Name: Bouw van Vapor Chambers gebruikt om muizen bloot te stellen aan alcohol tijdens het equivalent van alle drie trimesters van Menselijke Ontwikkeling (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 27 s
Description: Leer hoe u alcoholdampkamers bouwt voor muizen om foetale alcoholblootstelling te bestuderen tijdens alle drie trimesters van de menselijke zwangerschap. Dit model helpt onderzoekers de ontwikkelingsbiologie te begrijpen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ondersteund door National Institutes of Health verleent R01-AA015614, R01-AA014973, T32-AA014127 en K12-GM088021. De auteurs danken Samantha L. Blomquist voor technische bijstand en Drs. Kevin Caldwell en Donald Patrijs voor kritisch evalueren van het manuscript en video.

Alle dierlijke procedures werden goedgekeurd door de Universiteit van New-Mexico Health Sciences Center Institutional Animal Care en gebruik Comite. 1. Vapor Chamber Vergadering <ol><li> Cut polycarbonaat platen met een cirkelzaag of decoupeerzaag aan de afmetingen die in de video voor de bovenkant, onderkant, voorkant, achterkant, zijkanten en de deur (figuur 1 en tabel 1). </li><li> Met een cirkelzaag of decoupeerzaag, snijd een opening 8 cm hoog met 16 cm breed in het midden van het voorpaneel. </li><li> Meet en markeer de gaten voor de piano scharnier op de 18 inch met 10 inch polycarbonaat dat de deur van de kamer zal worden. </li><li> In de deur, boor verzinkingsradius gaten met een 5/16 inch boor, en met een 3/16 inch boor, boor het gat voor de schroeven. Zorg ervoor dat u verzinkingsradius gaten aan de binnenkant van de deur voor de schroefkoppen. </li><li> Bereid de polycarbonaat platen voor het lassen. </li><li> Monteer weernt, achterkant en zijkanten op het onderste paneel met Weld-bij # 16. </li><li> Seal eventuele openingen tussen panelen met Weld-on # 16. </li><li> Bevestig het bovenpaneel met Weld-on # 16. </li><li> Gebruik bar klemmen of zware tekstboeken om alles op zijn plaats, terwijl de lassen te genezen. </li><li> Bevestig een 1 inch bij 12 inch stuk polycarbonaat op het bedieningspaneel 1 inch onder de opening voor de bevestiging van het scharnier. </li><li> Laat minstens 24 uur voor Weld-on te genezen. </li><li> Knip 2 stukken van PEX buis 12 centimeter lang en 1 stuk van 1 cm lang PEX buizen. </li><li> Met een 5/16 boor een gat in elk van de 12 inch PEX buizen ongeveer 1 tot 2 cm van het uiteinde. </li><li> Maak 2 x 12 cm PEX buizen een 3/8 inch T-connector met de gaten vanaf de connector. </li><li> Cap de open einden van de PEX buis met 3/8 inch pluggen. </li><li> Bevestig de piano scharnier aan de voorkant en deur met behulp van 4-40 machine schroeven en moeren. </li><li> Met behulp van de deur als een gids, mark de gaten die nodig zijn voor de piano scharnier op de 1 inch spacer op het voorpaneel van de kamer. </li><li> Met een 3/16 inch boor, boor de gaten in de frontplaat voor de piano scharnier. </li><li> Bevestig de deur en piano scharnier op het voorpaneel met behulp van 4-40 machine schroeven en moeren. </li><li> Monteer de spanbanden zoals in beeld met een ring en moer aan weerszijden van de zijarm. </li><li> Mark en boor 3/16 inch gaten voor de toggle klemmen op het voorpaneel en bevestig gaffelklemmen met 4-40 machine schroeven en moeren. </li><li> Voeg 3/8 inch rubber bulb afdichtingen aan de binnenkant van de deur. </li><li> Met een 5/8 inch saai boor, boor een gat in het midden van het bovenpaneel voor de inlaatpoort. </li><li> Boor een 1/2 inch gat in bodem / midden van het achterpaneel voor de uitgang poort. </li><li> Monteer de uitlaatopening van de schroefdraad van de 3/8 inch doorgaande wand adapters duwen door de achterwand van de damp kamer in de uitlaatopening gat. Bevestig de moer van debinnenkant van de kamer plaats te houden. </li><li> Verwijder de beschermende laag van polycarbonaat platen. </li><li> Bevestig de 1 inch stuk van PEX buis aan de T-connector en dwingen de PEX buizen door de opening in de bovenkant van de kamer van binnenuit. </li><li> Bevestig een 3/8 inch 90 elleboog naar de top van de 1 inch PEX buizen van buitenaf. OPMERKING: Boor een 1/2 inch gat in de deur en plaats een 1/2 inch afdichting septa in het gat. </li><li> Herhaal de stappen 1-22 voor de lucht alleen regelkamer. </li></ol> 2. Rack en Air Delivery Assembly <ol><li> Als het plaatsen van de kamers op de kar / rek in het materiaal lijst vermeld, assembleren de kar volgens de instructies van de fabrikant. </li><li> Met reserve moeren en bouten, bevestig een restje polycarbonaat aan het rek om de luchtstroom toezichthouders houden. </li><li> Overal op het schroot stuk polycarbonaat, merk en boor 3/4 inch gaten voor de luchtstroom toezichthouders en bevestig toezichthouders met de moerenontvangen. </li><li> Met 3/8 inch doorgaande wand adapter aan op de in-en