonsupply.com/dp/B000FMWH1S/ref=sp_dp_g2c_asin" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Small Parts</a></td><td>CMN-0250-D</td><td>Maasopening: 250 microns vierkant, % open oppervlak: 34, draaddiameter: 180 micron, breedte: 24&amp;rdquo;, lengte: 12&amp;rdquo;, verpakkingshoeveelheid: 1</td></tr><tr><td>Tyvek Home Wrap</td><td><a href="http://www.lowes.com/pd_14582-2020-D13499991_0__" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> DuPont</a></td><td>D1349991</td><td>Rol van 9 ft x 150 ft, kan doormidden gesneden worden aangevraagd.</td></tr><tr><td>Polyethyleenschuim, &amp;frac12;&amp;rdquo; dik&amp;nbsp;</td><td><a href="http://www.colsfoam.com/apcfp/products.htm" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Columbus Foam Products</a></td><td></td><td>Rol van 2 ft x 50 ft</td></tr><tr><td>MetroMix 510</td><td><a href="http://sungro.com/products_displayProduct.php?product_id=118&amp;amp;brand_id=17" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sun Gro Horticulture</a></td><td></td><td>2.8 cu. ft. schors, veenmos, vermiculiet, schorsas, startvoedingslading (met gips), vertraagde stikstofafgifte en&amp;nbsp;dolomietkalk.</td></tr><tr><td>Osmocote Plus 15-9-12</td><td><a href="http://everris.us.com/product/15-9-12" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Everris</a></td><td>E903206</td><td>Standaard afgifte gedurende 3-4 maanden</td></tr><tr><td>Sight Savers 10X</td><td><a href="http://www.amleo.com/Bausch---Lomb-Illuminating-Codington-Magnifier-10x/p/CM10/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Bausch &amp;amp; Lomb</a></td><td>813434</td><td>Verlichte Coddington-loep, 10X vergroting</td></tr><tr><td>Nikon Mini Field Stereoscope</td><td><a href="http://www.opticsplanet.com/nikon-fieldmicroscope.html" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Nikon</a></td><td>7314</td><td>20X vergroting</td></tr><tr><td>Silicone II clear</td><td><a href="http://www.midlandhardware.com/159538.html" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> GE</a></td><td>159538</td><td>2.9 oz transparante kit voor ramen &amp;amp; deuren</td></tr></tbody></table>

een techniek om screen amerikaanse beech voor weerstand tegen de beech scale insect (<em&gt; cryptococcus fagisuga</em&gt; lind.)

A Technique to Screen American Beech for Resistance to the Beech Scale Insect (Cryptococcus fagisuga Lind.)

Beuken schors ziekte (BBD) resulteert in een hoge mate van initiële sterfte, met achterlating overlevende bomen die sterk verzwakt en vervormd. De ziekte wordt geïnitieerd door het voeren activiteiten van de invasieve beuk schildluis, Cryptococcus fagisuga die ingangspunten voor infectie leidt bij een van de Neonectria soorten schimmels. Zonder schaal besmetting, is er weinig kans voor schimmelinfectie. Met behulp van schaal eieren kunstmatig besmetten gezonde bomen in zwaar BBD beïnvloed stands aangetoond dat deze bomen waren resistent tegen de schildluis gedeelte van de ziekte complex 1. Hier presenteren we een protocol dat we hebben ontwikkeld op basis van de kunstmatige besmetting techniek Houston 2, die kan worden gebruikt om te screenen op schaal-resistente bomen in het veld en in kleinere gepot zaailingen en enten. De identificatie van schaal-resistente bomen is een belangrijk onderdeel van het beheer van BBD door boomverbeterprogramma&#39;s en bosbouwkundige manipulatie.

Figuur 6 toont een resistente zaailingen (C) en twee gevoelige zaailingen (D, E) vertonen verschillende graden van gevoeligheid. Een voorbeeld van wat een gevoelige volwassen boom ziet eruit als 57 weken na de kunstmatige besmetting test werd opgezet is weergegeven in figuur 5B. Wanneer het schuim weg van de boom wordt geschild, is het niet ongewoon voor schaal insecten en hun eieren clusters blijven aan het schuim zoals getoond in Figuur 7,</st...

