Name: Embolische midden cerebrale slagader occlusie (MCAO) voor ischemische beroerte met homologe bloedstolsels in Ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Leer een embolische midden cerebrale slagader occlusie methode voor ischemische beroerte met homologe bloedstolsels in ratten. Dit model bootst menselijke beroerte nauwkeurig na voor preklinisch onderzoek naar trombolytische therapieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door subsidies van de National Institutes of Health HL087990 (G.L.).

Ethiek Verklaring: Mannelijke volwassen Sprague-Dawley ratten (met een gewicht van 330-380 g) werden gebruikt in dit protocol. Dit protocol werd goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) bij de LSU Health Science Center-Shreveport en is in overeenstemming met de &#39;Gids voor de zorg en het gebruik van proefdieren&#39; (achtste editie, National Academy of Sciences, 2011 ). 1 Voorbereiding van Modified PE-50 Tube <ol><li> Het bezit van een 30 cm lange PE-50 buis boven een gashaard met de handen, geleidelijk zachter de buis. Voorzichtig rekken van de buis. </li><li> Selecteer een punt op de verstrekte buis met een digitale schuifmaat (figuur 1), markeren, en snijd de gemodificeerde PE-50 buis in een 25 cm lang segment met een 1 cm lang tip (buitendiameter: 0,30-0,34 mm). </li></ol> 2 Voorbereiding van homologe Bloedstolsels <ol><li> Verdoven van de rat met isofluraan (5% voor inductie, 2-3% voor onderhoud) in 70% N 2 O en 30% O &lt;sub&gt; 2 door een gezichtsmasker voor bloedafname. Bevestig verdoving door een teen knijpen. </li><li> Voeren femorale arteriële canule van een donor ratten met gepubliceerde methode 4 en overdragen slagader bloed direct in een 20 cm lange PE-50 buis. Plaats de buis 2 uur bij kamertemperatuur stollen van bloed, en behoudt de buis gedurende 22 uur bij 4 ° C. Opmerking: Canulatie wordt uitgevoerd met behulp van een aseptische techniek zoals beschreven in stap 3.1. De donor rat wordt teruggewonnen voor verdere bemonstering. </li><li> Snij de PE-50 buis in 50 mm segmenten en het spoelen van het stolsel uit de buis in een steriele petrischaal met een fysiologische zoutoplossing. </li><li> Breng de 50 mm lange stolsel in een 60 mm PE-10 buis en sluit elk uiteinde van de PE-10 buis een 20 cm lange PE-50 buis verbonden met 1 ml spuit met zoutoplossing met 23 G naald (figuur 2) . </li><li> Schuif het stolsel door continu alternerende beweging van de ene spuit naar de andere gedurende 5 min, die bloedcellen uit kan verwijderenhet stolsel en het minimaliseren van de fragiele van extravasculair gestolde stolsel, zonder verstoring van de fibrine-kern. </li><li> Snijd de klonter in een 40 mm lang segment en breng de klonter segment in een gemodificeerde PE-50 katheter zoals beschreven in stap 1.2 onder aseptische omstandigheden. Opmerking: Alle PE buis wordt gesteriliseerd met ethyleenoxide. </li></ol> 3 Embolische midden cerebrale slagader occlusie (figuur 3A, B) <ol><li> Steriliseer alle chirurgische instrumenten autoclaaf (minimaal 121 ° C, 15 psi, gedurende 15 min). Ontsmetten van de operatie tafel en de bijbehorende chirurgische apparatuur met 70% ethanol. </li><li> Verdoven de rat met isofluraan zoals beschreven in stap 2.1. Test de diepte van de anesthesie door het uitvoeren van een teen knijpen aan beide achterste poten, en alle waargenomen beweging (terugtrekken van de poot) geeft aan dat het dier is niet voldoende verdoofd om de operatie te doen. Breng een kleine hoeveelheid van de dierenarts zalf op beide ogen tot droog te voorkomen terwijl ze onder narcose. Scheer de vacht op de ventrale nek en hoofd reregio&#39;s met een elektrische tondeuse om de huid bloot. </li><li> Plaats de rat in rugligging op een verwarmingselement. Plaats een rectale sonde, controle en onderhoud van de lichaamstemperatuur tussen 36,5-37,5 ° C met behulp van een homeothermic deken regeleenheid. </li><li> Ontsmet de geschoren huid rondom bont met 10% povidon-jood, gevolgd door 70% ethanol. </li><li> Maak een 2-cm-lange middellijn incisie op de hals onder een stereomicroscoop. Gebruik retractors aan het chirurgische veld bloot te leggen en te ontleden de juiste gemeenschappelijke halsslagader (CCA), externe halsslagader (ECA), de interne halsslagader (ICA), en pterygopalatine slagader (PPA) vrij van omliggende zenuwen en fascia (Figuur 3A). Opmerking: Voor de operatie, veranderen steriele handschoenen als er geen assistent helpt om het dier te bereiden. </li><li> Ontleden de CCA vrij van de omliggende zenuwen (zonder nadelige gevolgen voor de nervus vagus) en plaats een steriele 5-0 zijden hechtdraad onder de slagader. Bind een slip knoop (# 1) en pak de