Name: Een nieuwe methode van de Drug aan Multiple zebravis ( Danio rerio) En de kwantificering van Terugtrekking (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: Leer een nieuwe methode voor gelijktijdige dosering van ethanol aan groepen zebrafish (Danio rerio) om terugtrekkingsgedrag te bestuderen. Deze techniek maakt nauwkeurige analyse van angstniveaus mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs hebben niets te onthullen.

Alle procedures en gedragsmatige testen werden goedgekeurd door MacEwan University&#39;s Animal Research Ethics Board onder protocol nummer 06-11-12, dat is in overeenstemming met de Canadese Raad voor Animal Care&#39;s richtlijnen voor de verzorging en het gebruik van proefdieren. 1. Bereid Doseren Tanks, Solutions, en het toedieningsschema <ol><li> Bereid een toedieningsschema dat de dieren worden toegediend in dezelfde omgeving en gedurende dezelfde tijd van de dag aan een verwart tijd of vertekenende visuele stimuli voorkomen. </li><li> Verkrijgen van zoveel identiek, 1.5 L, duidelijke polypropyleen paai tanks als nodig is voor het aantal groepsgrootte. Gebruik groepen van 8 vissen per tank, waardoor voor 2 groepen van vis te testen per dag later in de procedure (zie stap 3). Gebruik een vuilwatertank en één doseertank per groep (2x totaal aantal groepen). <ol><li> Plaats 400 pm paai inserts in alle opslagtanks. Fziek de tanks met water leefgebied of omgekeerde osmose water op de juiste temperatuur (zebravis, 25-28 ° C) die overeenkomt met de temperatuur vis gewoonlijk ondergebracht bij. LET OP: Er kunnen ongewenste chemische interacties tussen sommige drugs en de chemische bestanddelen van gebufferd leefgebied water. In deze situatie gebruik omgekeerde osmose water gebufferd met minimale of geen aquarium zouten voor toediening, en voor de controlegroepen. </li><li> Zorg ervoor dat de tanks zijn in een neutrale omgeving te conditioneren vis op externe visuele prikkels tijdens de dosering te vermijden. </li></ol></li><li> Bereid de drug oplossing. Meng de geschikte hoeveelheid van het geneesmiddel met leefgebied water in de paai tanks. Bereid de 0,2% ethanoloplossing combineert 3 ml van een hoogwaardige ethanol (95% niet-gedenatureerde ethanol) met 1.497 ml water. Bereid de 1.4% ethanoloplossing door het combineren 21 ml ethanol met 1.479 ml water. </li></ol> 2. Verrekening Vis en Ethanol Administration Procedure <ol><li> Zorgvuldig netto vis uit hun habitat tanks en de overdracht naar de juiste vuilwatertank met de paai insert. Idealiter, het huis van de vis in de paaitijd insert te elimineren netten helemaal. </li><li> Met alle vissen in hun respectieve deelneming tanks, til de paai plaatst uit de vuilwatertank en plaats deze in de juiste drug schoonwatertank (Figuur 1A). <ol><li> Noteer de dosering als voorgeschreven. Gebruik 30 min in ethanol oplossing voor de hier beschreven procedure. </li><li> Indien mogelijk, assistenten helpen bij de overdracht van alle experimentele groepen aan de geneesmiddeloplossing tegelijkertijd nauwkeurige dosering te garanderen. Alternatief: breng één groep tegelijk en bijhouden van afzonderlijke groepen &#39;doseren keer (Figuur 1A). </li></ol></li><li> Aan het einde van de vereiste doseringsperiode, verwijder de vis uit de ethanoloplossing door voorzichtig optillen van de paai inzetstukout van de drug-oplossing en het plaatsen voorzichtig terug in de vuilwatertank. </li><li> Zachtjes net de vis in de opslagtanks en plaats ze terug in hun leefgebieden tot de volgende geplande dosering tijd, of plaats de paai steek terug in