uitlaatpoorten van de luchtstroom toezichthouders. </li><li> Monteer de ethanol kolf met de beluchting steen, # 8 stop en quick release in-line connectors. </li><li> Met 3/8 inch Tygon-buis, sluit de debietregelaars de luchtpomp en ethanol fles zoals getoond in figuur 1. </li><li> Voor de lucht slechts kamer, sluit de uitlaatopening van de luchtstroom regelaar naar inlaat 3/8 inch 90 elleboog met 3/8 inch Tygon-buis zoals getoond in figuur 1. </li></ol><img alt="Figuur 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51839/51839fig1highres.jpg" width="500" /> Figuur 1. Schematische weergave van de configuratie van de damp kamers. Een T-connector aan de geluidsarme luchtpomp aangesloten. De ene kant van de T-connector is direct aangesloten op een luchtstroom regelaar voor de lucht alleen damp kamer. De andere side opnieuw gesplitst en grenst aan 2 verschillende luchtstroom te regelen, een voor lucht en een voor ethanol. De luchtkamer is direct verbonden met de regelaar zijn. Voor de ethanol damp kamer, wordt een luchtstroom regelaar aangesloten op de beluchter steen ondergedompeld in vloeibaar ethanol in de filtreerkolf. De zijarm haven van de filter kolf wordt verbonden met de uitgang van de luchtregelaar aangegeven. De gefuseerde ethanol damp en lucht wordt vervolgens aangesloten op de inlaat van de ethanol damp kamer. De uitlaatbuizen (niet getoond) zijn verbonden met een ventilatieopening in de kamer. 3. Test Vapor Chambers en aanpassen Ethanol Levels <ol><li> Voeg 600 ml van 190 bewijs ethanol om het filter fles, steek de beluchting steen, en aansluiten op buis inlaat aan de zijarm van de kolf. </li><li> Sluiten kamerdeuren en zet luchtpomp. </li><li> Pas luchtstroom toezichthouders zodat ongeveer de helft zo veel lucht stroomt door de vloeistof alcohol als de lucht wordt vermengd met. Verstelbaart de lucht alleen luchtstroom naar de gecombineerde stroom van de alcohol en de lucht van de ethanol kamer. </li><li> Laat kamers equilibreren gedurende ten minste 30 minuten voor het meten van de lucht ethanolconcentratie. </li><li> Meet lucht ethanol concentratie door het extraheren van 5 ml lucht met een 18G naald en een spuit 60 ml door het septum. Verdunnen dat monster met lucht in de ruimte door de zuiger terug tot 60 ml (1:12 verdunning). Meet lucht ethanol niveau met behulp van een blaastest volgens de aanwijzingen van de fabrikant. De verdunning van de kamer lucht is nodig om alcohol damp niveaus te bereiken binnen het detectiebereik van de blaastest. OPMERKING: Bij gebruik van verschillende niveaus van blootstelling aan alcohol de verdunning moet mogelijk worden aangepast. </li><li> Als uitgangspunt, past de luchtstroom toezichthouders als nodig is om een ​​lucht alcoholconcentratie van ongeveer 4,5-5 g / dl (g verdampte alcohol per dl van lucht) te bereiken. </li></ol> 4. Fokkerij <ol><li> Groepshuis vrouwtjes C578BL / 6 muizen (2-3 maanden oud) gedurende minstens 1 week tot ovariële cycli synchroniseren. </li><li> Individueel te huisvesten mannelijke C57BL / 6 muizen (2-5 maanden oud) gedurende minstens 2 weken. </li><li> Na het synchroniseren, zet een enkele vrouw in met een mannetje voor 5 dagen om te paren. </li><li> Na de paring, verwijderen mannetjes en individueel huis vrouwtjes en plaats ze in kamers. </li></ol> 5. Pre-en postnatale Ethanol Vapor Exposure <ol><li> Expose zwanger dammen om ethanol damp gedurende 4 uur per dag vanaf 10:00 tijdens de licht-cyclus (lichten aan van 6:00-6:00), behalve de dag van de geboorte tot de pup dood te voorkomen. </li><li> Weeg dammen op een zwangerschapsduur van (G) 5, G13-G14, en G18-G20 om zwangerschappen te controleren; beddengoed was veranderd op dagen dat vrouwen werden gewogen om het hanteren te minimaliseren. </li><li> Elke dag vervangen voedsel voor ethanol blootgestelde groepen consumptie pellets met enig ethanol geabsorbeerd vermijden. </li><li> Op de dag vangeboorte geen dieren bloot. Na de geboorte bloot de dammen en pups gedurende 4 uur per dag vanaf 10:00 van P1-P12. </li><li> Weeg pups op P2, P8, P12 en P25; en veranderen beddengoed op P8 en P12 tot extra handelingen te minimaliseren. </li><li> Direct na de laatste blootstelling (P12), de overdracht van de kooien om een ​​standaard stallen kamer. </li></ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Hier beschrijven we in detail de werkwijzen voor de constructie van damp inhalatiekamers. De materialen en gereedschappen die nodig zijn om de kamers te bouwen zijn verkrijgbaar bij een aantal commerciële leveranciers en de stappen voor de bouw van de kamers zijn relatief eenvoudig. Het systeem dat we hier beschrijven heeft geen in-line terugslagkleppen bevatten een back-flow en menging te voorkomen. We konden geen detecteerbare ethanol te meten in de lucht slechts kamers te suggereren dat we geen vermenging of terugstr...