hechtdraad met een kleine Hemostat en trek onderwezen in de richting van het lichaam. </li><li> Ontleden van de Europese Rekenkamer en de twee takken, de occipitale slagader (OA) en de superieure schildklier slagader (STA). Stollen twee takken met behulp van een veterinaire elektrochirurgische eenheid. Leg twee stukken van steriele 6-0 zijde hechtingen onder de Europese Rekenkamer. </li><li> Scheid de beide zijde onder de slagader, een stuk naar de kop (distale uiteinde) en de andere naar het lichaam geplaatst. Das een strakke ligatuur (# 2) aan de kant die het dichtst bij het hoofd, pak de zijde met kleine hemostats en trek onderwezen in de richting van het hoofd. Bereid een losse knot (# 3) met de andere zijde om later te gebruiken. </li><li> Ontleden de ICA en de PPA van de omliggende zenuwen (zonder nadelige gevolgen voor de nervus vagus). Bind de PPA met een 6-0 hechtdraad (# 4). Maak een slip knoop met 6-0 hechtdraad rond de ICA (# 5). Of knip de ICA met een microvasculaire clip. </li><li> Knip een klein gaatje (1/2 thru) naar de Europese Rekenkamer tussen de strakke (2 #) en losse (# 3) ligaturen met een Vannas-stijl voorjaar schaar. Plaats de aangepaste PE-50-bade met bloedstolsel in de incisie en vooraf aan de splitsing van de CCA. Draai de losse ligatuur (# 3) rond het lumen net genoeg om veilig te bewaren mobiliteit van de in-woning buis. </li><li> Afgesneden van de Rekenkamer op de plaats van kleine gat om de stomp te bevrijden en de positie van de stomp onder de splitsing van de Rekenkamer en ICA; Dit zal toelaten de gewijzigde buis gemakkelijk in de ICA. Open de ICA en voorzichtig vooraf de buis uit het lumen van de ERK in de ICA totdat de punt van de catheter de oorsprong van de MCA bereikt (~ 17 mm van de bifurcatie). Opmerking: Voordat steek de punt van de buis in de ECA, steriele het buitenste oppervlak van de buis met 70% ethanol, en daarna wassen met steriele fysiologische zoutoplossing. </li><li> Injecteer de prop door de gemodificeerde PE-50 katheter samen met 10 pi zoutoplossing dan 10 seconden met 100 pl Hamilton spuit (Figuur 3B). </li><li> Trek de katheter van de Rekenkamer 5 min later. Bind de Rekenkamer en heropenen CCA. Hecht de incisie in de nek. </li></ol> 4 Monitoring Regionale Cerebral Blood Flow (rCBF) <ol><li> Vóór MCA occlusie, maak 1,2 cm middellijn incisie in de hoofdhuid aan de schedel bot bloot. Verwijder de weefsels op de schedel bot met een tandheelkundig schraper en steriele wattenstaafjes. Opmerking: Voor de operatie, het blootgestelde hoofdhuid stippellijn rond bont ontsmet met 10% povidon-jood, gevolgd door 70% ethanol. </li><li> Boor een 1,5 mm diameter boorgat zich op 2 mm posterior en 5 mm lateraal van de bregma met 0,7 mm roestvrij staal sferische burr (figuur 4). OPMERKING: Houd de dura intact. </li><li> Plaats de probe 0,5 mm boven het oppervlak dura. Controleer de rCBF met 0 (baseline), 5, 15, 30, 60, 90 en 120 minuten na embolisatie en verder met 5, 15, 30, 45 en 60 minuten na intraveneuze toediening van tPA. Na de laatste meting van rCBF, wordt de hoofdhuid incisie gesloten met hechtdraad. Opmerking: Voorafgaand aan nek incisie meten we rCBF als basislijn voor MCA occlusion. Bericht MCA occlusie meten we rCBF na hechtdraad sluiting van nek incisie. Zo wordt de nek incisie steriel bewaard. </li></ol> 5 Post-operatieve Zorg <ol><li> Injecteer 2,5 ml zoutoplossing subcutaan om uitdroging te voorkomen en injecteer Buprenex (0,05 mg / kg, SC) onmiddellijk na de operatie en elke 6-12 uur als nodig voor pijnbestrijding. </li><li> Stop isofluraananesthesie. Plaats de rat in een 37 ° C veterinaire recovery kamer (houden van dieren warm) en houd observatie. Het duurt meestal 10 min voor de rat om te herstellen van de anesthesie. Zet dan het dier in een gesteriliseerde kooi, plaats enkele bevochtigd eten in een petrischaal in de kooi, en terug de kooi om dieren sterilisatie kamer. </li><li> 24 uur na een beroerte, euthanaseren de rat met een overdosis van natriumpentobarbital (100 mg / kg lichaamsgewicht, IP). </li></ol> 6 neurologische uitval Score <ol><li> Voer de Bederson score voor en 2 uur na embolisatie. Gebruik een grading scale 0-3 zoals eerder beschreven 5: 0, waardoor de rat door staart, het dier uitstrekkende beide voorpoten naar de vloer en vertonen geen andere gebreken (normale verplaatsing); 1, het verhogen van de rat door de staart, buig de contralaterale voorpoot; 2, verminderde weerstand tegen zijdelingse druk (en voorpoot flexie) zonder cirkelen; 3, hetzelfde gedrag als graad 2 met cirkelen. OPMERKING: Ratten tonen Bederson score = 0 (geen tekort) op 2 uur na embolisatie worden uitgesloten van verdere studie. </li></ol>

