Name: Sublinguale immunotherapie als een alternatief voor bescherming tegen acute luchtwegeninfecties Induce (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 56 s
Description: Leer sublinguale immunotherapie om de aangeboren immuunrespons in de longen te versterken en bescherming te bieden tegen pneumokokkenpneumonie bij muizen. Deze methode biedt een veilig alternatief voor intranasaal toedienen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We acknowledge Dr. Jean-Claude Sirard from the Center for Infection and Immunity of Lille, Institute Pasteur de Lille-France, voor het vriendelijk verstrekken van de gezuiverde flagelline en Dr. Teresa Camou, directeur van het National Reference Laboratory, Ministerie van Gezondheid van Uruguay voor het vriendelijk verstrekken van de pneumokokkenstam.
De auteurs willen hun dank betuigen aan de heer Diego Acosta en de heer Ignacio Turel form BichoFeo Producciones-Uruguay voor hun toewijding en harde werk tijdens de gehele videoproductie en -bewerking.
Dit werk werd ondersteund door de subsidies PR_FCE_2009_1_2783 en BE_POS_2010_1_2544 van de Nationale Agentschap voor Onderzoek en Innovatie, ANII van Uruguay, het Programma voor Ontwikkeling van de Fundamentele Wetenschappen, PEDECIBA van Uruguay en de Sectorale Commissie voor Wetenschappelijk Onderzoek, CSIC-Universidad de la República, Uruguay.

<ol><li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumococcal+vaccines+WHO+position+paper--2012%5BTitle%5D)+AND+%22Weekly+Epidemiological+Record%22%5BJournal%5D)">Pneumococcal vaccines WHO position paper--2012.</a> Weekly Epidemiological Record. 14, 129-144 (2012).</li>
<li>Pneumonia - Facts Sheet N°331. , WHO. Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs331/en">http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs331/en</a> (2013).</li>
<li>Appelbaum, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carriage+of+antibiotic-resistant+Streptococcus+pneumoniae+by+children+in+eastern+and+central+Europe-a+multicenter+study+with+use+of+standardized+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Carriage of antibiotic-resistant Streptococcus pneumoniae by children in eastern and central Europe-a multicenter study with use of standardized methods.</a> Clin Infect Dis. 23, 712-717 (1996).</li>
<li>Ramirez, J. A., Anzueto, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changing+needs+of+community-acquired+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Changing needs of community-acquired pneumonia.</a> J Antimicrob Chemother. 66, 3-9 (2011).</li>
<li>Cuburu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublingual+immunization+induces+broad-based+systemic+and+mucosal+immune+responses+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Sublingual immunization induces broad-based systemic and mucosal immune responses in mice.</a> Vaccine. 25, 8598-8610 (2007).</li>
<li>Pedersen, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+sublingual+route+for+administration+of+influenza+H5N1+virosomes+in+combination+with+the+bacterial+second+messenger+c-di-GMP%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the sublingual route for administration of influenza H5N1 virosomes in combination with the bacterial second messenger c-di-GMP.</a> PLoS One. 25, 1-12 (2011).</li>
<li>Song, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublingual+vaccination+with+influenza+virus+protects+mice+against+lethal+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Sublingual vaccination with influenza virus protects mice against lethal viral infection.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 105, 1644-1649 (2008).</li>
<li>Cogo, R., Ramponi, A., Scivoletto, G., Rippoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prophylaxis+for+acute+exacerbations+of+chronic+bronchitis+using+an+antibacterial+sublingual+vaccine+obtained+through+mechanical+lysis%3A+a+clinical+and+pharmacoeconomic+study%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomed%22%5BJournal%5D)">Prophylaxis for acute exacerbations of chronic bronchitis using an antibacterial sublingual vaccine obtained through mechanical lysis: a clinical and pharmacoeconomic study.</a> Acta Biomed. 74, 76-87 (2003).</li>
<li>Rosaschino, F., Cattaneo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+optimizing+compliance+of+paediatric+patients+for+seasonal+antibacterial+vaccination+with+sublingually+administered+Polyvalent+Mechanical+Bacterial+Lysates+%28PMBL%29%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomed%22%5BJournal%5D)">Strategies for optimizing compliance of paediatric patients for seasonal antibacterial vaccination with sublingually administered Polyvalent Mechanical Bacterial Lysates (PMBL).</a> Acta Biomed. 75, 171-178 (2004).</li>
<li>Senna, G., Caminati, M., Canonica, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+tolerability+of+sublingual+immunotherapy+in+clinical+trials+and+real+life%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Safety and tolerability of sublingual immunotherapy in clinical trials and real life.</a> Curr Opin Allergy Clin Immunol. 13, 656-662 (2013).</li>
