Name: Capsulaire Serotypering van Streptococcus pneumoniae Door Latex Agglutinatie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Leer capsulaire serotypering van Streptococcus pneumoniae door latex agglutinatie. Deze methode maakt snelle identificatie mogelijk zonder microscoop en is ideaal voor diagnostische microbiologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk was onderdeel van het PneuCarriage-project, gefinancierd door de Bill en Melinda Gates Foundation met bijdrage van het Operational Infrastructure Support Program van de regering van Victoria’.

1 Voorbereiding van de in-house Latex Reagentia <ol><li> Bereiding van glycine gebufferde zoutoplossing (GBS) <ol><li> Voeg 1,5 g glycine, 11,7 g natriumchloride en 100 ml gedestilleerd water om een ​​200 ml bekerglas. </li><li> Maak deze fijn met een magneetroerder. </li><li> Breng het mengsel in een 500 ml maatcilinder en voeg gedestilleerd water tot een totaalvolume van 200 ml te maken. </li><li> Breng de oplossing terug in het bekerglas van 200 ml, controleer de pH en pas op 8,2 met 5 M natriumhydroxide. OPMERKING: Natriumhydroxide is corrosief, persoonlijke beschermingsmiddelen dragen. </li><li> Filter steriliseren van de oplossing met behulp van 0,22 uM filters en een aantal 60 ml spuiten in een 250 ml preautoclaved schroef afgesloten glazen fles. </li><li> Bewaar bij kamertemperatuur. </li></ol></li><li> Bereiding van GBS met 0,2% runderserumalbumine <ol><li> Voeg 0,2 g runderserumalbumine (BSA) poeder en 100 ml van GBS een 200 ml bekerglas en maak deze fijn met een magnetische roerder. </li><li> FilterSteriliseer de oplossing door 0,22 pm filters gebruik van meerdere 60 ml spuiten in een 250 ml preautoclaved schroef afgesloten glazen fles. </li><li> Bewaren bij 4 ° C. </li></ol></li><li> Latex reagens voorbereiding <ol><li> Label een 2 ml met ronde bodem microfugebuis. OPMERKING: ronde bodem buizen worden gebruikt om deeltjes bezinken die antilichaam bevestiging van invloed kunnen minimaliseren. </li><li> Met behulp van een P1000 pipet met steriele tips toe te voegen 975 ul van GBS in de microfugebuis, voeg dan 25 ul van geschikte pneumokokken antiserum voor de latex reagens wordt voorbereid (dat wil zeggen, het zwembad, groep, type of factor). Omkeren vijf keer te mengen. </li><li> Verdun polystyreen latex deeltjes 01:10 door toevoeging van 120 gl latex deeltjes 1.080 ul steriele fysiologische zoutoplossing. OPMERKING: Dit kan worden gedaan in grotere volumes, maar moet vers elke keer dat de latex reagentia worden geproduceerd worden gemaakt. </li><li> Voeg 1.000 III van het 01:10 latex suspensie (bereid in stap 1.3.3) tot 1,000 pl 1:40 antiserum suspensie (bereid in stap 1.3.2). Omkeren vijf keer te mengen. </li><li> Incubeer bij 37 ° C op een langzaam draaiende wiel (bijvoorbeeld 4 rpm voor een wiel 38,5 cm diameter) gedurende 2 uur. </li><li> Centrifugeer gedurende 15 minuten bij 1.100 x g. Verwijder het supernatant en resuspendeer de pellet voorzichtig in 2 ml steriele zoutoplossing. </li><li> Centrifugeer gedurende 15 minuten bij 1.100 x g. Verwijder het supernatant en voeg 1 ml van GBS en voorzichtig resuspendeer de pellet. </li><li> Pipetteer de latex schorsing in een gelabelde 5 ml buisje met schroefdeksel. Voeg nog 1 ml van GBS. </li><li> Voeg 2 ml van GBS die 0,2% BSA (w / v) (pH 8,2) (bereid in stap 1.2). Voeg 40 ul van 10% (w / v) oplossing van natriumazide als conserveermiddel. OPMERKING: Natriumazide is gevaarlijk bij inademing, en is een huid en irriterend voor de ogen. Het is wenselijk om een ​​bereide 10% oplossing kopen dan de poedervorm, omdat op deze manier het risico van blootstelling aan inademing. Persoonlijke beschermingsmiddelen (handschoenen eend veiligheidsbril) moeten gedragen worden bij het hanteren van dit reagens. Vindt u op het veiligheidsinformatieblad voor meer informatie. </li><li> WINKEL latex reagentia bij 4 ° C. </li></ol></li><li> Bereiding van negatieve controle latex reagens <ol><li> Label een 2 ml met ronde bodem microfugebuis. OPMERKING: ronde bodem buizen worden gebruikt om deeltjes bezinken die antilichaam bevestiging van invloed kunnen minimaliseren. </li><li> Met behulp van een P1000 pipet met steriele tips toe te voegen 975 ul van GBS in de microfugebuis, voeg dan 25 ul normale konijnenantiserum. Omkeren vijf keer te mengen. </li><li> Ga als in de stappen 1.3.3 tot 1.3.10 boven </li></ol></li></ol> 2 Quality Control (QC) van Latex Reagentia <ol><li> Breng latex reagens om RT. Vlak voor het gebruik, meng de latex reagens door het buisje meerdere malen. </li><li> Controleer reagens voor autoagglutination door pipetteren 15 pi op een glazen objectglaasje en ga verder zoals in de stappen 4.7 en 4.8 hieronder. Er mag geen een zijngglutination van de latexdeeltjes. Het reagens moet wit en glad verschijnen. </li><li> Test het reagens tegen een panel van lage passage pneumococcen isolaten. Gebruik vers gekweekte culturen bereid als in stap 3 Het panel van isolaten moet isolaten van het &#39;target&#39; serotype (het specifieke serotype van het reagens dat wordt getest) en &quot;non-target&quot; serotypen (isolaten van andere serotypen die normaal niet zouden kruisen onder reageren met het reagens). Ten minste een isolaat van elk doel en niet-doel serotype voor elke latex reagens ondergaan QC. Als er slechts een doel of niet-target serotype, moeten twee verschillende isolaten van het specifieke serotype. OPMERKING: Het testpanel moeten omvatten verschillende isolaten van elk serotype, waarvan sommige zijn ongewoon in invasieve ziekte en / of het type cultuur collecties. Het verdient de voorkeur ook enkele wagen isolaten, omdat ze vaak veeleisender serotype (gegevens niet getoond), waardoor de capaciteit o verdere testsf de reagentia en ervoor te zorgen dat de reagentia zijn waarschijnlijk in staat om serotypering zowel invasieve en wagen isoleert. </li><li> Ga verder met het testen van latex reagentia met doel en niet-doelwit pneumokokken isoleert volgens de in stap 3 en 4 hieronder beschreven methode. </li><li> Kwaliteitscontrole reagentia op het moment van de productie en vervolgens ten minste om het jaar. OPMERKING: Als een reagens niet voorbij QC, moet de partij worden weggegooid en een nieuw preparaat gemaakt. Bij herhaalde QC niet aanbevolen reagentia worden geproduceerd volgens alternatieve methoden Ortika et al., 2013 8 en in de discussie hieronder beschreven. </li></ol> 3 Voorbereiding van Pneumokokken Cultures for Serotypering <ol><li> Met behulp van een steriele lus selecteer een enkele kolonie van de pneumokokken isoleren en streak dit uit op een vaste selectieve agar zodat het primaire inoculum beslaat ongeveer een derde van het plaatoppervlak. Streak voor enkele kolonies. LET OP: Platen bereid uit gedefibrineerd paard of schaap bloed zijn geschikt; maar bloed platen bereid met menselijk bloed of gecitreerd dierlijk bloed niet. </li><li> Incubeer plaat O / N bij 37 ° C in een atmosfeer van 5% CO2. </li><li> Let op de groei op de plaat voor de zuiverheid en beoordelen of er voldoende groei voor serotypering. OPMERKING: Een zuivere cultuur van de pneumokokken-isolaat is vereist voor serotypering. In onze ervaring, confluente of bij confluente groei die ongeveer een derde van het plaatoppervlak is meestal voldoende om serotypering voltooien. Als pneumokokken culturen gevoelig voor autolyse kunnen zijn, moeten culturen voorbereid voor serotypering getest worden binnen 24 uur van de subcultuur. Laat de cultuur plaat niet uit de couveuse meer dan 15 tot 20 minuten vóór de serotypering begint. </li></ol> 4 Het uitvoeren latexagglutinatie Serotypering <ol><li> Verwijder alle latex reagentia uit de koelkast en laat ze op te warmen tot kamertemperatuur gedurende ca.nor- maal gesproken minstens 30 min. Vlak voor het gebruik, voorzichtig omkeren van de buizen naar de reagentia te mengen. </li><li> Label een microscoop dia. </li><li> Plaats 15 gl negatieve controle latex reagens op het objectglaasje. </li><li> Met behulp van een steriele wegwerp 1 ui lus neem een ​​sweep van de pneumokokken cultuur zodat de lus is ongeveer half vol. </li><li> Voorzichtig smeer het inoculum op het oppervlak van de dia nabij de druppel negatieve controle latex reagens. Het inoculum moet zichtbaar zijn op het glasplaatje zijn. </li><li> Snel en grondig mengen van de entstof in de negatieve controle latex reagens met behulp van de lus. Zorg ervoor dat de daling niet verder verspreid dan de oorspronkelijke grootte. </li><li> Pak de glijbaan, vast te houden aan beide uiteinden. Rock de glijbaan heen en weer voor 1 min. Zorg ervoor dat de vloeistof te houden langzaam, en ervoor te zorgen dat de omvang van de daling niet toeneemt. OPMERKING: U kunt ook gebruik maken van een plaat rocker. </li><li> Observeer voor macroscopische agglutinatie (dwz doorblote oog) en de clearing van de schorsing tegen een zwarte achtergrond. </li><li> Als negatieve controle latex reagens vertoont geen agglutinatie of clearing verder testen van de cultuur, vervanging van de proef latex reagentia voor de negatieve controle latex reagens in stappen 4,1-4,8 hierboven. Een verse lus moet worden gebruikt telkens. Ga verder met het testen van de latex reagentia te beginnen met de zwembaden. </li><li> Test elke &#39;pool&#39; latex reagentia achtereenvolgens tot een positieve test wordt verkregen. NB:. De volgorde van het testen van de zwembaden kan worden gedaan in &#39;rondes&#39; om de lokale incidentie van bepaalde serotypen (reflecteren bijvoorbeeld door het testen voor de drie meest waarschijnlijke zwembaden op de eerste dia als een positieve reactie niet wordt verkregen, dan testen de volgende drie meest waarschijnlijke van de resterende zwembaden op de tweede schuif, en zo verder tot een positieve reactie wordt verkregen). Dit garandeert dat de meest voorkomende serotypen eerst worden getest, waardoor de duur en reagentia nodig. </li><li>Met de fabrikantensleutel antisera welke individuele antisera worden weergegeven in de positieve pool. </li><li> Test elk van de groepen of types die in de positieve pool individueel aan de &#39;groep&#39; of &#39;type&#39; te bepalen, zoals in de stappen 4,1-4,8 hierboven. </li><li> Bepaal het resultaat op basis van de fabrikantensleutel antisera. Als een &quot;type&quot; wordt bepaald (bijvoorbeeld serotype 5), is geen verder onderzoek nodig is en dit resultaat wordt vastgelegd. </li><li> Als een &quot;groep&quot; wordt bepaald (bijvoorbeeld groep 19), dan wordt verwezen naar de fabrikanten om de factoren te testen bepalen. Doorgaan met testen met de individuele &#39;factor&#39; latex reagentia en bepalen de uiteindelijke serotype (bijv, serotype 19B). </li></ol>

