Name: Een nieuwe Verduidelijking methode om Visualiseer Biliary Degeneratie Tijdens Lever Metamorfose in Sea Lamprey ( Petromyzon marinus) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-06T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Leer een gemodificeerde CLARITY-methode om de galboom te visualiseren tijdens levermetamorfose bij zeeprikken. Deze techniek biedt inzicht in galdegeneratie en mogelijke implicaties voor menselijke galatresie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs erkennen de bijdrage van Hammond Bay Biologisch Station, Great Lakes Science Center, US Geological Survey. We danken ook Dr Melinda Frame bij het Center for Advanced Microscopy aan de Michigan State University voor haar technische ondersteuning bij confocale laser scanning microscopie. Dit onderzoek wordt ondersteund door subsidies van de Grote Meren Visserijcommissie om YWCD en WML.

1. Oplossing Voorbereiding <ol><li> Voeg 1 L 10x 0,1 M fosfaatbuffer zoutoplossing (PBS, pH 7,4): Weeg 26,2 g natriumfosfaat (monobasisch), 115 g natriumfosfaat (dibasisch) en 87,66 g NaCl. Los op in ongeveer 800 ml gedestilleerd H 2 O, aan te passen pH, en breng het volume tot 1 L met gedestilleerd H 2 O. <ol><li> Maak 1 L 0,1 M fosfaatbuffer zoutoplossing (pH 7,4): Neem 100 ml 10x PBS en voeg 900 ml gedestilleerd H 2 O. </li><li> Maak 1 L 0,1 M fosfaatbuffer zoutoplossing (pH 7,4) met 0,1% Triton X-100: Neem 100 ml 10x PBS, voeg 1 ml Triton X-100, en breng het volume tot 1 L met gedestilleerd H 2 O. </li></ol></li><li> Voeg 1 L 10x 0,1 M fosfaatbuffer (PB, pH 7,4): Weeg 26,2 g natriumfosfaat (monobasisch) en 115 g natriumfosfaat (dibasisch). Los op in ongeveer 800 ml gedestilleerd H 2 O, aan te passen pH, en breng het volume tot 1 L met gedestilleerd H 2 O. <ol><li> Maak 1 L 0,1 M fosfaatbuffer (pH 7,4): Neem 100 ml 10x PB,en voeg 900 ml gedestilleerd H2O </li><li> Maak 1 L 0,1 M fosfaatbuffer (pH 7,4) met 0,1% Triton X-100: Neem 100 ml 10x PB, voeg 1 ml Triton X-100, en breng het volume tot 1 L met gedestilleerd H 2 O. </li></ol></li><li> Voeg 400 ml hydrogel monomeeroplossing (4% acrylamide, 0,25% bis-acrylamide, 4% paraformaldehyde, 0,0075% ammoniumpersulfaat, 0,0005% saponine in 0,1 M PBS): Weeg 0,3 g ammoniumpersulfaat en 0,2 g saponine. Voeg 210 ml gedestilleerd H2O, 40 ml 40% acrylamide, 10 ml 2% bis-acrylamide, 40 ml 10x PBS (pH 7,4), 100 ml 16% paraformaldehyde en meng. </li><li> Maak 4 L clearing-oplossing (4% SDS in 0,2 M boorzuur): Weeg 49,464 g boorzuur en 160 g SDS. Los op in ongeveer 3,5 L gedestilleerd H2O, pH op 8,5 met NaOH en breng het volume tot 4 L. </li><li> Maak 1 L 80% glycerol oplossing: Meet 800 ml glycerol, voeg 200 ml gedestilleerd H 2 O, en meng goed. </li></ol> 2. Tissue Voorbereiding <ol><li> Bereid hydrogel monomeeroplossing en hoeveelheid 10 ml elk 15 ml centrifugebuis. </li><li> Ontleden het gehele weefsel en fixeer het hydrogel gedurende 2 dagen bij 4 ° C. Controleer of de hydrogel oplossing tenminste 10x het volume van het weefsel. </li><li> Breng de hydrogel vaste weefsel (in de 15 ml centrifugebuis) een zuurkast. </li><li> Polymeriseren de hydrogel vaste weefsel door toevoeging van 5 pl TEMED, meng goed en laat zitten in de zuurkast bij kamertemperatuur gedurende 2-3 uur. </li><li> Verwijder de overtollige gel grondig. Let op: Extra gel zal het clearing proces en het antilichaam penetratie tijdens kleuring belemmeren. </li><li> Incubeer de vaste weefsel in 10 ml clearing oplossing in een incubator schudder ingesteld op 70 tpm en 50 ° C gedurende enkele dagen tot het weefsel doorzichtig. Wijzig clearing oplossing ten minste eenmaal per dag en verwijder de overtollige gel uit het weefsel bij het veranderen van de clearing oplossing. </li><li> Spoel het weefsel in 10 ml 0,1 M PB met 0,1% Triton X-100 bij 70 ruur en 37 ° C gedurende de nacht. Herhaal deze stap 3 keer en verwijder de overtollige gel uit het weefsel bij het wijzigen van de bufferoplossing. </li><li> Incubeer de geklaarde weefsel in het primaire antilichaam oplossing PB met 0,1% Triton X-100 bij 70 tpm en 37 ° C gedurende 2 dagen. Opmerking: Maak genoeg primaire antilichaam oplossing voor het hele weefsel onderdompelen. </li><li> Spoel het weefsel in 10 ml PB met 0,1% Triton X-100 bij 70 tpm en 37 ° C gedurende de nacht. Herhaal deze stap 3 keer en verwijder de overtollige gel uit het weefsel bij het wijzigen van de bufferoplossing. </li><li> Voer de volgende stappen in een donkere kamer of bij weinig licht. Bedek de monsters met folie van de foto&#39;s bleken te voorkomen. </li><li> Incubeer de geklaarde weefsel met de fluorescerende secundaire antilichaam oplossing PB met 0,1% Triton X-100 en de blokkering serum bij 70 tpm en 37 ° C gedurende 1 dag. </li><li> Spoel het weefsel in 10 ml PB met 0,1% Triton X-100 bij 70 tpm en 37 ° C gedurende de nacht. Herhaal deze stap 3 keer en verwijder de overtollige gel from het weefsel wanneer u de bufferoplossing. </li><li> Spoel het weefsel in 10 ml PBS bij 70 tpm en 37 ° C gedurende de nacht. Herhaal deze stap 3 keer en verwijder de overtollige gel uit het weefsel bij het wijzigen van de bufferoplossing. </li><li> Incubeer de geklaarde weefsel in 80% glycerol bij 70 rpm en 37 ° C gedurende de nacht. </li><li> Bewaar de tl-lood weefsel bij 4 ° C voorafgaand aan confocale microscopie. </li></ol>

