Name: Ontwikkeling van een IFN-γ ELISpot Assay aan varicella-zoster virus-specifieke-cel gemedieerde immuniteit na transplantatie van navelstrengbloed (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-09T21:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Leer een IFN-γ ELISpot-assay voor cel-gemedieerde immuniteit tegen varicella-zoster virus. Deze methode detecteert cytokineproductie op enkelcellig niveau en kwantificeert T-celresponsen met standaard laboratoriumapparatuur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen studie deelnemers en hun ouders bedanken. Wij zouden ook graag Dr Rejean Lapointe (CHUM Notre-Dame, Montreal, Canada) bedanken voor toegang tot zijn ELISpot lezer, Dr Lubo Alexandrov voor statistische analyse, en Denis Blais, Sandra Caron, Silvie Valois en Martine Caty voor deskundige technische bijstand. Ondersteund door subsidies van le Fonds d&#39;operation pour les projets de recherche clinique et d&#39;Evaluatie des technologieën (CHU Sainte-Justine) aan GS en PO, door la Fondation Centre de cancérologie Charles-Bruneau, en door de Leukemia &amp; Lymphoma Society of Canada. ISF werd ondersteund door beurzen van la Fondation CHU Sainte-Justine en le Fonds de la recherche du Quebec-sante (FRQS). AJG was de ontvanger van beurzen van de afdeling Microbiologie, infectiologie &amp; Immunologie, Universite de Montreal (Gabriel-Marquis Scholarship), FRQS, en de Canadese Institutes of Health Rnderzoek (CIHR). NM werd ondersteund door la Fondation CHU Sainte-Justine, de Cole Foundation, en FRQS.