<ol><li>Rudan, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+etiology+of+childhood+pneumonia+in+2010%3A+estimates+of+incidence%2C+severe+morbidity%2C+mortality%2C+underlying+risk+factors+and+causative+pathogens+for+192+countries%5BTitle%5D)+AND+%22J+Glob+Health%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and etiology of childhood pneumonia in 2010: estimates of incidence, severe morbidity, mortality, underlying risk factors and causative pathogens for 192 countries.</a> J Glob Health. 3 (10401), (2013).</li>
<li>O'Brien, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+disease+caused+by+Streptococcus+pneumoniae+in+children+younger+than+5+years%3A+global+estimates%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Burden of disease caused by Streptococcus pneumoniae in children younger than 5 years: global estimates.</a> Lancet. 374, 893-902 (2009).</li>
<li>Henrichsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Six+newly+recognized+types+of+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Six newly recognized types of Streptococcus pneumoniae.</a> J Clin Microbiol. 33, 2759-2762 (1995).</li>
<li>Hausdorff, W. P., Bryant, J., Paradiso, P. R., Siber, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Which+pneumococcal+serogroups+cause+the+most+invasive+disease%3A+implications+for+conjugate+vaccine+formulation+and+use%2C+part+I%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Which pneumococcal serogroups cause the most invasive disease: implications for conjugate vaccine formulation and use, part I.</a> Clin Infect Dis. 30, 100-121 (2000).</li>
<li>Mulholland, K., Satzke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotype+replacement+after+pneumococcal+vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Serotype replacement after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 379, 1388-1389 (2012).</li>
<li>Weinberger, D. M., Malley, R., Lipsitch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotype+replacement+in+disease+after+pneumococcal+vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Serotype replacement in disease after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 378, 1962-1973 (2011).</li>
<li>Satzke, C., et al. Standard method for detecting upper respiratory carriage of Streptococcus pneumoniae: Updated recommendations from the World Health Organization Pneumococcal Carriage Working Group. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSatzke%2C+C+%22Vaccine%22">Vaccine</a>. , (2013).</li>
<li>Ortika, B. D., Habib, M., Dunne, E. M., Porter, B. D., Satzke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+latex+agglutination+reagents+for+pneumococcal+serotyping%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Res+Notes%22%5BJournal%5D)">Production of latex agglutination reagents for pneumococcal serotyping.</a> BMC Res Notes. 6 (49), (2013).</li>
<li>Adegbola, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotype+and+antimicrobial+susceptibility+patterns+of+isolates+of+Streptococcus+pneumoniae+causing+invasive+disease+in+The+Gambia+1996-2003%5BTitle%5D)+AND+%22Trop+Med+Int+Health%22%5BJournal%5D)">Serotype and antimicrobial susceptibility patterns of isolates of Streptococcus pneumoniae causing invasive disease in The Gambia 1996-2003.</a> Trop Med Int Health. 11, 1128-1135 (2006).</li>
<li>Slotved, H. C., Kaltoft, M., Skovsted, I. C., Kerrn, M. B., Espersen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple%2C+rapid+latex+agglutination+test+for+serotyping+of+pneumococci+%28Pneumotest-Latex%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Simple, rapid latex agglutination test for serotyping of pneumococci (Pneumotest-Latex).</a> J Clin Microbiol. 42, 2518-2522 (2004).</li>
<li>Turner, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+detection+of+nasopharyngeal+cocolonization+by+multiple+pneumococcal+serotypes+by+use+of+latex+agglutination+or+molecular+serotyping+by+microarray%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Improved detection of nasopharyngeal cocolonization by multiple pneumococcal serotypes by use of latex agglutination or molecular serotyping by microarray.</a> J Clin Microbiol. 49, 1784-1789 (2011).</li>
<li>Mudany, M. A., Kikuchi, K., Totsuka, K., Uchiyama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+new+serotyping+kit+for+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a new serotyping kit for Streptococcus pneumoniae.</a> J Med Microbiol. 52, 975-980 (2003).</li>
<li>Lalitha, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotyping+of+Streptococcus+pneumoniae+by+agglutination+assays%3A+a+cost-effective+technique+for+developing+countries%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+World+Health+Organ%22%5BJournal%5D)">Serotyping of Streptococcus pneumoniae by agglutination assays: a cost-effective technique for developing countries.</a> Bull World Health Organ. 74, 387-390 (1996).</li>
<li>Shutt, C. K., Samore, M., Carroll, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+Denka+Seiken+slide+agglutination+method+to+the+quellung+test+for+serogrouping+of+Streptococcus+pneumoniae+isolates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of the Denka Seiken slide agglutination method to the quellung test for serogrouping of Streptococcus pneumoniae isolates.</a> J Clin Microbiol. 42, 1274-1276 (2004).</li>
<li>Gella, F., Serra, J., Gener, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Latex+agglutination+procedures+in+immunodiagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Pure+Appl+Chem%22%5BJournal%5D)">Latex agglutination procedures in immunodiagnosis.</a> Pure Appl Chem. 63, 1131-1134 (1991).</li>
<li>Pneumococcus Key to S. pneumoniae types and pneumococcal diagnostic antisera. SSI Diagnostica. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.ssi.dk/ssidiagnostica">http://www.ssi.dk/ssidiagnostica</a> (2013).</li>
<li>Habib, M., Porter, B. D., Satzke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsular+serotyping+of+Streptococcus+pneumoniae+using+the+Quellung+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Capsular serotyping of Streptococcus pneumoniae using the Quellung reaction.</a> J. Vis. Exp. (84), (2014).</li>
<li>Arai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+antiserum-coated+latex+particles+for+serotyping+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Use of antiserum-coated latex particles for serotyping Streptococcus pneumoniae.</a> Microbiol Immunol. 45, 159-162 (2001).</li>
