Name: Real-time cytotoxiciteitsassays in humaan volbloed (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: Leer real-time cytotoxiciteitsassays in humaan volbloed met enkele-celresolutie. Deze methode combineert high-throughput imaging met fluorescentiemicroscopie voor kwantitatieve analyse van antilichaam-gemedieerde kankerceldoding.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij danken National Cancer Institute IMAT programma van NIH voor de financiering van dit werk [R33 CA174616-01A1].

1. Doel Celbereiding <ol><li> Handhaaf doelwitcellen (bijv. Raji lymfoomcellen) in kweekmedium (RPMI 1640-kweekmedium met 10% door warmte geïnactiveerd foetaal runderserum (FBS), 4nM L-glutamine en 500 IE / ml penicilline / streptomycine) bij 37 ° C in een 5% CO2 incubator. </li><li> Centrifugeer het monster om de doelcellen pellet in een 15 ml buis. Centrifugeren varieert met verschillende celtypen; centrifugeer gedurende 3 min bij 468 xg gedurende Raji cellen. </li><li> Zuig eerst eventuele luchtbellen gevormd op het oppervlak van de bovenstaande, en verwijder de gehele supernatant. </li><li> Voeg 10 ml PBS aan de buis. Re-schorten de cellen door pipetteren de oplossing op en neer meerdere malen te breken van de cel klomp. </li><li> Centrifugeer het monster gedurende 3 min bij 468 x g. </li><li> Zuig eventuele luchtbellen gevormd op het oppervlak van de bovenstaande, en verwijder de gehele supernatant. </li></ol> 2. Bereiding van Cell Microarrays <ol><li> Obtain celaanhechting 96 well plaat kits of single cell array-8 goed kamer dia&#39;s (zie tabel van materialen / reagentia). </li><li> Breng 1.2 ul van de activator aan het DNA reagens uit de set. Cap de flacon, omkeren, en schud om de oplossing te mengen. </li><li> Laat de oplossing reageren gedurende 20 min bij kamertemperatuur. </li><li> Breng de gemengde oplossing aan de doelcellen pellet (in de 15 ml buis). </li><li> Voeg groene fluorescentie cytosolische kleurstoffen bij een uiteindelijke concentratie van 500 nM. </li><li> Incubeer de doelcellen met de gemengde oplossing en de kleurstof gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur op een schudapparaat. </li><li> Was de cellen tweemaal met 5 ml PBS en resuspendeer de cellen in 10 ml groeimedium. </li><li> Breng 100 pi van de oplossing uit stap 2.7 in elk putje. Tel het aantal cellen met behulp van een hemacytometer. Zorg ervoor dat mobiele nummers variëren tussen 5 × 4-1 oktober × 10 6 cellen per well. </li><li> Na 10-15 min incubatie bij kamertemperatuur voorzichtig te wassen de monsters tweemaal met 200-300 ul groeimedia naar ongebonden cellen te verwijderen. OPMERKING: Over 5-10 ul groeimedia blijft in elk putje na het wassen. </li></ol> 3. volbloed cytotoxiciteitsbepalingen <ol><li> Voeg 180 ul humaan totaal bloed elk monster goed. </li><li> Verkrijgen Anti-CD20 antilichaam oplossing bij 5 mg / ml, en uitvoeren seriële verdunning om 50, 20, 10, 5, 2, 1, 0,5 ug / ml anti-CD20 antilichaam oplossing in 1,5 ml buizen. Voeg 20 pl van elke concentratie van anti-CD20 antilichaam aan elk monster goed maken triplo. </li><li> Voeg Propidiumjodide bij een uiteindelijke concentratie van 500 nM in elk putje. </li><li> Incubeer de verkregen plaat bij 37 ° C met 5% CO2 gedurende 16 uur. </li><li> Beeld de cellen op de dia&#39;s of 96 well platen met een automatische beeldvormingssysteem met 8x vergroting. </li><li> Gebruik de celtelling programma automatisch beeldvormingssysteem het kwantificeren. OPMERKING: De software van de automatische imaging systeem biedt eenvoudigestap voor stap handelingen voor celtelling. Het protocol van het gebruik van deze software is te vinden op de website van provider. </li><li> Selecteer [Bekijken Resultaten] vanaf de hoofdpagina van de software. </li><li> Selecteer [het bestand hebt opgeslagen voor de monsters]. </li><li> Eerste poort FITC gemiddelde intensiteit&gt; 50, dan poort TxRed gemiddelde intensiteit&gt; 20. </li><li> Selecteer [Plate Overzicht]. </li><li> Selecteer [Export Tables]. OPMERKING: Het percentage doden van cellen formule van het programma is hieronder weergegeven: % Targeted killing = (# van cellen gekleurd zowel groen als rood / # van cellen gekleurd groen) * 100% </li></ol>