Dit onderzoek protocol werd goedgekeurd door de Institutional Ethics Review Board van CHU Sainte-Justine, Montreal, Quebec, Canada, waar de studie werd uitgevoerd. Informed consent werd gezocht en verkregen van alle deelnemers aan de studie, hun ouders of wettelijke voogden. Alle procedures uitgevoerd op dag 1 en 2 dienen onder steriele omstandigheden (dat wil zeggen onder een laminaire stroming kap) worden uitgevoerd. Standaard veiligheidsprocedures voor het omgaan met menselijk bloed moeten strikt worden nageleefd. 1. Coating de platen <ol><li> Permeabilize de polyvinylideendifluoride (PVDF) membranen onder in 96 putjes MultiScreen IP witte ELISPOT platen door aan elk putje 20 ui 35% ethanol gedurende 1 minuut. Membranen moeten licht doorschijnend geworden. </li><li> Spoel de wells 3 maal met 200 ul van 1 x met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS, 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na 2 HPO 4, 2 mM KH 2PO 4, pH 7,4) met een mulnaals pipet of soortgelijk apparaat. Deze stap is van cruciaal belang gezien het feit dat ethanol residuen levensvatbaarheid van de cellen kan beïnvloeden en binding van vangantilichaam. ELISPOT-platen zijn kwetsbaar en dient voorzichtig behandeld: het gebruik van een geautomatiseerde plaatwasser wordt afgeraden. </li><li> Coat de putjes met 10 pl gezuiverd muis-anti-humaan IFN-γ capture-antilichaam verdund in 1 x PBS tot een eindconcentratie van 10 ug / ml. Bedek de platen met gewone plastic wrap en incubeer overnacht bij 4 ° C. </li></ol> 2. Blokkeerplaten <ol><li> Leeg de putten, tikken ze droog, en was platen 5 maal met 200 ul 1x PBS. </li><li> Vul de putjes met 200 ul volledig RPMI 1640 medium platen en incubeer gedurende 2 uur bij 37 ° C (blokkeringsstap). </li><li> Was de plaatjes 5x met 200 ul 1x PBS en houden de putten vol 1x PBS tot cellen zijn klaar om te worden verzilverd. </li></ol> 3. Cell Plating en stimulatie <ol><li> Bereid peripheral bloed mononucleaire cellen (PBMC) uit menselijk veneuze bloedmonsters door centrifugatie op Ficoll-Paque gradiënten volgens standaardprocedures. Ook toepassing van standaardmethoden, ontdooien aliquots van PBMC onder vloeibare stikstof bevroren. Na de laatste centrifugatie, resuspendeer cellen in een eindconcentratie van 2 x 10 6 cellen / ml en incubeer overnacht bij 37 ° C onder een 5% CO2 atmosfeer in een watermantel incubator. </li><li> Verwijder PBMC uit de incubator en resuspendeer ze in een eindvolume van 5 ml compleet RPMI 1640 medium. </li><li> Incubeer PBMC in de aanwezigheid van 10 pi van genetisch gemanipuleerde endonuclease uit Serratia marcescens gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur geroerd. </li><li> Verwijder een 50 pl aliquot van PBMC en mengen met 50 pi van trypan blauw kleurstof. Tellen cellen en schatten% levensvatbaarheid met behulp van een hemocytometer en microscopisch onderzoek (dye uitsluiting methode). Diverse geautomatiseerde methoden voor het tellen van cellen en de beoordeling van de levensvatbaarheid van de cel kan alzodanig gebruikt. PBMC moet&gt; 95% levend. Gooi monster wanneer de levensvatbaarheid van lager dan 95%. </li><li> Centrifugeer PBMC bij 700 xg gedurende 5 min, gooi supernatant en resuspendeer cellen in AIM V-medium aangevuld met 2% (v / v) geïnactiveerd humaan serum (HIS) bij een eindconcentratie van 2 x 10 6 cellen / ml. Bewaren bij 37 ° C totdat stimulatie mengsels worden toegevoegd aan de plaat. </li><li> Aan de putjes een druppelsgewijs 100 ul van de juiste stimulatie mengsel. Drie stimulatie mengsels worden gebruikt zoals hieronder beschreven: <ol><li> Gebruik AIM-V medium aangevuld met 2% (v / v) geïnactiveerd humaan serum (IHS) als negatieve controle. </li><li> Met anti-CD3 monoklonaal antilichaam (kloon OKT3) verdund in AIM V-medium aangevuld met 2% (v / v) IHS tot een eindconcentratie van 0,5 ug / ml als positieve controle). </li><li> Gebruik VZV-antigeen, in de vorm van hetzij γ-bestraalde (10.000 Gy, 30 min. belichtingstijd) levend verzwakt VZV-vaccin (1350 plaque-vormende eenheden [PFU] / ml) verdunningted 1:200 in AIM V-medium aangevuld met 2% (v / v) IHS) of 1 ug van een equimolair mengsel van 67 peptiden (15 aminozuurresten) gesynthetiseerd gebaseerd op de sequentie van het VZV onmiddellijk vroeg (IE63) fosfoproteïne . Controle bestraling werkzaamheid door monitoring van de afwezigheid van zichtbare cytopathische effecten na 4 dagen in PBMC kweken. </li><li> Bereid alle putten in tweevoud. </li></ol></li><li> Aan de putjes een druppelsgewijs 100 ul cellen bereid in stap 5.4 tot de geschikte putjes. Twee putten moet worden overgelaten zonder cellen (negatieve controle). Incubeer 20 uur bij 37 ° C onder een 5% CO2 atmosfeer in een watermantel incubator. Niet schudden, verplaatsen, of stapelen de platen boven op elkaar tijdens incubatie. </li></ol> 4. Spot Ontwikkeling en Opsporing <ol><li> Gooi de cellen en was de platen 10x met 1x PBS aangevuld met 0,05% (v / v) Tween 20 (PBST). Tween 20 helpt los cellen die zijn toegetreden tot de PVDF mijmbrane na overnacht incubatie. </li><li> Met een multichannel pipet 100 pi 0,5 mg / ml biotine geconjugeerd anti-IFN-γ monoklonaal antilichaam (kloon 4S.B3) verdund in 1 x PBS bevattende 0,5% (w / v) runderserumalbumine (BSA). Incubeer de platen gedurende 2 uur bij kamertemperatuur geroerd. </li><li> Was de putjes 6x met PBST en voeg elk putje 100 ui streptavidine conjugatd met alkalische fosfatase verdund 1:1000 in 1 x PBS bevattende 0,5% (w / v) BSA. Bedek de plaat en incubeer gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd. </li><li> Was de plaatjes 3x met PBST en 3x met 1x PBS. Voeg 100 ul van een 5-broom-4-chloor-3-indolyl fosfaat (BCIP) / nitro blauw tetrazolium chloride (NBT) substraat oplossing en incubeer 5 min bij kamertemperatuur geroerd. </li><li> Was de plaatjes onder stromend gedestilleerd water. Verwijder het onderste gedeelte van de ELISpot plaat en was beide zijden van het membraan met gedestilleerd water. Lucht drogen de platen. </li><li> Onderzoek de putten en sommen de vlekken met behulp van een stereoscopische dissection microscoop of scan de platen met behulp van een geautomatiseerde spot tegen. Houd de platen uit de buurt van licht als ze niet kunnen worden onderzocht op dezelfde dag. <ol><li> Gemiddeld het aantal vlekken geteld overeenkomstige duplo putjes en aftrekken van het aantal spots meegeteld negatieve controle putjes (zonder cellen) van het aantal vlekken geteld in de test wells. </li><li> Express IFN-γ productie het aantal ter eenheden (SFU) per 10 6 PBMC. </li><li> Bedenk dat monsters positief als het aantal SFU is&gt; 50 10 6 PBMC en 2 standaarddeviaties (SD) boven de negatieve controle (cellen + AIM-V medium aangevuld met 2% (v / v) IHS). </li><li> Gebruik een waarde van 400 SFU per putje als vlekken zijn te talrijk om te tellen. </li></ol></li><li> Test of ELISpot gegevens normaal verdeeld zijn of niet met behulp van de Kolmogorov-Smirnov test. Wanneer de gegevens normaal verdeeld zijn, uit te voeren statistische vergelijkingen met behulp van Student&#39;s t test (2 groepen) of ANOVA en Bonferroni post-test (meerdere vergelijkingen). Als de gegevens niet normaal verdeeld zijn, gebruik maken van de Mann-Whitney U-test (2 groepen) of de Kruskal-Wallis-test en post-test Dunn&#39;s (meerdere vergelijkingen). </li></ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.