<li>Lafong, A. C., Crothers, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+latex+agglutination+method+for+typing+pneumococci%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Simple latex agglutination method for typing pneumococci.</a> J Clin Pathol. 41, 230-231 (1988).</li>
<li>Ortega-Vinuesa, J. L., Bastos-Gonzalez, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+factors+affecting+the+performances+of+latex+agglutination+tests%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomater+Sci+Polym+Ed%22%5BJournal%5D)">A review of factors affecting the performances of latex agglutination tests.</a> J Biomater Sci Polym Ed. 12, 379-408 (2001).</li>
<li>Yap, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+slide+latex+agglutination+test+for+rotavirus+antigen+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Malays+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Development of a slide latex agglutination test for rotavirus antigen detection.</a> Malays J Pathol. 16, 49-56 (1994).</li>
<li>Severin, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Latex+agglutination+in+the+diagnosis+of+meningococcal+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Latex agglutination in the diagnosis of meningococcal meningitis.</a> J Clin Pathol. 25, 1079-1082 (1972).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Latex agglutinatie is een eenvoudige, snelle en goedkope methode voor pneumokokken serotypering. Commerciële pneumokokken latexagglutinatie reagentia beschikbaar zijn, maar ze momenteel geen onderscheid alle bekende pneumokokkenserotypes 10,12. Echter, latex agglutinatie reagentia gemakkelijk worden geproduceerd in eigen huis met behulp van gekochte antisera opgewekt tegen specifieke pneumokokken capsulaire antigenen. In de hier beschreven werkwijze worden antilichamen passief aan latexdeeltjes een reeks latexagglutinatie reagentia maken. Een positieve latex reactie optreedt bij specifieke antilichamen gebonden aan de latexdeeltjes hechten aan antigenen op de polysaccharide capsule van de pneumococcen isoleren 18,19. De latexdeeltjes aan de antilichamen maken de specifieke antilichaam-antigen reactie gevisualiseerd zonder vergroting. Latex agglutinatie is een geschikte methode voor high throughput laboratoria eend ook voor arme omgevingen. Belangrijke voordelen van de latex agglutinatie methode zijn dat geen speciale apparatuur nodig om de proef reagentia hebben een houdbaarheid van ten minste 2 jaar bij opslag bij 4 ° C 8, en dat het is goedkoop, eenvoudig en snel uit te voeren. Serotypering een pneumococcen isolaat van latexagglutinatie duurt ongeveer 10 minuten, en vier latex reagentia kunnen worden getest parallel aan een dia. Bovendien, indien de prevalentie van serotypen is gekend voor de epidemiologische instelling tests kunnen worden uitgevoerd in rondes beginnend met de baden met de meest voorkomende serotypen lijken op de Queliung proef 17. Deze benadering minimaliseert het aantal tests nodig serotype bepalen. De werkwijze is ook zeer reproduceerbaar tussen verschillende exploitanten (gegevens niet getoond). Een nadeel van latex agglutinatie serotypering is dat het produceren van de reagentia is tijdrovend, duurt ongeveer 4 uur; hoewel meerdere reants kunnen gemakkelijk worden geproduceerd in parallel. Bovendien zijn sommige antigenen gemeenschappelijk voor verschillende pneumococcen serotypen, waardoor kruisreacties met sommige antisera (bijvoorbeeld serotype 29, 42 en groep 35). Echter, deze kruisreacties goed gekarakteriseerd bij gebruik commerciële antisera (die meestal vooraf geabsorbeerd aan de problematischer kruisreagerende antilichamen te verwijderen) en hulpplanken tabellen werden door de fabrikant om te onderscheiden welke serotype aanwezig is. Latex reagentia kunnen ook oversteken reageren als de antistoffen niet goed zijn uitgelijnd op de latex deeltjes; deze worden gedetecteerd als QC mislukkingen. In onze ervaring, strenge QC is voor het succes van deze werkwijze, ook wanneer de handel verkrijgbare antisera worden voor productie. QC duurt ongeveer 15 minuten per reagens en voert een reeks passende QC isolaten zoals hierboven beschreven. De hier beschreven methode resulteert in reagentia die een positieve reactie geven goed widun de testperiode. In onze ervaring, valse positieven zijn zeldzaam in de praktijk (gegevens niet getoond). Occasionele vals-negatieve reacties gezien worden; meestal deze betrekking hebben op bekende problemen met een bepaalde antiserum (bijvoorbeeld kan serogroep 6 isolaten niet reageren met zwembad B antiserum), of omlaag regulering van capsule expressie door het isolaat. De serotypering algrorithm door de fabrikant is belangrijk, zoals in de meeste gevallen een vals positieve of negatieve reactie zal leiden tot een &quot;blind end &#39;resultaat. In deze gevallen en wanneer reacties zijn moeilijk te interpreteren, adviseren wij herhaal-testen en / of het testen van een alternatieve methode zoals het Queliung reactie. Sommige problemen oplossen is soms nodig om bevredigende latex reagentia maken. In de hier beschreven werkwijze wordt het antilichaam aan latexdeeltjes op passieve adsorptie 15,19 bevestigd, zodat een kritische variabele is de antilichaamconcentratie gebruikt, die bepaalt hoe goedhet oppervlak van de latexdeeltjes is overdekt en de daaropvolgende aanpassing van het antilichaam actieve plaatsen 15,20. Indien derhalve onvoldoende of bovenmatige antilichaam aan de latexdeeltjes is bevestigd, het antilichaam-antigeen reacties zullen niet optimaal zijn, en onbevredigende reagentia kunnen worden geproduceerd 15,20,21. Zoals antilichaam titers variëren tussen de verschillende partijen van antisera, kan een standaardset verdunningen produceren reagentia die goed presteren 8. Een goed uitgangspunt is om een ​​1:40 verdunning van het antiserum te gebruiken, en als dit niet lukt, verdunnen verder het antiserum. In onze ervaring is dit lost meestal het probleem 8. In een klein aantal gevallen kan reagentia zwakke agglutinatie dat niet gepaard gaat met het ruimen van de opschorting wanneer daarop doelwit isoleert tonen. In deze gevallen verdunnen van antiserum niet de kwaliteit van het reagens, maar voldoende reagentia kunnen gewoonlijk worden bereid door het weglaten van de centrifugatie en wasstappen 8,22 </sup&gt;. Antilichaam beklede latex deeltjes worden vaak gebruikt in diagnostische microbiologie voor herkenning of serotypering van verschillende microben 15,20. Als zodanig kan de hier beschreven werkwijze geschikt voor het bereiden latex reagentia voor andere doeleinden, mits geschikte antisera is vrij en adequate QC procedures worden vastgesteld.