de vuilwatertank te netting elimineren. </li><li> Zoals eerder, indien mogelijk vermeld binnen de parameters van stallen materiaal, huis dieren in dezelfde tank en paai inzetstuk wordt gebruikt als vuilwatertank. Dit zal elimineren saldering helemaal tijdens de toediening procedure. </li></ol> 3. Behavioral Testen <ol><li> Verkrijgen van een licht / donker arena 9,5 cm breed en 55 cm lang en 9,5 cm diep met een witte waterdichte vloer (Figuur 1B). Plak wit en zwart waterdichte niet-reflecterend papier aan de binnenwanden van de arena met behulp van klittenband, waarbij de helft van de arena bedekt met witte en de helft bedekt met zwart. Vul de arena tot een diepte van 5 cm met leefgebied water bij een temperatuur van 25-28 ° C. Maintain deze temperatuur tijdens testen. </li><li> Minimaliseer externe visuele prikkels door de aanleg van een witte driezijdige behuizing voor de arena te zijn gelegen in. Zorg ervoor dat de testruimte heeft diffuus overhead verlichting die niet reflecties op het wateroppervlak veroorzaakt, maar toch voldoende helder voor de beweging tracking software, of post -hoc handleiding kwantificering van videobeelden. </li><li> Plaats de arena in de behuizing en zet de opname en bewegingsanalyse parameters van het gedrag tracking software. Stel de proef duur 5-15 min, afhankelijk van de onderzoeksvraag. LET OP: Hier gebruikten we 5 min. </li><li> Vervoer de groep vissen te worden getest om het onderzoeksgebied in het leefgebied tank en plaats ze buiten de arena behuizing. Acclimatiseren de vis gedurende 10 minuten. </li><li> Zachtjes net een vis uit de betreffende groep en plaats in het midden van de licht / donker-arena, en zorg ervoor dat de vis los wanneer het wordt evenwijdig aan de lange as van de arena om AVOid vertekenende de vis aan de lichte of donkere zone. </li><li> Beginnen met opnemen gedrag onmiddellijk nadat het dier wordt vrijgelaten. Kijk voor alle software problemen met het bijhouden van de vis of voor vis springen of invriezen. Draai de arena 180 ° na de helft van de proefpersonen getest één verwart raakt door vooroordelen gevolg van welke kant van de arena is gericht naar het open uiteinde van de behuizing. </li><li> Na de proefperiode is afgelopen, zachtjes net en haal de vis uit de arena om een ​​vuilwatertank of leefgebied tank. </li></ol> 4. Analyse <ol><li> Onderzoeken de tijd doorgebracht in het licht versus donker zones. Voor elke groep en elke vis, het verkrijgen van de relatieve tijd doorgebracht in de lichte en donkere zones en analyseren met behulp van een one sample t-test (of Wilcoxon test voor niet-parametrische gegevens; verschil met (de helft van het totale proces tijd) 150 sec) te bepalen of groepen significant liever een ruimte boven de andere. </li><li> Te vergelijken voorkeuren, berekenen een preference index door aftrekken van de tijd doorgebracht in de lichte zone van de tijd doorgebracht in de donkere zone en vergelijk de verschillen tussen groepen. t- tests kunnen worden gebruikt om twee groepen te vergelijken. Vergelijk meerdere groepen met een one-way variantie analyse met behulp van Tukey&#39;s HSD post hoc-test waar nodig (of de Kruskal-Wallis-test met Dunn&#39;s meervoudige vergelijking post hoc test voor niet-parametrische data). </li><li> Vergelijk snelheid, aantal zone overgangen, meanderende en immobiliteit tussen groepen. Gebruik one-way variantie-analyse met behulp van Tukey&#39;s HSD post hoc-test waar nodig (of de Kruskal-Wallis-test met Dunn&#39;s meervoudige vergelijking post hoc test voor niet-parametrische data). </li></ol>