<li>Mascarell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+dendritic+cells+mediate+antigen-specific+tolerance+by+stimulating+TH1+and+regulatory+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Oral dendritic cells mediate antigen-specific tolerance by stimulating TH1 and regulatory CD4+ T cells.</a> J Allergy Clin Immunol. 122, 603-609 (2008).</li>
<li>Mascarell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+of+the+lingual+immune+system+reveals+the+presence+of+both+regulatory+and+effector+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Allergy%22%5BJournal%5D)">Mapping of the lingual immune system reveals the presence of both regulatory and effector CD4+ T cells.</a> Clin Exp Allergy. 39, 1910-1919 (2009).</li>
<li>Mascarell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+macrophage-like+cells+play+a+key+role+in+tolerance+induction+following+sublingual+immunotherapy+of+asthmatic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Oral macrophage-like cells play a key role in tolerance induction following sublingual immunotherapy of asthmatic mice.</a> Mucosal Immunology. 4, 638-647 (2011).</li>
<li>Hervouet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-bearing+dendritic+cells+from+the+sublingual+mucosa+recirculate+to+distant+systemic+lymphoid+organs+to+prime+mucosal+CD8+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Antigen-bearing dendritic cells from the sublingual mucosa recirculate to distant systemic lymphoid organs to prime mucosal CD8 T cells.</a> Mucosal Immunology. 7, 280-291 (2014).</li>
<li>Munoz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+administration+of+flagellin+protects+mice+from+Streptococcus+pneumoniae+lung+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Mucosal administration of flagellin protects mice from Streptococcus pneumoniae lung infection.</a> Infect Immun. 78, 4226-4233 (2010).</li>
<li>Hayashi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+innate+immune+response+to+bacterial+flagellin+is+mediated+by+Toll-like+receptor+5%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The innate immune response to bacterial flagellin is mediated by Toll-like receptor 5.</a> Nature. 410, 1099-1103 (2001).</li>
<li>Lightfield, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+function+for+Naip5+in+inflammasome+activation+by+a+conserved+carboxy-terminal+domain+of+flagellin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Critical function for Naip5 in inflammasome activation by a conserved carboxy-terminal domain of flagellin.</a> Nature Immunology. 9, 1171-1178 (2008).</li>
<li>Lightfield, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+requirements+for+NAIP5+in+activation+of+the+NLRC4+inflammasome%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Differential requirements for NAIP5 in activation of the NLRC4 inflammasome.</a> Infect Immun. 79, 1606-1614 (2011).</li>
<li>Honko, A. N., Mizel, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+administration+of+flagellin+induces+innate+immunity+in+the+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Mucosal administration of flagellin induces innate immunity in the mouse lung.</a> Infect Immun. 72, 6676-6679 (2004).</li>
<li>Janot, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radioresistant+cells+expressing+TLR5+control+the+respiratory+epithelium%27s+innate+immune+responses+to+flagellin%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Radioresistant cells expressing TLR5 control the respiratory epithelium's innate immune responses to flagellin.</a> Eur J Immunol. 39 (6), 1587-1596 (2009).</li>
<li>Van Maele, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR5+signaling+stimulates+the+innate+production+of+IL-17+and+IL-22+by+CD3%28neg%29CD127%2B+immune+cells+in+spleen+and+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">TLR5 signaling stimulates the innate production of IL-17 and IL-22 by CD3(neg)CD127+ immune cells in spleen and mucosa.</a> J Immunol. 185, 1177-1185 (2010).</li>
<li>Lee, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurologic+adverse+events+following+influenza+A+%28H1N1%29+vaccinations+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics+international%3A+official+journal+of+the+Japan+Pediatric+Society%22%5BJournal%5D)">Neurologic adverse events following influenza A (H1N1) vaccinations in children.</a> Pediatrics international: official journal of the Japan Pediatric Society. 54, 325-330 (2012).</li>
<li>Lewis, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+facial+nerve+paralysis+%28Bell%27s+palsy%29+following+intranasal+delivery+of+a+genetically+detoxified+mutant+of+Escherichia+coli+heat+labile+toxin%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Transient facial nerve paralysis (Bell's palsy) following intranasal delivery of a genetically detoxified mutant of Escherichia coli heat labile toxin.</a> PLoS One. 4, e6999(2009).</li>