Streptococcus pneumoniae (de pneumokok) is een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit bij kinderen onder de leeftijd van vijf jaar de hele wereld, vooral in arme omgevingen 1,2. Pneumokokkeninfecties varieert van lokale infecties tot levensbedreigende aandoeningen zoals pneumonie, sepsis en meningitis 1,2. Meer dan 90 serotypen van pneumokokken geïdentificeerd op basis van verschillen in hun capsulair polysaccharide 3. Voor vaccins gericht de capsulaire polysaccharide en bescherming van de grote serotypen die invasieve ziekten veroorzaken 4. Serotypering pneumokokken isolaten is van belang voor de beoordeling van de impact van vaccinatie op de wagen en de ziekte alsmede het verstrekken van ruimere epidemiologische informatie 5,6. De huidige &#39;gouden standaard&#39; methode voor pneumokokken serotypering is de Queliung test, maar het is tijdrovend en vereist enige vaardigheid om perform 7. Latex agglutinatie is een alternatieve methode voor serotypering aanbevolen door de World Health Organization 7. Latexagglutinatie is snel en eenvoudig uit te voeren, en wordt gebruikt in veel laboratoria wereldwijd 8-11. Belangrijk is latexagglutinatie aangetoond vergelijkbare nauwkeurigheid aan de Queliung test voor pneumokokken serotypering 10,12-14. Over het algemeen is deze methode ideaal voor arme omgevingen, alsmede high throughput laboratoria. Latex agglutinatie reagens (reagentia latex &quot;) worden door de binding van antilichamen aan latexdeeltjes 15. In een positieve reactie, deze gemerkte deeltjes agglutineren bij aanwezigheid van antigeen. Commerciële latex reagentia zijn beschikbaar voor een beperkte reeks van serotypen. Latex reagentia kunnen eveneens worden bereid in-house de handel verkrijgbare antisera 10. Mengsels van antisera (&quot;pools&quot;) en specifieke antisera pneumokokken serogroups (bijvoorbeeld groep 19), individuele serotypen (bijvoorbeeld serotype 5), en specifieke antigenen (&quot;factoren&quot;, bijvoorbeeld. factor 19c herkennen serotype 19A) verder definiëren serotypen in groepen beschikbaar 16. Dit manuscript beschrijft de belangrijkste stappen in de productie van latex reagentia met passieve bevestiging van commercieel verkrijgbare antisera tegen latexdeeltjes. De kwaliteitscontrole (QC) aspecten van deze werkwijze zijn beschreven, en een protocol voor het gebruik van latex reagentia voor pneumococcen serotypering inbegrepen.