Beuken schors ziekte wordt geïnitieerd door het voeren van de activiteiten van de beuk schaal insect dat schimmel toegangspunten creëren in de bast. Bomen die resistent zijn tegen de schildluis zijn ook bestand tegen ziektes. Hier presenteren we het protocol dat we hebben ontwikkeld om individuele beuken screenen op beuken schaal weerstand.

Een techniek om Screen Amerikaanse Beech voor Weerstand tegen de Beech Scale Insect (<em&gt; Cryptococcus fagisuga</em&gt; Lind.)

Beech bark disease (BBD) results in high levels of initial mortality, leaving behind survivor trees that are greatly weakened and deformed.&#160;The ...

Het algemene doel van deze procedure is om onderscheid te maken tussen Amerikaanse beukbomen die resistent zijn voor de beukenbastziekte en bomen die er vatbaar voor zijn. Dit wordt bereikt door eerst volwassen beukschildluizen en hun eieren direct van Amerikaanse beukbomen te verzamelen. De tweede stap is het verkrijgen van een homogene batch eieren door deze te scheiden van de volwassenen en ander vuil.Vervolgens worden de eieren geteld, op schuimpads geplaatst en aan de schors van de testbomen bevestigd. Tegelijkertijd worden er tests opgezet om de levensvatbaarheid van de eieren te bevestigen. Ongeveer een jaar later worden de testpads verwijderd en worden het aantal volwassenen en eierclusters geteld.Uiteindelijk wordt deze techniek om beuken kunstmatig te besmetten met de beukenschildluis gebruikt om bomen te identificeren die resistent of gevoelig zijn voor beukenschorsziekte. Het voordeel van deze techniek ten opzichte van de eerder door Dave Houston ontwikkelde methode voor kunstmatige schildluisbesmetting is dat onze techniek gebruikmaakt van controlebomen en assays voor de levensvatbaarheid van eitjes, en kwantitatief en reproduceerbaar genoeg is voor genetische studies. Deze methode kan helpen bij beslissingen over het beheer van de beukenschorsziekte door vast te stellen welke bomen resistent zijn tegen de ziekte en behouden moeten blijven tijdens de oogst, of welke de beste kandidaten zijn voor opname in een zaadboomgaard: Amerikaanse beuken met een zware besmetting door de beukenschildluis.Insecten zijn gemakkelijk te identificeren aan hun witgepleisterde uiterlijk. Gebruik een handvergrootglas om de aanwezigheid van eitjes te bevestigen, welke doorgaans in overvloed aanwezig zijn van half juli tot half augustus. Bevestig met tape een afsluitbare plastic verzamelzak van één gallon aan een besmette boomstam en gebruik een penseel om de witte, wasachtige klonten van volwassen schildluizen, eitjes en ander debris voorzichtig in de zak te borstelen.Verzamel eieren van minimaal drie verschillende bomen die ten minste 12 meter uit elkaar staan. Maak een vierkant stuk polyethyleenschuim van 2,5 centimeter vochtig en plak dit met tape aan de binnenkant van de zak om te voorkomen dat de eieren uitdrogen. Sluit de zak vervolgens af.Blaas in de zak om een beschermend luchtkussen toe te voegen voor het transport van de eieren. De eieren kunnen tot twee weken worden bewaard in de verzegelde opvangzak bij vier graden Celsius. Om de schubbeieren te scheiden van de volwassenen en het residu, wordt een zeef geconstrueerd door middel van sandwiching.Een vierkant stuk nylon gaas van 250 micron tussen een kort stuk PVC-buis van twee inch en een koppeling. Plaats een glazen petrischaal onder de zeef en giet vervolgens het mengsel van volwassenen, was, eieren en debris uit de opvangzak op de zeef. Gebruik daarna een klein schilderspenseel om de eieren voorzichtig door het gaas in de glazen petrischaal eronder te begeleiden.Om te voorkomen dat de eitjes uitdrogen, plakt u een vochtig stukje schuimfoam aan het deksel en sluit u dit af met Parafilm. De gezuiverde eitjes kunnen in de Petri-schaal worden bewaard bij 4 °C gedurende ten minste een week. Om levensvatbare schildluizen te verkrijgen, moet u eerst in staat zijn de volwassen eiafzetters te identificeren en deze met behulp van het scheidingsproces van de eitjes te scheiden.Ten slotte moet u in staat zijn de levensvatbaarheid van deze eieren te bevestigen met een levensvatbaarheidstest voor eieren. Om de levensvatbaarheid van de eieren te beoordelen, gebruikt u een spuit van 10 cc om een dunne ring vaseline aan te brengen rond de omtrek van de bodem van een glazen Petrischaal van 60 millimeter. Schep ongeveer 100 eieren op met een spatel en breng deze over naar het midden van de ring.Plaats vervolgens het deksel op de Petrischaal en verzegel deze met Parafilm. Laat de verzegelde petrischaal gedurende twee weken ongestoord op kamertemperatuur staan, of drie weken indien de eitjes waren bewaard bij vier graden Celsius. Gebruik na twee tot drie weken de dissectiemicroscoop om het aantal uitgekomen nimfen te tellen, die vaak vastzitten in de vaseline.Tel vervolgens het aantal niet uitgekomen eieren, die opaak en geelachtig zijn, en het aantal uitgekomen eieren, die lichter van kleur en doorschijnend zijn. Bereken de levensvatbaarheid door het aantal uitgekomen nimfen te delen door de som van de lege eieren plus de overgebleven niet uitgekomen eieren. Een goede levensvatbaarheid ligt tussen de 75 en 90% uitgekomen eieren.Veldtesten van het assortiment op resistentie tegen de strandschildluis. Indien slechts een kwalitatieve