Name: Ongecompliceerd Assay voor de kwantificering van Sociale Avoidance in Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: Leer een eenvoudige methode om sociale vermijding in Drosophila melanogaster te kwantificeren met behulp van een T-maze. Dit protocol meet gedragsreacties op stresssignalen en helpt bij het bestuderen van genetische en omgevingsfactoren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We danken Rachelle Kanippayoor voor haar hulp bij het identificeren van de nieuwe wild-type stam als van de melanogaster soort. R.W.F, O.F. en A.F.S waren verantwoordelijk voor het onderzoeksontwerp; R.W.F, M.N. en O.F. voerden de experimenten uit. R.W.F, M.N., O.F. en A.F.S. analyseerden de gegevens; R.W.F., I.S.M. en A.F.S. schreven het manuscript.
Dit werk werd ondersteund door PSC-CUNY onderzoeksbeurzen, gezamenlijk gefinancierd door The Professional Staff Congress en The City University of New York aan A.F.S.; door interne financiering van Western University aan A.F.S. en I.S.M.; door een opleidingsondersteuning van het National Alliance for Hispanic Health’s Alliance/Merck Ciencia (Science) Hispanic Scholars Program en een Universitaire Beurs van de Yale Graduate School of Arts and Sciences aan R.W.F.

1. apparatuur en reagentia Gemaakt In-house (zie lijst van materiaal voor anderen) <ol><li> Bereid een Drosophila koude anesthesietoestel om vlieg werk uit te voeren. <ol><li> Snijd een poreus polyethyleen blad aan een klein plastic doosje (12,7 cm lang, 10,2 cm breed), meestal de bovenklep van een doos pipetuiteinden (12,7 cm lang, 10,2 cm breed, 3,8 cm diep) te dekken. </li><li> Vul de doos met crushed ijs, dek af met de poreuze polyethyleen blad. </li></ol></li><li> Bereid een T-doolhof apparaat; de inrichting eerder beschreven in detail 28-31 passen. </li><li> Bereid een vlieg aspirator zoals beschreven 32. </li><li> Bereid een phototaxis reactie apparaat om vliegen te verplaatsen in en uit testen flesjes zonder stress: <ol><li> Gebruik tegenstroom inrichting, zoals beschreven door 29,33. </li></ol></li></ol> OPMERKING: De T-doolhof kan ook worden gebruikt voor andere doeleinden, zoals beschreven door 28. <ol start="5"><li> Zorgen homogeneous lichtomstandigheden: uitvoeren van het experiment op een bankje bedekt met een witte bank cover, en aan de voorzijde van een witte boord. LET OP: Voor deze experimenten, de vlieg gebruikte stammen waren Drosophila melanogaster wild-type: Canton-S, Oregon en Samarkand vliegt van ons laboratorium voorraden 34; Elwood vliegen werden verzameld in het najaar van 2011 in de buurt van Huntington Elwood, op Long Island, New York, USA. </li></ol> 2. Voorbereiden van de Vliegen voor het experiment 1-2 dagen voordat het experiment: <ol><li> Handhaaf vliegen op standaard maïsmeel-agar-melasse-gist medium bij 25 ° C op een 12 uur licht / donker cyclus. </li><li> Verzamel de responder vliegen onder koud verdoving 1-2 dagen voorafgaand aan het uitvoeren van het experiment <ol><li> Transfer de vliegen uit de flessen waarin ze zijn opgegroeid in 50 ml Falcon buizen, met behulp van een trechter. </li><li> Plaats de valk buis met de vliegen onder ijs niveau, in eengeïsoleerde ijsemmer. </li><li> Leg de koude anesthesietoestel met crushed ijs bij -4 ° C om te relaxen. </li><li> Wacht 5 minuten voor de vliegen om een ​​chill coma te voeren. </li><li> Transfer de vliegen op de poreuze polyethyleen blad van de koude anesthesie apparaat. </li><li> Verzamel de responder vliegen op de koude anesthesie apparaat. Bij KT, onder een stereomicroscoop, scheiden 3-7 dagen oud Man uit vrouwelijke vliegen en deze vliegen te houden in groepen van 40. </li></ol></li><li> Verzamel de emitter vliegen 1-2 dagen voorafgaand aan het uitvoeren van het experiment. <ol><li> Verzamel Canton-S mixed-sex vliegt uit hun flessen, met behulp van een mond aspirator, het beheersen van hun nummer. </li><li> Handhaaf deze vliegen in groep 60-100, zoals ze zullen zijn de emitters. </li><li> Bereid zoveel monsters vervuilers gegevenspunten nodig. </li></ol></li><li> Laat minstens een nacht van herstel na inning van de responders en vervuilers, om eventuele verstorende effect van de koude anesthesie te minimaliserenen mond aspirator collectie op gedrag. </li><li> Open de zak proef flesjes, zodat de muffe kunststof ruikende lucht in de zak te vervangen door verse lucht, ten minste 1 dag voor het experiment. </li></ol> 2 uur voordat het experiment: <ol start="6"><li> Zorg ervoor dat de temperatuur in de ruimte waar het experiment wordt uitgevoerd ongeveer 23-25 ​​° C, met nog licht en vochtigheid boven 30%. </li><li> Breng de responders en emitters fruitvliegen in vers voedsel flesjes om ervoor te zorgen dat deze vliegen niet worden uitgehongerd. </li><li> Laat de