<ol><li>Hutchinson, L., Kirk, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+drug+attrition+rates--where+are+we+going+wrong%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">High drug attrition rates--where are we going wrong.</a> Nat Rev Clin Oncol. 8, 189-1890 (2011).</li>
<li>Moreno, L., Pearson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attrition+rates+be+reduced+in+cancer+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Informa+healthcare%22%5BJournal%5D)">Attrition rates be reduced in cancer drug discovery.</a> Informa healthcare. 8, 363-368 (2013).</li>
<li>Seok, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+Host+Response+to+Injury%2C+Large+Scale+Collaborative+Research+Program.+Genomic+responses+in+mouse+models+poorly+mimic+human+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Inflammation and Host Response to Injury, Large Scale Collaborative Research Program. Genomic responses in mouse models poorly mimic human inflammatory diseases.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110, 3507-3512 (2013).</li>
<li>Suntharalingam, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+storm+in+a+phase+1+trial+of+the+anti-CD28+monoclonal+antibody+TGN1412%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Cytokine storm in a phase 1 trial of the anti-CD28 monoclonal antibody TGN1412.</a> N Engl J Med. 355, 1018-1028 (2006).</li>
<li>Eastwood, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibody+TGN1412+trial+failure+explained+by+species+differences+in+CD28+expression+on+CD4%2B+effector+memory+T-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibody TGN1412 trial failure explained by species differences in CD28 expression on CD4+ effector memory T-cells.</a> Br J Pharmacol. 161, 512-526 (2010).</li>
<li>Hsiao, S. C., Liu, H., Holstlaw, T. A., Liu, C., Francis, C. Y., Francis, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real+time+assays+for+quantifying+cytotoxicity+with+single+cell+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Real time assays for quantifying cytotoxicity with single cell resolution.</a> PLoS One. 8, 10-1371 (2013).</li>
<li>Wang, S. Y., Weiner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rituximab%3A+a+review+of+its+use+in+non-Hodgkin%E2%80%99s+lymphoma+and+chronic+lymphocytic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Rituximab: a review of its use in non-Hodgkin’s lymphoma and chronic lymphocytic leukemia.</a> Expert Opin Biol Ther. 8, (2008).</li>
<li>Dalle, S., Thieblemont, C., Thomas, L., Dumontet, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+in+clinical+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Agents+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies in clinical oncology.</a> Anticancer Agents Med Chem. 8, 523-532 (2008).</li>
<li>Brunner, K. T., Mauel, J., Cerottini, J. C., Chapuis, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assay+of+the+lytic+action+of+immune+lymphoid+cells+on+51-Cr-labelled+allogeneic+target+cells+in+vitro%3B+inhibition+by+isoantibody+and+by+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Quantitative assay of the lytic action of immune lymphoid cells on 51-Cr-labelled allogeneic target cells in vitro; inhibition by isoantibody and by drugs.</a> Immunology. 14, 181-196 (1968).</li>
<li>Korzeniewski, C., Callewaert, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enzyme-release+assay+for+natural+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">An enzyme-release assay for natural cytotoxicity.</a> J Immunol Methods. 64, (1983).</li>
<li>Gerlier, D., Thomasset, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+MTT+colorimetric+assay+to+measure+cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Use of MTT colorimetric assay to measure cell activation.</a> Immunol Methods. 94, 57-63 (1986).</li>
<li>Toriello, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+microfluidic+bioprocessor+for+single-cell+gene+expression+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Integrated microfluidic bioprocessor for single-cell gene expression analysis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, (2008).</li>
<li>Douglas, E. S., Hsiao, S. C., Onoe, H., Bertozzi, C. R., Francis, M. B., Mathies, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA-barcode+directed+capture+and+electrochemical+metabolic+analysis+of+single+mammalian+cells+on+a+microelectrode+array%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">DNA-barcode directed capture and electrochemical metabolic analysis of single mammalian cells on a microelectrode array.</a> Lab on a Chip. 9, 2010-2015 (2008).</li>
<li>Mayr, L. M., Bojanic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+trends+in+high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Novel trends in high-throughput screening.</a> Current opinion in pharmacology. 9, 580(2009).</li>
<li>Zanella, F., Lorens, J. B., Link, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+content+screening%3A+seeing+is+believing%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">High content screening: seeing is believing.</a> Trends in Biotechnology. 28, 237-245 (2010).</li>
<li>Coelho, J., P, L., Quinn, S., Murphy, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+image+analysis+for+high-content+screening+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">Automated image analysis for high-content screening and analysis.</a> J Biomol Screen. 15, 726-734 (2010).</li>
<li>Sundberg, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+and+ultra-high-throughput+screening%3A+solution-+and+cell-based+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">High-throughput and ultra-high-throughput screening: solution- and cell-based approaches.</a> Current Opinion in Biotechnology. 11, 47(2000).</li>
<li>Simmons, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+medicine+is+more+than+genomic+medicine%3A+confusion+over+terminology+impedes+progress+towards+personalized+healthcare%5BTitle%5D)+AND+%22PERS+MED%22%5BJournal%5D)">Personalized medicine is more than genomic medicine: confusion over terminology impedes progress towards personalized healthcare.</a> PERS MED. 9, 85(2012).</li>
</ol>

