Name: De heupzenuw handboeien Model van neuropathische pijn in Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 9 s
Description: Leer het heupzenuw handboeien model voor neuropathische pijn bij muizen met een polyethyleen manchet rond de nervus ischiadicus. Deze methode maakt evaluatie van mechanische allodynie mogelijk via von Frey filamenten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door het Centre National de la Recherche Scientifique (contract UPR3212), de Universiteit van Straatsburg en door een NARSAD Young Investigator Grant van het Brain &amp; Behavior Research Foundation (tot IY). Publicatiekosten worden ondersteund door de Neurex netwerk (Programma Interreg IV Boven-Rijn).

Protocollen zijn goedgekeurd door het &quot;Comite d&#39;ethique en matière d&#39;experimentation animale de Strasbourg&quot; (CREMEAS). 1. Nulmeting van Paw onttrekkingsdrempel <ol><li> Laat de muizen te wennen aan het dier faciliteiten voor ten minste 10 dagen tot 2 weken voor het begin van de testprocedures. </li><li> Wennen de muizen aan de von Frey test set-up en de von Frey procedure die worden beschreven in hoofdstuk 4. </li><li> Voor de operatie, de evaluatie van de mechanische poot onttrekkingsdrempel met von Frey filamenten zoals beschreven in de paragraaf 4.3. Opmerking: Herhaal de procedure op verschillende dagen tot ten minste drie stabiele opeenvolgende waarden worden verkregen voor poot terugtrekking drempels. </li><li> Wijs de muizen om de verschillende experimentele groepen zodat deze groepen aanvankelijk niet verschillen poot terugtrekking drempels. </li></ol> 2. Chirurgie Procedure voor manchet Implantatiop <ol><li> Weeg het dier. Opmerking: Muis lichaamsgewicht moet meer dan 20 g voor de hieronder beschreven manchet inbrengprocedure. </li><li> Verdoven het dier met een intraperitoneale injectie van 4 ml / kg van een mengsel van ketamine (17 mg / ml) en xylazine (2,5 mg / ml) in 0,9% NaCl, die ongeveer 45 min anesthesie bepaalt. </li><li> Controleer de afwezigheid van poot reflexen door te knijpen een achterpoot met een pincet en toezien dat er geen oog reflexen om ervoor te zorgen dat het dier volledig verdoofd. </li><li> Scheer de rechter been vanaf de knie tot de heup met behulp van een elektrisch scheerapparaat. </li><li> Met beschermende oog vloeibare gel voor de ogen met een wattenstaafje. </li><li> Leg het dier op zijn linkerzijde en plaats de juiste achterste ledematen op een klein kussen en onderhouden van de juiste achterste ledematen aan het kussen met plakband. </li><li> Ontsmet het veld chirurgie met chloorhexidine en 70% ethanol met behulp gaasje of wattenstaafje. </li><li> Vind het dijbeen met de wijsvinger en maak eenincisie van ongeveer 0,5 cm, parallel aan het femur en ongeveer 1,5 mm ventraal van het dijbeen. </li><li> Scheid de spieren in de buurt van het dijbeen met twee geautoclaveerd stokken. Opmerkingen: Snijd nooit de spier. Normaal gesproken is de spier lagen scheiden gemakkelijk zonder bloeden en de heupzenuw is dan zichtbaar. In het geval van bloeden, een steriele wattenstaafje om het bloed op te vangen. </li><li> Plaats twee geautoclaveerd stokken onder de heupzenuw haar hoofdvestiging bloot, en hydrateren de zenuw met een steriele fysiologische oplossing (0,9% NaCl). </li><li> Houd de voorbereide steriel 2 mm doorsnede van split PE-20 polyethyleen buis (manchet), 0,38 mm ID / 1.09 mm OD, met de hulp van een puntige stalen stok en een bulldog klem. <ol><li> Steek het puntige staal stok in de manchet, die iets zal openen. </li><li> De manchet zijopening, plaats de bulldog aan een uiteinde van de manchet en evenwijdig aan de manchet. Draai de bulldog (180 °), zodat het de manchet zal houden door dezijde die tegenover de zijopening. Sluit de bulldog en verwijder de puntige stalen stok. Opmerking: De rotatie wordt gedaan om die op de manchet in een optimale positie voor het inbrengen, wordt de bulldog klem ook helpen om de manchet gedeeltelijk