<li>Mutsch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+inactivated+intranasal+influenza+vaccine+and+the+risk+of+Bell%27s+palsy+in+Switzerland%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Use of the inactivated intranasal influenza vaccine and the risk of Bell's palsy in Switzerland.</a> N Engl J Med. 350, 896-903 (2004).</li>
<li>Kuo, C. H., Wang, W. L., Chu, Y. T., Lee, M. S., Hung, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublingual+immunotherapy+in+children%3A+an+updated+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Neonatol%22%5BJournal%5D)">Sublingual immunotherapy in children: an updated review.</a> Pediatr Neonatol. 50, 44-49 (2009).</li>
<li>Nempont, C., Cavet, D., Rumbo, M., Bompard, C., Villeret, V., Sirard, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+flagellin%27s+hypervariable+region+abrogates+antibody-mediated+neutralization+and+systemic+activation+of+TLR5-dependent+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Deletion of flagellin's hypervariable region abrogates antibody-mediated neutralization and systemic activation of TLR5-dependent immunity.</a> J. Immunol. 181, 2036-2043 (2008).</li>
<li>
 Pathogen Regulation Directorate, Public Health Agency of Canada
 . Streptococcus pneumoniae: Pathogen Safety Data Sheet - Infectious Substances. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.phac-aspc.gc.ca/lab-bio/res/psds-ftss/streptococcus-pneumoniae-eng.php">http://www.phac-aspc.gc.ca/lab-bio/res/psds-ftss/streptococcus-pneumoniae-eng.php</a> (2011).</li>
<li>Marques, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+against+Streptococcus+pneumoniae+serotype+1+acute+infection+shows+a+signature+of+Th17-+and+IFN-gamma-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">Protection against Streptococcus pneumoniae serotype 1 acute infection shows a signature of Th17- and IFN-gamma-mediated immunity.</a> Immunobiology. 217, 420-429 (2012).</li>
<li>Stewart, C. C., Stewart, S. J., et al. Titering antibodies. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStewart%2C+CC+%22Current+Protocols+in+Cytometry%22">Current Protocols in Cytometry</a>. 4, Unit 4.1(2001).</li>
<li>Kubista, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+real-time+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Aspects+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">The real-time polymerase chain reaction.</a> Molecular Aspects of Medicine. 27, 95-125 (2006).</li>
<li>Pedersen, G., Cox, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mucosal+vaccine+quandary%3A+intranasal+vs.+sublingual+immunization+against+influenza%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Vaccines+%26+Immunotherapeutics%22%5BJournal%5D)">The mucosal vaccine quandary: intranasal vs. sublingual immunization against influenza.</a> Human Vaccines & Immunotherapeutics. 8, 689-693 (2012).</li>
<li>Vitaliti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+immunity+and+sublingual+immunotherapy+in+respiratory+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Regulators+and+Homeostatic+Agents%22%5BJournal%5D)">Mucosal immunity and sublingual immunotherapy in respiratory disorders.</a> Journal of Biological Regulators and Homeostatic Agents. 26, S85-S93 (2012).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Sublinguale toediening van therapeutische middelen is bewezen als een nuttig middel om de immuunreactie in de luchtwegen moduleren. Het belangrijkste voordeel van SLIT voor de behandeling van luchtwegaandoeningen is dat het niet een rechtstreekse afgifte van verbindingen in de longen of neus, die veiliger dan behandelingen gebaseerd op intranasale toediening 31. Sublinguale immunotherapie worden gebruikt om de immuunrespons op verschillende manieren moduleren, hetzij voor inductie van regulatoire reacties die kan verlichten de symptomen van allergische ontsteking en astma 32 of tijdelijke activering van het aangeboren immuun mechanismen induceren van acute longinfecties behandelen zijn. Het muismodel in deze video is een geschikte werkwijze voor het screenen van verschillende verbindingen als therapeutische middelen voor SLIT. Dit diermodel een nuttig middel om de impact te bepalenvan SLIT immuunrespons de longen alsmede in andere organen (bijvoorbeeld., afvoerende lymfeknopen of distale mucosale sites) die niet kan worden nagebootst door het gebruik van in vitro modellen. Hoewel er verschillende kranten dat de resultaten verkregen met behulp van sublinguale immunotherapie beschrijven, gedetailleerde methoden voor de procedures van sublinguale toediening niet beschikbaar zijn nog niet gemaakt. Bovendien kan het model worden gebruikt voor de evaluatie van sublinguale vaccins gericht op systemische en lokale bescherming te verlenen in de luchtwegen. Zoals getoond in de bijgaande video, sublinguale toediening van verbindingen is een eenvoudige procedure die snel kan worden uitgevoerd zonder de noodzaak van uitgebreide training. Doorgaans zal een persoon die bedreven zijn in de behandeling van dieren 1 uur nodig om SLIT presteren in een groep van 10 muizen met behulp van injecteerbare anesthetica zoals