Auteurs hebben geen concurrerende financiële belangen.

WCA is een cruciaal in vitro anti-kanker screening tool met enkele cel resolutie 12-16, idealiter gebruikt na de traditionele doelgroep screenings zoals CDC en ADCC testen 9-11, en ​​voordat preklinische dierproeven. Momenteel, zijn primaire doel screening assays zoals CDC of ADCC testen allemaal uitgevoerd in een vereenvoudigd medium of een buffersysteem. Echter, kandidaat-geneesmiddelen die werkzaamheid vertonen in deze vereenvoudigde buffersysteem zijn niet altijd effectief in de comple...

Recente vooruitgang in de farmaceutische industrie heeft geleid tot een toenemende belangstelling realiseren van de specifieke identificatie van tumorcellen antilichamen en gepersonaliseerde kankerbehandelingen; zijn echter een aantal belemmeringen bij het proces. Slechts 5% van de middelen die antikanker activiteit in preklinische ontwikkeling heeft zijn licentie na het tonen van onvoldoende werkzaamheid in fase II-III testen 1,2. De preklinische strategieën (zowel in vitro en in vivo) suboptimaal vele voorbeelden blijkt dat antitumorgeneesmiddelen zich anders gedragen in menselijke en in proefdieren vooral door hun verschillende bloedcomponenten 3-5. Om de noodzaak van een anti-tumor drug discovery platform te pakken en om een ​​check-point voor dure dierproeven en klinische proeven te verschaffen, is een humaan volbloed cytotoxiciteit assay (WCA) voorgesteld voor de evaluatie van anti-tumor werkzaamheid van het geneesmiddel in een meer relevante biologische omgeving. Hetvolbloed cytotoxiciteit assay kan worden gebruikt om de respons van de individuele cellen om antilichamen en andere geneesmiddelkandidaten in humaan volbloed evalueren. De WCA wordt ontwikkeld door het opnemen van high-throughput cell technologie voor plaatsbepaling met high-throughput en high-inhoud imaging 6. Door gebruik van een geautomatiseerd beeldvormingssysteem, kan het aantal van zowel levende en dode cellen te bepalen met een hoge nauwkeurigheid. Vanwege het feit dat de doelcellen worden geïmmobiliseerd op dezelfde focal plane, WCA kan kwantitatieve analyse cytotoxiciteit in realtime verschaffen zonder het verwijderen van rode bloedcellen. Bovendien is het automatisch afbeeldingssysteem verschaft verscheidene voordelen zoals dat alleen doelcellen dat de opgegeven criteria bereikt (bijv., Fluorescent gelabelde cellen en celmorfologie) worden afgesloten en verwerkt. Ook maakt de productie van 144 platen per dag. Bijgevolg deze imaging mogelijkheden en doorvoer maakt werking van high-cNHOUD en high-throughput experimenten gelijktijdig. Door het combineren WCA en het automatische beeldvormingssysteem kunnen hoge throughput kwantitatieve cel cytotoxiciteit analyse worden verwezenlijkt in een biologisch relevante omgeving.