fruitvliegjes aanpassen aan de omgeving gedurende 2 uur, op de bank waarmee het experiment wordt uitgevoerd. </li></ol> 3. Het uitvoeren van de Sociale Avoidance Experiment <ol><li> Voer elke experiment op hetzelfde tijdstip van de dag, in een range van 3-4 uur in de middag tussen Zeitgeber tijd ZT5 en ZT9. </li><li> Plaats de T-doolhof op het beukende pad, en draai de schroef clip zo tHij lift stabiel. </li><li> Breng de responder vliegen in een frisse toets flacon. Snap dit flesje dat de responder vliegen op het bovenste gedeelte van de T-doolhof. </li><li> Schuin de T-doolhof apparaten en tik op de beukende mat zodat de fruitvliegjes vallen in de lift. </li><li> Beweeg het bovenste deel van de lift naar beneden zodat de vliegen zijn tussen de bovenste en onderste deel van de T-doolhof, maar let op de lift boven het keuzepunt houden - te voorkomen dat vliegen ontsnappen. </li><li> Verkrijgen flesjes met DSO (zie hoofdstuk 5 tot DSO-vrije flesjes die eerder door vliegen werden bezet te genereren). <ol><li> Terwijl de responder vliegen worden aan te passen aan deze nieuwe omgeving, plaatst de zender vliegen in een test flacon. </li><li> Leg een stuk katoen aan de flacon te sluiten zodat de fruitvliegen niet ontsnappen. </li><li> Mechanisch ageren deze flacon op een mini-vortex als volgt: vortex gedurende 15 seconden, verwijder de flacon uit de vortex gedurende 5 sec. Herhaal dit 3 keer voor een totaal van 55 sec. </li><li> Remove de emitter vliegt uit de verse flesje - door de overdracht in een keukenmachine flacon - en snel plaats deze DSO gevuld flesje in een van de twee kanten van de T-doolhof apparaat. </li><li> Wissel de zijkant van plaatsing voor de DSO gevuld flesje in elke nieuwe run. </li></ol></li><li> Plaats een nieuwe proef flesje aan de andere kant van het T-doolhof. </li><li> Breng de lift helemaal naar beneden, zodat de fruitvliegjes kan kiezen tussen de verse-test flacon en de test flacon met DSO, en start de timer. </li><li> Laat de vliegen kiezen tussen de verse flacon en de DSO flacon, gedurende 1 min, tenzij anders vermeld. </li><li> Na 1 min, beweegt u de lift naar de vliegen in de frisse flacon, DSO flesje, en die vast te zitten in de lift te scheiden. </li><li> Tel het aantal vliegen per flesje, en de lift. </li><li> Herhaal dit voor elk genotype / conditie. </li></ol> 4. Het analyseren van de Sociale Avoidance Gegevens <ol><li> Tel het aantal fruitvliegjes in elk flesje voor elk genotYpe en overdracht van de gegevens naar een spreadsheet. </li><li> Met een spreadsheetprogramma Bereken het-index (PI) voor elk genotype door het aftrekken van het aantal vliegen in de DSO flacon uit het aantal vliegen in de DSO-vrij flesje, en vervolgens te delen door het totale aantal vliegen. </li><li> Vergelijk de PI&#39;s &quot;: door middel van statistische analyse software voor de analyse van de resultaten. <ol><li> Idealiter bereiden 2-3 interne herhalingen van elk experiment en 3 onafhankelijke herhalingen uitgevoerd op verschillende dagen met verschillende flessen of overschrijdt 30. </li><li> Gebruik Gaussische verdeling statistische tests, zoals de gegevens volgt een normale verdeling. </li><li> Bij het ​​testen van een effect (dwz dichtheid - figuur 2), gebruik een eenzijdige ANOVA met post-test voor meervoudige vergelijking (kolom per kolom), of een t-test elk resultaat te vergelijken met een controle. </li><li> Als groep experimenten worden uitgevoerd, testen beide voorwaarden en geslachten (lege flacons, benadrukte eend un-benadrukte vliegen; en gender-effect - figuur 1), met behulp van een twee-weg ANOVA. </li></ol></li></ol> 5. Genereer Flesjes Eerder Bezet door onbeklemtoonde Flies - Voer plaats van 3,5-3,6 <ol><li> Gebruik phototaxis flesjes bezet door vliegen die niet zijn onderstreept bereiden, als controle. </li><li> Breng het vliegen in een test flesje, en klik deze in de tegenstroom apparaten, met verse lege flesjes in de tegenovergestelde plaats. </li><li> Leg het apparaat horizontaal met de distale flacon direct voor een 15 W TL koel-wit licht, en dek af met een zwarte doek. </li><li> Laat de vliegen zachtjes bewegen in de frisse flacon. Dit kan enkele minuten duren. Zodra meeste vliegen lopen naar het licht in de distale flacon, start de timer gedurende 1 min. </li><li> Verwijder voorzichtig het zwarte doek, schakelt de plaats van het licht, herstellen met het zwarte doek, en laat de vliegen op de proef flacon vertrekken. </li><li> Op dat moment, initiate het keuze-experiment als in 3,2-3,5. Overslaan 3.6 en 3.7. </li><li> Verplaats de schuif van de inrichting, de vliegen die de test flacon uit de andere zijde verlaten scheiden. </li><li> Gebruik het verlaten proef flacon in de T-doolhof direct voor de keuze experiment, zoals in 3.7. </li></ol>