<ol><li>Applegate, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+history+of+the+sea+lamprey+%28Petromyzon+marinus%29+in+Michigan%5BTitle%5D)+AND+%22US+Fish+and+Wildlife+Service+Special+Science+Report+on+Fishery+Service%22%5BJournal%5D)">Natural history of the sea lamprey (Petromyzon marinus) in Michigan.</a> US Fish and Wildlife Service Special Science Report on Fishery Service. (55), (1950).</li>
<li>Hardisty, M. W., Potter, I. C. The general biology of adult lampreys. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHardisty%2C+MW+%22The+biology+of+lampreys%22">The biology of lampreys</a>. Hardisty, M. W., Potter, I. C. 1, New York Academic Press. 127-206 (1971).</li>
<li>Youson, J. H., Potter, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+description+of+the+stages+in+the+metamorphosis+of+the+anadromous+sea+lamprey%2C+Petromyzon+marinus+L%5BTitle%5D)+AND+%22Can.+J.+Zool%22%5BJournal%5D)">A description of the stages in the metamorphosis of the anadromous sea lamprey, Petromyzon marinus L.</a> Can. J. Zool. 57, 1808-1817 (1979).</li>
<li>Boomer, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholangiocyte+apoptosis+is+an+early+event+during+induced+metamorphosis+in+the+sea+lamprey%2C+Petromyzon+marinus+L%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pediatr.+Surg%22%5BJournal%5D)">Cholangiocyte apoptosis is an early event during induced metamorphosis in the sea lamprey, Petromyzon marinus L.</a> J. Pediatr. Surg. 45, 114-120 (2010).</li>
<li>Kasai, M., Suzuki, H., Ohashi, E., Ohi, R., Chiba, T., Okamoto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+and+results+of+operative+management+of+biliary+atresia%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Technique and results of operative management of biliary atresia.</a> World J. Surg. 2, 571-580 (1978).</li>
<li>Suzuki, T., Hashimoto, T., Kondo, S., Sato, Y., Hussein, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+patients%E2%80%99+outcome+post-Kasai+operation%3A+a+19-year+experience+with+modification+of+the+hepatic+portoenterostomy+and+applying+a+novel+steroid+therapy+regimen%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Surg.+Int%22%5BJournal%5D)">Evaluating patients’ outcome post-Kasai operation: a 19-year experience with modification of the hepatic portoenterostomy and applying a novel steroid therapy regimen.</a> Pediatr. Surg. Int. 26, 825-830 (2010).</li>
<li>Hartley, J. L., Davenport, M., Kelly, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biliary+atresia%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Biliary atresia.</a> Lancet. 374, 1704-1713 (2009).</li>
<li>Morecki, R., Glaser, J. H., Cho, S., Balistreri, W. F., Horwitz, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biliary+atresia+and+reovirus+type+3+infection%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Biliary atresia and reovirus type 3 infection.</a> New Engl. J. Med. 307, 481-484 (1982).</li>
<li>Shimadera, S., Iwai, N., Deguchi, E., Kimura, O., Fumino, S., Yokoyama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inv+mouse+as+an+experimental+model+of+biliary+atresia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pediatr.+Surg%22%5BJournal%5D)">The inv mouse as an experimental model of biliary atresia.</a> J. Pediatr. Surg. 42, 1555-1560 (2007).</li>
<li>Sidon, E. W., Youson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+changes+in+the+liver+of+the+sea+lamprey%2C+Petromyzon+marinus+L.%2C+during+metamorphosis%3A+I.+Atresia+of+the+bile+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Morphol%22%5BJournal%5D)">Morphological changes in the liver of the sea lamprey, Petromyzon marinus L., during metamorphosis: I. Atresia of the bile ducts.</a> J. Morphol. 177, 109-124 (1983).</li>
<li>Yeh, C. -Y., Chung-Davidson, Y. -W., Wang, H., Li, K., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+synthesis+and+secretion+of+bile+salts+as+an+adaptation+to+developmental+biliary+atresia+in+the+sea+lamprey%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Nat.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Intestinal synthesis and secretion of bile salts as an adaptation to developmental biliary atresia in the sea lamprey.</a> Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 109, 11419-11424 (2012).</li>
<li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497, 332-337 (2013).</li>
<li>Alarcón, V. B., Filosa, M. F., Youson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokeratins+in+the+liver+of+the+sea+lamprey+%28Petromyzon+marinus%29+before+and+after+metamorphosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Cytokeratins in the liver of the sea lamprey (Petromyzon marinus) before and after metamorphosis.</a> Cell Tissue Res. 287, 365-374 (1997).</li>
<li>Youson, J. H., Ogilvie, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+features+of+degeneration+of+the+gallbladder+during+lamprey+biliary+atresia%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+and+Cell%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural features of degeneration of the gallbladder during lamprey biliary atresia.</a> Tissue and Cell. 22, 477-492 (1990).</li>
<li>Morii, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+of+apoptosis+in+the+cystic+duct+during+metamorphosis+of+a+Japanese+lamprey%2C+Lethenteron+reissneri%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">Onset of apoptosis in the cystic duct during metamorphosis of a Japanese lamprey, Lethenteron reissneri.</a> Anat. Rec. 293, 1155-1166 (2010).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dit protocol is een modificatie van een nieuwe methode genaamd &quot;duidelijkheid&quot; 12, die intact weefsel verknoopt polyacrylamide met een nanoporeuze hydrogel, en ontdoet het plasmamembraan van het weefsel optische transparantie en macromoleculaire permeabiliteit bereiken. &quot;Duidelijkheid&quot; kunt intact weefsel beeldvorming van lange afstand projectie en lokale bedrading in het zenuwstelsel. Deze nieuwe methode kan worden gebruikt om de gehele galwegen visualiseren Zeeprik lever tijdens metamorf...