Drinken tijdens de zwangerschap kan de foetus schaden, waarbij een aanhoudende veranderingen in vele organen en systemen die de kwaliteit van leven voor de getroffen individuen en hun families aanzienlijk zal dalen. Geschat wordt dat ongeveer 10-30% van de vrouwen drinken tijdens zwangerschap in de VS, met 1-8% drinken in een binge patroon 1,2. Het bereik van de effecten veroorzaakt door blootstelling aan ethanol tijdens de foetale ontwikkeling is gezamenlijk bekend als foetale alcohol spectrum stoornissen (FASDs). Recente schattingen geven aan dat FASDs zijn een belangrijk probleem voor de volksgezondheid met een prevalentie zo hoog als 2-5% in de VS 3. De meer ernstige manifestatie van FASDs is Foetaal Alcohol Syndroom (FAS), die wordt gekenmerkt door groeiachterstand, craniofaciale afwijkingen en neurobehavioral tekorten, waaronder leerstoornissen. De prevalentie van FAS geschat 0,2-0,7% en in de VS 3. De momenteel beschikbare behandelingen voor FASDs slechts ten dele doeltreffenden ontwikkeling van effectievere behandelingen wordt beperkt door de slechte begrip van de cellulaire en moleculaire onderbouwing van deze complexe spectrum van aandoeningen. Gegevens van de Nationale Aangeboren afwijkingen Prevention Study (NBDPS) geven aan dat zwangere vrouwen het meest drinken tijdens het 1 e trimester, vóór de zwangerschap is gedetecteerd, gevolgd door onthouding tijdens de latere stadia van de zwangerschap 2. De NBDPS vond ook dat de tweede meest voorkomende patroon van ethanol consumptie tijdens de dracht gaat drinken in alle trimesters van de zwangerschap 2. De redenen hiervoor zijn gebrek aan bewustzijn over de mogelijke schadelijke effecten van foetale blootstelling aan ethanol (zelfs bij lage doses), beperkte toegang tot prenatale zorg, positieve geschiedenis voor neuropsychiatrische aandoeningen, en misbruik van of afhankelijkheid van ethanol 4. Interessant is dat de NBDPS gemeld dat de derde meest voorkomende consumptiepatroon betrokken onthouding tijdens de 1 <sup&gt; E en 2 e trimester gevolgd door het verbruik in het 3e trimester, wanneer het wordt vaak aangenomen dat het drinken is veilig omdat organogenese is grotendeels afgerond. Echter, het 3 e trimester is een periode van hoge gevoeligheid voor ethanol veroorzaakte schade aan het zenuwstelsel, want dit is een periode waarin neuronale circuits ondergaan ingrijpende verfijning 2. De NBDPS identificeerde ook andere, minder frequente patronen van alcoholgebruik die zich voordoen tijdens de zwangerschap, met inbegrip van het verbruik gedurende de 1 e en 2 e trimester gevolgd door onthouding tijdens het 3e trimester 2. In een poging om de verschillende patronen ethanol consumptie waargenomen bij zwangere vrouwen model, een aantal ontwikkelings blootstelling ethanol paradigma uitgeoefend aan verschillende diersoorten, ratten en muizen zijn meest 5,6. De duur van de zwangerschap bij deze dieren meestal lasts ongeveer 3 weken, wat overeenkomt met de 1e en 2e trimester van de zwangerschap. Veel knaagdieren studies hebben het effect van verschillende doses en patronen van de blootstelling ethanol in deze periode geëvalueerd. Voorbeelden van de methoden vaak gebruikt om ethanol te dienen aan zwangere muizen en ratten omvatten toediening via vloeibare diëten 7,8 toevoeging van ethanol aan het drinkwater 9,10, vrijwillige inname van sacharine gezoete oplossingen 11, maag sonde 12, dampinademingstoxiciteit 13 en subcutane of intraperitoneale injectie 14. Resultaten van deze studies hebben verscheidene van de waargenomen bij mensen met FASDs tekorten samengevat, tonen dat blootstelling tijdens de vroege stadia van de zwangerschap is voldoende neuronale circuits beschadigen in de hersenen (beoordeeld in 6,15). Experimenten met knaagdieren hebben ook aangetoond dat blootstelling gedurende het equivalent van de 3e </sup&gt; Trimester van de zwangerschap, die ongeveer overeenkomt met de eerste 1-2 weken na de geboorte bij ratten en muizen, kan aanzienlijk afbreuk hersenontwikkeling. Blootstelling tijdens deze periode is gemodelleerd door het toedienen van ethanol tot neonatale ratten of muizen. Ethanol werd toegediend aan de dieren met behulp van verschillende methoden, waaronder voeden via gastrostomie in kunstmatig opgefokt 16-18, intragastrische intubatie 19, subcutane injectie 20 en dampinademingstoxiciteit 21,22. Deze studies