Name: Transplantatie van Tail Skin aan allogene CD4 T-cel responsen bij muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 48 s
Description: Leer staarthuidtransplantatie bij muizen om T-celafhankelijke afstoting en tolerantie-inductie te bestuderen. Deze minimaal invasieve methode maakt eenvoudige monitoring van immuunresponsen mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door SNF-subsidies PPOOA-_119204 en PPOOP3_144918 aan S.W.R. We danken E. Palmer en B.T.H. Hausmann voor muizen en technische expertise.

In deze video publicatie en protocol, werden alle dierlijke procedures uitgevoerd in overeenstemming met het dier protocol door de kantonrechter Autoriteit Basel-Stadt, Zwitserland goedgekeurd. Voer alle procedures in steriele omstandigheden waar. 1. Voorbereiding van de Chirurgie <ol><li> Autoclaaf alle chirurgische instrumenten en gaas voor gebruik. </li><li> Verwarm de warme pad en organiseren chirurgische instrumenten op de tafel (tabel of Materials / Methoden). </li><li> Open de vinger strip bandages. Vaseline op de wond pad met een wattenstaafje (zorg ervoor dat het gaas is volledig bedekt). </li><li> Weeg de muizen en beheren analgesie Buprenorfine 0,05 mg / kg lichaamsgewicht. Let op: dit zal analgesie onmiddellijk na de transplantatie. </li></ol> 2. Voorbereiding van de Staart-huid voor transplantatie <ol><li> Euthanaseren donormuizen (bijv. IA BM12) per CO 2 stikken en disinfect de staarten met desinfectie oplossing voor excisie. </li><li> Plaats de staart met de zwarte streep op een schone plastic bord en snijd hem overlangs in heel de middelste lijn, waardoor een oppervlakkige incisie waarbij slechts de huidlaag. </li><li> Trek het vel van de staart met behulp aangrijpend tang. </li><li> Zet de staart-huid in een 10 cm celkweek schotel gevuld met 10 ml HBSS. </li></ol> 3. Chirurgische Procedure <ol><li> Verdoven ontvangende muizen (bijvoorbeeld C57BL / 6) door inademing van een 3% oplossing isofluorane transparante inductie vak. NB: Het duurt 3-5 minuten voor de muis om chirurgische anesthesie vliegtuig te bereiken. Gebruik dierenarts zalf op de ogen tot droog voorkomen terwijl onder verdoving. </li><li> Plaats de muis op de warme pad en toepassing 1,5% isofluorane via een mondmasker en ezels elk dier reflex door teen knijpen. </li><li> Scheer de dorsale site van de ontvangende muizen (bijv. C57BL / 6) en verwijder besmetten haren met een droog gaasje swab. </li><li> Desinfecteer geschoren transplantatie site met aseptische oplossing. </li><li> Knijp de huid met een tang in het midden / rechts site van het dorsale gedeelte en gebruik gebogen schaar om een ​​ronde insnijding van ongeveer 1 x 0,6 cm maken. </li><li> Als bloeden optreedt, dan is het reinigen van de wond met een steriel wattenstaafje. </li><li> Evalueer de grootte van de incisie en snijd een transplantatie van de geschatte omvang van de staart-huid met behulp van de scalpel. </li><li> Trim hoeken om de transplantatie te ronden. </li><li> Laad de transplantatie op de scalpel, droge overmaat HBSS op een steriel wattenstaafje en plaats deze in het transplantaat bed van de ontvanger muis. </li><li> Vermijd overlapping van donor en gastheer huid en weefsel toe te passen lijm op de contact zone uitsluitend. </li><li> Breng een pleister zonder plooien rond de muis taille. </li><li> Breng de lijm niet-elastisch verband om de pleister vast aan de muis (3 mm verschoven). </li><li> Incise met de schaar ongeveer 3 mm in de bovenste ventrale plaats van het verband. Opmerking: Dit is om te voorkomen dat trapping van de tanden van de muis tijdens de herstelfase. </li><li> Verwijder de narcose-mond-masker en houden de getransplanteerde muizen op de verwarming pad totdat wakker. </li><li> Terug getransplanteerde muizen om hun kooien wanneer volledig hersteld en beoordelen hun mobiliteit zodat het verband niet te strak. </li><li> Steriliseren alle chirurgische instrumenten met 70% ethanol, alvorens volgende operatie. </li></ol> 4. Postoperatieve zorg <ol><li> Add-paracetamol bevattende siroop aan het drinkwater (4 mg / ml) en toedienen gedurende 7 dagen. </li><li> Terug muis om het dier kamer als het eenmaal is hersteld. </li><li> Nauwlettend toezien op muizen voor klinische symptomen, zoals depressie of andere gedragsveranderingen (eten of immobiliteit), abnormale verschijning (gebrek aan verzorging) of houding (pilo-erectie of gebogen houding) voor de tijd dat het verband op zijn plaats is (1 week). </li></ol> 5. Bandage verwijderen (6-7 dagen na transplantatie) <ol><li> Anesthetize muizen door inhalatie van een 3% isofluorane oplossing in een doorzichtige doos inductie (zie hierboven). </li><li> Knip verband en gips met slagader schaar en verwijder voorzichtig hen. Opmerking: vermijd het uitrekken van de transplantatie plaats. </li><li> Bewaken van de getransplanteerde muizen op klinische tekenen (zie 4.3) en de score voor de afwijzing van huidtransplantaties (tabel 1). Opmerking: Het transplantaat score systeem maakt gebruik van de verschillende haartexturen op de staart-huid in vergelijking met de dorsale huid. Het uiterlijk van de transplantatie en de afwijzing is ingedeeld in 3 klassen. Allogene huid (MHC II mismatch, bijvoorbeeld, IA BM12) enten van C57BL / 6 immunocompetente muizen worden meestal binnen 12-15 dagen na de transplantatie (eigen gegevens en 15-20) verworpen. </li></ol>