open te houden. Het model en de omvang van de bulldog klem zijn kritiek voor deze stap van de procedure. </li></ol></li><li> Laat een tweede experimentator houden de twee stokken onder de zenuw en voorzichtig scheiden de stokken om de toegang tot een deel van de heupzenuw dat is ongeveer 4 mm lang te vergemakkelijken. </li><li> Plaats de 2 mm manchet rond de hoofdtak van de nervus ischiadicus, beginnend aan door de deel van de manchet die distaal van de bulldog rond het deel van de zenuw die proximaal is aan de heup. </li><li> Sluit de manchet voorzichtig druk uit te oefenen op de twee distale zijden met een tang, zonder knijpen of het veranderen van de vorm van de buis. Draai de manchet om ervoor te zorgen dat het correct is gesloten. </li><li> Hecht de geschoren huid laag with chirurgische knopen. </li><li> Plaats de muis aan de linkerkant in een schone kooi. Houd het onder de hitte lamp totdat de muis wakker is. </li><li> Voeg extra water en plaats enkele chow direct in de kooi. </li></ol> 3. Chirurgie Procedure voor Sham Controls <ol><li> Pas dezelfde chirurgische ingreep zoals hierboven beschreven vanaf stap 2.1 naar stap 2.9, daarna volgen met stappen 2,15-2,17. Voor schijncontroles, laat de stappen 2,10-2,14 die alleen betrekking hebben op de manchet inbrengen. </li></ol> 4. Von Frey Testen <ol><li> Leg de muizen in duidelijke individuele vakken (7 cm x 9 cm x 7 cm) met gaten, op een verhoogde geperforeerde plaat van glad roestvrij staal (1 mx 50 cm, 5 mm cirkel perforaties met 2,5 mm tussen perforatie grenzen). Let op: tot 12 muizen kunnen gelijktijdig worden getest op deze set-up. Geopereerde dieren kan de dag worden getest na de operatie. Echter, 3 dagen van herstel wordt aanbevolen om de post-operatie overgevoeligheid waargenomen bij verminderenschijncontroles. </li><li> Laat de dieren wennen gedurende 15 minuten voor de test. </li><li> Breng de von Frey filamenten de voetzool van elke achterpoot een reeks oplopende krachten. Opmerkingen: De von Frey filamenten zijn plastic haren van gekalibreerde diameters. Ze zijn 5 cm lang en worden bevestigd op de hand-held applicators. De snelheid van filament toepassing kan de mate van buigen en de duur van de toepassing de drempelwaarden die zijn verkregen met deze test 3 beïnvloeden. Met deze procedure bij muizen, de filamenten die het meest worden gebruikt zijn de 0.16, 0.4, 0.6, 1, 1.4, 2, 4, 6, 8, en 10 g. <ol><li> Breng de gekozen filament aan de voetzool van de linkerpoot totdat de gloeidraad juist buigt. Herhaal de procedure 3-5 keer achter elkaar, en doe hetzelfde met de rechter voorpoot. Wanneer het filament is getest op beide poten, test de volgende dier. Opmerkingen: Vermijd poot laterale grenzen die gevoeliger kunnen zijn. De verwachte reactie een pootterugtrekking, plotselinge spier te vertrekken of poot likken. Beschouw de respons zo positief als ten minste drie verwachte reacties worden waargenomen van de vijf proeven. Een bepaalde poot wordt altijd drie keer getest, maar de vierde en de vijfde proeven zijn slechts indien 1 of 2 antwoord (en) werd (en) die tijdens de eerste drie tests. In C57BL/6J-muizen, start de pre-operatie testen met de 1,4 g gloeidraad. Na de operatie, beginnen de testen met de 0,4 g gloeidraad. Indien een positieve reactie is waargenomen met het eerste geteste filament, testen van een gloeidraad van lagere kracht (in plaats van groter) bij stap 4.3.2. </li><li> Pas dezelfde filament naar de volgende dieren volgens de procedure 4.3.1. Zodra alle dieren getest, opnieuw beginnen op de eerste dier met de volgende gloeidraad van grotere kracht. Herhaal de procedure tot alle muizen geven een positieve reactie. Opmerkingen: Test elk dier tot twee opeenvolgende filamenten geven een positieve reactie. Denk aan de gram waarde van de lagere gloeidraad die een positieve reactie gaven als de poot withdrawal drempel voor dit dier. </li></ol></li></ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.