<ol><li>Fry, S. N., Rohrseitz, N., Straw, A. D., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TrackFly%3A+virtual+reality+for+a+behavioral+system+analysis+in+free-flying+fruit+flies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">TrackFly: virtual reality for a behavioral system analysis in free-flying fruit flies.</a> J Neurosci Methods. 171, 110-117 (2008).</li>
<li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+video+tracking+of+locomotion+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution video tracking of locomotion in adult Drosophila melanogaster.</a> J Vis Exp. 24, 1096(2009).</li>
<li>Dankert, H., Wang, L., Hoopfer, E. D., Anderson, D. J., Perona, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+monitoring+and+analysis+of+social+behavior+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Automated monitoring and analysis of social behavior in Drosophila.</a> Nat Methods. 6, 297-303 (2009).</li>
<li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nat Methods. 6, 451-457 (2009).</li>
<li>Simon, J. C., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+chamber+for+studying+the+behavior+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A new chamber for studying the behavior of Drosophila.</a> PLoS One. 5, 8793(2010).</li>
<li>Wang, L., Dankert, H., Perona, P., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inaugural+Article%3A+A+common+genetic+target+for+environmental+and+heritable+influences+on+aggressiveness%5BTitle%5D)+AND+%22in+Drosophila.+Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Inaugural Article: A common genetic target for environmental and heritable influences on aggressiveness.</a> in Drosophila. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 5657-5663 (2008).</li>
<li>Schneider, J., Dickinson, M. H., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+structures+depend+on+innate+determinants+and+chemosensory+processing+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Social structures depend on innate determinants and chemosensory processing in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 2, 17174-17179 (2012).</li>
<li>Miyamoto, T., Amrein, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+male+courtship+by+a+Drosophila+pheromone+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Suppression of male courtship by a Drosophila pheromone receptor.</a> Nat Neurosci. 11, 874-876 (2008).</li>
<li>Villella, A., Hall, J. C., Jeffrey, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+3+Neurogenetics+of+Courtship+and+Mating+in+Drosophila.+%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Chapter 3 Neurogenetics of Courtship and Mating in Drosophila. </a> Advances in Genetics. 62, 67-184 (2008).</li>
<li>Ejima, A., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Courtship+Initiation+Is+Stimulated+by+Acoustic+Signals+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Courtship Initiation Is Stimulated by Acoustic Signals in Drosophila melanogaster.</a> PLoS ONE. 3, 3246(2008).</li>
<li>Mery, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Public+Versus+Personal+Information+for+Mate+Copying+in+an+Invertebrate%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Public Versus Personal Information for Mate Copying in an Invertebrate.</a> Current Biology. 19, 730-734 (2009).</li>
<li>Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+taste+of+the+Drosophila+gustatory+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">A taste of the Drosophila gustatory receptors.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 19, 345-353 (2009).</li>
<li>Billeter, J. -C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specialized+cells+tag+sexual+and+species+identity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster.</a> Nature. 461, 987-991 (2009).</li>
<li>Krupp, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+experience+modifies+pheromone+expression+and+mating+behavior+in+male+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster.</a> Curr Biol. 18, 1373-1383 (2008).</li>
<li>Kent, C., Azanchi, R., Smith, B., Formosa, A., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+context+influences+chemical+communication+in+D.+melanogaster+males%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Social context influences chemical communication in D. melanogaster males.</a> Curr Biol. 18, 1384-1389 (2008).</li>
<li>Levine, J. D., Funes, P., Dowse, H. B., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resetting+the+Circadian+Clock+by+Social+Experience+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Resetting the Circadian Clock by Social Experience in Drosophila melanogaster.</a> Science. 298, 2010-2012 (2002).</li>
<li>Ganguly-Fitzgerald, I., Donlea, J., Shaw, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Waking+Experience+Affects+Sleep+Need+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Waking Experience Affects Sleep Need in Drosophila.</a> Science. 313, 1775-1781 (2006).</li>
<li>Billeter, J. -C., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Who+is+he+and+what+is+he+to+you%3F+Recognition+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Who is he and what is he to you? Recognition in Drosophila melanogaster.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 23, 17-23 (2013).</li>