<ol><li>Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+behaviour+and+ecology+of+the+zebrafish%2C+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio.</a> Biological Reviews. 83 (1), 13-34 (2008).</li>
<li>Langheinrich, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+A+new+model+on+the+pharmaceutical+catwalk%5BTitle%5D)+AND+%22BioEssays%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: A new model on the pharmaceutical catwalk.</a> BioEssays. 25 (9), 904-912 (2003).</li>
<li>Santoriello, C., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hooked%21+Modeling+human+disease+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Hooked! Modeling human disease in zebrafish.</a> Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2337-2343 (2012).</li>
<li>Miller, N., Greene, K., Dydinski, A., Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+nicotine+and+alcohol+on+zebrafish+%28+Danio+rerio%29+shoaling%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+brain+research%22%5BJournal%5D)">Effects of nicotine and alcohol on zebrafish ( Danio rerio) shoaling.</a> Behavioural brain research. , (2012).</li>
<li>Bencan, Z., Sledge, D., Levin, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Buspirone%2C+chlordiazepoxide+and+diazepam+effects+in+a+zebrafish+model+of+anxiety%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Buspirone, chlordiazepoxide and diazepam effects in a zebrafish model of anxiety.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 94 (1), 75-80 (2009).</li>
<li>Holcombe, A., Howorko, A., Powell, R. A., Schalomon, M., Hamilton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversed+Scototaxis+during+Withdrawal+after+Daily-Moderate%2C+but+Not+Weekly-Binge+Administration+of+Ethanol+in+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Reversed Scototaxis during Withdrawal after Daily-Moderate, but Not Weekly-Binge Administration of Ethanol in Zebrafish.</a> PLoS ONE. 8 (5), (2013).</li>
<li>Mathur, P., Guo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+of+acute+versus+chronic+ethanol+exposure+on+anxiety-like+behavioral+responses+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Differences of acute versus chronic ethanol exposure on anxiety-like behavioral responses in zebrafish.</a> Behavioural Brain Research. 219 (2), 234-239 (2011).</li>
<li>Dlugos, C., Rabin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+effects+on+three+strains+of+zebrafish%3A+model+system+for+genetic+investigations%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Ethanol effects on three strains of zebrafish: model system for genetic investigations.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. , (2003).</li>
<li>Maximino, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scototaxis+as+anxiety-like+behavior+in+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Scototaxis as anxiety-like behavior in fish.</a> Nature Protocols. 5 (2), 209-216 (2010).</li>
<li>Gerlai, R., Lee, V., Blaser, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+acute+and+chronic+ethanol+exposure+on+the+behavior+of+adult+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Effects of acute and chronic ethanol exposure on the behavior of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 85 (4), 752-761 (2006).</li>
<li>Egan, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+behavioral+and+physiological+phenotypes+of+stress+and+anxiety+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+brain+research%22%5BJournal%5D)">Understanding behavioral and physiological phenotypes of stress and anxiety in zebrafish.</a> Behavioural brain research. 205 (1), 38-44 (2009).</li>
<li>Gebauer, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+anxiolytics+in+zebrafish%3A+Similarities+and+differences+between+benzodiazepines%2C+buspirone+and+ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Effects of anxiolytics in zebrafish: Similarities and differences between benzodiazepines, buspirone and ethanol.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 99 (3), 480-486 (2011).</li>
<li>Serra, M. C., Mattioli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+preference+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29+for+a+dark+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Braz+J+Med+Biol+Res%22%5BJournal%5D)">Natural preference of zebrafish (Danio rerio) for a dark environment.</a> Braz J Med Biol Res. 32 (12), 1551-1553 (1999).</li>
<li>Maximino, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+neurochemical+changes+in+the+zebrafish+leopard+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Behavioral and neurochemical changes in the zebrafish leopard strain.</a> Genes Brain Behav. 12 (5), 576-582 (2013).</li>
<li>Levin, E. D., Bencan, Z., Cerutti, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anxiolytic+effects+of+nicotine+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Anxiolytic effects of nicotine in zebrafish.</a> Physiology & Behavior. 90 (1), 54-58 (2007).</li>
<li>Gerlai, R., Chatterjee, D., Pereira, T., Sawashima, T., Krishnannair, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+chronic+alcohol+dose%3A+population+differences+in+behavior+and+neurochemistry+of+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%2C+Brain+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Acute and chronic alcohol dose: population differences in behavior and neurochemistry of zebrafish.</a> Genes, Brain and Behavior. 8 (6), 586-599 (2009).</li>
<li>Mathur, P., Berberoglu, M. A., Guo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preference+for+ethanol+in+zebrafish+following+a+single+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Preference for ethanol in zebrafish following a single exposure.</a> Behavioural Brain Research. 217 (1), 128-133 (2011).</li>
<li>Renninger, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+genetics+of+visual+processing%2C+function+and+behaviour+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">Investigating the genetics of visual processing, function and behaviour in zebrafish.</a> Neurogenetics. 12, 97-116 (2011).</li>
<li>Crawshaw, L. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerance+and+withdrawal+in+goldfish+exposed+to+ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Tolerance and withdrawal in goldfish exposed to ethanol.</a> Physiology & Behaviour. 87 (3), 460-468 (2006).</li>
<li>Hamilton, T. J., Holcombe, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tresguerres%2C+M.CO2-induced+ocean+acidification+increases+anxiety+in+rockfish+via+alteration+of+GABAA+receptor+functioning%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+B%22%5BJournal%5D)">Tresguerres, M.CO2-induced ocean acidification increases anxiety in rockfish via alteration of GABAA receptor functioning.</a> Proceedings of the Royal Society B. , (2014).</li>
<li>Ramsay, J. M., Feist, G. W., Varga, Z. M., Westerfield, M., Kent, M. L., Schreck, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-body+cortisol+response+of+zebrafish+to+acute+net+handling+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Aquaculture%22%5BJournal%5D)">Whole-body cortisol response of zebrafish to acute net handling stress.</a> Aquaculture. 297 (1-4), 157-164 (2009).</li>
<li>Hamilton, T. J., Paz-Yepes, J., Morrison, R. A., Palenik, B., Tresguerres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+bloom-like+concentrations+of+two+marine+Synechococcus+cyanobacteria+%28strains+CC9311+and+CC9902%29+differentially+alters+fish+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Conservation+Physiology%22%5BJournal%5D)">Exposure to bloom-like concentrations of two marine Synechococcus cyanobacteria (strains CC9311 and CC9902) differentially alters fish behaviour.</a> Conservation Physiology. 2 (1), (2014).</li>
</ol>