<table><tbody><tr><td>Microparticles based on polystyrene, 800 nm</td><td>Sigma</td><td>65984-10 ml-F</td><td>Of andere volumes zoals vereist</td></tr><tr><td>Normal rabbit serum</td><td>Antibodies Australia&nbsp;</td><td>NRS-1ml</td><td>Of andere volumes zoals vereist, breng voor gebruik naar RT</td></tr><tr><td>Pneumococcus (Neufeld) antisera</td><td>SSI Diagnostica</td><td>Various</td><td>Breng voor gebruik naar RT <a href="http://www.ssi.dk/ssidiagnostica">http://www.ssi.dk/ssidiagnostica</a></td></tr><tr><td>Sterile Bovine Albumin&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>A-4503</td><td>Breng voor gebruik naar rRT</td></tr><tr><td>Sodium azide 10% (v/v) solution&nbsp;</td><td>VWR International</td><td>ROAC3902/100ml</td><td>Let op: gevaarlijk bij inademing; irriterend voor huid en ogen</td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock tubes, 2 ml</td><td>Eppendorf</td><td>0030 120.094</td><td>Rond bodem</td></tr><tr><td>Sodium chloride</td><td>Merck</td><td>10241.AP</td><td></td></tr><tr><td>Calibrated disposable inoculating loops 1 &micro;l</td><td>Copan</td><td>CD175SO1</td><td></td></tr><tr><td>Glass microscope slides 76 mm x 26 mm</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>LBS 2950RC</td><td></td></tr><tr><td>5 M NaOH</td><td>BDH</td><td>10252</td><td>Let op: zeer corrosief</td></tr><tr><td>Glycine</td><td>Merck</td><td>10119.05</td><td></td></tr><tr><td>Horse Blood Agar (HBA) plates</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PP2001</td><td>Breng voor gebruik naar RT <a href="http://www.thermofisher.com.au/">http://www.thermofisher.com.au</a></td></tr><tr><td>Rotating wheel</td><td>Wyble Engineering Development Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polystyrene flat bottom screw cap tube, 5 ml</td><td>Technoplas</td><td>S5016SU</td><td></td></tr><tr><td>60 ml syringes without needles</td><td>Terumo</td><td>SS-60L</td><td></td></tr><tr><td>Millex-GP syringe filter unit, 0.22 &micro;m</td><td>Merck Millipore</td><td>SLGP033RS</td><td></td></tr><tr><td>Brochure on Neufeld antisera</td><td>Statens Serum Institut</td><td></td><td>Sleutel voor het bepalen van serotypes <a href="http://www.ssi.dk/ssidiagnostica">http://www.ssi.dk/ssidiagnostica</a></td></tr><tr><td>Key to pneumococcal factor serum</td><td>Statens Serum Institut</td><td>18058</td><td>Voor het bepalen van serotype binnen groepen <a href="http://www.ssi.dk/ssidiagnostica">http://www.ssi.dk/ssidiagnostica</a></td></tr><tr><td>*alternative sources are available for most materials</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