hebben overtuigend aangetoond dat de hersenen groeispurt is een periode van grote kwetsbaarheid voor de effecten op de ontwikkeling van ethanol 6. Zoals hierboven vermeld, het drinken tijdens alle trimesters van de zwangerschap is een gemeenschappelijk patroon van ethanol consumptie bij vrouwen 2. Er zijn echter relatief weinig studies die het effect van dit patroon van blootstelling met behulp van diermodellen beoordeeld. Sommige van deze studies hebben advantag genomene van grote dieren waar de 3e trimester equivalent voorkomt in utero dan de neonatale periode bij ratten en muizen. Deze diermodellen, zoals niet-menselijke primaten 23,24 en schapen 25-27. Echter, deze diermodellen niet op grote schaal gebruikt in FASDs onderzoek, gedeeltelijk vanwege de hoge kosten en de behoefte aan gespecialiseerde zorginstellingen. Knaagdieren zijn vaker gebruikt om het effect van al-trimester ethanol blootstelling op de foetale ontwikkeling 5 karakteriseren. Cavia&#39;s zijn bijzonder voordelig zijn in dit verband gezien hun uitgebreide prenatale ontwikkeling en overeenkomsten in het brein met die van mensen 28,29. Bij cavia&#39;s, is het mogelijk om het effect van blootstelling ethanol karakteriseren in utero dat het equivalent ontwikkelingsperiode van de menselijke 3e trimester omvat. De relatief hoge kosten van deze dieren, alsook de relatief lange duur van de zwangerschap(~ 67 dagen), heeft het gebruik ervan beperkt tot enkele laboratoria aan FASDs onderzoek. Vanwege hun kosteneffectiviteit en breed gebruik in biomedisch onderzoek, hebben onderzoekers gebruikt ratten model blootstelling aan ethanol tijdens alle trimesters van de zwangerschap. In eerste studies werden ratten blootgesteld tijdens dracht via vloeibare diëten gevolgd door toediening van ethanol via gastrostomie kunstmatig gekweekte pasgeborenen (postnatale dagen (P) 1-10) waardoor piekbloed ethanol levels (BEC) in de dam van 0,08 g / dl en de pups 0,16 g / dl. Dit paradigma veroorzaakt langdurige veranderingen in de oogzenuw myelinisatie en vermindering van het aantal Bergmann glia vezels in het cerebellum 30-32. Evenzo, Maier en medewerkers met behulp van kunstmatige kweekomstandigheden toegediend ethanol aan zwangere dammen rat in een binge-achtige manier via de maag intubatie gevolgd door neonatale toediening gedurende een deel van het 3e trimester equivalent (P4-9) 33,34. PEAK moeder en pup Becs waren 0,3 g / dl bij zowel een zwangerschapsduur van 20 en P6. Deze alles-trimester blootstelling paradigma leidde tot groeivertraging die aanzienlijk groter is dan die waargenomen bij pups blootgesteld tijdens bepaalde periodes van de zwangerschap 33 was. Bovendien ratten blootgesteld aan ethanol tijdens hetzelfde voor alle trimester vertoonde een vermindering van het aantal cerebellaire Purkinje cellen en granule die groter dan waargenomen bij dieren blootgesteld tijdens andere perioden 34 was. Verlagingen van de hippocampus cel aantallen werden ook gemeld met dit paradigma, maar deze effecten lijken vooral het gevolg van blootstelling tijdens het 3e trimester-equivalent 35. Werkwijze die ethanol toediening omvat via intragastrische sonde zowel zwangere ratten en neonatale muizen werd ook gebruikt om alle trimester blootstelling 36 model. Deze methode, die BEC van 0,13 g / dl bij de moederdieren (zwangerschapsduur van 17) en 0,24 g / dl in P6 pups geïnduceerde lon leverdeg blijvende veranderingen in monoamine neurotransmitter niveaus in de hippocampus en hypothalamus, en verhoogde expressie van DNA-methyl en methyl-CpG-bindend eiwit 2 in de hippocampus 37,38. Met een vergelijkbare blootstelling paradigma (BEC = 0,14-0,2 g / dl in dammen en 0,2 g / dl in jongen), Gil-Mohapel et al.. 39 gedetecteerd een toename van het aantal nieuwe onrijpe neuronen in de dentate gyrus van volwassen ratten die kan een compensatiemechanisme vertegenwoordigen ethanol geïnduceerde neuronale schade of een wijziging van de rijping van volwassen geboren neuronen. Onderzoekers hebben ook geprobeerd om alle trimester blootstelling aan ethanol te modelleren door het blootstellen van dammen via vloeibare voeding of drinkwater tijdens de zwangerschap en tijdens het geven van borstvoeding 9,40. Echter, het nut van het blootstellen van de pups via de moedermelk is beperkt, omdat het resulteert meestal in lage pup Becs (bijv. ,002-,05 g / dl; 41,42). Muizen