<li>Suh, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+population+of+olfactory+sensory+neurons+mediates+an+innate+avoidance+behaviour+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A single population of olfactory sensory neurons mediates an innate avoidance behaviour in Drosophila.</a> Nature. 431, 854-859 (2004).</li>
<li>Bonini, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Tribute+to+Seymour+Benzer+1921-2007%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">A Tribute to Seymour Benzer 1921-2007.</a> 180, 1265-1273 (2008).</li>
<li>Castermans, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobeachin+gene+is+disrupted+by+a+translocation+in+a+patient+with+idiopathic+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Genetics%22%5BJournal%5D)">The neurobeachin gene is disrupted by a translocation in a patient with idiopathic autism.</a> Journal of Medical Genetics. 40, 352-356 (2003).</li>
<li>Medrihan, L., et al. Neurobeachin, a protein implicated in membrane protein traffic and autism, is required for the formation and functioning of central synapses. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMedrihan%2C+L+%22J+Physiol%22">J Physiol</a>. 587, 5095-5106 (2009).</li>
<li>Simon, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+assay+to+study+social+behavior+in+Drosophila%3A+measurement+of+social+space+within+a+group%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">A simple assay to study social behavior in Drosophila: measurement of social space within a group.</a> Genes Brain Behav. 11, 243-252 (2012).</li>
<li>Venkatesh, T., et al. Cold Spring Harbor Meeting: From Molecules to Circuit Behavior. , Cold Spring Harbor Laboratories. Cold Spring Harbor, NY. (2013).</li>
<li>Hamilton, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+mutation+in+the+dopamine+transporter+gene+associates+dopamine+dysfunction+with+autism+spectrum+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">De novo mutation in the dopamine transporter gene associates dopamine dysfunction with autism spectrum disorder.</a> Mol Psychiatry. 18, 1315-1323 (2013).</li>
<li>Gadow, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+dopamine+gene+variants%2C+emotion+dysregulation+and+ADHD+in+autism+spectrum+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Developmental+Disabilities%22%5BJournal%5D)">Association of dopamine gene variants, emotion dysregulation and ADHD in autism spectrum disorder.</a> Research in Developmental Disabilities. 35, 1658-1665 (2014).</li>
<li>Fernandez, R. W., Akinleye, A. A., Nurilov, M., Rouzyi, Z., Simon, A. F. 54th Annual Drosophila Research Conference, , (2014).</li>
<li>Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+Locomotor%2C+Learning%2C+and+Memory+Deficits+in+Drosophila+Models+of+Neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration.</a> J Vis Exp. , 2504(2011).</li>
<li>Connolly, J. B., Tully, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aConnolly%2C+JB+%22Drosophila%3A+A+Practical+Approach%22">Drosophila: A Practical Approach</a>. Roberts, D. B. 1, IRL. New York, NY. 265-317 (1998).</li>
<li>Tully, T., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classical-conditioning+and+retention+in+normal+and+mutant+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+%5BA%5D%22%5BJournal%5D)">Classical-conditioning and retention in normal and mutant Drosophila melanogaster.</a> J Comp Physiol [A]. 157, 263-277 (1985).</li>
<li>Krashes, M. J., Waddell, S. Drosophila Aversive Olfactory Conditioning. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKrashes%2C+MJ+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22">Cold Spring Harbor Protocols</a>. 2011, (2011).</li>
<li>Ejima, A., Griffith, L. C. Ch. 30. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEjima%2C+A+%22Drosophila+Neurobiology%2C+A+Laboratory+Manual%22">Drosophila Neurobiology, A Laboratory Manual</a>. Zhang, B., Freeman, M. R., Waddell, S. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring, NY. 475-481 (2010).</li>
<li>Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+mutants+of+Drosophila+melanogaster+isolated+by+countercurrent+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Behavioral mutants of Drosophila melanogaster isolated by countercurrent distribution.</a> PNAS. 58, 1112-1119 (1967).</li>
<li>Simon, A. F., Shih, C., Mack, A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroid+control+of+longevity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Steroid control of longevity in Drosophila melanogaster.</a> Science. 299, 1407-1410 (2003).</li>
<li>Vaux, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+methods%3A+Know+when+your+numbers+are+significant%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Research methods: Know when your numbers are significant.</a> Nature. 492, 180-181 (2012).</li>
<li>Stowers, L., Logan, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+dimorphism+in+olfactory+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Sexual dimorphism in olfactory signaling.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 20, 770-775 (2010).</li>
<li>Simon, A. F., Liang, D. T., Krantz, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+decline+in+behavioral+performance+of+Drosophila+melanogaster+with+age%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Ageing+and+Development%22%5BJournal%5D)">Differential decline in behavioral performance of Drosophila melanogaster with age.</a> Mechanisms of Ageing and Development. , 127-647 (2006).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