De auteurs erkennen Joshua Gallup voor het gebruik van zijn fotografie apparatuur die wordt gebruikt voor Figuur 1. Dit werk werd ondersteund door een Natural Sciences and Engineering Research Council (NSERC) Canada Discovery subsidie ​​(tot TJH).

Vorige studies met toediening van het geneesmiddel in de zebravis hebben gewoon vertrouwd op saldering vis om ze te vervoeren van hun huis tank in de drug oplossing 12,16. Saldering is niet altijd consistent en duurt vaak langer dan verwacht als gevolg van de ontsnapping respons van de zebravis, die aanzienlijke individuele variatie heeft. Traditionele overdrachtsmethoden, hoewel nuttig, kan worden verbeterd door de hoeveelheid van de totale tijd doorbrengen vis buiten water, evenals het verminderen van de ho...

De zebravis (Danio rerio) is een klein teleost soorten van oorsprong uit India, dat is een bruikbaar model organisme voor gedragsverandering 1 en medisch onderzoek 2,3. Zebravis worden ook vaak gebruikt bij het testen van verschillende farmacologische stoffen om hun impact op het gedrag karakteriseren. Diverse doseringen en schema van toediening zijn gebruikt om het gedrag van de zebravis na de toediening van verbindingen zoals stimulantia 4, anxiolytica 5 en ethanol 6-8 onderzoeken. Ons laboratorium heeft het effect van verschillende schema ethanol toediening op zebravis angst en beweging in de goed gevalideerde licht / donker assay 9, 20, ook bekend als de scototaxic assay onderzocht. Een nieuwe wijze van toediening ethanol werd ontwikkeld om de efficiëntie voor herhaalde dagelijkse toediening toenemen gedurende een lange periode (21 dagen) 6 </sup&gt;. Eerder gebruikte werkwijzen waren praktisch echter zochten we een methode verrekening verminderd met bijbehorende tijdskosten ontwikkelen, en men tegelijkertijd nauwkeurig tijdgestuurde toediening van het geneesmiddel van belang grote aantallen vissen. In traditioneel onderzoek met behulp van ethanol, worden zebravis gesaldeerd en overgebracht van de ene naar de andere tank met de juiste mengsel van ethanol en water 10-12. Hoewel deze methode is algemeen aanvaard, kan saldering zebravis de variabiliteit in de tijd genomen om te introduceren en te verwijderen van de vis uit de drug oplossing te verhogen. Daarom kan de exacte blootstelling aan de verbinding van belang variëren in de loop van een experiment met herhaalde toediening. Een methode die bronnen van fouten als gevolg van de variabiliteit in het vervoer tijden reduceert is dus wenselijk. Met onze methode kunnen we alle vissen tegelijk bewegen, waardoor identieke doseertijd per vis. Na blootstelling aan ethanol (hier beschreven) kunnen zebravissen worden getest in elke number gedrags- testen, waaronder die angst beoordelen. Doseren groepen van vis met behulp van de nieuwe methode heeft praktische toepassingen buiten het vermogen om nauwkeurig te repliceren en te standaardiseren dosering tussen onderwerpen en over groepen van vis. De komst van nieuwe software die het mogelijk maakt voor het volgen van meerdere vissen in een keer kan zien onderzoekers maken gebruik van onze methoden om herhaalbaarheid en nauwkeurigheid in hun experimenten. Gezien het wijdverbreide gebruik van zebravis als modelorganisme voor Behavioral Neuroscience, zal deze methode de efficiëntie en bruikbaarheid in de toekomst farmacologische studies te verhogen. In het huidige paradigma, werd een herhaalde doseringsschema gebruikt die ongeveer weerspiegelt de menselijke drinken schema. Vissen werden willekeurig toegewezen aan één van drie groepen: controle, dagelijkse matige, of wekelijkse-binge. Het doseringsschema was 21 dagen duurden gekozen omdat het aanzienlijk belichtingstijden in eerdere studies 7 overschreden. Controlevissen ontvangen nul alcohol, ontving dagelijks matige vis 0,2% alcohol een keer per dag, en wekelijks binge-vis ontvingen 1,4% alcohol een keer per week. Het licht / donker taak werd gebruikt om angst te beoordelen na 2 dagen van terugtrekking. Dit is een relatief eenvoudige test te beheren met een rechthoekige arena waarin de wanden enerzijds zijn wit en anderzijds donker 9 gebruikt. Volwassen zebravissen robuust voorkeur aan de donkere kant van de arena onder controle condities 6,9,13. Toegenomen angst is operationeel gedefinieerd als aanzienlijk meer tijd in de donkere zone en verminderde angst kan worden aangenomen wanneer de vis besteedt relatief meer tijd in de lichte zone. Met motion-tracking software, kunnen andere informatieve variabelen ook worden gekwantificeerd, zoals gemiddelde snelheid, immobiliteit, meanderende, en zone overgangen 14. De dosering methode ontwikkeld in ons laboratorium kan worden toegepast op elk onderzoek waarbij in water oplosbare verbindingen worden toegediend aan één of meer zebrafish. Veel andere farmacologische middelen die kunnen profiteren van deze methodiek worden momenteel getest in de zebravis. Gewoonlijk geteste verbindingen omvatten nicotine, chloordiazepoxide, buspiron en scopolamine, die zijn opgelost in een soortgelijke wijze ethanol; door mengen van de juiste hoeveelheid van de chemische stof in water. Daarom is het algemene toepassingsgebied van deze procedure is veel breder en niet beperkt tot ethanol. Bovendien na toediening van geneesmiddelen voor meerdere dagen, de licht / donker taak is slechts één van vele gedragstesten die kunnen worden toegepast. Na toediening van het geneesmiddel of tijdens de terugtrekking, andere populaire assays die kunnen worden gebruikt zijn onder andere de roman tank duiken-test 15 en tests van sociaal gedrag zoals shoaling 16. De volgende procedure zal een efficiënte methode van herhaaldelijk overbrengen groepen van vis of van individuele vissen in oplossingen die een farmacologische verbinding van belang te schetsen. Bovendien, het proces van het testen van angst met de licht / donker-testin groepen van vis die in intrekken na blootstelling aan lange lijsten van alcohol toediening worden beschreven.