De &quot;cuff&quot;-model werd aanvankelijk ontwikkeld in ratten naar een gestandaardiseerde en reproduceerbare chronische vernauwing letsel met de inplanting van meerdere manchetten rond de heupzenuw 6 te verkrijgen. Het werd vervolgens gewijzigd om een enkel manchet 7,8 implanteren, hoewel sommige onderzoeksgroepen nog steeds gebruik maken van meerdere manchet inbrengen 19-22. Vervolgens werd aangepast aan muizen 9,23, die de mogelijkheid om transgene dieren te gebruiken geopend. De manchet is gewoonlijk 2 mm lang, maar andere lengtes ook gebruikt bij ratten 22. De polyethyleen buis afhankelijk van de soort: PE-20 in muizen 9 en PE-60 24,25 of PE-90 7,8,26,27 bij ratten. De mechanische allodynie wordt gemeten met haren von Frey. In deze test, is de absolute waarden terugtrek drempelwaarden afhankelijk van het oppervlak waarop het dier staat 28 of van de duur van gloeidraad buigen 3, maar deze factoren nietinvloed hebben op de detectie van de neuropathische allodynie. De &quot;cuff&quot;-model is van belang voor de studie van neuropathische pijn mechanismen. Het werd gebruikt om morfologische veranderingen in gemyeliniseerde en niet-gemyeliniseerde vezels 6,29 en functionele veranderingen in sensorische neuronen, primaire afferenten en spinale neuronen 19,21,22,30-35 bestuderen. Het stond demonstratie dat gliale activering en een centrale verschuiving in neuronale anion gradiënt deelnemen aan veranderingen in de activiteit en in de reacties van spinale nociceptieve neuronen en bij neuropathische allodynie 24,36-38. De invloed van glutamaatreceptoren 7,39-41 van opioïde receptoren 16,42-45 en nicotinereceptoren 46 werd ook bestudeerd in dit model. Een ander belang van het model is zijn reactie op de huidige behandelingen van neuropathische pijn, dwz., Gabapentinoids en antidepressiva. Net als bij klinische waarnemingen: gabapentinoids tonen zowel eenn acute kortdurende analgetische werking bij hoge dosis en een vertraagde verlichten aanhoudende actie die wordt waargenomen na enkele dagen behandeling, tricyclische antidepressiva en selectieve serotonine en noradrenaline heropnameremmers geen acute pijnstillend effect bij relevante dosis, maar ze vertonen een vertraging opgelopen verlichten actie die 1 tot 2 weken van behandeling en de selectieve serotonine heropnameremmer fluoxetine nodig is effectief 16. Het model is dus geschikt om het moleculaire mechanisme achter deze behandelingen 16-18,44,45,47, waarin nieuwe therapeutische doelen kan blijken om te testen bij patiënten 48-51 bestuderen. Ten slotte model kan ook de studie van de anxiodepressive gevolgen van neuropathische pijn. Klinisch, deze gevolgen van invloed zijn ongeveer een derde van neuropathische pijn patiënten, maar zijn preclinically minder bestudeerd dan de sensorische aspecten van pijn. In dit model, een tijdsafhankelijke angstontwikkeling-achtige en depressiesive-achtige fenotypes aanwezig is 52 en het bijbehorende mechanisme kan dus worden aangepakt. De gestandaardiseerde manchetten en procedures in dit muismodel van neuropathische pijn resulteren in een lage interindividuele variabiliteit voor de mechanische allodynie. De mogelijkheid van genetisch gemodificeerde dieren 17,18,44-47,52, de langdurige allodynie gebruikt, de reactie op klinisch gebruikte behandelingen en tijdsafhankelijke ontwikkeling van anxiodepressive symptomen maken dit model geschikt voor de studie van de diverse aspecten gevolgen van neuropathische pijn en de behandelingen, die al waardevolle informatie gebracht hebben om dit gebied van onderzoek.