<ol><li>Mahillo, B., Carmona, M., Álvarez, M., White, S., Noel, L., Matesanz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Data+in+Organ+Donation+and+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22transplantation%22%5BJournal%5D)">Global Data in Organ Donation and Transplantation.</a> transplantation. 92 (10), 1069-1074 (2011).</li>
<li>Halleck, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+perspectives+of+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+proceedings%22%5BJournal%5D)">New perspectives of immunosuppression.</a> Transplantation proceedings. 45 (3), 1224-1231 (2013).</li>
<li>Wood, K. J., Bushell, A., Jones, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunologic+unresponsiveness+to+alloantigen+in+vivo.+a+role+for+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+reviews%22%5BJournal%5D)">Immunologic unresponsiveness to alloantigen in vivo. a role for regulatory T cells.</a> Immunological reviews. 241 (1), 119-132 (2011).</li>
<li>Sykes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+tolerance%3A+mechanisms+and+application+in+clinical+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Immune tolerance: mechanisms and application in clinical transplantation.</a> Journal of Internal Medicine. 262 (3), 288-310 (2007).</li>
<li>McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+allograft+rejection.%5BTitle%5D)+AND+%22Current+protocols+in+immunology%22%5BJournal%5D)">Skin allograft rejection.</a> Current protocols in immunology. , (2009).</li>
<li>McKenzie, I. F., Morgan, G. M., Sandrin, M. S., Michaelides, M. M., Melvold, R. W., Kohn, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B6.C-H-2bm12.+A+new+H-2+mutation+in+the+I+region+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">B6.C-H-2bm12. A new H-2 mutation in the I region in the mouse.</a> The Journal of experimental medicine. 150 (6), 1323-1338 (1979).</li>
<li>McIntyre, K. R., Seidman, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleotide+sequence+of+mutant+I-A+beta+bm12+gene+is+evidence+for+genetic+exchange+between+mouse+immune+response+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Nucleotide sequence of mutant I-A beta bm12 gene is evidence for genetic exchange between mouse immune response genes.</a> Nature. 308 (5959), 551-553 (1984).</li>
<li>Stuart, P. M., Beck-Maier, B., Melvold, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Provocation+of+skin+graft+rejection+across+murine+class+II+differences+by+non--bone-marrow-derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Provocation of skin graft rejection across murine class II differences by non--bone-marrow-derived cells.</a> Transplantation. 37 (4), 393-396 (1984).</li>
<li>Hausmann, B., Palmer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+selection+through+a+motif+in+the+alphabeta+T+cell+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Positive selection through a motif in the alphabeta T cell receptor.</a> Science. 281 (5378), 835-838 (1998).</li>
<li>Bill, J., Ronchese, F., Germain, R. N., Palmer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contribution+of+mutant+amino+acids+to+alloantigenicity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">The contribution of mutant amino acids to alloantigenicity.</a> The Journal of experimental medicine. 170 (3), (1989).</li>
<li>Monaco, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppression+and+tolerance+for+clinical+organ+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunosuppression and tolerance for clinical organ allografts.</a> Current Opinion in Immunology. 1 (6), 1174-1177 (1989).</li>
<li>Rosenberg, A. S., Singer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+basis+of+skin+allograft+rejection%3A+an+in+vivo+model+of+immune-mediated+tissue+destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cellular basis of skin allograft rejection: an in vivo model of immune-mediated tissue destruction.</a> Annual Review of Immunology. 10, 333-358 (1992).</li>