<table><tbody><tr><td>Cell attachment 96 well plate kits&nbsp;</td><td>Adheren</td><td>AP9601</td><td></td></tr><tr><td>Suspension Single cell array 8 well chamber slide</td><td>Adheren</td><td>SS0801</td><td></td></tr><tr><td>Adherent Single cell array 8 well chamber slide</td><td>Adheren</td><td>SS0802</td><td></td></tr><tr><td>Lymphoma cell line CD20+</td><td>ATCC</td><td>CCL-86</td><td>Raji cellen</td></tr><tr><td>Lymphoma cell line CD20-</td><td>ATCC</td><td>CRL-8083</td><td>MC/CAR</td></tr><tr><td>RPMI 1640 met L-glutamine</td><td>Life Technologies</td><td>11875-119</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovien serum</td><td>Thermo</td><td>SH30070.01HI</td><td></td></tr><tr><td>Peni/Strep</td><td>Life Technologies</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td>Cytosolische kleurstof</td><td>Life Technologies</td><td>C7025</td><td>Cell Tracker Green</td></tr><tr><td>Rituxan (Biosimilaire)&nbsp;</td><td>Eureka Therapeutics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Menselijk volbloed</td><td>Allcells</td><td>WB001</td><td></td></tr><tr><td>Propidiumjodide</td><td>Sigma</td><td>P4170-10MG</td><td></td></tr><tr><td>Automatisch beeldvormingssysteem</td><td>Molecular Devices</td><td>Contact Vendor</td><td>Cell Reporter</td></tr><tr><td>Celtellingsprogramma</td><td>Molecular Devices</td><td>Contact Vendor</td><td>Cell Reporter</td></tr></tbody></table>

real-time cytotoxiciteitsassays in humaan volbloed

Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood

Een live-cell based volbloed cytotoxiciteit assay (WCA), dat de toegang tot temporele informatie van de totale cel cytotoxiciteit laat is ontwikkeld met high-throughput cell technologie voor plaatsbepaling. De beoogde tumorcel populaties eerst voorgeprogrammeerd immobilisatie in een array formaat en gelabeld met groen fluorescent cytosolische kleurstoffen. Na de cel matrix formatie, worden antilichamen drugs toegevoegd in combinatie met humaan volbloed. Propidium jodide (PI) toegevoegd aan celdood. De celmatrix wordt geanalyseerd met een automatische beeldvormingssysteem. Terwijl cytosole kleurstof etiketteert de beoogde tumorcel populatie, PI labelt de dode tumorcel populaties. Aldus kan het percentage van kanker doelwit celdoding gemaakt worden door het aantal overlevende doelcellen om het aantal dode doelcellen. Met deze methode, de onderzoekers in staat zijn om toegang te krijgen tot tijdsafhankelijke en dosis-afhankelijke cel cytotoxiciteit informatie. Opmerkelijk, geen gevaarlijke radiochemicaliën. De WCA hier gepresenteerde is getest met lymfoom, leukemie en solide tumor cellijnen. Daarom WCA stelt onderzoekers in staat om de werkzaamheid van geneesmiddelen te evalueren in een zeer relevante ex vivo toestand.