<ol><li>Overgaard, K., Sereghy, T., Boysen, G., Pedersen, H., Høyer, S., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+reproducible+cerebral+infarction+using+thrombotic+blood+clot+emboli%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">A rat model of reproducible cerebral infarction using thrombotic blood clot emboli.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 12 (3), 484-490 (1992).</li>
<li>Zhang, R. L., Chopp, M., Zhang, Z. G., Jiang, Q., Ewing, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+focal+embolic+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">A rat model of focal embolic cerebral ischemia.</a> Brain Res. 766 (1-2), 83-92 (1997).</li>
<li>Dinapoli, V. A., Rosen, C. L., Nagamine, T., Crocco, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+MCA+occlusion%3A+a+precise+embolic+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Selective MCA occlusion: a precise embolic stroke model.</a> J. Neurosci. Methods. 154 (1-2), 233-238 (2006).</li>
<li>Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femoral+arterial+and+venous+catheterization+for+blood+sampling%2C+drug+administration+and+conscious+blood+pressure+and+heart+rate+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements.</a> J Vis Exp. 59 (3496), (2012).</li>
<li>Bederson, J. B., Pitts, L. H., Tsuji, M., Nishimura, M. C., Davis, R. L., Bartkowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+middle+cerebral+artery+occlusion%3A+evaluation+of+the+model+and+development+of+a+neurologic+examination%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination.</a> Stroke. 17 (3), 472-476 (1986).</li>
<li>Henninger, N., Bouley, J., Bråtane, B. T., Bastan, B., Shea, M., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+Doppler+flowmetry+predicts+occlusion+but+not+tPA-mediated+reperfusion+success+after+rat+embolic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Laser Doppler flowmetry predicts occlusion but not tPA-mediated reperfusion success after rat embolic stroke.</a> Exp Neurol. 215 (2), 290-297 (2009).</li>
<li>Zhu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Annexin+A2+combined+with+low-dose+tPA+improves+thrombolytic+therapy+in+a+rat+model+of+focal+embolic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Annexin A2 combined with low-dose tPA improves thrombolytic therapy in a rat model of focal embolic stroke.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 30 (6), 1137-1146 (2010).</li>
<li>Cheng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+protein+C+inhibits+tissue+plasminogen+activator-induced+brain+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Activated protein C inhibits tissue plasminogen activator-induced brain hemorrhage.</a> Nat Med. 2 (11), 1278-1285 (2006).</li>
<li>Taniguchi, H., Andreasson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypoxic-ischemic+encephalopathy+model+of+perinatal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The hypoxic-ischemic encephalopathy model of perinatal ischemia.</a> J Vis Exp. 21 (955), (2008).</li>
<li>Sicard, K. M., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+focal+brain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Transl+Stroke+Med%22%5BJournal%5D)">Animal models of focal brain ischemia.</a> Exp Transl Stroke Med. 1 (7), (2009).</li>
<li>Florian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neurosci Lett. 438 (2), 180-185 (2008).</li>
<li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li>
<li>Westendorp, W. F., Nederkoorn, P. J., Vermeij, J. D., Dijkgraaf, M. G., van de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-stroke+infection%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurol%22%5BJournal%5D)">Post-stroke infection: a systematic review and meta-analysis.</a> BMC Neurol. 11 (110), (2011).</li>
</ol>