<table><tbody><tr><td>Behuizingssysteem voor tafelblad met drie planken</td><td><a href="http://aquatichabitats.com/research-systems/z-hab-system/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Aquatic Habitats</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>1.5 L Kuittank met 400 &amp;mu;m schot</td><td><a href="http://aquatichabitats.com/consumables/tanks-lids-and-baffles/info/nursery-tank-and-baffles/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Aquatic Habitats</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pure graanethanol</td><td><a href="http://www.luxco.com/brands/vodka-neutral-spirits-neutral-spirits-everclear" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Luxco, INC</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ethovision XT Software voor bewegingsregistratie</td><td><a href="http://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Noldus Information Technology</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipet</td><td><a href="http://eshop.eppendorf.ca/categories/1" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Eppendorf Canada</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Licht/donker-arena</td><td>Custom</td><td></td><td>Constructeer volgens de procedurebeschrijving. 9.5 cm breed, 9.5 cm diep, 55 cm lang.</td></tr></tbody></table>

een nieuwe methode van de drug aan multiple zebravis ( danio rerio) en de kwantificering van terugtrekking

A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish (Danio rerio) and the Quantification of Withdrawal

Angsttesten bij zebravissen worden vaak bestudeerd in combinatie met de toepassing van farmacologische substanties. In deze studies worden vissen routinematig gevangen en getransporteerd tussen thuisaquaria en doseringstanks. Om de gemakkelijke toediening van verbindingen te verbeteren, werd een nieuwe methode ontwikkeld voor het overbrengen van vissen tussen tanks voor medicijntoediening. Inzetstukken die zijn ontworpen voor het afzetten, werden gebruikt om groepen vissen in de medicijnoplossing over te brengen, waardoor nauwkeurige dosering van alle vissen in de groep mogelijk werd. Dit verhoogt de precisie en efficiëntie van dosering, wat erg belangrijk wordt bij lange schema's van herhaalde medicijntoediening. We implementeerden deze procedure voor gebruik in een studie die het gedrag van zebravissen in de licht/donker-test onderzocht na toediening van ethanol met verschillende schema's van 21 dagen. Bij vissen die dagelijks matige hoeveelheden alcohol kregen, was er een significant verschil in locatievoorkeur na 2 dagen ontwenning in vergelijking met de controlegroep. Echter, een significant verschil in locatievoorkeur in een groep die werd blootgesteld aan wekelijkse binge-toediening, werd niet waargenomen.
Dit protocol kan worden gegeneraliseerd voor gebruik met alle soorten verbindingen die wateroplosbaar zijn en kan worden gebruikt in elke situatie waarin het gedrag van vissen tijdens of na lange schema's van medicijntoediening wordt onderzocht. De licht/donker-test is ook een waardevolle methode om op ontwenning geïnduceerde veranderingen in angst te beoordelen.

Om de nauwkeurigheid en controle farmacologische studies zebravis is het belangrijk om tijd de duur van ethanol toediening consistent en nauwkeurig beschreven behouden. Onze procedure kan het gemak en de doorvoer van de dosering procedure te verhogen. De toediening van ethanol op een wekelijkse-binge of dagelijks matige schema resulteerde in gewijzigde angst niveaus, gemeten met de licht / donker-test, in vergelijking met controles. Wanneer onderzocht twee dagen na de laatste toediening zebravis in de controlegroep (die...

Een nieuwe methode voor het verminderen van variabiliteit bij het blootstellen van vissen aan geneesmiddelen wordt uitgelegd. Vissen die werden blootgesteld aan verschillende patronen van ethanolblootstelling bleken veranderde angstniveaus te hebben tijdens ontwenning in een licht/donker scototaxisch onderzoek.

Een nieuwe methode van de Drug aan Multiple zebravis ( Danio rerio) En de kwantificering van Terugtrekking

Anxiety testing in zebrafish is often studied in combination with the application of pharmacological substances. In these studies, fish are routinely ...