<li>Kingsley, C. I., Nadig, S. N., Wood, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+tolerance%3A+lessons+from+experimental+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+international+%3A+official+journal+of+the+European+Society+for+Organ+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Transplantation tolerance: lessons from experimental rodent models.</a> Transplant international : official journal of the European Society for Organ Transplantation. 20 (10), 828-841 (2007).</li>
<li>Larsen, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+acceptance+of+skin+and+cardiac+allografts+after+blocking+CD40+and+CD28+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Long-term acceptance of skin and cardiac allografts after blocking CD40 and CD28 pathways.</a> Nature. 381 (6581), 434-438 (1996).</li>
<li>Tomura, M., Nakatani, I., Murachi, M., Tai, X. G., Toyo-oka, K., Fujiwara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+allograft+responses+induced+by+interleukin-6%2C+which+selectively+modulates+interferon-gamma+but+not+interleukin-2+production%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Suppression of allograft responses induced by interleukin-6, which selectively modulates interferon-gamma but not interleukin-2 production.</a> Transplantation. 64 (5), 757-763 (1997).</li>
<li>Ring, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+is+necessary+for+initiating+the+acute+rejection+of+major+histocompatibility+complex+class+II-disparate+skin+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma is necessary for initiating the acute rejection of major histocompatibility complex class II-disparate skin allografts.</a> Transplantation. 67 (10), 1362-1365 (1999).</li>
<li>Rosenberg, A. S., Finbloom, D. S., Maniero, T. G., Vander Meide, P. H., Singer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+prolongation+of+MHC+class+II+disparate+skin+allografts+by+in+vivo+administration+of+anti-IFN-gamma+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Specific prolongation of MHC class II disparate skin allografts by in vivo administration of anti-IFN-gamma monoclonal antibody.</a> Journal of immunology. 144 (12), 4648-4650 (1950).</li>
<li>Goes, N., Sims, T., Urmson, J., Vincent, D., Ramassar, V., Halloran, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disturbed+MHC+regulation+in+the+IFN-gamma+knockout+mouse.+Evidence+for+three+states+of+MHC+expression+with+distinct+roles+for+IFN-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Disturbed MHC regulation in the IFN-gamma knockout mouse. Evidence for three states of MHC expression with distinct roles for IFN-gamma.</a> Journal of immunology. 155 (10), 4559-4566 (1995).</li>
<li>Surquin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-4+deficiency+prevents+eosinophilic+rejection+and+uncovers+a+role+for+neutrophils+in+the+rejection+of+MHC+class+II+disparate+skin+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">IL-4 deficiency prevents eosinophilic rejection and uncovers a role for neutrophils in the rejection of MHC class II disparate skin grafts.</a> Transplantation. 80 (10), 1485-1492 (2005).</li>
<li>Gaylo, A. E., Laux, K. S., Batzel, E. J., Berg, M. E., Field, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+rejection+of+MHC+class+II-disparate+skin+allografts+in+mice+treated+with+farnesyltransferase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+immunology%22%5BJournal%5D)">Delayed rejection of MHC class II-disparate skin allografts in mice treated with farnesyltransferase inhibitors.</a> Transplant immunology. 20 (3), 163-170 (2009).</li>
<li>Bose, A., Inoue, Y., Kokko, K. E., Lakkis, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+perforin+down-regulates+CD4+and+CD8+T+cell-mediated+immune+responses+to+a+transplanted+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: perforin down-regulates CD4 and CD8 T cell-mediated immune responses to a transplanted organ.</a> Journal of immunology. 170 (4), 1611-1614 (2003).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