Neuropathische pijn is meestal chronische en ontstaat als gevolg van een letsel of een ziekte die de somatosensorische systeem. Onaangepaste veranderingen gewonde sensorische neuronen en langs het gehele traject nociceptieve in het centrale zenuwstelsel aan dit complex syndroom. Diverse modellen zijn ontwikkeld bij knaagdieren voor het bestuderen van neuropathische pijn en de behandelingen 1-3. Op basis van bekende etiologie, de modellen van neuropathische pijn zijn gericht op het nabootsen van de polyneuropathie waargenomen bij diabetes, de verwondingen aan de perifere zenuwen, de centrale verwondingen, de trigeminusneuralgie, de neuropathieën opeenvolgende chemotherapie, de postherpetische neuralgie, etc. Verschillende modellen van perifere zenuwschade bij knaagdieren richten op de heupzenuw. Deze modellen zijn afhankelijk van compressie en / of een deel van de zenuw. Inderdaad, de heupzenuw biedt relatief eenvoudige operatie en zorgt voor tests op basis van poot terugtrekking reflexen. De models van chronische zenuwcompressie omvatten bijvoorbeeld: de chronische vernauwing letsel (CCI) 4,5, de heupzenuw cuffing 6-9, de gedeeltelijke heupzenuw ligatie (PSL) 10, de spinale zenuwen ligatie (SNL) 11, of de gemeenschappelijke peroneal zenuwknelling 12. Aangeduid als &quot;gespaard zenuwletsel&quot; (SNI) modellen worden ook veel gebruikt. Ze bestaan ​​uit een strakke ligatie en axotomie van twee van de drie terminal takken van de nervus ischiadicus, terwijl de derde tak blijft intact 13-15. De verschillende modellen van neuropathische pijn, waarbij de heupzenuw richten, leidt tot een chronische mechanische allodynie (een nociceptieve reactie op een normaal niet-nociceptieve stimulus) op de gewonde achterpoot. Hier is de gedetailleerde chirurgische ingreep voor de &quot;cuff model&quot; neuropathische pijn in muizen beschreven. Het bestaat uit het implanteren van een polyethyleen manchet rond de belangrijkste tak van de nervus ischiadicus 6-9. The gebruik van von Frey filamenten beschreven. Deze filamenten laten beoordelen van de mechanische allodynie die is een langdurige nociceptieve symptoom aanwezig in dit model.

<table><tbody><tr><td>PE-20 polyethyleen buisjes</td><td>Harvard Apparatus</td><td>PY2-59-8323</td><td>Gesplitst voorafgaand aan de operatie</td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Centravet</td><td>IMA004</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine HCl</td><td>Sigma</td><td>X1251</td><td>Frisch bereid voorafgaand aan de operatie</td></tr><tr><td>Ocry-gel</td><td>Centravet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tang</td><td>FST</td><td>11003-12</td><td>52,5 mm recht</td></tr><tr><td>Bulldogklem</td><td>FST</td><td>p130 18038-45</td><td></td></tr><tr><td>Geperforeerde plaat</td><td>CTTM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>von Frey filamenten</td><td>Bioseb</td><td>NC-12775</td><td></td></tr></tbody></table>

de heupzenuw handboeien model van neuropathische pijn in muizen

The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

Neuropathische pijn ontstaat als gevolg van een letsel of een ziekte die de somatosensorische systeem. Dit syndroom resultaten van onaangepast veranderingen gewonde sensorische neuronen en langs de gehele nociceptieve traject binnen het centrale zenuwstelsel. Het is meestal chronisch en uitdagend om te behandelen. Om neuropathische pijn en de behandelingen bestuderen, zijn verschillende modellen ontwikkeld knaagdieren. Deze modellen afgeleid van bekende oorzaken, aldus reproduceren perifeer zenuwletsel, centrale blessures, en metabole-, besmettelijke-of chemotherapie-gerelateerde neuropathieën. Muismodellen van perifere zenuwschade vaak gericht op de heupzenuw die is gemakkelijk te bereiken en maakt nociceptieve tests van de achterpoot. Deze modellen zijn op compressie en / of sectie. Hier is de gedetailleerde chirurgische ingreep voor de &quot;cuff model&quot; neuropathische pijn in muizen beschreven. In dit model, een manchet van PE-20 polyethyleen buis van gestandaardiseerde lengte (2 mm) is eenzijdig implanted rond de belangrijkste tak van de nervus ischiadicus. Het induceert een langdurig mechanische allodynie, dwz. Een nociceptieve reactie op een normaal niet-nociceptieve stimulus die kan worden geëvalueerd met von Frey filamenten. Naast de gedetailleerde chirurgie en testprocedures zijn de belang van dit model voor de studie van neuropathische pijn mechanisme voor de studie van neuropathische pijn en sensorische anxiodepressive aspecten en voor de studie van neuropathische pijn behandelingen besproken.