test nodig is, kan de insectenanalyse kwantitatief worden uitgevoerd door 500 eitjes te tellen met een draagbare dissectiemicroscoop. Plaats de 500 eitjes in een klein flacon met een vullijn die kan worden gebruikt om aanvullende batches van ongeveer 500 eitjes af te meten.Maak vervolgens een rechthoek van open-cel polyethyleenschuim vochtig en knijp daarna zoveel mogelijk water uit. Strooi de 500 eieren met een kleine metalen laboratoriumspatel voorzichtig over het midden van het vochtige schuim. De eieren zijn nu klaar om te worden gebruikt voor kunstmatige infestatie.Selecteer volwassen, gezonde Amerikaanse beuken die geen tekenen van schildluizen, plagen of ziekten vertonen. Bind een nylon touw rond de testboom en plaats vervolgens het schuimkussen op de boom met de eierzijde tegen de schors. Schuif het touw over het kussen om het te bevestigen.Schuif een tweede kussen onder het touw aan de tegenovergestelde zijde van de boom. Er moeten minimaal twee kussens per boom worden geplaatst. Er dient materiaal van kunststof of metaal te worden gebruikt in plaats van touw, draad of twijne, omdat dat laatste gemakkelijker door wilde dieren wordt weggehaald.Voorgesneden.Neem een stuk dampdoorlatend, waterdicht bouwvlies van 23 bij 30 centimeter en breng aan de bovenkant en zijkanten een acetaatgebaseerde siliconenkit aan. Plaats het bouwvlies vervolgens over het schuimrubberen testkussen en druk de randen tegen de boom aan om een waterdichte afdichting te creëren. Bind nylon touw of plastic-gecoaten ijzerdraad rond de boom en het bouwvlies om het vlies op zijn plaats te houden terwijl de kit uithardt; selecteer zichtbaar vatbare bomen om als controles te gebruiken.Gebruik een borstel met stugge haren om eventuele natuurlijk voorkomende schildluizen of eitjes te verwijderen van het gebied waar de testpads worden geplaatst. Plaats vervolgens testpads op ten minste twee vatbare bomen per testlocatie. Begin met het kweken van zaailingen of enten in een verrijkte potgrondmix.Het testen van in potten gekweekte zaailingen of enten vindt later in het groeiseizoen plaats in een schaduwhuis. Bemest de planten wekelijks naar behoefte tijdens het groeiseizoen en houd de planten in een schaduwhuis. Laat de planten in de herfst buiten in rust gaan voordat ze worden verplaatst naar een opslagruimte van vier graden Celsius.Van november tot en met april, na één tot twee jaar, wanneer de stam hoog genoeg is om er ten minste twee afzonderlijke testpads op te plaatsen en een minimale diameter van 1 cm heeft, gemeten met een schuifmaat 5 cm boven de bodemlijn. Wanneer deze klaar is voor testen, worden eventuele kleine zijtakken indien nodig gesnoeid om ruimte te maken voor de testpads. Gebruik een dissectiemicroscoop om 150 eitjes af te tellen en verspreid deze over een voorgesneden en bevochtigde open-cel polyethyleenschuimpad.Bevestig het schuimkussen met plastic omhulseldraad aan de zaailing, waarbij de eizijde tegen de schors wordt geplaatst. Wikkel een klein vierkant stuk huishoudfolie rond de zaailing net boven het schuim en kit dit af met acetaatgebaseerde siliconen. Voor de controles worden schuimkussens met eieren bevestigd aan bekende vatbare zaailingfamilies of enten.Ongeveer één jaar. Nadat de schuimrubberen kussentjes op de bomen zijn geplaatst, verwijdert u het kussentje voorzichtig van de zaailing of de volwassen boom. Gebruik vervolgens een handlens of een vergrootglas van 10 x om het aantal volwassen schildluizen te tellen dat zich op de schors heeft gevestigd.Wanneer het schuimkussen wordt verwijderd, komt het vaak voor dat sommige volwassenen en de meeste eibunchjes samen met het schuim van de plant worden getrokken. Tel onder een dissectiemicroscoop de eibunchjes en volwassenen die aan het schuimkussen vastzitten. Hier wordt een resistente zaailing getoond.De zwarte lijnen geven de omvang van het schuimkussen aan. Er is geen besmetting van de schors zichtbaar. De twee vatbare zaailingen die hier worden getoond, vertonen verschillende graden van vatbaarheid.Hier wordt een vatbare volwassen boom getoond 57 weken na kunstmatige infestatie. De bomen werden kunstmatig geïnfesteerd met eitjes van de beukenbladluis in het Allegheny National Forest in Pennsylvania en in Luton State Park in Michigan. Deze grafiek vergelijkt resistente bomen met vatbare controlebomen.Het aantal geteste bomen per groep staat tussen haakjes vermeld. De gemiddelde aantallen volwassenen per 100 aangeboden eieren zijn berekend over alle bomen binnen de groep. Hoewel er aanzienlijke variatie is in het aantal volwassenen dat zich op de vatbare bomen heeft gevestigd, zijn er duidelijke verschillen waarneembaar tussen de vatbare en de resistente bomen.Bij het uitvoeren van deze techniek is het belangrijk om ervoor te zorgen dat het bouwfolie stevig aan de boom is afgesloten. Dit voorkomt een te grote ophoping van vocht op het schuimkussen, wat uw assay kan verpesten. Na het bekijken van deze video zou u in staat moeten zijn om schildluiseieren te verzamelen en te zuiveren, en deze te gebruiken voor het opzetten van tests om te bepalen of een beukenhoutboom resistent of vatbaar is voor de schildluis.De schildluis maakt deel uit van een causaal complex met een schimmel die feitelijk leidt tot de beukenschorsziekte.