zijn ook gebruikt Extenstend de effecten van ontwikkelingsstoornissen ethanol blootstelling karakteriseren. Dit diermodel heeft veel van de hierboven beschreven voor de rat diermodel, met het bijkomende voordeel dat veel sterke genetisch gemodificeerde muizenstammen beschikbaar 5. Muizen zijn met succes gebruikt om de effecten van ethanol karakteriseren tijdens de 1e, 2e of 3e trimester van de zwangerschap 43,44. Het effect van trimester blootstelling van deze dieren is niet goed gekarakteriseerd omdat het technisch moeilijker om muizen blootstellen bij het equivalent van alle trimester van de zwangerschap. Bijvoorbeeld, kunstmatige kweek en maag maagsonde, die met succes gebruikt bij ratten, vereisen meer gespecialiseerde procedures in muizen 45. Aan het beste van onze kennis, maar een studie tot nu toe heeft geprobeerd om het effect van alle trimester blootstelling aan ethanol met behulp van muizen te bestuderen; deze dieren werden blootgesteld aan ethanoloplossing in drinkwater During zwangerschap en borstvoeding 46. Maternale Becs waren 0,07 g / dl en pup Becs werden niet bepaald, maar zal naar verwachting een fractie van die in de dammen zijn. Hier beschrijven we een nieuw model voor alle trimester ethanol blootstelling van muizen waar alcohol wordt toegediend aan zowel zwanger dammen en pasgeborenen via damp inhalatiekamers. Vapor kamers werden gebouwd op basis van een eerder ontwerp 47. Wij bieden gedetailleerde instructies over hoe de inhalatiekamers bouwen en het uitvoeren van de procedures blootstelling. We bieden ook informatie over de Becs die kunnen worden bereikt en het effect van blootstelling op overleving van de jongen en groei.

```html
<table><tbody><tr><td>Polycarbonaat 1/4" helder 48" x 24"</td><td>McMaster-Carr</td><td>8574K23</td><td>10</td></tr><tr><td>Schuimrubberen knop afdichting 3/8"w x 7/32"h</td><td>McMaster-Carr</td><td>93085K67</td><td>10 ft</td></tr><tr><td>Weld-on #16</td><td>McMaster-Carr</td><td>7515A11</td><td>3</td></tr><tr><td>Pianoscharnier 12" lang</td><td>McMaster-Carr</td><td>1658A11</td><td>2 x 1 ft</td></tr><tr><td>Klemmen om te klemmen standaard</td><td>McMaster-Carr</td><td>5126A26</td><td>8</td></tr><tr><td>PEX-buis 1/2"</td><td>McMaster-Carr</td><td>51275K88</td><td>10 ft</td></tr><tr><td>Gestraalde Tee buis fitting (Zwart) Pkg 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K608</td><td>1</td></tr><tr><td>Gestraalde plug fitting (Zwart) Pkg 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5462K79</td><td>1</td></tr><tr><td>Gestraalde elleboog buis fitting (Zwart) Pkg 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K596</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8" Door-Wall Adapters, Buis naar Draadgebundelde Pijp</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K851</td><td>1</td></tr><tr><td>Phillips Machine schroef 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>91772A112</td><td>1</td></tr><tr><td>Machine schroef zeskantmoer 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>90480A005</td><td>1</td></tr><tr><td>Paneelmontage flowmeter 2-20</td><td>McMaster-Carr</td><td>41945K76</td><td>3</td></tr><tr><td>FLASK, FILTER 1.000 ml 6/PACK</td><td>VWR</td><td>89001-800</td><td>2</td></tr><tr><td>Precision Seal Septa</td><td>VWR</td><td>89084-490</td><td>1</td></tr><tr><td>VWR Zwarte Rubber Stopper #8 1-gats</td><td>VWR</td><td>59581-367</td><td>1</td></tr><tr><td>TUBE TYGON R3603 3/8X9/16 50'</td><td>VWR</td><td>89068-556</td><td>1</td></tr><tr><td>TUBE TYGON R3603 1/4X11/16 50'</td><td>VWR</td><td>89068-502</td><td>1</td></tr><tr><td>Aerator Steen P2120</td><td>VWR</td><td>32573-007</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8" T-connectors Pk van 20</td><td>VWR</td><td>46600-060</td><td>1</td></tr><tr><td>VWR Disconnectors conisch Pk van 10</td><td>VWR</td><td>46600-110</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8 slang Gestraalde binnen klepkoppeling</td><td>Colder Products Company</td><td>HFCD17612</td><td>1</td></tr><tr><td>Luchtpomp middelgrote capaciteit</td><td>LMI Manufacturers</td><td>DB60L</td><td>1</td></tr><tr><td>Nexelate Draadrek 36"B X 24"D X 63"H</td><td>Global industrial</td><td>T9A990135</td><td>1</td></tr><tr><td>Set van (4) 5" Polyurethaan Wiel op Stelvoeten</td><td>Global industrial</td><td>T9A500591</td><td>1</td></tr></tbody></table>
```