De gegevens zijn uitgedrukt als gemiddelde ± SEM. Statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van multi-factor variantieanalyse (ANOVA) of ongepaarde t-test volgens proefopzet. Voor deze analyses werden de Sham en manchet chirurgie groepen en de saline versus medicamenteuze behandelingen als tussen-groep factoren. Wanneer nodig werden herhaalde meting de analysemethoden voor de tijd cursus data. De vergelijkingen post-hoc werden uitgevoerd met de Duncan test. Statistische significantie werd p &lt;0,05 beschouwd. Bij gebruik van de procedures die hierboven zijn beschreven, de manchet implantatie resulteert in een ipsilaterale allodynie zoals geïllustreerd in figuur 1. Zodra de muis gewend aan de testprocedure de waarden voor terugtrek drempels Von Frey-test blijft stabiel en zijn niet door de chirurgische procedure zodanig, zoals in Sham dieren. Er moet echter wordenopgemerkt dat een tijdelijke postoperatieve allodynie meestal worden waargenomen in Sham muizen. Wanneer dergelijke allodynie aanwezig is, de terugtrek reactie terugkeert naar basislijn na een paar dagen na de operatie. In manchet muizen, de ipsilaterale allodynie is reeds op de eerste dag na de operatie en gedurende meer dan 2 maanden (zie 9 en figuur 1, F8, 344 = 29,5, p &lt;0,001). De cuff-geïnduceerde allodynie blijft ipsilaterale in C57BL/6J-muizen zoals gemeten door de von Frey test zoals hierboven beschreven, maar in andere omstandigheden aanwezigheid van allodynie op de contralaterale poot kan worden waargenomen 8. De absolute waarden van baseline meestal tussen 4 en 6 g C57BL/6J-muizen, maar het testprotocol kunnen deze waarden op. Tricyclische antidepressiva behoren tot klinische eerstelijns behandelingen voor neuropathische pijn. In dit model werden het tricyclisch antidepressivum geneesmiddel nortriptyline (5 mg / kg, intraperitoneaal tweemaal daags) relieves de neuropatische allodynie na ongeveer 2 weken behandeling, zoals weergegeven in figuur 2 (F7, 91 = 15,3, p &lt;0,001, post hoc: (CuffNor = Sham)&gt; CuffSal bij p &lt;0,001 op dagen 29-34). Bij deze dosis wordt geen acute analgetische werking van kalmerend waargenomen 16,17. Om de blijvende pijn die aanwezig zijn bij patiënten die dergelijke geneesmiddelen is na te bootsen, kunnen de muizen worden getest voordat de ochtend toediening van het geneesmiddel in plaats van na. Een dergelijke procedure kan de beoordeling van een langdurig effect geprimed door de vorige dagen van de behandeling. In dit geval vereist 1 tot 2 weken behandeling een blijvende verlichting van neuropatische allodynie observeren. Als de behandeling wordt onderbroken, wordt een terugval meestal waargenomen binnen 3 tot 4 dagen 18. Naast sommige antidepressiva, gabapentinoids zijn de andere eerste keuze behandelingen voor neuropathische pijn. Gabapentine een acute en voorbijgaande pijnstillende werking in dit model 16, maar het geeft ook een vertraagde en lon<html> g duurzame antiallodynische optreden bij het ​​testen van het dier per dag voor de toediening van het geneesmiddel (Figuur 3, p &lt;0,001). Deze actie is sneller dan het gebruik van antidepressiva. <img alt="Figuur 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1.jpg" /> Figuur 1. Mechanische poot terugtrekking drempels in de manchet model van neuropathische pijn bij muizen. Volwassen mannelijke C57BL/6J-muizen waren gewend aan de von Frey procedure totdat een stabiele basislijn werd verkregen (de basislijn is vertegenwoordigd bij punt 0 op de grafiek). Beide poten werden getest. De manchet muizen tonen ipsilateral mechanische allodynie zoals aangetoond door de verlaagde poot terugtrekking drempels (n = 10 per groep). tp_upload/51608/51608fig2.jpg &quot;/&gt; Figuur 2. Vertraagde antiallodynische werking van een tricyclisch antidepressivum. Na twee weken na de operatie kregen muizen intraperitoneale behandeling tweemaal per dag (ochtend en avond) met hetzij 0,9% NaCl of 5 mg / kg nortriptyline hydrochloride (n = 5 of 6 per groep ). De von Frey test werd gedaan voordat de ochtend behandeling. Met deze procedure wordt een vertraagde antiallodynische werking van nortriptyline waargenomen, die ongeveer 12 dagen van behandeling vereist. <img alt="Figuur 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3.jpg" /> Figuur 3. Antiallodynische werking van een gabapentinoid. Na drie weken na de operatie kregen muizen intraperitoneale behandeling tweemaal per dag (ochtend en avond) met hetzij 0,9% NaCl of 10 mg / kg gabapentine (n = 5 per groep). De von Frey test werd gedaan voordat de ochtend traktatiement. Met deze procedure wordt een vertraagde en blijvende antiallodynische actie van gabapentine waargenomen. Gegevens zijn weergegeven voordat de behandelingen en van de 6de dag van behandeling.

