Non-Terminal Bloedafname Technieken in Guinea Pigs
11 oktober 2014
Hoewel een bekend model, de cavia vertegenwoordigt momenteel een niche in experimentele dierwetenschappen en beperkte gegevens beschikbaar over de uitvoering van de meeste procedures. Hier presenteren we vier verschillende benaderingen van non-terminal in vivo bloedafname technieken in ofwel bewust of verdoofd cavia.
Het algemene doel van deze video is om de methodologie van vier verschillende bloedmonstertechnieken bij cavia's te illustreren. De getoonde procedures zijn niet terminaal, tenzij de monstervolumes of het aantal monsters de richtlijnen voor bloedafname overschrijdt. Bij laboratoriumdieren zien we hier de oorzaak van de laterale ous-vene en de tarsale vene.
De ous-vene loopt dorsaal en lateraal over het tarsale gewricht. Er mogen maximaal drie monsters worden genomen van elke achterpoot, en er kunnen ongeveer 100 tot 400 microliter bloed per monster worden verzameld. Noodzakelijke apparatuur omvat een elektrische scheermachine, warm waterbad, een schone handdoek, wat watten, een ontsmettingsmiddel zoals 70% alcohol, steriele naalden, 21 gorge of kleinere opvangbuisjes.
En als het doel is om bloedglucose te meten en AccuCheck-sampler, kan bloedafname uit de cepheus of tarsale vene bij cavia's zonder verdoving worden gedaan. De cavia wordt vastgehouden door een getrainde assistent en er moet een septische techniek worden gebruikt. Het haar dat het tarsale gebied bedekt, wordt geschoren met een elektrische scheermachine en de achterpoot wordt gewassen en verwarmd in een lauw waterbad.
Naast het reinigen van de poot, zorgt dit ervoor dat de aderen uitzetten en zichtbaarder worden. De achterpoot wordt gestrekt en stasis wordt bereikt door zachte neerwaartse druk toe te passen net boven de knie, waardoor de ader direct voorafgaand aan de monstername zichtbaar wordt. Het geschoren gebied wordt afgeveegd met een ontsmettingsmiddel.
De ader wordt geprikt met een naald of een lancet, en bloed kan worden verzameld in een capillair of microt-buisje. Wanneer het bloed is verzameld, wordt de stasis verlicht en wordt zachte druk uitgeoefend met een stuk watten. Om hemostase te vergemakkelijken, zijn de oppervlakkige slagaders en aderen op het dorsale oppervlak van het caviaoor hier te zien. Deze vaten kunnen worden gebruikt voor bloedafname wanneer slechts een zeer klein volume vereist is.
Een voorbeeld zou kunnen zijn voor bloedglucosemetingen. De cavia wordt voorzichtig vastgehouden terwijl het oor toegankelijk blijft. De prikplaats moet voorafgaand aan de monstername septisch worden voorbereid, maar scheren is niet noodzakelijk.
Er kan lichte druk worden uitgeoefend aan de basis van het oor om de aderen zichtbaarder te maken. De ader wordt geprikt met een naald of lancet en bloed wordt verzameld in een capillairbuisje of onmiddellijk geanalyseerd op bloedglucoseniveaus met behulp van het AccuCheck-monstersysteem. Wanneer het bloed is verzameld, moet zachte druk worden uitgeoefend op de prikplaats om hemostase te vergemakkelijken.
Deze afbeelding illustreert de positie van de cavia voor halsslagaderbloedafname en de oorzaak van de halsslagader. De procedure wordt uitsluitend uitgevoerd op een verdoofd dier. Noodzakelijke apparatuur omvat geneesmiddelen voor anesthesie en elektrische scheermachine watten, een ontsmettingsmiddel zoals 70% alcohol, stethoscoop, neutrale oogzalf, een milliliter spuiten, steriele naalden, meestal 23 of 25.
Gorge Heparien en EDTA kunnen worden gebruikt om spuiten te spoelen voorafgaand aan de monstername om coagulatie te voorkomen. Er bestaan verschillende anesthesieprotocollen voor cavia's. In dit geval worden dieren verdoofd door evenwichtige anesthesie met een mengsel van solit tile sine en butif geïnjecteerd onderhuids in de nek.
Dit mengsel kan worden verdund met zoutoplossing om de dosering nauwkeuriger te maken. Na de injectie moet de cavia worden teruggeplaatst in zijn kooi en rustig worden gelaten. De effecten van de omgeving worden meestal na ongeveer 10 minuten waargenomen en duren 30 tot 40 minuten voorafgaand aan de monstername.