Zeeprik ontwikkelen door middel van drie verschillende levensstadia 1,2. Larvale zeeprik (L) brengen de meeste tijd in holen als benthische filter feeders. Na het doorlopen zeven metamorfe stadia dramatische veranderingen in de externe morfologie en reorganisatie in inwendige organen 3, de resulterende jongeren (JV) Voer een parasitaire fase waarin zij zich voeden met bloed en weefsel vloeistoffen uit gastheervis en maakt de lichaamsmassa meer dan 100 keer . Na 1,0 tot 1,5 jaar voeden met de gastheer vis in de oceaan of de grote meren, volwassenen ophouden borstvoeding tijdens het vroege voorjaar en migreren in rivieren om te paaien en dan sterven 1,2. Tijdens de metamorfose, de zeeprik lever verliest de galblaas en de hele galwegen, een evolutionaire mutante fenotype dat de menselijke zuigeling ziekte galgangatresie nabootst. Zuigeling galgangatresie is een zeldzame pediatrische leverziekte met ernstige medische complicaties 4,5,6,7, 8,9,10, maar de pathogenese en etiologie van galgangatresie zijn grotendeels onbekend 4. Patiënten met galgangatresie sterven binnen twee jaar na de geboorte, tenzij chirurgische ingreep (Kasai procedure) wordt uitgevoerd 5. Vervolgens deze patiënten vereisen uitgebreide klinische behandeling en vaak levertransplantatie 6. Veel theorieën van biliaire atresie etiopathogenese voorgesteld, zoals virale infecties, aangeboren afwijking, auto-immuunziekten en toxische insult. Echter, de bijdrage van elk tot de ontwikkeling van galgangatresie blijft onduidelijk 7,8,9,10. In tegenstelling tot de zuigelingen die pathologische galgangatresie lijden, ondergaan zeeprik ontwikkelingsgebied geprogrammeerd galgangatresie zonder uitgebreide necroinflammation, fibrose of cirrose 10. De dieren kunnen voorbijgaande cholestase lijden tijdens dit proces 10, maar aan te passen aan deze ontwikkelingsstoornis aandoeningvia de synthese en uitscheiding van galzouten in de darm na ontwikkeling biliaire atresie, naast de bekende mechanismen zoals een vermindering van galzout synthese in lever 11. Dit ontwikkelingsproces in Zeeprik biedt de enige bekende mogelijkheid om de progressie van biliaire atresie onderzoeken. Een nieuw ontwikkelde methode genaamd &quot;duidelijkheid&quot; maakt hoge-resolutie beeldvorming in complexe zoogdieren zenuwstelsel door het transformeren intact weefsel in een optisch transparant nanoporeus hydrogel 12. Met behulp van de zeeprik lever en een gemodificeerd DUIDELIJKHEID protocol, kan intact weefsel beeldvorming van de galwegen degeneratie worden gedocumenteerd in de lever metamorfose.