Neuropathische pijn is het gevolg van een letsel of ziekte die het somatosensorische systeem. De &quot;cuff model&quot; van neuropathische pijn bij muizen bestaat uit de inplanting van een polyethyleen manchet rond de belangrijkste tak van de nervus ischiadicus. Mechanische allodynie wordt getest met behulp van von Frey filamenten.

De heupzenuw handboeien Model van neuropathische pijn in Muizen

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in ...

Het algemene doel van deze procedure is om een muismodel van neuropathische pijn vast te stellen na compressie van een perifere zenuw. Na het voorbereiden van het dier voor de operatie wordt de hoofdtak van de nervus ischiadicus blootgelegd en wordt een polyethyleenmanchet rond de zenuw geplaatst. Vervolgens wordt de wond gesloten.Om de gevoeligheid van de poot te testen, worden de muizen in doorzichtige bakken over een geperforeerde stalen plaat geplaatst. Vervolgens wordt een reeks Von Frey-filamenten van toenemende dikte op de poot aangebracht totdat het dier consistent op de druk reageert. Uiteindelijk kan de aanwezigheid van een langdurige mechanische allodynie, ipsilateraal aan de geopereerde poot, worden waargenomen door de mechanische drempelwaarden uit de Von Frey-test in de tijd uit te zetten.Dit model kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in het vakgebied van pijn, zoals de mechanismen die ten grondslag liggen aan neuropathische pijn. Het kan ook worden gebruikt om huidige behandelingen te onderzoeken, nieuwe therapeutische middelen te testen of om de anxiolytische en antidepressieve gevolgen van neuropathische pijn te bestuderen. Een visuele demonstratie van deze methode is echter essentieel, aangezien de implantatie van de manchet een moeilijke stap is om zonder visuele ondersteuning uit te leggen.Om de mechanische pootterugtrekdrempel te evalueren, worden de muizen eerst voor acclimatisatie in transparante individuele boxen op een geperforeerde stalen plaat geplaatst; tot 12 dieren kunnen gelijktijdig worden getest. Gebruik hiervoor von Frey-filamenten. Deze plastic haren met gekalibreerde diameters zijn bevestigd aan een handapplicator.Bij het buigen oefent elke filament een druk uit die proportioneel is aan de diameter. Bij muizen variëren de meest gebruikte filamenten van 0,16 tot 10 gram. Begin met de lichtste druk.Pas bij het meten van de drempelwaarden voor de test van de muizen het filament toe op de linkerachterpoot totdat de filamenten beginnen te buigen. Vermijd de laterale randen van de poot, aangezien deze gevoeliger kunnen zijn. Het dier reageert op de toepassing van het filament.Als de poot spert of wordt ingetrokken, herhaal de applicatie nog twee keer; indien het dier op alle drie de applicaties reageert, test dan de andere poot. In andere gevallen worden de filamenten in totaal vijf keer toegepast voordat de andere poot wordt getest. Test elke muis opeenvolgend met het gekozen von Frey-filament en herhaal het proces vervolgens met het volgende filament.Wanneer een dier drie keer reageert op dezelfde filament, wordt dit beschouwd als een positief resultaat. Wanneer twee opeenvolgende filamenten positieve scores krijgen, wordt het testen van die poot gestaakt. De drempelwaarde voor het terugtrekken van de poot is de lagere van de twee gramwaarden voor een gegeven muis.Deze waarden kunnen tussen beide poten verschillen. Herhaal deze procedure dagelijks totdat ten minste drie opeenvolgende drempelwaarden stabiel zijn. Ga daarna verder met de chirurgische ingreep.Noteer het gewicht van het dier, dat meer dan 20 gram moet zijn, en anesthetiseer het dier met ketamine en xylazine. Controleer op de afwezigheid van