Dit protocol beschrijft een gedetailleerde procedure voor de sociale vermijding test. Canton-S zal alleen voorkomen dat een flacon waarin vliegt eerder mechanisch geweest benadrukt, en dat seks en het aantal responders heeft geen invloed op dat sociale vermijding prestaties. Echter, de genetische achtergrond van de respondenten heeft een grote invloed. De volgende zijn een aantal cruciale stappen voor het uitvoeren van dit experiment met succes: 1) altijd de vliegen te dragen 2 uur voor het ...

Het doel van deze methode is om gemakkelijk te kwantificeren een nieuw aspect van eenvoudige sociaal gedrag in Drosophila melanogaster, onafhankelijk van verkering en agressie. Sociale interacties zijn cruciaal voor de goede ontwikkeling en gezondheid van individuen binnen een samenleving, evenals de functionaliteit van een sociale groep als geheel. De hoge complexiteit van deze interacties noodzakelijk grote aantallen individuen en een systeem waarmee vereenvoudiging van het gedrag als de genetische en neurale grondslagen van sociaal gedrag zijn nog slecht begrepen. Drosophila melanogaster is een krachtige genetisch model dat kan worden gebruikt om de genetische identificatie en neurale grondslagen van sociale interacties. Inderdaad, D. melanogaster heeft een repertoire van complex sociaal gedrag en een aantal directe metingen van socialisatie zijn al gedaan 1-7. De meeste van deze pogingen zijn gericht op relatief complex sociaal gedrag, zoals agressive interacties 3,6, diverse aspecten van de hofmakerij 3,8-12, en hoe sociale ervaring beïnvloedt andere gedragingen zoals leren, of circadiane ritme 13-17. Bovendien zijn veel van deze assays afhankelijk analyseren van complexe interactiepatronen groepen van vliegen, met videotracking en software om de resulterende overvloed data te analyseren. Dergelijke analyses zijn van onschatbare waarde, en leiden tot belangrijke nieuwe inzichten, zoals de dynamiek van de fly-fly interacties in groep 7. Een beperking is echter de ontoegankelijkheid van deze testen aan de gemeenschap in het algemeen, en de beperkte kennis van de mechanismen die ten grondslag liggen aan erkenning van anderen. Met andere woorden, is de basis van de emissie van een signaal van een individu en de erkenning ervan door een ander nog steeds slecht begrepen 18. Het D.: In tegenstelling, vliegen ook een eenvoudige gedrag, sociale vermijding, waar individuen te stappen van een signaal uitgezonden door benadrukte vliegen vertonen Melanogaster Stress Odorant of DSO 19. In een high-throughput assay kan dit gedrag worden gekwantificeerd als het vermijden van een spanning signaal uitgezonden door andere vliegen of sociale vermijden 19. Vliegen is in een T-doolhof apparaat geplaatst en de keuze om een ​​flesje dat DSO voorkomen. Met dit assay, CO 2 bleek een component van de DSO en een deel van de neurale circuits noodzakelijk is om aan CO 2 werd ontleed 19 zijn. De sociale vermijding test hier gepresenteerde is vergelijkbaar conceptueel de eenvoudige gedrags assays ontwikkeld in Seymour Benzer het laboratorium dat generaties onderzoekers nodig om complexe gedragingen 20 ontleden. Analyse van sociale vermijding kan worden uitgevoerd kosteneffectief behulp van de T-doolhof test, waardoor bredere studie van sociaal gedrag. Bijvoorbeeld met behulp van deze test we onlangs aangetoond dat verschillende genetische risico voor autisme contrasterende effecten in sociale behavior assays. Mutanten voor een kandidaat voor autisme - neurobeachin 21,22 - heden tekortkomingen zowel in de sociale ruimte (elders 23 beschreven) en sociale vermijding 24. Abnormale dopaminerge signalering wordt voorgesteld een rol spelen bij de etiologie van autisme bij mensen 25,26. In tegenstelling tot de resultaten verkregen met neurobeachin, vonden we dat sociale vermijden prestatie was niet beïnvloed door verhoogde of verlaagde niveaus van de Drosophila vesiculaire monoamine transporter (VMAT) in dopaminerge cellen, hoewel sociale ruimte rechtstreeks gecorreleerd met deze niveaus van VMAT 27. De contrasterende resultaten verkregen met neurobeachin en VMAT onderstrepen de mogelijkheid tot identificatie van verschillende vormen van asociaal gedrag en daarmee de verschillende onderliggende neurale circuits moduleren van de respons op anderen.