We hebben geen potentiële belangenconflicten te onthullen.

In deze studie hebben we aangetoond een standaard werkwijze voor het uitvoeren van een embolische beroerte MCAO model in de rat, waarbij de oorsprong van de MCA wordt afgesloten door een fibrine-rijke stolsel. Het grote voordeel van dit model is: de occlusie van de steel van MCA met een fibrine-rijke bloedstolsel lijkt op trombo-embolische beroerte bij mensen, het embolische beroerte model kan preklinisch onderzoek fibrinolyse en dat dit model kan ontwikkelen een reproduceerbare en voorspelbare infarctvolume binnen de d...

A correction was made to <a href="/video/51956">Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats</a>. The institution information was updated.
The institution "Louisiana State University Health Science Center" was changed to "Louisiana State University Health Science Center, Shreveport".

A correction was made to <a href="/video/51956">Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats</a>. The institution information was updated.

Erratum: Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Beroerte is de derde doodsoorzaak in de Verenigde Staten, maar opties voor de behandeling van acute beroerte beperkt blijven. Momenteel intraveneuze infusie van recombinant tissue plasminogen activator (tPA) het oplossen van bloedstolsels is de meest efficiënte behandeling van acute ischemische beroerte. Echter, het gebruik van tPA beperkt door de nauw therapeutisch en verhoogd risico intracerebrale bloeding. Daarom is een model van een beroerte die geschikt zijn voor trombolytische onderzoek dringend nodig. De middelste cerebrale slagader (MCA) is de slagader meestal opgesloten in een beroerte bij mensen. Gericht op dit slagader, hebben veel dieren modellen van ischemische beroerte vastgesteld. Op dit moment zijn er twee belangrijke types van knaagdieren focale ischemie modellen door occlusie MCA ontwikkeld: hechtdraad MCAO model en embolische MCAO model. Hoewel MCAO modellen via de intraluminale hechtdraad techniek zijn op grote schaal gebruikt in-mechanisme gedreven beroerte onderzoek, deze hechtingen modellen nietnabootsen menselijke beroerte, zoals tot 80% van menselijke beroertes worden veroorzaakt door trombose of embolie. Echter, embolische beroerte model met behulp van bloedstolsels nauw bootst de menselijke beroerte en is geschikt voor trombolytische studie beschouwd. Dit embolische model werd voor het eerst ontwikkeld in ratten door Overgaard et al. 1 in 1992 en verder gekenmerkt door Zhang et al. In 1997 2 en door Dinapoli et al. In 2006 3. Hoewel embolische MCAO heeft opgedaan steeds meer aandacht, er zijn technische problemen door vele laboratoria. In dit artikel tonen we een standaard werkwijze voor het produceren embolische MCAO met homologe bloedstolsels in de volwassen rat, die een voorspelbare infarct binnen het grondgebied MCA kan ontwikkelen. De technieken die in dit artikel zou moeten helpen onderzoekers bij technische problemen te overwinnen voor het vaststellen van dit model voor een beroerte onderzoek.