poot- of oogreflexen. Breng met een wattenstaafje een beschermende gel aan op de ogen.Scheer vervolgens het rechterbeen van de knie tot aan de heup. Positioneer het dier daarna met het rechterachterbeen omhoog op een klein kussentje en zet dit been vast met tape. Desinfecteer de blootgestelde huid met chlorhexidine en 70% ethanol.Begin met palpatie om het femur te lokaliseren. Maak vervolgens een incisie van 0,5 centimeter parallel aan het femur, ongeveer 1,5 millimeter posterior van het femur. Scheid nu met behulp van autoclaafstokjes de spieren dicht bij het femur, maar snijd deze niet door.De hoofdtak van de nervus ischiadicus moet zichtbaar worden gemaakt. Indien er sprake is van bloedingen, dient dit bij de sham-controles zorgvuldig te worden weggedept met een wattenstaafje. Hiermee is de chirurgische ingreep voor de muizen die een cuff krijgen voltooid.Plaats twee stokjes onder de nervus ischiadicus om de hoofdtak van de zenuw bloot te leggen. Voeg een beetje fysiologisch zout toe om de zenuw te hydrateren. Pak nu een gespleten manchet vast met een gepunt stalen stokje en een bulldogklem.Plaats vervolgens de bulldogklem en draai deze 180 graden, zodat deze de manchet vasthoudt tegenover de laterale opening van de manchet. Sluit nu de bulldogklem en verwijder het gepunte stokje. Laat vervolgens een assistent de twee stokjes onder de zenuw vasthouden en deze voorzichtig uit elkaar trekken.Om toegang tot de zenuw te verkrijgen, wordt de cuff van twee millimeter rond de hoofdtak van de nervus ischiadicus geplaatst. Begin met het invoeren van het deel van de cuff dat distaal ten opzichte van de bulldogklem rond het deel van de zenuw dat proximaal ten opzichte van de heup ligt. Sluit de cuff vervolgens voorzichtig met een tang om te controleren of de cuff correct is gesloten.Draai de muis om. Verwijder nu de stokjes en hecht de huid dicht. Gebruik chirurgische knopen, breng de muis over naar zijn schone thuiskooi en plaats de muis op zijn linkerzijde.Houd het dier warm met de warmtelamp totdat het ontwaakt. Voeg extra voedsel en water toe in de kooi, zodat de muis zichzelf kan voeden. Dieren kunnen de dag na de operatie worden getest op lage onttrekkingsdrempels, maar het is beter om drie dagen te wachten om postchirurgische hypersensitiviteit bij deze procedure te verminderen.Muizen met een cuff vertonen meer dan twee maanden lang ipsilaterale allodynie in vergelijking met sham-controles. Behandeling van de muizen met vijf milligram per kilogram nortriptyline, een tricyclisch antidepressivum, tweemaal daags verlicht de neuropathische allodynie na ongeveer twee weken behandeling.Indien de behandeling werd onderbroken, traden de muizen gewoonlijk na drie tot vier dagen terug in een recidief. Dit model is ook gevoelig voor een andere behandeling van neuropathische pijn: gabapentinoïden. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u de hoofdvertakking van de nervus ischiadicus bij geanestheseerde muizen kunt lokaliseren en hoe u hier een cover omheen kunt plaatsen.In dit model van neuropathische pijn maakt de one fray test het bovendien mogelijk om de mechanische drempels te evalueren en medicijnresponsen te bestuderen.

the-sciatic-nerve-cuffing-model-of-neuropathic-pain-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De Gespaard zenuwletsel diermodel is hier beschreven als een muis model van perifere neuropathische pijn na een gedeeltelijke denervatie van de nervus ischiadicus door lesioning het scheenbeen en de gemeenschappelijke peroneus takken, waardoor de resterende Sural zenuw intact. Gedragsverandering als gevolg van mechanische allodynie wordt gekwantificeerd door von Frey filamenten.