Wijzigingen en probleemoplossing: IFN-γ ELISPOT-tests werden gebruikt om celgemedieerde immuunresponsen tegen een verscheidenheid van microbiële pathogenen, waaronder humaan immunodeficiëntievirus type 1 (HIV-1) 24,25, hepatitis C virus (HCV) 26 onderzocht, 27, en Mycobacterium tuberculosis 28,29, om er maar een paar te noemen. Hier beschrijven we de ontwikkeling van een IFN-γ ELISpot test om cellulaire immuniteit tegen te meten, met de hoop van het definiëren van correlaten van...

Eerste uitgevoerd in 1989, wordt UCBT steeds meer gebruikt als onderdeel van de behandeling van verschillende neoplastische en nonneoplastic bloed bij kinderen 1. VZV is een cytopatisch menselijk alfaherpesvirus die twee verschillende ziekten, varicella (na primaire infectie) en herpes zoster (na reactivering) veroorzaakt. Na primaire infectie, VZV blijft gedurende de gehele levensduur van de gastheer beschut binnen sensorische zenuwen van de dorsale wortel ganglia. Een van de meest bedreigende infectieuze complicaties na UCBT geassocieerd met VZV 2-4. In ons klinisch centrum, in afwezigheid van VZV profylaxe, de cumulatieve incidentie van VZV ziekte VZV ziekte op 3 jaar postUCBT was 46% 2. Bij deze patiënten is de novo infectie met of reactivering van VZV vaak geassocieerd met viscerale verspreiding onder het centrale zenuwstelsel, de longen en de lever 5-7. Dientengevolge, acyclovir, valacyclovir of famciclovir profylaxe gewoonlijk toegediend aan UBCT ontvangers 8,9. Echter, deze behandelingsstrategie geen rekening gehouden met de beschermende potentieel van VZV specifieke T-lymfocyten en de kinetica van reconstitutie van VZV specifieke T cel responsen. Mogelijke problemen in verband met het toenemende gebruik van lange termijn antiherpetic profylaxe onder a) patiënt overbehandeling; b) de ontwikkeling van resistentie tegen antivirale middelen 10,11; en c) bijzondere waardevermindering van VZV specifieke immuunreconstitutie 12,13. Omdat detectie van functionele VZV-specifieke T-lymfocyten correleert met de aanwezigheid van lange termijn bescherming tegen VZV infectie en betere klinische uitkomst 4,14,15, monitoring cel-gemedieerde immuunrespons gericht tegen VZV in de periode na transplantatie kan leiden tot een rationeler gebruik van antivirale behandeling doordat artsen aan patiënten die baat hebben bij VZV onderscheiden profylaxe van degenen bij wie het immuunsysteem is in staat de controle VZV replicatie 4,13. De IFN-γ ELISPOT wordt veel gebruikt voor het bewaken celgemedieerde immuunresponsen in verschillende experimentele systemen en klinische voorwaarden. Spots gegenereerd na de splitsing van een chromogeen substraat, het genereren van een zichtbare en stabiel precipitaat op de plaats van de reactie. Elke individuele vlek daardoor vertegenwoordigt de voetafdruk van een individuele cytokine producerende cellen. IFN-γ ELISPOT meet niet alleen het vermogen van afzonderlijke cellen ex vivo IFN-γ produceren in reactie op in vitro stimulatie met verwant antigeen, maar ook een schatting van de frequentie van reagerende cellen in een bepaalde celpopulatie 16,17. Naast de hoge gevoeligheid, IFN-γ ELISPOT is eenvoudig uit te voeren, waarbij de toepassing mogelijk in het kader van gepersonaliseerde klinische protocollen die als leidraad initiatie of beëindiging van antivirale behandeling. De onderstaande procedure describ beschrevenes een ELISPOT-assay die specifiek is ontworpen voor het opsporen en meten van de productie van IFN-γ door perifere mononucleaire cellen na in vitro stimulatie met VZV afgeleide antigenen.