<table><tbody><tr><td>rh-tPA</td><td>Chemisch</td><td>Genentech</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-trifenyltetrazoliumchloride</td><td>Chemisch</td><td>Sigma</td><td>T8877</td></tr><tr><td>Anesthesie-verdamper</td><td>Uitrusting</td><td>Soma Technology</td><td>Drager Vapor 19.1&nbsp;&nbsp;</td></tr><tr><td>Oplaadbare hoge snelheid microboor</td><td>Uitrusting</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-17</td></tr><tr><td>Gebogen schaar</td><td>Uitrusting</td><td>Fine Science Tools</td><td>14117-14</td></tr><tr><td>Dumont-tang (Medisch #7)</td><td>Uitrusting</td><td>Fine Science Tools</td><td>11270-20</td></tr><tr><td>Dumont-tang (Medisch #5)</td><td>Uitrusting</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td></tr><tr><td>Vannas-stijl veerschaar</td><td>Uitrusting</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-03</td></tr><tr><td>Veterinaire herstelkamer&nbsp;</td><td>Uitrusting&nbsp;</td><td>Peco Services&nbsp;</td><td>V1200&nbsp;&nbsp;</td></tr><tr><td>Genie plus spuitpomp</td><td>Uitrusting</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td></td></tr><tr><td>Rattenbreinmatrix</td><td>Uitrusting</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>RBMA-310C</td></tr><tr><td>Digitale schuifmaat&nbsp;</td><td>Uitrusting</td><td>World Precision Instruments</td><td>501601</td></tr><tr><td>Dissectiemicroscoop</td><td>Uitrusting</td><td>World Precision Instruments</td><td>PZMTIII-BS-LWD</td></tr><tr><td>Hamilton-spuit</td><td>Uitrusting</td><td>Hamilton</td><td>model 710</td></tr><tr><td>Homeotherme dekenregelunit</td><td>Uitrusting</td><td>Harvard Apparatus</td><td></td></tr><tr><td>Elektrische tondeuse</td><td>Uitrusting</td><td>Braintree Scientific</td><td>CLP-9931</td></tr><tr><td>Veterinaire elektrochirurgische unit</td><td>Uitrusting</td><td>MACAN Manufacturing Company</td><td>MV-9</td></tr><tr><td>Bloedflowmeter</td><td>Uitrusting</td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab 4/30</td><td>Uitrusting</td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>LabChart 7.2</td><td>software</td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>1 ml-spuit</td><td>Verbruiksartikel</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>309659</td></tr><tr><td>23 G-naald</td><td>Verbruiksartikel</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305143</td></tr><tr><td>30 G-naald</td><td>Verbruiksartikel</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305106</td></tr><tr><td>PE-50 slang</td><td>Verbruiksartikel</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>427517</td></tr><tr><td>PE-10 slang</td><td>Verbruiksartikel</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>427400</td></tr><tr><td>6-0 Zijde-draad</td><td>Verbruiksartikel</td><td>Harvard apparatus</td><td>723287</td></tr><tr><td>5-0 Zijde-draad</td><td>Verbruiksartikel</td><td>Harvard Apparatus</td><td>517607</td></tr></tbody></table>

embolische midden cerebrale slagader occlusie (mcao) voor ischemische beroerte met homologe bloedstolsels in ratten

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Klinisch trombolytische therapie met gebruik van recombinant tissue plasminogen activator (tPA) altijd de meest effectieve behandeling van acute ischemische beroerte. Echter, het gebruik van tPA beperkt door de nauw therapeutisch en verhoogd risico hemorragische transformatie. Er is een dringende behoefte aan geschikte takt modellen te ontwikkelen om nieuwe trombolytica en strategieën te onderzoeken voor de behandeling van ischemische beroerte. Op dit moment zijn er twee belangrijke types van ischemische beroerte modellen ontwikkeld bij ratten en muizen: intraluminale hechtdraad MCAO en embolische MCAO. Hoewel MCAO modellen via de intraluminale hechting techniek zijn op grote schaal gebruikt in mechanisme aangedreven stroke onderzoek, deze hechting modellen niet de klinische situatie nabootsen en zijn niet geschikt voor trombolytische studies. Van deze modellen is de embolische MCAO model nabootst menselijke ischemische beroerte en is geschikt voor preklinische onderzoek trombolytische therapie. Dit embolische model werd eerst ontwikkeld in ratten Overgaard ea. 1 in 1992 en verder gekenmerkt door Zhang et al. in 1997 2. Hoewel embolische MCAO heeft opgedaan steeds meer aandacht, er zijn technische problemen van veel laboratoria. Om de toenemende behoefte aan trombolytische onderzoek op te lossen, stellen we een zeer reproduceerbaar model van embolische MCAO in de rat, die een voorspelbare infarct volume binnen het gebied MCA kan ontwikkelen. In het kort wordt een gemodificeerd PE-50 buis voorzichtig geavanceerd van de externe halsslagader (ECA) in het lumen van de interne halsslagader (ICA) tot de punt van de catheter de oorsprong van de MCA bereikt. Door de catheter, wordt een homoloog bloedstolsel geplaatst aan de basis van de MCA. Om het succes van MCA occlusie te identificeren, werd de regionale cerebrale doorbloeding gecontroleerd, werden neurologische tekorten en infarct volumes gemeten. De technieken die in dit document moeten de onderzoekers van technische problemen voor de oprichting van dit model voor een beroerte onderzoek te overwinnen helpen. &lt;/ P&gt;