Huidtransplantatie is een veel gebruikte werkwijze voor het bestuderen afstoting en tolerantie afhankelijk van T-cellen. Aangezien de huid transplantatie model werd opgericht, hebben diverse aanpassingen en wijzigingen zijn toegepast. In de beschreven procedure, is IA BM12 staart-huidtransplantatie uitgevoerd met behulp van narcosegas (isofluorane). Het gebruik van gas verdoving vermindert de tijd van uitvoering en muizen herstel, dat de stress vermindert op getransplanteerde muizen. De procedure maakt gebrui...

Transplantatie van solide organen zoals huid, hart en nieren is nu een standaard procedure in de medische praktijk wereldwijd 1. Succesvol getransplanteerde organen kan door activering van de ontvanger immuunsysteem, die de major histocompatibility antigenen van de donor herkent worden afgewezen. Daarom getransplanteerde patiënten moeten de behandeling met immunosuppressieve geneesmiddelen 2. Allogene huidtransplantatie bij muizen werd vastgesteld Medawar en collega&#39;s in 1955 en is nuttig voor het identificeren van gerichte moleculen later beschreven major histocompatibility complex (MHC) klasse I en II. Sindsdien heeft de huidtransplantatie model voortdurend gemodificeerd en aangepast aan de rol van T-cel subsets en de relevantie van chemische en biologische interventie bij het ​​onderdrukken van transplantaatafstoting 2-4 bestuderen. Huid van het oor en de romp zijn moeilijker te bereiden en zijn meer vatbaar voor hypoxie en necrose dan staartstuk 5; echter,transplantatie procedure gelijk. Naast het toezicht op de staart-huidtransplantaties is eenvoudig te wijten aan de karakteristieke haar textuur van de huid. Dit artikel geeft een gedetailleerde procedure voor MHC klasse II mismatch staart-huidtransplantatie dat zorgt voor de studie van de verschillende aspecten van CD4 + T-cel gemedieerde allograft afstoting en tolerantie bij muizen. De natuurlijke drie-puntmutatie in de MHC klasse II molecuul IA b (de zogenaamde IA BM12) 6-9 is voldoende om afstoting van de huid allotransplantaten induceren in C57BL / 6 muizen 8. De IA BM12 molecuul activeert CD4 + T-cellen met verschillende αβ-T-celreceptor (TCR) ketens van C57BL / 6 muizen, waaronder Vα2Vβ8 TCR-specifieke T-cellen werden geïdentificeerd om een TcR-transgene muizen 10 genereren. De adoptieve overdracht van Vα2Vβ8-TcR T-cellen is gebruikt om afstoting model vast te stellen bij immunodeficiënte C57BL / 6 RAG2 - / - muizen getransplanteerd met IA BM12 huid. Genetische verschillen tussen donor en ontvanger beïnvloeden het resultaat van transplantaat-acceptatie en afwijzing. Er zijn verschillende soorten transplantaties: autografts zijn transplantaties van het ontvangende individu zelf; syngrafts en allotransplantaten respectievelijk transplantatie van genetisch identiek en genetisch niet verwante individuen. Aanvaarding van verschillende allogene orgaantransplantaties is aangetoond door chemische en biologische interventie bij patiënten en muismodellen 11,3,4. In een fundamentele aanpak, anti-CD3-antilichaam behandelde C57BL / 6 muizen bleek langdurige overleving van IA BM12 staart-huid (ongepubliceerde gegevens). Depletie van CD4 + en CD8 + T-cellen voor transplantatie in ontvangende muizen resulteerde in aanvaarding van MHC klasse I en II mismatched transplantaten (rev. in 12). Interessant afwijzing van huidtransplantaties afhankelijk van de aanwezigheid van CD4 + </sup&gt; T-cellen (rev. in 12). In dit model, gericht op specifieke interacties tussen verschillende immune cellen door het blokkeren costimulatoire moleculen met antilichamen of onderdrukking van regulatoire T-cellen kan tolerantie (ongepubliceerde gegevens) induceren. Inderdaad, het blokkeren van zowel CD40 en CD28 leidde tot lange termijn huid allotransplantaat tolerantie 13,14. Staart-huidtransplantatie is eenvoudig uit te voeren en gemakkelijk te controleren in vergelijking met transplantatie van andere organen. Bovendien staart-huidtransplantaten gemakkelijk te bereiden en zijn minder gevoelig voor ischemie dan andere huidweefsels. In tegenstelling tot geïnjecteerde anesthetica, het gebruik van anestheticum gas (isofluorane) tijdens transplantatie verkort zowel de procedure en ontvanger hersteltijd. Krullen van de staart-huidtransplantatie, wat kan leiden tot onvolledige wondgenezing en transplantaatafstoting, wordt voorkomen door toepassing van weefsellijm. Bovendien is de IA BM12 staart-huidtransplantatie model activeert CD4 uitsluitend <sup&gt; + T-cellen in zowel immunocompetente en immunodeficiënte muizen (van dezelfde genetische achtergrond) de interpretatie van de resultaten te vergemakkelijken. Dit protocol beschrijft een betrouwbaar, reproduceerbaar en gemakkelijk gevolgd muismodel waarmee chemische en biologische interventie. Het model is bedoeld voor het onderzoeken van afwijzing en tolerantie inductie van staart-huidtransplantaties.