<table><tbody><tr><td>Leucocep buis</td><td>VWR</td><td>89048-936/89048-932</td><td>12 ml of 50 ml buizen kunnen worden gebruikt, afhankelijk van het bloedvolume.&nbsp;</td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02</td><td>Bescherm tegen licht.</td></tr><tr><td>Benzonase nuclease</td><td>Novagen</td><td>70746-3</td><td>Bewaar bij -20 &#176;C.</td></tr><tr><td>MultiScreenHTS-IP Filter Plate</td><td>Millipore</td><td>MSIPS4W10</td><td>Steriel met poriegrootte van 0,45 &micro;m.&nbsp;</td></tr><tr><td>Muis anti-menselijke IFN-&gamma; captuurantilichaam</td><td>BD Biosciences</td><td>551221</td><td>NIB42 clone.&nbsp;</td></tr><tr><td>Pepmix VZV IE63&nbsp;</td><td>JPT Peptide Technologies</td><td>PM-VZV-IE63</td><td>Los de inhoud van één fles op in 40 &#956;l DMSO. Gebruik binnen 6 maanden.</td></tr><tr><td>Biotine-geconjugeerd anti-IFN-&gamma; monoklonaal antilichaam</td><td>BD Biosciences</td><td>554550</td><td>4SB3 clone.</td></tr><tr><td>Streptavidine geconjugeerd met alkalische fosfatase&nbsp;</td><td>Bio-Rad Life Science</td><td>170-3554</td><td>Verdun voor gebruik op dezelfde dag.</td></tr><tr><td>BCIP/NBT</td><td>Bio-Rad Life Science</td><td>170-6432</td><td>Bescherm tegen licht.</td></tr></tbody></table>

ontwikkeling van een ifn-γ elispot assay aan varicella-zoster virus-specifieke-cel gemedieerde immuniteit na transplantatie van navelstrengbloed

Development of an IFN-&#947; ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

Varicella zoster-virus (VZV) is een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit na transplantatie van navelstrengbloed (UCBT). Daarom is antiherpetic profylaxe systematisch toegediend aan pediatrische UCBT ontvangers complicaties met VZV-infectie te voorkomen, maar er is geen sterk bewijs gebaseerde consensus dat de optimale duur bepaalt. Omdat T-cel gemedieerde immuniteit is verantwoordelijk voor de controle van VZV-infectie, de beoordeling van de reconstructie van VZV-specifieke T-cel responsen na UCBT kan aanwijzingen verschaffen over de vraag of profylaxe moet worden gehandhaafd of kan worden gestaakt. Hiervoor werd een specifiek VZV gamma interferon (IFN-γ) enzym-gekoppelde immunospot (ELISPOT) assay ontwikkeld IFN-γ productie karakteriseren door T-lymfocyten als reactie op in vitro stimulatie met bestraalde levend verzwakt VZV-vaccin. Deze test geeft een snelle, reproduceerbare en gevoelige meting van VZV specifieke cell gemedieerde immuniteit geschikt voor het bewaken van de reconstructie van VZV specifieke immuniteit in een klinische setting en beoordelen immuunrespons te VZV antigenen.