Het algemene doel van deze procedure is om groepen vissen nauwkeurig en efficiënt te doseren met ethanol voor het beoordelen van de effecten van herhaalde dosering op ontwenninggedrag. Dit wordt bereikt door eerst de zebravis te doseren, met behulp van een nieuwe methode die is ontwikkeld om de gelijktijdige blootstelling aan geneesmiddelen van hele groepen vissen gedurende precieze hoeveelheden tijd mogelijk te maken. De tweede stap is om de vissen te blijven doseren volgens een schema dat het testen op specifieke effecten van ethanol ontwenning mogelijk maakt.Vervolgens worden de vissen tijdens de ontwenning individueel getest in een licht-donker taak met behulp van motion tracking software om de beweging op te nemen. De laatste stap is om de gegevens te analyseren om de effecten van ethanol ontwenning op het gedrag van zebravissen te onderzoeken. Uiteindelijk resulteert herhaalde ethanol dosering met behulp van de beschreven procedure in een tijdelijk maar duidelijk effect op het gedrag van zebravissen na twee dagen van ontwenning.Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het gelijktijdige toediening van geneesmiddelen aan grote groepen vissen mogelijk maakt, en het is ideaal voor onderzoeken die betrekking hebben op herhaalde blootstelling aan geneesmiddelen, geneesmiddelen of toxines gedurende langere tijd. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van neurofarmacologie, zoals de kwantificering van ontwenning gerelateerd gedrag. We kregen het idee voor deze methode voor het eerst toen we ethanol probeerden toe te dienen aan meerdere vissen tegelijk en ontdekten dat netten een onnauwkeurige en onnauwkeurige methode was voor het toedienen van geneesmiddelen.Begin met het voorbereiden van een toedieningsschema zodat de dieren in dezelfde omgeving en tijdens dezelfde tijd van de dag worden gedoseerd om eventuele verwarring van tijd of bias naar visuele stimuli te voorkomen. Verkrijg vervolgens zoveel identieke 1,5 liter heldere polypropyleen kuittanks als nodig is voor het aantal groottes om twee groepen vissen per dag te testen.Gebruik groepen van acht vissen per tank, één houdtank en één doseringstank is nodig per groep. Daarom is het aantal tanks twee keer het aantal groepen. Plaats vervolgens 400 micron kuitinserts in alle houdtanks.Vul de tanks met habitat, water of omgekeerde osmose water op de juiste temperatuur hier. 25 tot 28 graden Celsius wordt gebruikt voor zebravissen. Zorg ervoor dat de tanks in een neutrale omgeving staan om conditionering van de vissen aan externe visuele stimuli tijdens de dosering te voorkomen.Bereid vervolgens de geneesmiddeloplossing voor door de juiste hoeveelheid van het geneesmiddel met habitat water in de doseringstanks hier te mengen, een 0,2% ethanoloplossing en een 1,4% ethanoloplossing worden bereid door hoogwaardig ethanol met water in de tank te combineren. Net voorzichtig de vissen uit hun habitattanks en breng ze over in de juiste houdtank met de kuitinsert. Idealiter huisvest u de vissen in de kuitinsert om netten helemaal te elimineren met alle vissen in hun respectieve houdtanks.Til voorzichtig de kuitinsert uit de houdtank en plaats deze in de juiste geneesmiddeloplossing tank. Heb indien mogelijk assistentie bij de overdracht van alle groepen naar de