<table><tbody><tr><td>Betadine standaardoplossing</td><td>Mundipharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wattenstaafje</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>31025060</td><td></td></tr><tr><td>Dafalgan, UPSA</td><td>Bristol Myers Squibb UPSA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hansaplast vingerpleisters</td><td>Beierdorf AG</td><td>REF.76861</td><td></td></tr><tr><td>Histoacryl weefselkleefstof</td><td>Braun</td><td>REF.1050052</td><td></td></tr><tr><td>Leukotape classic, 2 cm x 10 m</td><td>BSN Medical SAS</td><td>REF.02204-00</td><td></td></tr><tr><td>PBS, Phosphate Buffered Saline, pH 7.4</td><td>Invitrogen</td><td>10010015</td><td>GIBCO</td></tr><tr><td>Steriele gaas, 5 x 5 cm, 8 lagen</td><td>MaiMed GmbH</td><td>21010</td><td></td></tr><tr><td>Fijne tang met smalle patroon</td><td>FST</td><td>11003-12</td><td></td></tr><tr><td>Fijne iris schaar gebogen</td><td>FST</td><td>14095-11</td><td></td></tr><tr><td>Fijne iris schaar</td><td>FST</td><td>14094-11</td><td></td></tr><tr><td>Mayo schaar</td><td>FST</td><td>14010-15</td><td></td></tr><tr><td>Slagader schaar met bolspits 11,5 cm</td><td>FST</td><td>14080-11</td><td></td></tr><tr><td>Weefseltang</td><td>FST</td><td>11021-14</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgisch mes nr. 20</td><td>Swann-Morton LTD</td><td>3006</td><td>Koolstofstaal</td></tr><tr><td>Chirurgische mesgrepen</td><td>Swann-Morton LTD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spuit, 1 ml</td><td>ARTSANA</td><td></td><td>Wegwerp</td></tr><tr><td>Temgesic, buprenorfine</td><td>ESSEX Chemie AG</td><td></td><td>0,3 mg/ml</td></tr><tr><td>Weefselkwekerij schotels 10 cm, 60,1 cm2</td><td>TPP</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vaseline</td><td>Vifor SA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Warmtepad</td><td>Solis</td><td></td><td>Type 223</td></tr></tbody></table>

transplantatie van tail skin aan allogene cd4 t-cel responsen bij muizen

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Het onderzoek naar T-celreacties en hun gevolgen tijdens herkenning van allo-antigenen vereist een model dat het mogelijk maakt om onderscheid te maken tussen donor en gastheer T-cellen, het gemakkelijk controleren van het transplantaat en het aanpassen van het systeem om verschillende immunologische vragen te beantwoorden. Medawar en collega's vestigden in 1955 allogene staarthuidtransplantatie bij muizen. Sindsdien is het huidtransplantatiemodel voortdurend gewijzigd en aangepast om specifieke vragen te beantwoorden. Het gebruik van staarthuid maakt dit model gemakkelijk te scoren voor afstoting van het transplantaat, vereist geen uitgebreide voorbereiding of diepe anesthesie, is toepasbaar op dieren van alle genetische achtergrond, ontmoedigt ischemische necrose en maakt chemische en biologische interventie mogelijk. 
In het algemeen zijn zowel CD4+ als CD8+ allogene T-cellen verantwoordelijk voor de afstoting van allograften, omdat ze niet-overeenkomende major histocompatibiliteitsantigenen van verschillende muizenstammen herkennen. Er zijn verschillende modellen beschreven voor het activeren van allogene T-cellen in muizen met huidtransplantatie. De identificatie van major histocompatibiliteitscomplex (MHC) klasse I en II moleculen in verschillende muizenstammen, inclusief C57BL/6 muizen, was een belangrijke stap in het begrijpen en bestuderen van T-cel-gemedieerde alloresponsen. In het hier beschreven staarthuidtransplantatiemodel is een drie-puntsmutatie (I-Abm12) in de antigeen-presenterende groef van het MHC-klasse II (I-Ab) molecuul voldoende om sterke allogene CD4+ T-celactivatie in C57BL/6 muizen te induceren. Huidtransplantaten van I-Abm12 muizen op C57BL/6 muizen worden binnen 12-15 dagen afgestoten, terwijl syngene transplantaten tot 100 dagen worden geaccepteerd. De afwezigheid van T-cellen (CD3-/- en Rag2-/- muizen) maakt huidtransplantaatacceptatie mogelijk tot 100 dagen, wat kan worden overwonnen door het overbrengen van 2 x 104 wildtype of transgene T-cellen. Adoptief overgedragen T-cellen prolifereren en produceren IFN-γ in I-Abm12-getransplanteerde Rag2-/- muizen.