De IFN-γ ELISPOT protocol hierboven beschreven werd ontwikkeld en geoptimaliseerd in ons laboratorium om de omvang en de kwaliteit van celgemedieerde immuunresponsen tegen VZV 4 meten. Diverse bronnen van VZV-antigeen kan worden gebruikt ter bevordering stap. Deze omvatten: a) de handel verkrijgbaar detergent geïnactiveerd uittreksels uit VZV geïnfecteerde Vero-cellen 18; b) pools van overlappende synthetische peptiden uit specifieke VZV gecodeerde eiwitten, waaronder IE63 15 en ORF4 <su...

Nieuwe generaties van functionele testen zoals gamma interferon (IFN-γ) ELISPOT, die cytokineproductie detecteren op enkele cel en bieden zowel kwantitatieve als kwalitatieve karakterisering van T cel responsen kunnen worden gebruikt om celgemedieerde immuunresponsen tegen varicella zoster beoordelen virus (VZV).

Ontwikkeling van een IFN-γ ELISpot Assay aan varicella-zoster virus-specifieke-cel gemedieerde immuniteit na transplantatie van navelstrengbloed

Varicella zoster virus (VZV) is a significant cause of morbidity and mortality following umbilical cord blood transplantation (UCBT). For this reason, ...

Het algemene doel van de volgende procedure is het detecteren van IFN-gamma-productie op enkelcelniveau om de celgemedieerde immuunrespons tegen het varicella-zoster-virus of VZV te beoordelen. Dit wordt bereikt door eerst de wells van een 96-wells alley spot-plaat te coaten met een IFN-gamma-capture monoklonaal antilichaam. In de tweede stap worden de cellen geplaatst en gestimuleerd met VZV-antigeen.Vervolgens worden de cellen verwijderd en wordt het gevangen IFN gamma gelabeld met een detectieantilichaam, waardoor uiteindelijk de IFN gamma-productie en de omvang en kwaliteit van de celgemedieerde immuunresponsen gericht tegen BZV gekwantificeerd kunnen worden. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden zoals PMHC, timers en intracellulaire cytokinestaining is dat de interferon gamma spot-assay een robuuste, reproduceerbare en informatieve analyse is die kan worden uitgevoerd op veneuze bloedmonsters met behulp van relatief eenvoudige apparatuur, zoals incubatoren, centrifuges en dissectiemicroscopen.Om de platen voor de procedure voor te bereiden, begint u met het toevoegen van 20 µL 35% ethanol aan elke put van de 96-puts multi-screen IP wh

development-an-ifn-elispot-assay-to-assess-varicella-zoster-virus

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Identificatie van microbiële doelstellingen van adaptieve immuniteit in idiopathische ziekte kan worden bewerkstelligd door het gebruik van het enzym-linked immunospot assay.

Enzyme-linked immunospot Assay (ELISPOT): Kwantificering van de Th-1 cellulaire immuunreacties tegen microbiële antigenen

Een snelle, eenvoudige en kosteneffectieve protocol voor het genereren van donor-afgeleide multivirus-specifieke CTL (rCTL) voor infusie aan allogene hematopoietische stamceltransplantatie (HSCT) ontvangers risico op het ontwikkelen CMV, Adv of EBV infecties. Dit productieproces is GMP-compliant en moet zorgen voor de bredere implementatie van T-cel-immunotherapie voorbij gespecialiseerde centra.

Genereren van Multivirus-specifieke T-cellen te voorkomen / virale infecties te behandelen na allogene hematopoietische stamceltransplantatie

Hier beschrijven we de eerste Good Manufacturing Practice (GMP)-compatibele werkwijze voor het produceren van virus-specifieke cytotoxische T lymfocyten (CTL) uit navelstrengbloed een bron voornamelijk naïeve T-cellen.

Uitbreiden cytotoxische T-lymphocyten uit navelstrengbloed dat Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, en Adenovirus

Het karakteriseren van T-cel-epitopen van pathogenen die lokale infecties veroorzaken, zoals het humaan papillomavirus, is een uitdaging vanwege het beperkte aantal circulerende T-cellen. Er wordt een methode beschreven waarbij zeldzame T-cellen werden geïsoleerd en gekarakteriseerd, beginnend met een zeer klein aantal cellen.

Het gebruik van interferon-γ Enzyme-linked immunospot Assay om nieuwe T-cel epitopen van het humaan papillomavirus karakteriseren

Het doel van dit protocol is om pathogeen-specifieke klinische graad T-cellen te produceren met behulp van een tafelblad, geautomatiseerde, tweede generatie celverrijkingsapparaat dat een gesloten cytokine-opvangsysteem bevat en geen toegewijd personeel of gebruik van een GMP-faciliteit vereist. De gegenereerde cytomegalovirus pp65-specifieke T-cellen kunnen direct aan patiënten worden toegediend.