geneesmiddeloplossing tegelijkertijd om een ​​nauwkeurige doseringstijd te garanderen. Noteer de doseringstijd zoals vereist.30 minuten in de ethanoloplossing wordt gebruikt voor de hier beschreven procedure aan het einde van de vereiste doseringsperiode. Verwijder de vissen uit de ethanoloplossing door voorzichtig de kuitinsert uit de geneesmiddeloplossing te tillen en voorzichtig terug te plaatsen in de houdtank. Verkrijg een lichtdonker arena negen en een halve centimeter breed bij 55 centimeter lang en negen en een halve centimeter diep met een witte waterdichte vloer.Bevestig een vast wit en zwart waterdicht niet-reflecterend papier aan de binnenwanden van de arena met behulp van klittenband met de helft van de arena bedekt in wit en de helft bedekt in zwart, vul de arena tot een diepte van vijf centimeter met habitat water op een temperatuur van 25 tot 28 graden Celsius. Handhaaf deze temperatuur gedurende het hele testen minimaliseer externe visuele stimuli door een witte driezijdige behuizing voor de arena te bouwen om in te plaatsen. Zorg ervoor dat het testgebied diffuus overhead heeft.Verlichting die geen reflecties op het wateroppervlak veroorzaakt en toch voldoende helder is voor de bewegingsvolgsoftware of post hoc handmatige kwantificering van videobeelden. Stel vervolgens de opname- en bewegingsanalyseparameters van de gedragsvolgsoftware in met een proefduur van vijf tot 15 minuten, afhankelijk van de onderzoeksvraag, vervoer de te testen groep vissen naar het onderzoeksgebied in de habitattank en plaats ze buiten de arena.Enclosure. Laat de vissen gedurende 10 minuten acclimatiseren.Net voorzichtig een vis uit de juiste groep en plaats in het midden van de lichtdonker arena waarbij elke vis vrijgelaten wordt wanneer deze evenwijdig aan de lange as van de arena is gepositioneerd. Om te voorkomen dat de vissen naar de lichte of donkere zone worden beïnvloed, begin met het opnemen van gedrag direct nadat het dier is vrijgelaten. Kijk uit voor eventuele softwareproblemen met het volgen van de vissen of voor vissen die springen of bevriezen nadat de proef is afgelopen, net voorzichtig en verwijder de vis uit de arena naar een houdtank of habitattank.Roteer de arena 180 graden nadat de helft van de proefpersonen is getest om eventuele verwarring te voorkomen als gevolg van biassen die resulteren uit welk uiteinde van de arena is georiënteerd naar de open kant van de behuizing. Begin met analyseren door de tijd in licht versus donkere zones voor elke groep en voor elke vis te onderzoeken, verkrijg de relatieve tijd besteed aan de lichte en donkere zones en analyseer met behulp van een eensteekproef T-test om te bepalen of groepen significant de ene zone boven de andere verkiezen. Om voorkeuren te vergelijken, bereken een voorkeursindex door de tijd in de lichtzone af te trekken van de tijd in de donkere zone, en vergelijk verschillen tussen groepen.Vergelijk met behulp van T-test meerdere groepen met een eenrichtingsanalyse van variantie met behulp van twee sleutels, e

a-novel-method-drug-administration-to-multiple-zebrafish-danio-rerio

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

De video beschrijft de licht-donker voorkeurstest om het angstgerelateerde gedrag bij zebravissen na de blootstelling aan ethanol te bestuderen.