Anti-CD20 antilichamen en lymfoom cellen (Raji cellen en MC / CAR) werd gekozen als modelsysteem voor de volbloed cytotoxiciteit assay (WCA) 7,8 demonstreren. Raji cellen hadden hoge kopieaantal van CD20 op het celoppervlak, terwijl MC / CAR cellen had lage kopieaantal van CD20 op hun membraan. Doelcellen werden eerst gekleurd groen met groene fluorescentie cytosolische kleurstoffen en gerangschikt op de 96-well plaat. 10.000 - 50.000 doelwit lymfoomcellen werden geïmmobiliseerd in elk putje. 180 ul vers afge...

De volbloed cytotoxiciteit assay (WCA) is een cytotoxiciteit assay ontwikkeld door het opnemen van high-throughput cell technologie voor plaatsbepaling met fluorescentie microscopie en geautomatiseerde beeldverwerking. Hier beschrijven we hoe lymfoomcellen behandeld met een anti-CD20 antilichaam kan worden geanalyseerd real-time in humaan volbloed kwantitatieve cellulaire cytotoxiciteit analyse.

Real-time cytotoxiciteitsassays in humaan volbloed

A live cell-based whole blood cytotoxicity assay (WCA) that allows access to temporal information of the overall cell cytotoxicity is developed with ...

Het doel van deze procedure is om de cytotoxiciteit van doelkankercellen in menselijk volbloed met een nauwkeurigheid van één cel te meten. Eerst wordt een enkele celaray van doelkankercellen gegenereerd. Menselijke volbloed wordt aan de celaray toegevoegd en geneesmiddelen zoals antilichamen worden toegepast. De cellen worden vervolgens geïncubeerd met een celviabiliteitskleurstof, zoals propidiumjodide, en hoogwaardige beeldvorming wordt gebruikt om het aantal dode doelkankercellen te meten dat rood gekleurd is, wat uiteindelijk de effectiviteit van de geneesmiddelen voor cytotoxiciteit aantoont.Het belangrijkste voordeel van deze technologie boven bestaande methoden, zoals LDH en chroom-assay, is dat het doden van kankercellen kan worden uitgevoerd in menselijk volbloed met beeldvormingsmogelijkheden. Deze methode kan de cytotoxiciteit van antilichamen in vitro evalueren vóór dierproeven. Begin met het verkrijgen van cellen voor aanhechting. 96. Welp plate kits of eencelligheid acht wel kamer slides hier, de 96 well plate zal worden gebruikt.Breng 1,2 microliter van de activator aan op de buis met DNA-reagens uit de kit, sluit de fles, draai hem om en schud hem voorzichtig om de

real-time-cytotoxicity-assays-in-human-whole-blood

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Het chromium afgifte assay, een gemeenschappelijke test voor het detecteren cytotoxische T-celactiviteit, heeft verschillende beperkingen. Gebruikmakende van antigeen-specifieke CD8 + T-cellen en humane borsttumor lijn, SKBR3, in dit artikel is een impedantie-gebaseerde aanpak onderzocht kan detecteren celdoding.

Het bepalen van optimale cytotoxische activiteit van de mens Her2neu Specifieke CD8 T cellen door vergelijking van de Cr51 afgifte test aan de xCELLigence System

This video demonstrates an in vitro technique to measure the cytotoxic ability of cytokine-induced killer (CIK) cells against cancer cells. Upon co-culturing target cancer cells with CIK cells, the dead cancer cells are identified using a fluorescent viability dye and are quantified using flow cytometry, estimating the cytotoxic effect of CIK cells.

An In Vitro Assay to Study the Cytotoxic Capability of Cytokine-Induced Killer Cells

This video demonstrates a method for monitoring CAR T cell activity against cancer cells through real-time electrical impedance measurements. Tracking changes in impedance assesses the effectiveness of CAR T cells in inducing cancer cell cytolysis, providing insights into their cytotoxic capabilities.