capsulaire serotypering van<em&gt; streptococcus pneumoniae</em&gt; door latex agglutinatie

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Latex-agglutinatie reagentia worden veel gebruikt in microbiële diagnose, identificatie en serotypage. Streptococcus pneumoniae (de pneumococcus) is een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit wereldwijd. Huidige vaccins zijn gericht op de pneumokokkencapsule, en er zijn meer dan 90 capsulaire serotypen. Serotypage van pneumokokken isolaten is daarom belangrijk voor het beoordelen van de impact van vaccinatieprogramma's en voor epidemiologische doeleinden. De Wereldgezondheidsorganisatie heeft latex-agglutinatie aanbevolen als een alternatieve methode voor de ‘gold standard’ Quellung-test voor het serotyperen van pneumokokken. Latex-agglutinatie is een relatief eenvoudige, snelle en goedkope methode; en is daarom geschikt voor omgevingen met beperkte middelen evenals laboratoria met een hoge werklast. Latex-agglutinatie reagentia kunnen in eigen beheer worden bereid met behulp van commercieel verkrijgbare antilichamen die passief aan latexdeeltjes zijn bevestigd. Dit manuscript beschrijft een methode voor de productie en kwaliteitscontrole van latex-agglutinatie reagentia, en beschrijft een sequentiële testaanpak die tijd- en kosteneffectief is.
Deze methode van productie en kwaliteitscontrole kan ook geschikt zijn voor andere testdoeleinden.

Een positieve latex reactie optreedt bij het ​​Type-specifiek antilichaam aan de latex deeltje bindt aan de capsule van de pneumococcus en agglutinatie van antilichaam gemerkte deeltjes ontstaat 15. Figuur 1A toont een positieve reactie die wordt gekenmerkt door zichtbare agglutinatie en opheldering van de achtergrond suspensie. Een negatieve reactie wordt gekenmerkt door de latex agglutinatie reagens suspensie blijft glad en wit (Figuur 1B). De reagentia worden geoptimaliseerd dat een positieve reactie worden waargenomen voor het einde van de ene min tijdsinterval (gewoonlijk detecteerbaar in ongeveer 20 seconden). We raden niet aan het lezen van reacties na de 1 min tijdsinterval. Heel af en toe, reacties geven zwakke agglutinatie rond de rand van de druppel die niet gepaard gaat met het opruimen van de achtergrond schorsing, of lijken &#39;draderig&#39; zonder achtergrond clearing (gegevens niet getoond). Deze zijn het meest op<html> ly negatieve reacties. In dergelijke gevallen is het raadzaam opnieuw testen en / of nader onderzoek met behulp van een andere serotypering methode (bijvoorbeeld de Queliung reactie 17). <img alt="Figuur 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51747/51747fig1highres.jpg" width="500" /> Figuur 1 Positieve en negatieve latex agglutinatiereacties. Bereidingen van pneumococcen isolaat gemengd met latex agglutinatie reagens dat een positieve reactie (A) of een negatieve reactie (B). Agglutinatie vergezeld opheldering van de achtergrond wordt gezien in de positieve reactie (A) .Er geen zichtbare agglutinatie met de negatieve controle latex reagens of in een negatieve test reactie (B). Foto 8 gebruikt met toestemming.&quot;Target =&quot; _blank &quot;&gt; Klik hier om een ​​grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

Latex agglutinatie test is een eenvoudige, snelle en goedkope werkwijze voor serotypering Streptococcus pneumoniae en ook grote schaal toegepast in diagnostische microbiologie. Dit manuscript beschrijft de in-house productie van latex agglutinatie reagentia, procedures voor kwaliteitscontrole en de toepassing van deze techniek om pneumokokken serotypering.

Capsulaire Serotypering van<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Door Latex Agglutinatie