De diepte van de anesthesie wordt beoordeeld door de reflexen te controleren en neutrale oogzalf wordt gegeven om de ogen te beschermen. De halsslagader wordt benaderd met de cavia op zijn rug geplaatst en de voorpoten worden kwartair teruggetrokken. Het gebied wordt geschoren en aseptisch voorbereid, het sleutelbeen wordt gevoeld en een 23 gorge naald gemonteerd op een een milliliter spuit wordt ongeveer een centimeter lateraal tot de middellijn geplaatst, net craniodorsaal van het sleutelbeen.
De spuit moet in een lichte opwaartse en mediale hoek worden gehouden. Zodra de huid is doorboord, wordt lichte negatieve druk toegepast op de spuit, omdat de halsslagader vrij ondiep ligt en een inbrengdiepte van ongeveer drie tot vier millimeter voldoende is. Wanneer het monster is verzameld, wordt de spanning van de voorpoten losgelaten en wordt zachte druk uitgeoefend op de prikplaats.
Het dier kan vervolgens worden teruggeplaatst in een herstelkooi, maar moet worden gecontroleerd om hemostase en herstel van de anesthesie te waarborgen. Wanneer de cavia volledig is hersteld van de anesthesie, mag hij terugkeren naar zijn verblijf. De anatomische kenmerken van de cavia verschillen enigszins van die van andere knaagdiermodellen, en modulatie van monstertechnieken is noodzakelijk om rekening te houden met soortspecifieke verschillen en om binnen de kortst mogelijke tijd monsters van voldoende kwaliteit te verkrijgen.
Omdat zowel langdurige als kortdurende. In vivo, studies vereisen vaak herhaalde bloedafname. De keuze van de techniek moet zorgvuldig worden overwogen om stress en ongemak te verminderen en om de overleving te waarborgen, evenals om te voldoen aan de vereisten van monstergrootte en toegankelijkheid.
Alle beschreven methoden zijn grondig getest en met succes toegepast voor herhaalde in vivo bloedafname. In onderzoek in onze onderzoeksfaciliteit vertegenwoordigt de cavia een niche in experimentele dierwetenschap, maar er zijn beperkte gegevens beschikbaar over de uitvoering van basisprocedures. In dit videoartikel hebben we vier verschillende benaderingen gepresenteerd voor niet-terminale in vivo bloedafname bij bewuste of verdoofde dieren, op voorwaarde dat de monstervolumes en het aantal monsters de richtlijnen voor bloedafname bij laboratoriumdieren niet overschrijden.
Deze procedures worden aanbevolen voor gebruik bij cavia's wanneer herhaalde bloedafname vereist is. In uw studieprotocol.
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Overzicht
Deze video demonstreert vier niet-terminale bloedafnametechnieken bij cavia's, zowel in bewuste als in geanestheseerde toestand. Deze methoden zijn essentieel voor onderzoekers die werken met dit modelorganisme, waarvoor beperkte procedurele gegevens beschikbaar zijn.
Belangrijkste studiecomponenten
Wetenschappelijk gebied
- Experimentele dierwetenschappen
- Veterinaire technieken
- Methodologieën voor bloedafname
Achtergrond
- Cavia's zijn een nichemodel in experimenteel onderzoek.
- Er is beperkte data beschikbaar over bloedafnameprocedures bij deze soort.
- Niet-terminale technieken zijn essentieel voor ethische onderzoekspraktijken.
- Inzicht in richtlijnen voor bloedafname is cruciaal voor het dierenwelzijn.
Doel van de studie
- Om veilige en effectieve technieken voor bloedafname te illustreren.
- Om richtlijnen te bieden voor maximale monstervolumes en frequentie.
- Om de kennisbasis voor onderzoekers die met cavia's werken te vergroten.
Gebruikte methoden
- Demonstratie van bemonstering uit de laterale ous-ader en de tarsale ader.
- Gebruik van specifieke apparatuur zoals steriele naalden en opvangbuisjes.
- Richtlijnen voor het maximale bloedvolume per monster.
- Procedure voor zowel bewuste als geanestheseerde dieren.
Belangrijkste resultaten
- Succesvolle demonstratie van vier bloedafnametechnieken.
- Vaststelling van veilige limieten voor het monstervolume.
- Duidelijke instructies voor de benodigde apparatuur en voorbereiding.
- Nadruk op ethische overwegingen bij bloedafname.