A Real-Time In Vitro Cytolysis Assay to Evaluate the Potency of CAR T Cells

We beschrijven een single-cell high-throughput assay voor cytotoxiciteit van T-cellen te meten wanneer geïncubeerd met tumor doelcellen. Deze werkwijze gebruikt een dichte, elastomeer reeks sub-nanoliter wells (~ 100.000 putjes / array) ruimtelijk beperken de T-cellen en doelcellen met gedefinieerde verhoudingen en is gekoppeld met fluorescentie microscopie effector-target conjugatie en daaropvolgende apoptose controleren.

Quantitative High-throughput Eencellige cytotoxiciteit T cellen

Dit protocol beschrijft een gevoelige, cel-gebaseerde cytotoxiciteit assay. Door het tellen van de afname in frequentie van levende doelwit CD4+ T-cellen in aanwezigheid van een toenemend aantal effector CD8+ T-cellen, staat deze assay toe de directe beoordeling van de cytolytische activiteit van antigeen-specifieke CD8+ T-cellen.

Celgebaseerde flowcytometrie-test om cytotoxische activiteit te meten

Dit werk beschrijft een geavanceerd werkproces voor de nauwkeurige en snelle bepaling van het NK (Natural Killer) celgetal en de NK celcytotoxiciteit in menselijke bloedmonsters.

Flow cytometrische analyse van de NK-cel lytische activiteit in humaan volbloed

Een stroom cytometry gebaseerde methode om kwantitatief de cytotoxische activiteit van menselijke natural killer cellen wordt hier weergegeven.

Een stroom Cytometry gebaseerde cytotoxiciteit Assay voor de beoordeling van menselijke NK cel activiteit

We beschrijven een kwantitatieve real-time in vitro cytolysis assay systeem om de potentie van chimere antigeen receptor T-cellen gericht op vloeibare en solide tumorcellen te evalueren. Dit protocol kan worden uitgebreid om andere immuuneffector cellen te beoordelen, evenals combinatie behandelingen.

Een real-time potentie test voor Chimerische antigeen receptor T-cellen gericht op vaste en hematologische kankercellen

Op volbloed gebaseerde immunoassays bieden een gemakkelijk en hulpbronnenefficiënt hulpmiddel om antigeenspecifieke immuniteit te analyseren voor diagnostische en onderzoeksdoeleinden. Dit artikel biedt een geoptimaliseerd volbloedprotocol met dubbele co-stimulatie voor uitgebreide analyse van de immuniteit van de gastheer tegen schimmel- en virale pathogenen, inclusief een versie met een laag volume voor pediatrische patiënten en kleine dieren.

Volbloedtest met dubbele co-stimulatie voor antigeenspecifieke analyse van de immuniteit van de gastheer tegen schimmel- en virale pathogenen

Hier beschrijven we een methode voor het maken van dubbele emulsiedruppeltjes die één T-cel en een kankerdoelcel inkapselen om celdoding op eencellig niveau te onderzoeken. Deze methode maakt dubbele kwantificering mogelijk van zowel cytotoxische moleculen als apoptose van doelcellen binnen een grote populatie T-cellen.

Op druppels gebaseerde cytotoxiciteitstest om chimere antigeenreceptor-T-cellen op eencellig niveau te beoordelen

Dit protocol biedt een gestandaardiseerde in vitro. workflow voor consistente meting van natuurlijke, chimere antigeenreceptor-gemedieerde en antistofafhankelijke cytotoxiciteit van menselijke natuurlijke moordenaars met behulp van live-cell imaging en flowcytometrie.

Kwantificatie van NK-cel cytotoxiciteit versterkt door chimerische antigeenreceptoren en therapeutische antilichamen met behulp van live-cell imaging en flowcytometrie

Leer real-time cytotoxiciteitsassays in humaan volbloed met enkele-celresolutie. Deze methode combineert high-throughput imaging met fluorescentiemicroscopie voor kwantitatieve analyse van antilichaam-gemedieerde kankerceldoding.

Real-time cytotoxiciteitsassays in humaan volbloed

Meer video's verkennen