bouw van vapor chambers gebruikt om muizen bloot te stellen aan alcohol tijdens het equivalent van alle drie trimesters van menselijke ontwikkeling

Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development

Blootstelling aan alcohol tijdens de ontwikkeling kan resulteren in een constellatie van morfologische en gedragsafwijkingen die gezamenlijk bekend staan ​​als Foetaal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). Bij de meest ernstige einde van het spectrum foetaal alcoholsyndroom (FAS), gekenmerkt door groeiachterstand, craniofaciale dysmorphology en neuro tekorten. Onderzoeken met diermodellen, zoals knaagdieren, hebben vele moleculaire en cellulaire mechanismen die betrokken zijn bij de pathofysiologie van FASDs toegelicht. Ethanol toediening aan zwangere knaagdieren is gebruikt om menselijke blootstelling model tijdens het eerste en tweede trimester van de zwangerschap. Derde trimester ethanol verbruik bij de mens is gemodelleerd met behulp van neonatale knaagdieren. Er zijn echter weinig studies met knaagdieren het effect van blootstelling aan ethanol tijdens het equivalent van de drie trimesters van de zwangerschap bij de mens, een patroon van blootstelling dat gebruikelijk is bij zwangere vrouwen gekarakteriseerd. Hier laten we zien hoe damp kamers bouwen van gemakkelijk obtainable materialen die elk plaats bieden aan maximaal zes standaard muis kooien. We beschrijven een dampkast paradigma dat kan worden gemodelleerd blootstelling aan ethanol, met minimaal hanteren gedurende drie trimesters. Onze studies tonen aan dat zwangere dammen ontwikkeld significante metabole tolerantie voor ethanol. Echter, neonatale muizen niet ontwikkelen metabole tolerantie en het aantal foetussen, foetus gewicht, placenta gewicht, aantal jongen / nest, aantal dode jongen / nest, en gewicht van de jongen werd niet significant beïnvloed door blootstelling aan ethanol. Een belangrijk voordeel van dit paradigma is de toepasbaarheid studies met genetisch gemodificeerde muizen. Bovendien, dit paradigma minimaliseert de omgang met dieren, een belangrijke verwarren in foetaal alcohol onderzoek.

Figuur 2A laat zien dat zowel de zwangere muizen en neonatale nakomelingen werden blootgesteld aan relatief stabiel ethanol damp concentraties in de kamers. Deze varieerde van 4-6 g / dl. Figuur 2B toont de resultaten van de zwangere muizen als een functie van de tijd BEC. BEC werden gemeten met een standaard alcoholdehydrogenase gebaseerde test 48. Op G5, Becs snel steeg tot ~ 60 mM 2 uur na de start van de blootstelling en piekte op het einde van de 4 uur blootstelling peri...

We tonen de bouw van alcohol damp kamers met behulp van gemakkelijk beschikbare materialen die tegelijk huisvesten 6 muis kooien. We gebruik ervan verder te beschrijven in een muismodel van foetale blootstelling aan alcohol gelijk aan alle 3 trimesters van de zwangerschap bij de mens. Dit paradigma bloot dieren tijdens de dracht en postnatale dagen 1-12.

Bouw van Vapor Chambers gebruikt om muizen bloot te stellen aan alcohol tijdens het equivalent van alle drie trimesters van Menselijke Ontwikkeling

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal ...