In een eerste benadering werden C57BL / 6 muizen getransplanteerd met IA BM12 allografts en IA b syngrafts. Na bandage verwijdering, ent manifeste tekenen van wondgenezing zonder sluiting van het contact zone in C57BL / 6 muizen (figuur 1A). Na verwijdering bandage, CD4 + T-cellen gemedieerde ontsteking leidde tot het ontstaan ​​van necrotische gebieden (rode stippen) en afstoting van allografts IA BM12 in C57BL / 6 muizen binnen 13 dagen na transplantatie <st...

Transplantatie van staarthuid is een krachtig model voor het bestuderen van T-cel-afhankelijke afstoting en tolerantie-inductie tijdens allogene immuunresponsen bij muizen. De voordelen van dit protocol zijn kleine invasieve chirurgie en gemakkelijke monitoring zonder dat de ontvangende muis hoeft te worden geofferd.

Transplantatie van Tail Skin aan allogene CD4 T-cel responsen bij muizen

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Het algemene doel van de volgende procedure is het uitvoeren van een staarthuittransplantatie. Om T-cel-gemedieerde afstoting of tolerantie-inductie in een muismodel te bestuderen, wordt dit bereikt door eerst de staarthuid van een donormuis te oogsten. In de tweede stap wordt de transplantatieplaats op het ontvangende dier voorbereid.Vervolgens wordt het transplantaat getransplanteerd en in de laatste stap gefixeerd met weefsellijm en een verband. Het verband wordt op dag zeven na de transplantatie verwijderd en het transplantaat wordt gescoord. Uiteindelijk kan de T-cel-gemedieerde allo-immuunrespons worden bestudeerd.Deze techniek voor staarthuidtransplantatie biedt een krachtig model voor het bestuderen van T-cel-afhankelijke afstoting en tolerantie-inductie tijdens allogene immuunresponsies bij muizen. Open vóór aanvang van de procedure de vingerstripverbanden en breng met een wattenstaaf vaseline aan op de wondkussentjes, waarbij u erop let dat het gaas volledig bedekt is. Desinfecteer vervolgens de staart van een geëuthanaseerde donormuis met een desinfectieoplossing.Plaats vervolgens de staart op een schoon plastic bord. Draai de bovenste zwarte streep naar beneden en maak een longitudinale oppervlakkige incisie door de huid langs de middellijn van de staart. Gebruik grijpforceps om de huid te verwijderen en plaats het weefsel vervolgens in een celluikschaal van 10 centimeter gevuld met 10 milliliters HBSS.Scheren we de dorsale zijde van een geanestheseerde recipientmuis en gebruik een droog stukje gaas om eventuele achtergebleven haren te verwijderen. Nadat de geschoren transplantatieplaats is gedesinfecteerd met een aseptische oplossing, knijpt u met een pincet in de huid aan de rechterkant van het midden van de rug en maakt u met een gebogen schaar een ronde incisie van ongeveer 1 bij 0,6 centimeter in diameter. Gebruik vervolgens een scalpel om een graft uit de weggesneden donorstaarthuid te snijden, waarbij de hoeken worden bijgetrimd om het weefsel rond te maken; plaats de graft op de scalpel en dep het overtollige HBSS weg met een steriel wattenstaafje.Plaats vervolgens het gedroogde weefsel op het graftbed van de ontvangermuis. Vermijd overlap tussen de donor- en gastheerhuid door weefsellijm uitsluitend op de contactzone aan te brengen. Wikkel daarna een pleister zonder vouwen rond de taille van de muis en breng een niet-elastisch hechtverband aan om de pleister aan de muis te bevestigen, zodat te voorkomen wordt dat de muis met zijn tanden in het verband bijt.Maak tijdens het herstel een incisie van drie millimeter in de bovenste ventrale zijde van het materiaal. Nadat het dier volledig is bijgekomen op een verwarmd warmtekussen, plaatst u het getransplanteerde dier terug in de kooi en beoordeelt u de