Conclusies
- De gepresenteerde technieken zijn essentieel voor onderzoek met cavia's.
- Een adequate training en naleving van de richtlijnen waarborgen het dierenwelzijn.
- Verder onderzoek kan deze methodologieën verder uitbreiden.
Veelgestelde vragen
Relevantie voor de industrie
Niet-terminale bloedafname bij cavia's ondersteunt longitudinale in vivo studies door herhaalde verzameling van hoogwaardige monsters mogelijk te maken, terwijl het dierenwelzijn gewaarborgd blijft. Deze mogelijkheid is cruciaal voor preklinische farmacokinetische en farmacodynamische beoordelingen, waarbij seriële bemonstering inzicht geeft in target engagement en mechanische risicoreductie. De technieken vullen een methodologische leemte in een niche maar translationeel relevant model, waardoor de betrouwbaarheid van gegevens voor vroege discovery-workflows wordt verbeterd.
Strategische toepassingen in biopharma R&D
Vroege ontdekking & targetvalidatie
- Wetenschappelijke waarde: Maakt hypothesetoetsing mogelijk door seriële biomarkermeting in vivo.
- Operationele waarde: Biedt reproduceerbare toegang tot systemische expositiegegevens voor studies naar doelwitmodulatie.
- Voorspellende waarde: Ondersteunt de karakterisering van de dosis-responsrelatie en het opbouwen van vertrouwen in het doelwit.
Screening & assayontwikkeling
- Wetenschappelijke waarde: Genereert kwantificeerbare plasma- of serummonsters voor assay-uitlezingen.
- Operationele waarde: Standardiseert het tijdstip van monstername en de verwerking gedurende screeningcampagnes.
- Assay-gereedheid: Garandeert voldoende volume en kwaliteit voor downstream analytische workflows.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Translationele continuïteit: Slaat een brug tussen targetvalidatie in de ontdekkingsfase en preklinische veiligheidsprofielering.
- Risicobeperking: Vermindert variabiliteit in expositiemetrieken door gestandaardiseerde monsterneming.
- Relevantie van het model: Maakt gebruik van de fysiologische overeenkomsten tussen cavia's en mensen voor predictieve risicoreductie.
Integratie van Pipeline en Workflow
Deze bemonsteringsmethoden passen zich in discovery biology-workflows door betrouwbare biologische matrices te leveren voor de analyse van doelpaden en de evaluatie van leadverbindingen.
- Discovery Biology: Faciliteert de verduidelijking van pathways via seriële meting van farmacodynamische markers.
- Screening: Maakt consistente evaluatie van verbindingen mogelijk door gestandaardiseerde, reproduceerbare monstername.
- Analytics: Levert kwantificeerbare resultaten (bijv. concentratie, biomarkerniveaus) voor comparatieve analyse van condities.
- Translationeel onderzoek: Ondersteunt de continuïteit naar preklinische studies door het behoud van monsterintegriteit en naleving van ethische richtlijnen.
- Enterprise Reuse: Creëert een herbruikbare capaciteit voor longitudinale studies met cavia's over verschillende projecten heen.
Operationele impact en impact op de organisatie
- Wetenschappelijke waarde: Verhoogt het voorspellende vertrouwen door vermindering van door bemonstering veroorzaakte variabiliteit en stressartefacten.
- Operationele waarde: Verbeterde standaardisatie en schaalbaarheid van in vivo bemonstering tussen verschillende faciliteiten.
- Strategische waarde: Verbetert de kwaliteit van go/no-go-beslissingen door betrouwbare longitudinale gegevens te leveren.
- Impact op portfolio: Maakt risico-gecorrigeerde prioritering mogelijk op basis van consistente metrieken voor target engagement.
Overwegingen voor implementatie
- Vereist training in aseptische techniek en dierbehandeling voor procedures bij bewuste of geanestheseerde dieren.
- Afhankelijk van apparatuur zoals elektrische scheermachines, verwarmingsbaden en steriele verzamelinstrumenten.
- Noodzaak tot naleving van soortspecifieke richtlijnen voor bloedvolume (max 100–400 µL/sample, ≤3 samples/achterpoot).
- Omvat overwegingen voor aanpassingen bij de toegang tot de vene op basis van dierenstam, leeftijd of gezondheidstoestand.
- Bevat praktische beperkingen zoals zichtbaarheidsproblemen bij gepigmenteerde of obese dieren en de vereiste vaardigheid van de operator om hematomen te voorkomen.