In deze video zullen we demonstreren hoe je alcoholdampkamers kunt bouwen en assembleren. We zullen ook een alcoholinhalatieparadigma beschrijven dat muizen blootstelt tijdens het equivalent van alle drie de trimesters van de menselijke ontwikkeling. De kamers zijn zeer aanpasbaar aan gewenste bloedalcoholniveaus of blootstellingsparadigma's.Ons kamerontwerp kan plaats bieden aan maximaal zes standaard muizenkooien waar muizen vrij toegang hebben tot voedsel en water. Dit paradigma produceert relatief hoge bloedalcoholniveaus bij zowel zwangere muizen als jongen zonder het gebruik van rosol. We horen van het laboratorium van Fernando Valenzuela aan de University of New Mexico.In deze video zullen we de assemblage van polycarbonaat ethanoldampkamers demonstreren en hun gebruik beschrijven in een muismodel van foetale alcoholblootstelling gedurende alle drie de trimesters. Iedereen met basiskennis van timmerwerk kan de kamers bouwen en de afmetingen kunnen worden aangepast aan individuele behoeften. De kamers kunnen in de dierenfaciliteit worden gehuisvest tijdens de blootstelling en minimaliseren stress gerelateerd aan transport en behandeling van de dieren.Vanwege verschillen in ontwikkelingsstadia is ethanoltoediening aan zwangere knaagdieren gebruikt om de menselijke blootstelling tijdens het eerste en tweede trimester te modelleren, terwijl ethanoltoediening aan neonaten wordt gebruikt om de blootstelling tijdens het derde trimester te modelleren. Deze kamers zijn ontworpen om meerdere muizenkooien tegelijk te huisvesten en zwangere vrouwtjes en neonaten die bij hun moeder zijn gehuisvest bloot te stellen. Enkele van de voordelen van het gebruik van dit alcoholblootstellingsparadigma zijn het vermogen om alle drie de ontwikkelingstrimesters na te bootsen, de vermindering van stress voor zwangere vrouwtjes en jongen, evenals de flexibiliteit in uw controle over het niveau van ethanolblootstelling.Op vijf afzonderlijke stukken van 24 bij 48 inch van een kwart inch dikke, heldere polycarbonaat platen, meet en markeer de gegeven afmetingen voor de bovenkant, onderkant, voorkant, achterkant, zijden en de deur. Deze afmetingen zullen één kamer construeren die 32 inch breed, 22 inch diep en 14 inch hoog is. Een kamer van deze grootte past voldoende voor zes standaard muizenkooien met afmetingen van 11 en een half inch bij zeven en een half inch bij vijf en een half inch hoog.Het is belangrijk om te onthouden dat dit slechts één enkele kamer biedt en dat dit proces herhaald moet worden om te eindigen met twee identieke kamers, één kamer voor alcoholblootstelling en één kamer voor luchtgecontroleerde blootstellingen. De polycarbonaat platen kunnen worden gesneden met een cirkelzaag uitgerust met een 80-tandblad of een decoupeerzaag uitgerust met een specifiek plastic of plexiglasblad. Snijd de polycarbonaat platen tot de gemeten afmetingen en wees zo voorzichtig mogelijk om rechte sneden te garanderen.Dit zal openingen tijdens het assemblageproces verminderen zodra alle stukken zijn gesneden. Meet een rechthoek van acht bij zestien inch in het midden van de voorste paneel om een opening voor de deur te creëren. Gebruik een drie-achtste inch boortje om een gat in de binnenkant van elke hoek te boren.De gaten worden gebruikt om de jig-subblad door het polycarbonaat plaat te steken en de opening weg te snijden. Als je een cirkelzaag gebruikt, kan een duiksnede worden uitgevoerd. Mogelijk zijn een paar achtersneden nodig om de randen bij de hoeken schoon te maken.Zodra alle randen zijn gesneden, kan het middelste stuk worden verwijderd en je blijft achter met een opening in het voorste paneel. Om de assemblage van de deur te beginnen, markeer de gaten die nodig zijn om de pianoscharnieren aan de deur te bevestigen. Gebruik een vijf-zestiende inch boortje om gaten te boren bij de markeringen, deze counter sink gaten zullen het hoofd van de schroef accepteren en moeten slechts half door het polycarbonaat plaat worden geboord.Met een drie-zestiende inch boortje, maak de gaten door het plaat af met de counter sink gaten als uw gids voor de assemblage. Verwijder ongeveer twee inch van de beschermende coating van de polycarbonaat platen om lassen van de stukken mogelijk te maken. Het assemblageproces kan snel verlopen, dus het kan nuttig zijn om de onderkant, achterkant, voorkant en zijden voor het lassen van de stukken samen te leggen.Gebruik barscharnieren om alles op zijn plaats te houden terwijl de las uithardt. Als alternatief kunnen zware boeken tijdens het uithardingsproces worden gebruikt om ervoor te zorgen dat de deur vlak op de buitenkant van de kamer rust. Een stuk polycarbonaat van één inch bij 12 inch moet aan de voorste paneel worden gelast, één inch onder de opening.De scharnieren zullen zich aan deze ruimte aansluiten en de deur toelaten om de kamer te verzegelen. Om de inlaatbuis te construeren, snijd twee stukken van halve inch polyethyleenbuis van 12 inch lang. Snijd ook een stuk van een inch van halve inch polyethyleenbuis om het verdampte alcohol of lucht te leveren.Maak een vijf-zestiende inch gat ongeveer een inch van het einde van elk van de 12 inch stukken polyethyleenbuis. Monteer het luchtleveringssysteem met twee drie-achten inch pluggen en één drie-achten inch T-connector. Zorg ervoor dat de gaten die je in de polyethyleenbuis hebt geboord het verst verwijderd zijn van de T-connector.Bevestig de pianoscharnieren aan de deur, zorg ervoor dat de counter sink gaten omhoog staan. Gebruik vier 40 machine schroeven en moeren om de pianoscharnieren aan de deur te bevestigen. Gebruik de deur als gids en markeer de gaten voor de pianoscharnieren op de één inch ruimte op de voorste paneel met een drie-zestiende inch boortje.Boor de gaten in het voorste paneel om de deur met vier 40 machine schroeven en moeren te bevestigen. Bevestig de deur en de pianoscharnieren aan de voorste paneel. Draai vast met een sleutel.Monteer de houder. Scharnieren als getoond. Markeer de gaten van de scharnieren op de voorste paneel met behulp van de deur als gids.Herhaal dit voor twee scharnieren langs de bovenkant en één aan elke kant van de deur met een drie-zestiende

construction-vapor-chambers-used-to-expose-mice-to-alcohol-during

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De experimentele ontwerpen voorgesteld hier richten op het bestuderen van de effecten van blootstelling aan alcohol in apoptose en de toepassing van neurotrophic peptide tijdens de zwangerschap in de foetale hersenen. Een gedetailleerde beschrijving van de kweek tot de verzameling van foetale hersenen beschreven. Technieken voor de bepaling van apoptose nader omschreven.