mobiliteit. Om ervoor te zorgen dat het verband niet te strak zit, behandelt u de muis zeven dagen lang met paracetamolsiroop in het drinkwater van het dier.Knipt na zes tot zeven dagen met steriele arterieschaar door de verbanden en verwijder deze voorzichtig, waarbij u erop let dat de transplantatieplaats niet wordt uitgerekt. Monitor ten slotte de getransplanteerde muizen op klinische tekenen en bepaal de score voor de afstoting van de huidtransplantaten. In dit experiment werden C 57 BL six muizen getransplanteerd met IABM 12 allografts en IAB sin grafts.Na het verwijderen van de verbanden vertoonde het transplantaat tekenen van wondgenezing zonder sluiting van de contactzone bij de C 57 BL six-muizen. Eén tot twee weken later leidde een CD four-positieve T-cel-gemedieerde ontsteking tot het verschijnen van necrotische gebieden binnen het transplantaat. Afstoting van de I A BM 12-allotransplantaten werd waargenomen bij de C 57 BL six-muizen binnen 13 dagen na de transplantatie.Terwijl de syn-transplantaten tot 100 dagen werden getolereerd, is de afstoting van MHC-klasse II-mismatched huid van de staart afhankelijk van de aanwezigheid van allogene CD4-positieve T-cellen. Zo vertonen T-cel-deficiënte CD3ε-knockoutmuizen en T- en B-cel-deficiënte RAG2-knockoutmuizen volledige wondgenezing en tolereren zij I a BM 12-transplantaten tot 100 dagen.Acceptatie van de IABM 12 mismatch-staartskin maakt de studie van allogene CD4-positieve T-cellen en hun effectorfuncties mogelijk in een muismodel zonder ernstige ziektepathologieën. Het voordeel van dit staartskin-transplantatiemodel is dat functionele analyse van CD4-positieve T-cellen eenvoudig kan worden uitgevoerd door adoptieve transfer van antigeenspecifieke CD4-positieve T-cellen. In dit representatieve experiment was de transfer van 2 × 10⁴ antigeenspecifieke transgene A BM-cellen voldoende om de afstoting van IABM 12-transplantaten in rag2-knockoutmuizen binnen 13 dagen te induceren. Er werd waargenomen dat de Vα2 Vβ8 TCR-keten-expresserende A BM-cellen uitgebreid prolifereerden via de EFL 670-dilutie-assay en IFN-γ produceerden na PMA-stimulatie.Deze gegevens tonen aan dat slechts enkele allogene CD4-positieve T-cellen nodig zijn om één A BM 12 huidtransplantaat af te stoten, waardoor dit een ideaal model is voor de analyse van allogene T-cellen in afwezigheid van ernstige pathologie. Na het bekijken van deze video moet u een goed inzicht hebben in het uitvoeren van staarthuidtransplantaties en het succesvol monitoren van transplantaatafstoting.

transplantation-tail-skin-to-study-allogeneic-cd4-t-cell-responses

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Allogene huid transplantatie is een standaard model voor het testen van gastheer T-cel responsen aan MHC-ongelijksoortige donor antigenen. Deze video-artikel geeft een visuele handleiding van iedere stap die betrokken zijn bij het uitvoeren van een BALB/c--&gt; C57BL / 6 huid transplantatie.

Murine huidtransplantatie

Murine beenmergtransplantatie is een veel gebruikte techniek om immunologische mechanismen voor graft-versus-host ziekte bij mensen bestuderen. De mogelijkheid om T-cel mensenhandel patronen te...

Inductie van Graft-versus-host ziekte en<em&gt; In Vivo</em&gt; T-cel monitoren door gebruik van een MHC-matched muizenmodel

This video demonstrates the induction of intestinal graft-versus-host disease, GvHD, in a lethally-irradiated recipient mouse using allogeneic hematopoietic stem cells and GvHD-inducing splenic alloreactive T lymphocytes. This protocol helps establish a severe acute intestinal GvHD model to understand the mechanism of the disease and develop innovative therapeutic options.