a-technique-to-screen-american-beech-for-resistance-to-beech-scale

Research

JoVE Journal

Environment

Milieu

Beschrijven we een low cost, high throughput methode voor het screenen op schimmels endoglucanase activiteit...

High Throughput Screening van Fungal endoglucanase activiteit in Escherichia coli</em

Dit protocol laat twee inoculatie methoden om de schimmel entomopathogen...

Tot oprichting van Schimmel Entomopathogens als endofyten: Op weg naar Endofytische Biologische bestrijding

We bieden een techniek om intact boomfloëem te behouden en het voor te bereiden op observatie. We creëren een apparaat genaamd een floëemsandwich dat het mogelijk maakt om geleedpotigen, microben en andere organismen die in floëemweefsels leven te introduceren en observeren.

Techniek voor het bestuderen van geleedpotigen en microbiële gemeenschappen binnen Tree Tissues

Microbiële consortia binnen bumble bee-hives verrijken en behouden van pollen voor larven van de honingbij. Met behulp van de volgende generatie sequencing, samen met laboratorium en veld gebaseerde experimenten, dit manuscript wordt beschreven protocollen gebruikt om te testen van de hypothese dat fungicide residuen veranderen de stuifmeel microbiome, en de kolonie demografie, uiteindelijk leidde tot de kolonie verlies.