De Gespaard Nerve Injury (SNI) Model van Induced mechanische allodynie in Muizen

Door de eenvoud van de ingreep en de robuuste gedrag dat eruit voortkomt, chronische vernauwing van de nervus ischiadicus is een van de vooraanstaande dierlijke modellen van neuropathische pijn. Binnen 24 uur na een operatie, wordt de pijn overgevoeligheid vastgesteld en kan kwantitatief gemeten worden met een von Frey aesthesiometer (mechanische test) en plantaire analgesie meter (thermische test).

Chronische Vernauwing van de nervus ischiadicus en Pijn Overgevoeligheid Testen bij ratten

In this video, we develop an in vivo mouse model for perineural invasion by injecting pancreatic cancer cells into the sciatic nerve. This model helps quantify the extent of invasion and study the interactions between cancer cells and nerves.

Murine Perineural Invasion Model: Generating an In Vivo Model to Simulate Perineural Invasion in Mouse Sciatic Nerve

De scheenbeenzenuw doorsnijding model is een goed verdragen, gevalideerde en reproduceerbaar model van de skeletspier atrofie. Het model chirurgische protocol wordt beschreven en gedemonstreerd in C57Black6 muizen.

Scheenbeen Nerve doorsnijding - Een gestandaardiseerd model voor denervatie-geïnduceerde Skeletal Muscle Atrofie in Muizen

De aangepaste chirurgie is een vereenvoudigde methode voor een model voor gespaard zenuwletsel bij muizen of ratten dat slechts één ligatie en één snede vereist om zowel de gemeenschappelijke peroneale als de surale zenuwen te verwonden.

Gemodificeerd model voor gespaard zenuwletselchirurgie van neuropathische pijn bij muizen

De mechanische conflictvermijdingstest wordt gebruikt als een niet-reflexieve uitlezing van pijngevoeligheid bij muizen die kan worden gebruikt om affectieve-motiverende reacties in verschillende muispijnmodellen beter te begrijpen.

Mechanische conflictvermijdingstest om pijngedrag bij muizen te meten

Partiële heupzenuwligatie induceert langdurige chronische neuropathische pijn, gekenmerkt door overdreven reacties op thermische en mechanische stimuli. Dit muismodel van neuropathische pijn wordt vaak gebruikt om innovatieve therapieën voor pijnbestrijding te bestuderen. Dit artikel beschrijft in detail de chirurgische procedure om de standaardisatie en reproduceerbaarheid te verbeteren.

Partiële heupzenuwligatie: een muismodel van chronische neuropathische pijn om het antinociceptieve effect van nieuwe therapieën te bestuderen

We presenteren een protocol voor het gebruik van Fu's subcutane needling in een chronisch vernauwingsletselmodel om heupzenuwpijn bij ratten te induceren.

Werkzaamheid van Fu's subcutane naald op heupzenuwpijn: gedrags- en elektrofysiologische veranderingen in een rattenmodel met chronische vernauwingsblessure

Chronische vernauwingsschade van de distale infraorbitale zenuw bij muizen induceert veranderingen in spontaan gedrag (verhoogde gezichtsverzorgingsactiviteit) en nocifensief gedrag als reactie op tactiele stimulatie (hyperreactiviteit op von Frey-haarstimulatie) die tekenen zijn van aanhoudende pijn en allodynie, en dient als model voor trigeminusneuropathische pijn.

Chronisch vernauwingsletsel van de distale infraorbitale zenuw (DIoN-CCI) bij muizen om trigeminusneuropathische pijn te bestuderen

Dit protocol presenteert een reproduceerbaar rattenmodel dat sensorische zenuwen gebruikt om menselijke neuroompijn na te bootsen en chirurgische behandelingen te beoordelen, en biedt een waardevol hulpmiddel voor translationeel neuroomonderzoek.

Nieuw chirurgisch knaagdiermodel voor het bestuderen van opties voor de behandeling van neuroompijn met behulp van gerichte spierreïnnervatie door de nervus saphenos

Leer het heupzenuw handboeien model voor neuropathische pijn bij muizen met een polyethyleen manchet rond de nervus ischiadicus. Deze methode maakt evaluatie van mechanische allodynie mogelijk via von Frey filamenten.

De heupzenuw handboeien Model van neuropathische pijn in Muizen

Meer video's verkennen