<table><tbody><tr><td>40% acrylamide&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0140</td><td></td></tr><tr><td>2% bis-acrylamide&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0142</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0800</td><td></td></tr><tr><td>ammonium persulfate&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>A3678-25G</td><td></td></tr><tr><td>boorzuur</td><td>Sigma</td><td>B7901-1KG</td><td></td></tr><tr><td>saponine&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>natriumdodecylsulfaat&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>L337-500G</td><td></td></tr><tr><td>natriumfosfaat (monobasisch)</td><td>Sigma</td><td>04269-1KG</td><td></td></tr><tr><td>natriumfosfaat (dibasisch)</td><td>Sigma</td><td>S5136-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>X100-500ML</td><td></td></tr><tr><td>glycerol&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>G9012-500ML</td><td></td></tr><tr><td>16% paraformaldehyde&nbsp;</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710-S</td><td></td></tr><tr><td>NaOH-pellets&nbsp;</td><td>EMD</td><td>SX0590-3</td><td></td></tr><tr><td>15 ml centrifugebuizen</td><td>Elk merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>dissectie-instrumenten&nbsp;</td><td>Elk merk</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

een nieuwe verduidelijking methode om visualiseer biliary degeneratie tijdens lever metamorfose in sea lamprey ( petromyzon marinus)

A New Clarification Method to Visualize Biliary Degeneration During Liver Metamorphosis in Sea Lamprey (Petromyzon marinus)