Geautomatiseerde Cel Verrijking van Cytomegalovirus-specifieke T-cellen voor klinische toepassingen met het cytokine-beeldverwerkingssysteem

Lange-termijn gekweekte interferon-γ enzymgebonden immunospot assay wordt gebruikt als maat voor centraal geheugen responsen en correleert met beschermende anti-mycobacteriële vaccinresponsen. Met deze assay worden perifeer bloed mononucléaire cellen gestimuleerd met mycobacteriële antigenen en interleukine-2 voor 14 dagen, waardoor differentiatie en expansie van centrale geheugen T-cellen.

Toepassing van Lange-termijn gekweekte interferon-γ Enzyme-linked immunospot Assay voor het beoordelen van effector en geheugen T cel responsen in Vee

Een protocol bij het evalueren van antigeen-specifieke T-cel-reacties in de organen van de immunoprivileged van het Ifnar1- / - lymfkliertest model voor de Zika-virus (ZIKV)-infectie wordt beschreven. Deze methode is cruciaal voor het onderzoeken van de cellulaire mechanismen voor de bescherming en immunopathogenese van ZIKV vaccins en is ook waardevol voor de evaluatie van hun doeltreffendheid.

Evaluatie van Zika Virus-specifieke T-cel reacties in Immunoprivileged organen van besmette Ifnar1- / - muizen

De ontwikkeling van de interferon-gamma ELISpot assay voor cavia PBMCs kunt de karakterisatie van T-cel reacties in dit zeer relevant model voor het bestuderen van besmettelijke ziekten. Wij hebben de test voor het meten van de T cel reacties gekoppeld intradermale levering van vaccin dat DNA toegepast.

Geoptimaliseerde Interferon-gamma ELISpot Assay maatregel T cel antwoorden in het Model van de cavia na vaccinatie

Het huidige protocol combineert ex vivo stimulatie en flowcytometrie om polyfunctionele T-cel (TPF) profielen te analyseren in perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC's) binnen Japanse encefalitisvirus (JEV) -gevaccineerde kinderen. De detectiemethode en het flowcytometriekleurenschema van JEV-specifieke TPF's werden getest om een referentie te bieden voor vergelijkbare studies.

Detectie van polyfunctionele T-cellen bij kinderen die zijn gevaccineerd met japans encefalitisvaccin via de flowcytometrietechniek

Op volbloed gebaseerde immunoassays bieden een gemakkelijk en hulpbronnenefficiënt hulpmiddel om antigeenspecifieke immuniteit te analyseren voor diagnostische en onderzoeksdoeleinden. Dit artikel biedt een geoptimaliseerd volbloedprotocol met dubbele co-stimulatie voor uitgebreide analyse van de immuniteit van de gastheer tegen schimmel- en virale pathogenen, inclusief een versie met een laag volume voor pediatrische patiënten en kleine dieren.

Volbloedtest met dubbele co-stimulatie voor antigeenspecifieke analyse van de immuniteit van de gastheer tegen schimmel- en virale pathogenen

Dit protocol demonstreert temporele veneninjectie voor intraveneuze toediening van kinderkankercellen aan neonatale muizen, waardoor precieze, reproduceerbare modellering van immuunresponsen in het vroege leven tegen kanker mogelijk is. De methode maakt het mogelijk om de impact van interventies, zoals immunomodulatie of therapie, te beoordelen wanneer deze tijdens de neonatale periode worden toegepast.

Een neonataal intraveneus transplantatiemodel voor de beoordeling van immuunactiviteiten in het vroege leven tegen kankercellen

Leer een IFN-γ ELISpot-assay voor cel-gemedieerde immuniteit tegen varicella-zoster virus. Deze methode detecteert cytokineproductie op enkelcellig niveau en kwantificeert T-celresponsen met standaard laboratoriumapparatuur.

Ontwikkeling van een IFN-γ ELISpot Assay aan varicella-zoster virus-specifieke-cel gemedieerde immuniteit na transplantatie van navelstrengbloed (Video) | JoVE Journal

Ontwikkeling van een IFN-γ ELISpot Assay aan varicella-zoster virus-specifieke-cel gemedieerde immuniteit na transplantatie van navelstrengbloed

Meer video's verkennen