Licht-donker voorkeurstest: een methode om angstgerelateerd gedrag bij zebravissen te bestuderen

Zebravissen zijn een belangrijk modelorganisme voor de studie van energiehomeostase. Door gebruik te maken van een NADH2 gevoelige redoxindicator, alamar Blue, hebben we een test ontwikkeld die de metabole snelheid van zebravislarven meet in een 96-well plate formaat en kan worden toegepast op medicijn- of genontdekking.

High Throughput<em&gt; Danio Rerio</em&gt; Energie Uitgaven Assay

Het doel van dit protocol is voor het meten van de transittijd van fluorescently geëtiketteerde voedsel door de darm van larvale zebrafish in een hoge doorvoersnelheid mode.

High-throughput meting van darm transittijd met behulp van larvale zebravis

Dit manuscript beschrijft een eenvoudige methode om stress gedrag in volwassen zebravis te meten. De aanpak maakt gebruik van de aangeboren tendens dat zebravis de voorkeur aan de onderste helft van een tank, wanneer in een stressvolle toestand. Wij beschrijven ook methodes om de analyse met farmacologie te koppelen.

Gedrags benaderingen voor het bestuderen van aangeboren stress in zebravis

Zebravis embryo's worden gebruikt voor het evalueren van de toxiciteit van chemische verbindingen. Ze ontwikkelen zich extern en zijn gevoelig voor chemicaliën, waardoor subtiele fenotypische veranderingen kunnen worden opgespoord. Het experiment vereist slechts een kleine hoeveelheid stof, die direct wordt toegevoegd aan de plaat die embryo's bevat, waardoor het testsysteem efficiënt en kosteneffectief is.

Snelle evaluatie van de toxiciteit van chemische verbindingen met behulp van zebravis embryo's

Zebrafish xenograft modellen zorgen voor high-throughput drug screening en fluorescerende beeldvorming van menselijke kankercellen in een in vivo micro-omgeving. We ontwikkelden een workflow voor grootschalige, geautomatiseerde medicijnscreening op patiënt-afgeleide leukemiemonsters bij zebravissen met behulp van een geautomatiseerde fluorescentiemicroscoop uitgeruste imaging unit.

Drug Screening van primaire patiënt afgeleid tumor Xenografts bij zebravissen

Hier presenteren we een uitgebreide gedragstestbatterij, inclusief de nieuwe tank-, Shoaling- en sociale voorkeurstests, om de potentiële neurotoxische effecten van chemicaliën (bijv. methamfetamine en glyfosaat) op volwassen zebravissen effectief te bepalen met behulp van een enkele tank. Deze methode is relevant voor neurotoxiciteit en milieuonderzoek.

Beoordeling van neurotoxiciteit bij volwassen Danio rerio met behulp van een reeks gedragstests in een enkele tank

Een nieuwe intraperitoneale (IP) injectiemethode bij volwassen zebravissen wordt beschreven. Bij het hanteren van giftige stoffen zoals doxorubicine is deze procedure effectiever dan de twee eerder gerapporteerde IP-methoden. De techniek is zo ontworpen dat het gemakkelijk kan worden toegepast door onderzoekers met beperkte ervaring in het zebravismodel.

Een intraperitoneale injectietechniek bij volwassen zebravissen die lichaamsschade en bijbehorende sterfte minimaliseert

Dit protocol beschrijft een screeningprocedure voor geneesmiddelen bij zebravislarven 3-7 dagen na de bevruchting, gevolgd door morfologische beoordeling.

Screening van kleine moleculen en toxiciteitstesten bij zebravislarven in een vroeg stadium

Deze studie presenteert een gelatine-gebaseerde voedingsmethode die precieze, niet-invasieve orale toediening van geneesmiddelen op basis van lichaamsmassa bij volwassen zebravissen mogelijk maakt. Het protocol toont betrouwbare voeracceptatie aan en, als bewijs van het principe, succesvolle levering van MK-801, wat resulteerde in de verwachte gedragseffecten.

Een eenvoudige en precieze voergebaseerde benadering van orale medicijnafgifte bij vissen

Leer een nieuwe methode voor gelijktijdige dosering van ethanol aan groepen zebrafish (Danio rerio) om terugtrekkingsgedrag te bestuderen. Deze techniek maakt nauwkeurige analyse van angstniveaus mogelijk.

Een nieuwe methode van de Drug aan Multiple zebravis ( Danio rerio) En de kwantificering van Terugtrekking

Meer video's verkennen