<table><tbody><tr><td>Stereo Zoom Microscope&nbsp;</td><td>Nikon&nbsp;&nbsp;</td><td>SMZ-645</td><td>Elk ander standaard bereik voor vliegverwerking zou werken</td></tr><tr><td>Kleine verf kwasten&nbsp;</td><td></td><td></td><td>voor het duwen van vliegen</td></tr><tr><td>Poreuze polyethyleen, 12" x 12" plaat</td><td>Flystuff - Genesee</td><td>46-100</td><td>http://www.flystuff.com/ProductInfo.php?productID=46-100 Poreuze kunststof plaat voor de koude anesthesie box</td></tr><tr><td>Mini-alarm timer/stopwatch</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sharpie pennen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zelfklevend plakband</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mini vortex</td><td>Fisher</td><td>14-955-151&nbsp;</td><td>http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail Voor mechanische agitatie van de vliegen - elke vortex zou werken.</td></tr><tr><td>Corning Life Sciences DL No.:352017, Falcon testbuis; ronde bodem; wegwerp; geen sluiting, 14 ml; 17 x 100 mm</td><td>Fisher</td><td>14-959-8 &nbsp;&nbsp;</td><td>http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&amp;langId=-1&amp;catalogId=29104&amp;productId=2771811&amp;distype=0&amp;highlightProductsItemsFlag=Y&amp;fromSearch=1&amp;searchType=PROD&amp;hasPromo=0 Deze klikken op hun plaats in de zelfgemaakte T-labyrint en tegenstroming apparaat (zie tekst)</td></tr><tr><td>Wattenschijfjes</td><td></td><td></td><td>om de flesjes te sluiten na het experiment.</td></tr><tr><td>Drievoudig bord en witte tafelkleed</td><td></td><td></td><td>om een witte achtergrond en een homogene licht te bieden.</td></tr><tr><td>Wit tafelkleed</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Slaapmuts</td><td></td><td></td><td>elke muismat werkt.</td></tr><tr><td>Grote zwarte doek</td><td></td><td></td><td>om het tegenstroming apparaat te bedekken in fototaxis respons.</td></tr><tr><td>Koel-witte licht&nbsp;</td><td>Home Depot</td><td>1000516563</td><td>http://www.homedepot.ca/product/illume-26-fluorescent-plug-in-linear/911423 elk soortgelijk lineair licht met fluorescente licht koel-wit op 13-15 W zou werken</td></tr></tbody></table>

ongecompliceerd assay voor de kwantificering van sociale avoidance in drosophila melanogaster

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is een opkomend model om verschillende aspecten van sociale interacties te bestuderen. Vliegen vermijden bijvoorbeeld gebieden die eerder werden bezet door gestreste soortgenoten vanwege een geur die vrijkomt tijdens stress, bekend als de Drosophila stressgeur (dSO). Door het gebruik van het T-labyrint apparaat, kan men de vermijding van de dSO door responder vliegen kwantificeren in een zeer betaalbare en robuuste test. De voorwaarden die nodig zijn om een sterke prestatie te verkrijgen, worden hier gepresenteerd. Een stressvolle ervaring is noodzakelijk voor de vliegen om dSO uit te stoten, evenals voldoende zendvliegen om een robuuste vermijdreactie op de aanwezigheid van dSO te veroorzaken. Genetische achtergrond, maar niet hun groepsgrootte, beïnvloedde sterk de vermijding van de dSO door de responder vliegen. Canton-S en Elwood vertonen een hogere prestatie in het vermijden van de dSO dan Oregon en Samarkand stammen. Deze gedragstest zal identificatie van mechanismen onderliggend aan dit sociale gedrag mogelijk maken, en de beoordeling van de invloed van genen en omgevingscondities op zowel emissie als vermijding van de dSO. Een dergelijke test kan worden opgenomen in batterijen van eenvoudige diagnostische tests die worden gebruikt om sociale tekortkomingen van mutanten of omgevingscondities van belang te identificeren.

De sociale vermijding test is een robuustere kwantificeren het vermogen van Drosophila melanogaster met een stress-signaal herkennen (DSO) uitgezonden door andere vliegen en dus beoordelen één aspect van de sociale interacties. De test wordt uitgevoerd met een inrichting gewoonlijk in verschillende gedrag assays bekend als een T-doolhof, waarbij de vliegen presenteren met een keuze tussen twee mogelijkheden - links of rechts 19,28-31. In dit geval wordt de efficiëntie waarmee de vliegen voorkomen DSO...

Hier presenteren we een protocol om de vermijding van gestreste individuen te kwantificeren. Dit paradigma is krachtig maar gebruiksvriendelijk en kan worden gebruikt om de invloed van genen en omgeving op een soort sociale interactie bij Drosophila melanogaster te beoordelen.

Ongecompliceerd Assay voor de kwantificering van Sociale Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