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

Het algemene doel van deze procedure is het serotyperen van isolaten van Streptococcus pneumoniae met behulp van antisera gebonden aan latexdeeltjes. De eerste stap bij het serotyperen van een pneumokokkenisolaat is het testen ervan tegen het negatieve controle-latexreagens. De tweede stap van de procedure is het testen van het pneumokokkenisolaat met de latex pool-reagentia totdat er een positieve reactie wordt waargenomen.De derde stap is om het isolaat te testen met de groepen en typen die in de positieve pool aanwezig zijn, waarbij de sleutel van de antiserafabrikant wordt gebruikt om de juiste reagentia voor de test te selecteren. De laatste stap is het testen van het isolaat met alle benodigde factor-latexreagentia, om vervolgens de resultaten te interpreteren met behulp van de sleutel van de antiserafabrikant om het definitieve serotype te bepalen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van andere methoden, zoals de quik-test, is dat er geen microscoop nodig is en dat de uitvoering relatief eenvoudig en snel is.Deze procedure wordt gedemonstreerd door Belinda, onderzoeksassistent uit ons laboratorium. Label eerst een microcentrifugebuis van twee milliliter. Kies een buis met een ronde bodem om te voorkomen dat deeltjes bezinken tijdens de fase van antilichaamkoppeling.Voeg met een 1000 µL pipette 975 µL glycine-gebufferde zoutoplossing toe aan de buis. Voeg daarna 25 µL van het pneumokokken-antiserum toe dat nodig is voor het latexreagens dat wordt bereid. Keer de buis vijf keer om om te mengen en verdun vervolgens 120 µL polystyreen-latexdeeltjes in 1080 µL steriele fysiologische zoutoplossing.Keer dit vijf keer om om 1000 µL van de latexsuspensie in de 1000 µL antiserumoplossing te mengen. Keer dit vijf keer om om te mengen en breng het vervolgens over naar een incubator van 37 °C en plaats het op een langzaam draaiend wiel. Laat het mengsel twee uur incuberen; centrifugeer na de incubatie de deeltjes 15 minuten bij 1.100 ×g.Verwijder het supernatant met een 1000 µL pipet. Gooi het supernatant weg en resuspendeer het pellet in twee milliliter steriele zoutoplossing. Centrifugeer het mengsel vervolgens opnieuw, verwijder het supernatant en resuspendeer het gewassen pellet in één milliliter glycine-gebufferde zoutoplossing.Breng de suspensie over naar een schroefdopbuisje van vijf milliliter en voeg nog één milliliter glycine-gebufferde zoutoplossing toe. Voeg nu twee milliliter glycine-gebufferde zoutoplossing met 0,2% BSA toe. Voeg vervolgens 40 µL 10% natriumazide toe.Houd bij het gebruik van natriumazide als conserveermiddel strikt de veiligheidsinformatie van het materiaalinformatieblad na. Neem vervolgens de handleiding van de antilichaamfabrikant tot in overleg om de juiste kwaliteitscontrole-isolaten te bepalen waartegen het reagens getest moet worden.Test vervolgens het reagens met behulp van deze positieve en negatieve controle-serotype-isolaten. Kwaliteitscontrole-testen zijn zeer belangrijk. Dit proces garandeert dat er een correct reagerend reagens is geproduceerd, wat een essentiële controlestap is. Bewaar de reagentia die de kwaliteitscontrole hebben doorstaan bij vier graden Celsius.Begin met het voorbereiden van de culturen. Selecteer met een steriele loot een enkele kolonie en inoculeer een derde van een niet-selectieve bloedagarplaat. Strijk vervolgens de plaat uit om enkelvoudige kolonies te verkrijgen.Incubeer de plaat overnight bij 37 °C in een atmosfeer van 5% koolstofdioxide. De volgende dag, voordat de SYP begint, haalt u de latexreagentia uit de koelkast en laat u ze op kamertemperatuur komen.Haal de plaat uit de incubator. De cultuur moet zuiver zijn en de groei moet confluent of bijna confluent zijn. Breng over een derde van de plaat de negatieve controle-latexreagens meerdere keren inverted aan.Verwijder 15 µL en pipetteer dit op een gelabelde objectglas. Maak vervolgens met een steriele lus van 1 µL een uitstrijkje van de cultuur totdat het midden van de lus ongeveer halfvol is. Smeer de inhoud van de gevulde lus voorzichtig uit op het objectglas, vlakbij de druppel met het negatieve controle-reagens.Het inoculum moet zichtbaar zijn op het glas. Meng vervolgens het inoculum met de entnaald in de latexreagensdruppel. Probeer te voorkomen dat de druppel over de plaat wordt uitgespreid.Til het dekglas aan beide uiteinden op en schud het voorzichtig heen en weer. Zorg dat de vloeistof langzaam blijft roteren en probeer te voorkomen dat de druppel zich over het objectglas verspreidt. Ga een minuut lang door met het schudden van het glas en lees vervolgens het resultaat af.Resultaten zijn rood tegen een donkere achtergrond. De druppel met negatieve controle-reagentia moet ongewijzigd blijven, zonder agglutinatie of klaring. Zodra is vastgesteld dat er geen reactie is met een negatief controle-reagens, start men met het testen van elk van de pool latex-reagentia totdat er een positieve reactie wordt verkregen.Gebruik voor elk reagens dezelfde procedure en een nieuwe steriele lus. Meestal worden drie pools op elk objectglas getest. Schud het objectglas één minuut lang voordat een reactie wordt beoordeeld.Een positieve latexreactie treedt op wanneer specifieke antilichamen die aan de latexdeeltjes zijn gebonden, zich hechten aan de capsule van de pneumokok, waarna agglutinatie van de gelabelde deeltjes volgt. Dit gaat over het algemeen gepaard met een zekere klaring van de achtergrondsuspensie. Een negatieve reactie wordt gekenmerkt door een latexreagenssuspensie die glad en wit blijft, zonder agglutinatie of klaring.Soms vertonen sommige waarschijnlijke negatieve reacties een zwakkere agglutinatie aan de rand van de druppel, zonder dat dit gepaard gaat met een opklaring van de achtergrondsuspensie. Andere waarschijnlijke negatieve reacties verschijnen sliertig, waarbij in beide ambigue gevallen geen opklaring van de achtergrond optreedt. Herhaal de test of probeer een andere stereotyperingsmethode.Zodra er een positieve reactie is verkregen, dient de sleutel van de fabrikant te worden gebruikt om vast te stellen welke groepen of typen in dat poolmengsel aanwezig zijn. Test vervolgens de groepen of typen die deze pool vormen met het isolaat, totdat er een positieve reactie wordt waargenomen. Indien een type is geïdentificeerd, is verder testen niet meer nodig.Indien er echter een groep wordt geïdentificeerd, raadpleeg dan de sleutel van de fabrikant om vast te stellen welke factoren getest moeten worden om het serotype te bepalen. Wanneer de resultaten van de factortests bekend zijn, raadpleegt u opnieuw de sleutel om het definitieve serotype vast te stellen. Zodra deze eenvoudige en goedkope techniek onder de knie is, kan deze worden gebruikt voor serotypering.Een pneumokok kan binnen 10 minuten worden geïsoleerd als dit correct wordt uitgevoerd. We voeren deze procedure uit. Het is belangrijk om te onthouden dat er voor elke test verse steriele inoculatielussen en pipetpunten worden gebruikt, zodat u noch de tests noch de reagentia kruisbesmet.Na het bekijken van deze video zou u een goed beeld moeten hebben van hoe u latexreagentia bereidt en gebruikt voor de stereotypering van de pneumokok.