Induction of Graft Versus Host Disease in Mouse Models via Allogeneic Bone Marrow and Splenic Cell Transplantation

Hier presenteren we een protocol om colonontsteking bij muizen te induceren door adoptieve overdracht van syngeneïsche CD4+CD45RBhigh T-cellen naar ontvangers zonder T- en B-cellen. Klinische en histopathologische kenmerken bootsen inflammatoire darmziekten bij mensen na. Deze methode maakt de studie van de initiatie van colonontsteking en de progressie van de ziekte mogelijk.

Inductie van Muriene darmontsteking door adoptieve overdracht van effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Hoog</sup&gt; T cellen in immunodeficiënte muizen

Dit nieuwe model voor orthotope achterste ledematen transplantatie in de muis, van een niet-hechtingsmanchet techniek voor super-microvasculaire anastomose, een krachtig hulpmiddel voor in vivo mechanistische immunologisch onderzoek naar gevasculariseerd samengestelde allotransplantatie (VCA).

Orthotope Hind Limb Transplantation in de muis

De mechanismen die de interstitiële beweeglijkheid van CD4-effector-T-cellen regelen op plaatsen van ontsteking zijn relatief onbekend. Wij presenteren een niet-invasieve benadering visualiseren en manipuleren in vitro geprimed CD4 T-cellen in het ontstoken oor dermis, waardoor studie van het dynamisch gedrag van deze cellen in situ.

Beeldvorming CD4 T Cell interstitiële Migratie in de ontstoken Dermis

Dit manuscript geeft een beschrijving van de methodologie die wordt gebruikt om muizenmodellen voor transductie-transplantatie te vestigen. Er wordt een gedetailleerd overzicht gegeven van technische fouten die moeten worden vermeden bij het uitvoeren van beenmergtransplantaties. Er moet een duidelijk begrip worden verkregen van het belang van hoog viraal titer, transfectie/transductie en bestraling.

Transductie-Transplantatie Mouse Model van myeloproliferatieve aandoening

Murine full-dikte van de huid transplantatie is een gevestigde model om afstoting te studeren in een alloimmuun setting. Hier bieden we een tutorial van elke stap die betrokken zijn bij het uitvoeren van een BALB / c -&gt; C57BL / 6 full-dikte van de huid transplantatie.

Murine volledige dikte van de huid Transplantation

Hier beschreven is een werkwijze voor het produceren van exogeen cytokine in patiënten afgeleide xenograftmuizen via wekelijkse intraperitoneale injectie van een cytokine-getransduceerde stromale cellijn. Deze methode verruimt het nut van PDX en biedt de mogelijkheid voor transiënte of langdurige exogene cytokine-afgifte in een groot aantal PDX-modellen.

Expressie van exogeen cytokine in patiënt afgeleide Xenografts via injectie met een cytokine-getransduceerde stromcellijn

Hier presenteren we een tumortransplantatieprotocol voor de karakterisering van tumor-inherente en periferie-afgeleide tumor-geïnfiltreerde lymfocyten in een muistumormodel. Specifieke tracering van de instroom van van de ontvanger afgeleide immuuncellen met flowcytometrie onthult de dynamiek van de fenotypische en functionele veranderingen van deze cellen tijdens antitumorimmuunresponsen.

Tumortransplantatie voor het beoordelen van de dynamiek van tumorinfiltrerende CD8 + T-cellen bij muizen

Dit protocol beschrijft een eenvoudige en minimaal invasieve methode voor het transplanteren en afbeelden van NIT-1-cellen in niet-obese diabetische (NOD) -ernstige gecombineerde immunodeficiënte muizen die worden uitgedaagd met splenocyten gezuiverd van spontaan diabetische NOD-muizen.

Bioluminescente monitoring van transplantaatoverleving in een adoptief transfermodel van auto-immuundiabetes bij muizen

Leer staarthuidtransplantatie bij muizen om T-celafhankelijke afstoting en tolerantie-inductie te bestuderen. Deze minimaal invasieve methode maakt eenvoudige monitoring van immuunresponsen mogelijk.

Transplantatie van Tail Skin aan allogene CD4 T-cel responsen bij muizen

Meer video's verkennen