Laser Doppler flowmetry (LDF) werd gebruikt voor bewaking rCBF tijdens de inductie van cerebrale ischemie 6,7. Veel laboratoria waaronder ons laboratorium hebben gebruikt rCBF dieren met succesvolle MCA occlusie identificeren, maar de drempelwaarden basislijn varieerde tussen laboratoria die verband houden met de plaats van de meting. De sonde van de LDF is gepositioneerd op 2 mm posterior en 5 mm lateraal aan de bregma zoals eerder beschreven 6. rCBF werd bij 0, 5, 15, 30, 60, 90 en 120 minuten na...

In dit artikel demonstreren we een standaardmethode voor het produceren van een embolische middelste hersenslagaderocclusie met homologe bloedstolsels (rijk aan fibrine) bij volwassen ratten. Dit model bootst de menselijke ischemische beroerte na en is geschikt voor preklinisch onderzoek van trombolytische therapie voor ischemische beroerte.

Embolische midden cerebrale slagader occlusie (MCAO) voor ischemische beroerte met homologe bloedstolsels in Ratten

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Het algemene doel van deze procedure is om een model van embolie bij beroerte bij de rat te ontwikkelen. Dit wordt bereikt door eerst de gemeenschappelijke halsslagader tijdelijk met een schuifknoop te binden en de buitenhalsslagader zo strak mogelijk. Vervolgens wordt een losse naald om de ECA boven de bifurcatie geplaatst.De tweede stap is het isoleren van de tego palatine-slagader en de binnenhalsslagader en deze tijdelijk met schuifknopen te binden. Vervolgens wordt er een klein gaatje in de ECA gesneden tussen de strakke en losse ligaturen. Vervolgens wordt de gemodificeerde P 50-buis met een bloedstolsel in de ECA geïntroduceerd.Vervolgens wordt de katheter omgekeerd in de ICA en wordt de buis voorzichtig vooruitgeduwd tot het uiteinde van de katheter de oorsprong van de MCA bereikt. De laatste stap is om het bloedstolsel door de katheter samen met zoutoplossing te injecteren, en vervolgens vijf minuten later de katheter uit de ECA terug te trekken. Uiteindelijk, 24 uur na de beroerte, wordt TTC-kleuring gebruikt om de infarctgebieden in de hersenslices te tonen.Het belangrijkste voordeel van deze techniek, ons bestaande beroertemodel, zoals het MC-model, is dat dit emboliemodel voor beroerte bij de mens nauwgezet nabootst en gebruikt, geschikt voor voorstudie van SLI-therapie voor ischemische beroerte, waarbij wordt aangetoond dat de procedure zal worden Dr. A-poort mislukking uit mijn laboratorium. Dr.Gene heeft meer dan 10 jaar ervaring met het uitvoeren van rode circuitmodellen. Visuele demonstratie van deze methode is kritisch stappen is moeilijk te benoemen.Om de PE 50-buis geleidelijk te verzachten en uit te rekken, een 30 centimeter lange PE 50-buis boven een gasvlam. Selecteer een punt op de uitgerekte buis met een digitale schuifmaat. Snijd het vervolgens in een 25 centimeter lang segment met een een centimeter lang uiteinde en een buitendiameter tussen 0,30 en 0,34 millimeter.Verzamel vervolgens het femorale slagaderbloed van een geanesthetiseerde rat met een 20 centimeter lange PE 50-buis. Plaats de buis twee uur op kamertemperatuur om het bloed te laten stollen. Bewaar vervolgens de buis 22 uur bij vier graden Celsius.Snijd de PE 50-buis in 50 millimeter segmenten en spoel het stolsel uit de buis in een steriele petrischaal met zoutoplossing. Breng het 50 millimeter lange stolsel over in een 60 millimeter lange PE 10-buis. Verbind vervolgens elk uiteinde van de PE 10-buis met een 20 centimeter lange PE 50-buis, die is aangesloten op een een milliliter spuit met zoutoplossing met een 23 gauge naald om de bloedcellen te verwijderen zonder het fibrinehart te verstoren, verplaats het stolsel van de ene spuit naar de andere en vice versa continu gedurende vijf minuten. Snijd vervolgens het stolsel in een 40 millimeter lang segment en breng het stolselsegment over in een gemodificeerde