capsular-serotyping-of-streptococcus-pneumoniae-by-latex-agglutination

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Een efficiënte methode om het oppervlak-blootstelling van leptospiral eiwitten te bepalen is beschreven. De methode is speciaal ontworpen om verstoring van de kwetsbare buitenste membraan van leptospiral cellen te voorkomen. Deze techniek vergt inzet van een aantal negatieve controles te beoordelen van de integriteit van de buitenste membraan en de specificiteit van de antistof reactie.

Immuno Assay-fluorescentie van Leptospiral Surface-blootgesteld Eiwitten

Een recent ontwikkelde nieuwe deeltje agglutinatie (PA) test gebruik te maken van virus-receptor molecuul toegestaan ​​een snelle en eenvoudige identificatie van poliovirus (PV). In dit artikel zullen we de procedure show voor de PA-test voor PV-identificatie.

Particle Agglutinatie Methode voor Poliovirus Identification

This video demonstrates an opsono-adherence assay for examining the interaction between opsonized bacteria and immune cells. Fluorescently labeled bacteria, treated with test serum containing anti-capsule antibodies, are incubated with macrophages. After staining the macrophages with fluorescence, the attached bacteria on the macrophage surface are observed under a microscope for visualization.

An Opsono-Adherence Assay for Assessing the Opsonization of Encapsulated Bacteria by Anti-Capsule Antibodies

Experimentele menselijke pneumokokken vervoer biedt een natuurlijk model van wagen en een potentieel model voor gebruik in de ontwikkeling van vaccins. Deze techniek is waardevol maar ingewikkeld en brengt klinisch risico door een pathogeen in een mens. We hebben een uitgebreide protocol.

Experimentele Human Pneumokokken vervoer

De Queliung reactie is de gouden standaardtechniek voor de serotypering Streptococcus pneumoniae. Deze techniek maakt gebruik van een microscoop en specifieke pneumokokken antisera en wordt vaak gebruikt in referentie-en onderzoekslaboratoria wereldwijd.

Capsulaire Serotypering van<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; De Queliung Reaction

Streptococcus pneumoniae vormt discrete niet-purulente microscopische laesies in het hart. Beschreven wordt het protocol voor een muismodel van hartmicrolaesievorming. Er wordt instructie gegeven over microlaesievisualisatie met behulp van microscopie, onderscheid tussen vroege en late microlaesies en methoden om cardiale remodellering in harten van herstellende dieren te detecteren.

Visualisatie van<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Binnen Cardiac microverwondingen en Latere Cardiac Remodeling

Deze opsonophagocytic doden test wordt gebruikt om te vergelijken het vermogen van fagocytische immuuncellen reageren op en doden van de bacteriën op basis van verschillende behandelingen en/of voorwaarden. Klassiek, dient deze bepaling als de gouden standaard voor het beoordelen van effector functies van antilichamen tegen een bacterie als opsonin aan de orde gesteld.

Opsonophagocytic doden Assay te beoordelen van de immunologische reacties tegen bacteriële pathogenen

Genetische code uitbreiding wordt toegepast voor de introductie van een onnatuurlijk aminozuur met een biorthogonale functionele groep op een drager eiwit op een gedefinieerde site. De biorthogonale functie wordt verder gebruikt voor de plaatsselectieve koppeling van een koolhydraatantgeen om een homogeen glycoconjugaatvaccin te bieden.

Homogene Glycoconjugaat geproduceerd door gecombineerde onnatuurlijke aminozuur integratie en click-chemie voor vaccindoeleinden

Hier beschrijven we een S. pneumoniae serotype 1 stam 519/43 die genetisch kan worden gemodificeerd door gebruik te maken van zijn vermogen om op natuurlijke wijze DNA en een zelfmoordplasmide te verkrijgen. Als proof of principle werd een isogene mutant in het pneumolysine (ply) gen gemaakt.

Constructing Mutanten in Serotype 1 Streptococcus pneumoniae stam 519/43

Bij Mycoplasma pneumoniae-infectie kunnen serologische tests goede resultaten opleveren, maar met een lage specificiteit vanwege immunologische kruisreactie. De in-house antigeenvangst ELISA, beschreven in dit artikel, garandeert een hoge soortspecificiteit en is een betrouwbare screeningstest gebleken voor een nauwkeurige diagnose van M. pneumoniae.

Antigeen-Capture Enzyme-Linked Immunosorbent Assay voor specifieke detectie van Mycoplasma pneumoniae

Een driekanaals dual-reporter fluorescentiestroomanalysesysteem werd gebruikt om een op kralen gebaseerde multiplex-immunoassay te ontwikkelen die tegelijkertijd serummonsters evalueert voor IgG en IgM die worden opgewekt tegen meerdere antigenen van verschillende Borrelia-soorten die Lyme-borreliose veroorzaken in Europa en Noord-Amerika.

Gelijktijdige detectie van verschillende antilichaamklassen in een gemultiplexte serologische test

Leer capsulaire serotypering van Streptococcus pneumoniae door latex agglutinatie. Deze methode maakt snelle identificatie mogelijk zonder microscoop en is ideaal voor diagnostische microbiologie.

Capsulaire Serotypering van

Meer video's verkennen