Experimentele methoden voor het testen van de effecten van Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Tegen Alcohol-geïnduceerde apoptose tijdens de zwangerschap in C57BL / 6 muizen

Het doel van het hier gepresenteerde protocol is om procedures te beschrijven om ratten bloot te stellen aan matige niveaus van alcohol tijdens de prenatale hersenontwikkeling en om de resulterende veranderingen in sociaal gedrag tijdens de volwassenheid te kwantificeren.

Matige Prenatale blootstelling aan alcohol en kwantificering van sociaal gedrag bij volwassen ratten

Trace eyeblink klassieke conditionering (ECC) werd gebruikt om te beoordelen hippocampal-afhankelijke associative leren bij volwassen ratten die waren toegediend een hoge concentratie (11,9% v/v) van alcohol tijdens de vroege ontwikkeling van de neonatale hersenen. In het algemeen, zijn ECC procedures diagnostische hulpmiddelen voor het opsporen van hersenen dysfunctie over vele psychologische en biomedische instellingen voor geluid.

Het gebruik van Trace Eyeblink klassieke conditionering te beoordelen Hippocampal dysfunctie in een Rat Model van Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Alcohol gebruik stoornis (AUD) is een grote nationale gezondheidsprobleem en de ontwikkeling van effectievere behandelingen is vereist ter compensatie van de behoeften van deze patiënten populatie. Te dien einde het volgende protocol maakt gebruik van twee eenvoudige knaagdier drinken modellen om te beoordelen van de preklinische werkzaamheid van anti-alcohol loodverbindingen.

RattenUitrustingen drinken modellen in de ontwikkeling van farmacotherapieën voor alcoholisme: drinken in de donkere en twee-fles keuze

Hier wordt een protocol gepresenteerd voor het 2BC/CIE-model van alcoholverslaving bij muizen om alcoholgebruiksstoornis te bestuderen.

Chronische intermitterende blootstelling aan ethanoldamp gekoppeld aan keuze uit twee flessen om alcoholgebruiksstoornis te modelleren

Dit artikel beschrijft een reeks methoden voor het meten van het onderdrukkende vermogen van het snuiven van alcoholische dranken op het door wasabi opgewekte stekende gevoel.

Integratie van gedragsbeoordeling van dieren en convolutioneel neuraal netwerk om de smaak-geurinteractie van wasabi en alcohol te bestuderen

Dit protocol beschrijft een standaard home cage drinkparadijs met twee flessen met intermitterende toegang om alcoholconsumptie bij ratten te modelleren. Daarnaast biedt het stapsgewijze instructies om het standaardprotocol aan te vullen met een doe-het-zelf likke-detectiesysteem dat microstructurele analyse van drinkgedrag mogelijk maakt.

Modellering van alcoholconsumptie bij knaagdieren met behulp van drinken in een thuiscamer met een keuze uit twee flessen en microstructurele analyse

Vape-cartridges voor cannabisdestillaten zijn apparaten op batterijen die extracten met hoge concentraties cannabinoïden vernevelen. Het ontbreken van gevestigde preklinische modellen voor deze producten zorgt voor uitdagingen bij het bestuderen van hun fysiologische effecten. Om deze lacune op te vullen, is een gestandaardiseerd preklinisch inhalatiemodel voor muizen voor verdampte cannabisdestillaten ontwikkeld.

Ontwikkeling van een preklinisch inhalatiemodel om verdampte cannabisdestillaten te testen

Deze video toont een model om de ontwikkeling van intima hyperplasie studeren na stent met behulp van een menselijk vat (IMA) in een immunodeficiënte rat model.

Human Interne borstslagader (IMA) Transplantatie en stenting: een humaan model aan de ontwikkeling van in-stent restenose Studie

Amblyopie is een ontwikkelingsstoornis van de visuele cortex die vaak gepaard gaat met een sterke onderdrukking van een oog. We presenteren een nieuwe techniek voor het meten en behandelen van interocular onderdrukking bij patiënten met amblyopie die kunnen worden ingezet met behulp van virtual reality bril of een draagbaar iPod Touch-apparaat.

De meting en behandeling van Onderdrukking in Amblyopie

Leer hoe u alcoholdampkamers bouwt voor muizen om foetale alcoholblootstelling te bestuderen tijdens alle drie trimesters van de menselijke zwangerschap. Dit model helpt onderzoekers de ontwikkelingsbiologie te begrijpen.

Bouw van Vapor Chambers gebruikt om muizen bloot te stellen aan alcohol tijdens het equivalent van alle drie trimesters van Menselijke Ontwikkeling (Video) | JoVE Journal

Bouw van Vapor Chambers gebruikt om muizen bloot te stellen aan alcohol tijdens het equivalent van alle drie trimesters van Menselijke Ontwikkeling

Meer video's verkennen