PE 50-katheter.Steriliseer in deze procedure alle chirurgische instrumenten door autoclaving en ontsmet de operatietafel en de bijbehorende chirurgische apparatuur met 70% ethanol. Vervolgens verdooft u de rat met isofluorine en zorgt u voor de diepte van de anesthesie door een teenprik uit te voeren op de achterste voeten. Breng een kleine hoeveelheid zalf aan op de ogen om uitdroging te voorkomen.Plaats vervolgens de rat in rugligging op een verwarmingskussen. Scheer vervolgens de vacht op de ventrale halsregio met de elektrische tondeuse en desinfecteer de huid en de omliggende vacht met 70% ethanol. Breng een rectale sonde in en houd de lichaamstemperatuur op ongeveer 37 graden Celsius met behulp van een homeostatische dekencontrole-eenheid.Maak vervolgens onder een dissectiemicroscoop een twee centimeter lange middenlijnsnede op de hals. Gebruik de retractoren om het operatieveld bloot te leggen. Dissecteer de CCA vrij van de omliggende zenuwen zonder de vaguszenuw te beschadigen en plaats een steriele vijf nul zijden naald onder de slagader.Knoop een schuifknoop en trek de naald in de richting van het lichaam. Dissecteer vervolgens de ECA en zijn twee takken, de OA en de STA, coaguleer de twee takken met behulp van een veterinaire elektrochirurgische eenheid en plaats vervolgens twee stukken steriele zes nul zijden naald onder de ECA, scheid de twee zijden naalden die onder de slagader zijn geplaatst, een stuk in de richting van het hoofd en het andere in de richting van het lichaam. Knoop een strakke ligatuur aan de kant die het dichtst bij het hoofd ligt.Grijp de zijden naald met kleine hemostatieklemmen en trek deze in de richting van het hoofd. Bereid een losse knoop voor met de andere zijden naald voor later gebruik. Dissecteer nu de ICA en PPA van de omliggende zenuwen zonder de vaguszenuw te beschadigen.Bind de PPA met een zes nul naald. Maak vervolgens een schuifknoop rond de ICA of klem de ICA met een microvasculaire klem. Snijd vervolgens een klein gaatje in de ECA tussen de strakke en losse ligaturen met Venetiaanse stijlveer schaar.Breng de gemodificeerde PE 50-buis met het bloedstolsel in de incisie en breng het naar de bifurcatie van de CCA. Draai de losse ligatuur rond het lumen net genoeg vast om de mobiliteit van de ingebrachte buis veilig te behouden. Snijd vervolgens de ECA af op de plaats van het kleine gaatje om de stomp vrij te maken.Plaats de stomp onder de bifurcatie van de ECA en ICA. Dit zal de gemodificeerde buis gemakkelijk in de ICA laten glijden. Open de ICA en breng de buis voorzichtig vanuit het lumen van de ECA in de ICA tot het uiteinde van de katheter de oorsprong van de MCA bereikt.Injecteer nu het stolsel via de gemodificeerde P 50-katheter samen met 10 microliter zoutoplossing gedurende 10 seconden met behulp van een 100 microliter Hamilton-spuit. Trek vijf minuten later de katheter uit de ECA, bind de ECA en open de ECA daarna weer, naai de incisie op de hals. Maak in deze procedure een

embolic-middle-cerebral-artery-occlusion-mcao-for-ischemic-stroke

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Chirurgische inductie van ischemische hersenschade in de rat is een veel gebruikt model voor een beroerte onderzoek. Hier laten we zien de inductie van focale cerebrale ischemie door occlusie van de midden cerebrale slagader. Visualisatie van de resulterende infarct door histologische kleuring en magnetische resonantie beeldvorming wordt ook getoond.

Focus cerebrale ischemie Model door Endovasculaire Suture Occlusie van de midden cerebrale slagader in de Rat

We zien in de video een methode voor het produceren van een midden cerebrale slagader occlusie bij volwassen muizen met behulp van een intraluminale monofilament. We laten ook zien hoe de omvang van herseninfarct beoordelen door 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) kleuring.