Empirische, Metagenomic en computationele technieken verlichten de mechanismen door welke fungiciden compromis Bee gezondheid

Effectieve vallen aantrekken en vangen van de emerald ash borer (EAB) een sleutelelement voor het opsporen en beheren van deze invasieve pest. Dubbeldekker vallen, geplaatst in de volle zon in de buurt van ash bomen, visuele en olfactorische aanwijzingen nemen en waren meer kans te vangen EAB dan andere val ontwerpen in veldproeven.

Dubbeldekker Traps voor vroegtijdige opsporing van Emerald Ash Borer bouwen

Alomvattend toezicht van koffie berry borer en host plant dynamics is essentieel voor het aggregeren van gegevens van de landschap-niveau ter verbetering van het beheer van deze invasieve pest. Hier presenteren we een protocol voor wetenschappelijke monitoring van koffie berry borer beweging, besmetting, sterfte, koffie plant fenologie, weer en bedrijfsbeheer via een mobiele elektronische gegevens opnemen van toepassing.

De Hawaii-Protocol voor wetenschappelijke Monitoring van koffie Berry Borer: een Model voor koffie Agro-ecosystemen wereldwijd

Dit protocol presenteert een methode voor het beoordelen van de voedingssnelheid van het houtborende schaaldier Limnoria door de productie van fecale pellets te meten. Deze methode is ontworpen voor gebruik in niet-gespecialiseerde laboratoria en heeft potentieel voor opname in standaard testprotocollen, om verbeterde houtduurzaamheid onder maritieme omstandigheden te evalueren.

Snel testen van de weerstand van hout tegen biologische afbraak door mariene houtborende schaaldieren

Hier presenteren we een protocol op basis van het meelworm (Tenebrio molitor)-aassysteem dat werd gebruikt voor het isoleren en selecteren van entomopathogene schimmels (EPF) uit bodemmonsters. Een effectieve conidia-getalformule (ECN) wordt gebruikt om een hoge stresstolerante EPF te selecteren op basis van fysiologische kenmerken voor microbiële bestrijding van plagen in het veld.

Isolatie en selectie van entomopathogene schimmels uit bodemmonsters en evaluatie van schimmelvirulentie tegen insectenplagen

Een methode met behulp van groene koffievruchten (GFs) werd ontwikkeld om de toxiciteit van insecticiden tegen de koffiebessenboorder (CBB) te testen. Insecticiden of giftige stoffen werden aangebracht op gedesinfecteerde GFs voor of na CBB-besmetting. Insectensterfte, afstotendheid en voortplantingsvermogen, naast andere parameters, werden geëvalueerd.

Methodologie om controlemiddelen en insecticiden te testen tegen de koffiebesboorder Hypothenemus hampei

Hier presenteren we een protocol voor het verkrijgen van entomopathogene schimmels van een boshoutboorder en een vervangende manier om hun entomopathogene activiteiten te evalueren met behulp van een Coleoptera-modelinsect. Deze methode is efficiënt en handig voor het verkennen van entomopathogene schimmelbronnen van houtborende insectenplagen in natuurlijke bossen.

Isolatie, gedragsidentificatie en pathogeniteitsbeoordeling van entomopathogene schimmels van een boshoutboorder

We bieden een stapsgewijs protocol voor het beoordelen van populierenresistentie tegen stengelkankerpathogenen met behulp van een in vivo bladinoculatiemethode. Deze methode is vooral geschikt voor grootschalige beoordeling van resistentie tegen de ziekte van Cytospora chrysosperma en Botryosphaeria dothidea kanker bij nageslacht van populierenfokkers in China.

In vivo bladinoculatie: een alternatieve methode om de ziekteresistentie van hybride klonen in de populierenveredeling van stengelkankerziekte te beoordelen

Leer een protocol om Amerikaanse beuken te screenen op resistentie tegen de beukenschaal Cryptococcus fagisuga. Deze methode helpt onderzoekers resistente bomen te identificeren voor bosbeheer.

Een techniek om Screen Amerikaanse Beech voor Weerstand tegen de Beech Scale Insect (

Meer video's verkennen