Galgangatresie is een zeldzame ziekte van de kindertijd, met een geschatte 1 in 15.000 frequentie in het zuidoosten Verenigde Staten, maar vaker in Oost-Aziatische landen, met een gerapporteerde frequentie van 1 in 5000 in Taiwan. Hoewel veel bekend is over het beheer van galgangatresie, de pathogenese is nog steeds ongrijpbaar. De zeeprik (Petromyzon marinus) biedt een unieke gelegenheid om het mechanisme en de progressie van de galwegen degeneratie te onderzoeken. Zeeprik ontwikkelen door middel van drie verschillende levensfasen: larvale, parasitaire, en volwassen. Tijdens de overgang van larven tot parasitaire jeugdcriminaliteit, zeeprik ondergaan metamorfose met dramatische reorganisatie en verbouwing van de externe morfologie en interne organen. In de lever wordt het gehele galwegen verloren, zoals de galblaas en galwegen. Een nieuw ontwikkelde methode genaamd &quot;duidelijkheid&quot; is gewijzigd om de hele lever en de kruising met de darm in metamorfe Zeeprik verduidelijken. Deproces van gal degeneratie werd gevisualiseerd en onderscheiden tijdens zeeprik metamorfose met behulp van laser scanning confocale microscopie. Deze methode biedt een krachtig hulpmiddel om galgangatresie studeren in een uniek diermodel.

Enkele belangrijke ontwikkelingsstoornissen gebeurtenissen in het Lever-/galstelsel tijdens Zeeprik metamorfose. De galwegen en de galblaas ondergaan apoptose en gedegenereerde (figuur 1). Het combineren van de gemodificeerde verduidelijking werkwijze en kleuring met levercellen cytokeratine 19 (CK19, aanwezig in zowel cholangiocyten en hepatocyten voor en na metamorfose 13) en anti-apoptotische marker Bcl2 via confocale microscopie werd de volledige galwegen gevangen langs de Z-as ( ...

Zeeprik verliest de galblaas en galwegen tijdens metamorfose, een proces vergelijkbaar met de menselijke galgangatresie. Een nieuwe bevestiging en verduidelijking methode (duidelijkheid) werd gewijzigd om de gehele galwegen met behulp van laser scanning confocale microscopie visualiseren. Deze methode biedt een krachtig hulpmiddel om de gal degeneratie studeren.

Een nieuwe Verduidelijking methode om Visualiseer Biliary Degeneratie Tijdens Lever Metamorfose in Sea Lamprey ( Petromyzon marinus)

Biliary atresia is a rare disease of infancy, with an estimated 1 in 15,000 frequency in the southeast United States, but more common in East Asian ...

Het algemene doel van deze procedure is om de gehele lever en de overgang naar de darm te klaren voor globale, structurele en cellulaire analyses van galwegdegeneratie bij metamorfe C-lampreys. Dit wordt bereikt door de weefsels eerst te fixeren in de hydrogelmonomeeroplossing.Vervolgens wordt de hydrogel gepolymeriseerd samen met de gefixeerde weefsels. Daarna wordt het plasmamembraan van het gefixeerde weefsel verwijderd, waardoor het weefsel transparant wordt. Ten slotte wordt immunofluorescentiekleuring uitgevoerd, waarna laser-scanconfocale microscopie wordt gebruikt om globale structurele en cellulaire veranderingen tijdens galwegdegeneratie bij metamorfoseerde c Lampry aan te tonen.Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen binnen het biomedische veld, zoals de connectomen in het centrale zenuwstelsel, en in ons geval, de galwegdegeneratie tijdens de metamorfose van het serumstadium. De implicaties van deze techniek reiken tot de therapie of diagnose van humane galwegatresie, omdat deze zeldzame aangeboren kinderziekte vergelijkbare kenmerken vertoont als de galwegdegeneratie tijdens de metamorfose van het serumstadium. We kregen voor het eerst het i

a-new-clarification-method-to-visualize-biliary-degeneration-during

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Prikken herstellen motoriek na een complete dwarslaesie. Sommige spinale-projecterende neuronen goed regeneratoren en andere niet. Dit document illustreert de technieken voor huisvesting zeeprik larven (en onlangs omgebouwd volwassenen), het produceren van volledige ruggenmerg doorsnijdingen en het voorbereiden wholemount hersenen en ruggenmerg voor in situ hybridisatie.

Compleet ruggenmergletsel en Brain Dissection Protocol voor Latere Wholemount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie in Larvale Overzeese Lamprei

De zebravis embryo is een uitstekend model voor ontwikkelingsbiologie onderzoek. Tijdens de embryogenese, zebravissen ontwikkelen met een dooier massa, die driedimensionale uitdagingen voor monster observatie en analyse presenteert. Dit protocol beschrijft hoe twee-dimensionale platte mount voorbereidingen van ganse berg in situ (WISH) gekleurd zebravis embryo exemplaren maken.