Het doel van deze procedure is om de reactie van vliegen op het sociale signaal dat door gestreste individuen wordt uitgezonden te kwantificeren. Dit wordt bereikt door eerst, responder en emitter vliegen te verzamelen, niet meer dan twee dagen voor het experiment. De tweede stap is om zowel emitter als responder vliegen twee uur voor het experiment over te brengen naar verse flesjes en ze te laten wennen aan de omgevingsgecontroleerde ruimte waar de test zal worden uitgevoerd.Vervolgens worden de responder vliegen in de TMAs geplaatst en krijgen ze de keuze tussen een fles waarin vliegen eerder gestrest zijn geweest, dus het drosophila stressgeurmiddel bevat, en een verse fles. De laatste stap is om het aantal responder vliegen in de verse fles in de DSO-fles en in de lift te tellen om hun reactie op de DSO te kwantificeren. Uiteindelijk wordt de T-labyrint gebruikt om de vermijding door vliegen van een sociaal stresssignaal te meten, specifiek de gilo stressgeur. Ik had voor het eerst het idee voor deze methode toen ik een postdoc was aan Caltech.Op dat moment waren Greg Sue en zijn postdoc-adviseur David Anderson, geïnteresseerd in het bestuderen van angst of sociale vermijding in Phyla, maar er was nog geen bestaande test hiervoor. Ze benaderden me omdat ik veel gedragstests uitvoerde in S brands' lab en tijdens het uitvoeren van foto taxi en olfactorische leerexperimenten, was opgevallen dat vliegen aangetrokken werden tot flesjes waarin andere vliegen ongestoord tijd hadden doorgebracht, terwijl ze flesjes vermijden waarin vliegen op dat moment gestrest waren met een elektrische schok. Bishop. Demonstratie van deze methode is cruciaal, aangezien het experimentele proces van de sociale vermijdingstest enige oefening vereist om snel en efficiënt te zijn bij het overbrengen van de bios zonder vliegen of DSL te verliezen.Het belangrijkste voordeel van deze techniek om sociale interacties te onderzoeken ten opzichte van bestaande methoden zoals computerondersteunde videotracking, is dat dit een test is die gemakkelijk te beheersen en te implementeren is, maar zeer krachtig is om de sociale vermijding van gestreste individuen te kwantificeren. Om het experiment te beginnen, snijd een poreus polyethyleenvel om een doos van 12,7 centimeter bij 10,2 centimeter te bedekken. Vul de doos met gemalen ijs en bedek hem met het vel om het drosophila koudeanesthesieapparaat te voltooien.Voer het experiment uit op een werkbank bedekt met een witte werkbankafdekking en een whiteboard vooraan om homogene lichtomstandigheden te garanderen. Bereid vervolgens de vortex vliegaspirator collega's apparaat, thermometer en timer voor. Een tot twee dagen voor het experiment koloniseer vliegen.Breng de vliegen over met een trechter in een 50 milliliter buis en plaats de buis in een geïsoleerde ijsemmer onder het ijsniveau. Wacht vijf minuten tot de vliegen in een koude coma raken. Breng vervolgens de vliegen over op het poreuze polyethyleenvel op kamertemperatuur en sorteer responder vliegen onder een stereomicroscoop.Schei drie tot zeven dagen oude mannelijke vliegen van vrouwelijke vliegen en houd deze vliegen in een groep van 40 zacht verzameld gemengd geslacht Canton s emitter vliegen. Gebruik een mondzuignap om de vliegen toe te staan. Een nacht herstel om eventuele verwarrende effecten van de verzameling op het gedrag te minimaliseren.Open vervolgens de zak met testflesjes om de muffe plastic geur in de zak te vervangen door verse lucht. Zorg ervoor voor het experiment dat de kamertemperatuur 25 graden Celsius is, dat de kamer gelijkmatig verlicht is en dat de luchtvochtigheid groter is dan 30% Twee uur voorafgaand aan het experiment breng de responder en emitter vliegen over in verse voedselflesjes en laat de vliegen zich aanpassen aan de omgeving op de werkbank waar het experiment zal worden uitgevoerd. Plaats het theemaas op de kloppad en draai de schroefklem vast zodat de lift stabiel is.Breng vervolgens de responder vliegen over naar een vers testflesje en klik het flesje met de responder vliegen bovenop het theemaas. Kantel vervolgens het theemaas apparaat en tik het op de klopmat zodat de fruitvliegen in de lift vallen. Beweeg het bovenste deel van de lift naar beneden om de vliegen tussen de bovenste en onderste secties van de TMAs te plaatsen en zorg ervoor dat de lift boven het keuzepunt is om te voorkomen dat vliegen ontsnappen terwijl de responder vliegen zich aanpassen aan de nieuwe omgeving.Plaats de emitter vliegen in een vers testflesje en bedek het met een stukje katoen. Roer de buis op een mini vortex op deze manier. De vliegen zullen DSO uitstoten. Breng de vliegen over in een voedselbuis en plaats de DSO gevulde buis snel in een van de twee zijden van het team.Wissel de kant van plaatsing af voor de DSO gevulde buis. Plaats in elke nieuwe run een vers testflesje aan de andere kant van het team A breng vervolgens de lift volledig naar beneden zodat de fruitvliegen kunnen kiezen tussen de verse testfles en de DSO gevulde buis. Start onmiddellijk de timer.Na een minuut beweeg de lift omhoog om de vliegen in de verse fles en de DSO-fles te scheiden van de vliegen die in de lift vastzitten. Tel het aantal vliegen in elke fles en in de lift. Herhaal dit.Voor elke genotype en/of conditie heeft de grootte van de groep responder vliegen geen invloed op hun vermijding van DSO. Na het uitvoeren van het experiment op een bereik van 10 tot 80 vliegen, toonde een T-test geen statistische significantie tussen de prestatie-indexen of PI's van de responder vliegen. Het aantal emitter vliegen heeft invloed op de vermijding van DSO door de vliegen, zoals aangetoond door deze grafiek, die verschillende proeven vertegenwoordigt.Gebruik 10 tot 160 emitter vliegen per keer. Er werd nog steeds een substantiële vermijding gedetecteerd met slechts 10 gestreste vliegen. De keuze, tijd en genetische achtergrond van fruitvliegen beïnvloeden de reactie op DSO, zoals aangetoond door deze grafiek, die een reactie van Canton s en Elwood stammen illustreert.Beide genotypen vertonen een sterkere vermijding van de DSO dan Oregon en sommige markin stammen Na zijn ontwikkeling. Deze techniek heeft de weg gebaand voor on

straightforward-assay-for-quantification-social-avoidance-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