Muis model van de midden cerebrale slagader Occlusion

De intraluminale midden cerebrale slagader occlusie (MCAO) model is de meest frequente gebruikte model onder experimentele ischemische beroerte modellen. Hier zullen we demonstreren het gehele model in detail met de gids van Laser Doppler flowmetry, en zijn vertegenwoordiger resultaten.

Intraluminale midden cerebrale slagader Occlusie (MCAO) Model voor ischemische beroerte met Laser Doppler Flowmetry Begeleiding in Muizen

This video demonstrates the procedure of performing permanent distal middle cerebral artery occlusion, or MCAO, with the common carotid artery, or CCA ligation, in aged rats to model ischemic stroke. This blocks blood flow to the brain, leading to neuronal death and generating a model to study stroke mechanisms and potential treatments.

Inducing Ischemia via Middle Cerebral and Common Carotid Artery Occlusion in a Rat Model

Intraluminale gloeidraad occlusie van de middelste cerebrale slagader is het meest gebruikte in vivo model van experimentele beroerte in knaagdieren. Een alternatieve chirurgische benadering om gemeenschappelijke halsslagader reparatie gebeurt hier, waardoor de reperfusie van de gemeenschappelijke halsslagader en een volledige reperfusie naar het grondgebied van de middelste cerebrale slagader.

Occlusie van de middelste cerebrale slagader waardoor reperfusie via gemeenschappelijke halsslagader reparatie in muizen

Hier presenteren we een protocol te induceren post-takt depressie bij ratten door afsluiter het midden cerebrale slagader via de interne halsslagader. We gebruiken de Porsolt geforceerde zwem test en de sacharose voorkeur test om geïnduceerde depressieve stemmingen te bevestigen en te evalueren.

Een middelste cerebrale slagader occlusie techniek voor het induceren van post-takt depressie bij ratten

Dit protocol demonstreert een uniek muizenslagmodel met een middelgroot infarct en een uitstekende overlevingskans. Dit model stelt preklinische beroerte-onderzoekers in staat om de duur van de ischemie te verlengen, verouderde muizen te gebruiken en functionele resultaten op lange termijn te beoordelen.

Een aangepast transcraniaal occlusiemodel voor de middelste cerebrale slagader om de uitkomsten van een beroerte bij oudere muizen te bestuderen

Dit protocol beschrijft het model van voorbijgaande focale cerebrale ischemie bij muizen door intraluminale occlusie van de middelste hersenslagader. Daarnaast worden voorbeelden van uitkomstbeoordeling getoond met behulp van magnetische resonantiebeeldvorming en gedragstests.

Voorbijgaand occlusiemodel van de middelste cerebrale slagader van een beroerte

Hier presenteren we een protocol om een distaal occlusiemodel van de middelste hersenslagader (dMCAO) op te stellen door middel van transcraniële elektrocoagulatie bij C57BL/6J-muizen en evalueren we het daaropvolgende neurologische gedrag en histopathologische kenmerken.

Inductie van acute ischemische beroerte bij muizen met behulp van de distale occlusietechniek van de middelste slagader

Het huidige protocol beschrijft een ratmodel van occlusie/reperfusie van de middelste hersenslagader dat de anatomische structuur van hersenvaten behoudt zonder schade te veroorzaken.

Een rattenmodel van middelste cerebrale arteriële occlusie/reperfusie zonder de anatomische structuur van cerebrale vaten te beschadigen

Het doel van deze studie was het vaststellen van een reproduceerbare methode voor het uitvoeren van een craniectomie, gevolgd door permanente, selectieve midden-cerebrale arterie-occlusie bij ratten voor toepassing in experimentele studies naar motorische en ruimtelijke geheugentekorten.

Selectieve en permanente occlusie van de middenarterie cerebrale arterie bij ratten: een experimentele benadering voor het bestuderen van motorische en ruimtelijke geheugentekorten

Leer een embolische midden cerebrale slagader occlusie methode voor ischemische beroerte met homologe bloedstolsels in ratten. Dit model bootst menselijke beroerte nauwkeurig na voor preklinisch onderzoek naar trombolytische therapieën.

Embolische midden cerebrale slagader occlusie (MCAO) voor ischemische beroerte met homologe bloedstolsels in Ratten

Meer video's verkennen