Flat Mount Voorbereiding voor observatie en analyse van de zebravis embryo Exemplaren gekleurd door Whole Mount<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisatie

Om de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de door de galgangen gestuurde leverregeneratie bij zebravis te helpen beoordelen, hebben we een leverbeschadigingsmodel opgesteld waarin de nitroreductase-expresserende hepatocyten genetisch worden afgebroken na behandeling met metronidazol. In dit protocol beschrijven we hoe we op bekwame wijze hepatocytenafbraak en door galgangen gestuurde leverregeneratie kunnen manipuleren, bewaken en analyseren.

Hepatocyt-specifieke Ablation in zebravis-Biliary gedreven leverregeneratie Studie

Het branchiale skelet, inclusief kieuwbogen, keeltanden en branchiale botten, dient als de primaire plaats voor voedselverwerking bij de meeste vissen. Hier beschrijven we een protocol om dit interne skelet in drie-stekelige stekelbaarzen te dissecteren en plat te monteren. Deze methode is ook toepasbaar op een verscheidenheid aan andere vissoorten.

Dissection en Flat-montage van de driedoornige stekelbaars branchial Skeleton

Hier presenteren we een protocol om te isoleren en karakteriseren van de structuur, olfactorische potentie en gedragsmatige reactie van vermeende feromoon verbindingen van zee prikvissen.

De identificatie van de Zeeprik feromonen met behulp van de Bioassay-geleide fractionering

We presenteren een vrij eenvoudige en gevoelige methode voor nauwkeurige kwantificering van de dichtheid van de gal duct in de lever van de muis. Deze methode kan helpen bij het bepalen van de effecten van genetische en omgevings modificatoren en de effectiviteit van mogelijke therapieën in muizen modellen van galziekten.

Bepaling van de Galkanaal dichtheid in de lever van de muis

Hier demonstreren we een methode voor het kwantificeren van levergrootte bij larve zebravissen, die een manier bieden om de effecten van genetische en farmacologische manipulaties op levergroei en ontwikkeling te beoordelen.

Kwantificerende levergrootte bij larvale zebravissen met behulp van Brightfield Microscopie

Skeletspierregeneratie wordt aangedreven door weefsel ingezeten spierstamcellen, die bij veel spierziekten zoals spierdystrofie worden aangetast, en dit resulteert in het onvermogen van spieren om te regenereren. Hier beschrijven we een protocol dat het mogelijk maakt om spierregeneratie te onderzoeken in zebravismodellen van spierziekte.

Het onderzoeken van Spierregeneratie in Zebrafish Modellen van Spierziekte

Dit protocol beschrijft de procedure voor het verwijderen van de ventrale kwab van de lever bij volwassen zebravissen om de studie van leverregeneratie mogelijk te maken.

Gedeeltelijke hepatectomie bij volwassen zebravissen

Hier presenteren we hoe we een niet-alcoholische leververvetting (NAFLD) -geassocieerd Hepatocellulair Carcinoom (HCC) zebravismodel kunnen genereren om de impact van cholesteroloverschot op de micro-omgeving van de lever en het immuuncellandschap te bestuderen.

Analyse van levermicro-omgeving tijdens vroege progressie van niet-alcoholische leververvetting-geassocieerd hepatocellulair carcinoom bij zebravissen

Dit protocol beschrijft het oogsten en visualiseren van elasmoid schubben van zebravissen tijdens in vivo regeneratie. Bovendien wordt de ex vivo cultuur van deze schubben tot 7 dagen na de oogst gepresenteerd.

Zebravis Scale Regeneratie In Toto en Ex Vivo Kweek van Schubben

Leer een gemodificeerde CLARITY-methode om de galboom te visualiseren tijdens levermetamorfose bij zeeprikken. Deze techniek biedt inzicht in galdegeneratie en mogelijke implicaties voor menselijke galatresie.

Een nieuwe Verduidelijking methode om Visualiseer Biliary Degeneratie Tijdens Lever Metamorfose in Sea Lamprey ( Petromyzon marinus) (Video) | JoVE Journal

Een nieuwe Verduidelijking methode om Visualiseer Biliary Degeneratie Tijdens Lever Metamorfose in Sea Lamprey ( Petromyzon marinus)

Meer video's verkennen