In deze video artikel beschrijven we een nieuwe methode waardoor de bouw van odorant hellingen met een stabiele en controleerbaar geometrieën. We in het kort laten zien hoe deze gradiënten gebruikt kunnen worden om te screenen op olfactorische defecten (volledige en gedeeltelijke anosmie) en meer subtiele kenmerken van chemotaxis gedrag te bestuderen.

Hoge-resolutie Meting van Geur-Driven gedrag in Drosophila Larven

Gedrag assays voor het meten van motorische functies, leren en geheugen capaciteiten...

Het testen van Beweegwijzer, leren en geheugen Tekortkomingen in Drosophila Modellen van Neurodegeneratie

Drosophila melanogaster is een genetisch en gedragsmatig soepel model systeem dat is gebruikt om de moleculaire en cellulaire basis van een groot aantal belangrijke biologische processen meer dan een eeuw een begrip. Drosophila goed is benut om inzicht te krijgen in de genetische basis van vlieg gedrag.

Methoden om Assay Drosophila Gedrag

Deze video beschrijft een eenvoudige methode om vliegbeweging te kwantificeren en toont de uitgevoerde klimtest.  De vliegklimtest is een algemene test van de motorische functie die afhankelijk is van een negatieve geotaxis-respons.

Fly Climbing Assay: een methode om algemene voortbeweging in Drosophila melanogaster te testen

In deze video artikel beschrijven we een geautomatiseerde test om het effect van honger of verzadiging op olfactorische afhankelijke voedsel zoekgedrag meten de volwassen fruitvlieg Drosophila melanogaster.

A Single-fly test voor foerageergedrag in Drosophila

Het effect van genen en omgeving op de sociale ruimte van Drosophila melanogaster kan worden gekwantificeerd door middel van een krachtig maar eenvoudig analytisch paradigma. We tonen hier verschillende factoren die deze sociale ruimte kunnen beïnvloeden, en dus in aanmerking moeten worden genomen bij het ontwerpen van experimenten in dit paradigma.

Aandoeningen van de sociale ruimte in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Dit protocol beschrijft een hoogdoorlaattest voor het testen van ei-legvoorkeuren van Drosophila melanogaster met een nauwkeurigheid per enkel dier. Deze test biedt een eenvoudige, efficiënte en schaalbare platform om genen en circuitonderdelen te identificeren die een eenvoudig besluitvormingsproces controleren.

High Throughput Assay to-eierleggende Voorkeuren van de individuele onderzoeken<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Dit protocol introduceert een lichtvlek test om Drosophila larvale phototactische gedrag te onderzoeken. Bij deze test wordt een lichtvlek opgewekt als licht stimulatie en wordt het proces van het vermijden van larvale licht door een op infraroodlicht gebaseerd beeldvormings systeem vastgelegd.

Licht spot-gebaseerde assay voor analyse van Drosophila larval phototaxis

Dit werk beschrijft een eenvoudig gedragsparadigma dat de analyse van aversief associatief leren bij volwassen fruitvliegen mogelijk maakt. De methode is gebaseerd op het onderdrukken van het aangeboren negatieve geotaxisgedrag als gevolg van de associatie gevormd tussen een specifieke omgevingscontext en een elektrische schok.

Drosophila Passief vermijdingsgedrag als een nieuw paradigma om associatief aversief leren te bestuderen

Het huidige protocol beoordeelt de locomotorische activiteit van Drosophila door de beweging van vliegen in een handgemaakte arena te volgen en te analyseren met behulp van open-source software Fiji, compatibel met plug-ins om pixels van elk frame te segmenteren op basis van high-definition video-opname om parameters van snelheid, afstand, enz. Te berekenen.

Een eenvoudige techniek om locomotorische activiteit in Drosophila te testen

Autisme Spectrum Stoornis (ASS) wordt geassocieerd met verminderd sociaal en communicatief gedrag en het ontstaan van repetitief gedrag. Voor het bestuderen van de onderlinge relatie tussen ASS-genen en gedragsstoornissen in het Drosophila-model , worden in dit artikel vijf gedragsparadigma's beschreven voor het bepalen van sociale afstand, agressie, verkering, verzorging en gewenningsgedrag.

Paradigma's voor gedragsbeoordeling in het Drosophila-model van autismespectrumstoornis

Leer een eenvoudige methode om sociale vermijding in Drosophila melanogaster te kwantificeren met behulp van een T-maze. Dit protocol meet gedragsreacties op stresssignalen en helpt bij het bestuderen van genetische en omgevingsfactoren.

Ongecompliceerd Assay voor de kwantificering van Sociale Avoidance in Drosophila melanogaster

Meer video's verkennen