beschreven in dit protocol. Als pneumokokken uitdaging ook is uitgevoerd, zal 90 extra min voorbereiden moetende bacteriële suspensie en voer intranasale uitdaging van de dieren. De FACS protocollen hier gepresenteerde bieden eenvoudig karakterisering van het effect van SLIT bij de lokale plaats van toediening, drainerende lymfeknopen en hun effecten op celdynamiek de longen. Afzonderlijke analyse van de broncho inhoud en longparenchym is belangrijk om immuun inwoner van de luchtwegen en het infiltreren van celtypen van degenen die in het weefsel blijven discrimineren. Analyse van de BAL inhoud maakt de studie van alveolaire macrofaag omzet en de dynamiek van cellen rekrutering bij alveolaire ruimten geïnduceerd door verschillende behandelingen, bijvoorbeeld. PMN&#39;s, eosinofielen, monocyten. BAL kan ook worden gebruikt om de aanwezigheid van uitgescheiden cytokines en chemokines beoordelen door Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) of detectie van uitgescheiden IgA antilichamen opgewekt na sublinguale vaccinatie. Studie van weefsel de longenzal karakterisatie van andere celtypes, klassieke dendritische cellen, T-cellen en B-cellen mogelijk. Bereiding van BAL monsters en lymfeknopen, voor FACS-analyse is eenvoudig. Na monstername, worden normaal gesproken 60 minuten nodig om de kleuringsprotocol voltooien voor 10-20 monsters. Daarentegen zal isolatie van cellen van de longen of sublinguale weefsel meer tijd nodig omdat digestie van de extracellulaire matrix vereist. De absorptie van het therapeutische middel door sublinguaal toegediend worden kunnen worden aangepakt door het volgen van fluorescent of radioactief gelabelde moleculen via in vivo beeldvormende systemen. Sublinguale immunotherapie is een aantrekkelijke manier om immuunreacties van de luchtwegen en systemisch die kan worden gebruikt voor het behandelen of voorkomen van ademhalingsaandoeningen effectief induceren. Opheldering van de mechanismen die ten grondslag activatie vs tolerantie van de immuunreactie in de luchtwegen na SLIT is cruciaal rationele ontwerp van nieuwe therapeutische strategieën die alleen of in combinatie kunnen worden gebruikt met beschikbare behandelingen tegen verschillende respiratoire toelaat.

Het algemene doel van dit werk is om de voordelen van sublinguale immunotherapie voor de behandeling van acute respiratoire infecties (ARI) te illustreren en de voordelen van deze toedieningsroute te presenteren in vergelijking met andere toedieningsroutes, namelijk intranasaal.
ARI veroorzaken miljoenen sterfgevallen per jaar, vooral bij kinderen onder de vijf. Streptococcus pneumoniae blijft een van de belangrijkste etiologische agentia van bacteriële longontsteking bij zuigelingen en ouderen1,2. Tot op heden berust de belangrijkste beschikbare behandeling op het gebruik van antibiotica, maar er komen voortdurend resistente stammen op3,4.
SLIT induceert brede reacties op systeem- en ook op slijmvliesniveau, met name in de luchtwegen5. Het heeft bewezen effectiviteit tegen influenza-infectie en bevordert langdurige bescherming met productie van humorale en cellulaire reacties6,7. Daarnaast is aangetoond dat profylactisch behandelen met bacteriële lysaten die via de sublinguale route worden toegediend, verergering van chronische obstructieve bronchitis bij ouderen vermindert8 en terugkerende luchtweginfecties bij kinderen voorkomt9. SLIT wordt veel gebruikt voor de behandeling van allergieën en astma. Klinische studies hebben niet alleen de effectiviteit aangetoond om het immuunrespons in de luchtwegen te moduleren, maar ook de veiligheid10. Ondanks de groeiende interesse van farmaceutische bedrijven en onderzoekers in SLIT, blijven de mechanismen die betrokken zijn bij het induceren van mucosale immuunresponsen na sublinguale toediening van verbindingen onduidelijk. Recentelijk is de aandacht gericht op de mechanismen die tolerantie bevorderen die geassocieerd is met allergeendesensibilisatie. Er is voorgesteld dat residente en gerecruetete cellen in het sublinguale slijmvlies, zoals dendritische cellen en macrofagen, tolerantie kunnen bevorderen na SLIT11-13. Dendritische cellen van het orale slijmvlies kunnen IFN-gamma en IL-10 producerende T-helpercellen11 bevorderen, evenals recirculeren naar het distale genitale slijmvlies en CD8+ T-cellen14 bevorderen. Er is echter weinig bekend over de impact van SLIT op aangeboren cellen of over de capaciteit om de ziekteverwekkers op te ruimen tijdens acute respiratoire infecties.
De natuurlijke controle van pneumokokkeninfectie in de longen hangt grotendeels af van de efficiënte en snelle activering van lokale aangeboren afweer. We toonden eerder aan dat verbetering van de aangeboren immuniteit van de longen door een enkele intranasale dosis flagelline (FliC), een TLR5 en NLRC4-agonist, 75-100% van de muizen beschermt die worden uitgedaagd met een dodelijke dosis van een klinisch isolaat van Streptococcus pneumoniae serotype 1. Deze bescherming bleek afhankelijk te zijn van lokale recrutering van GR1+ cellen (waarschijnlijk polymorf-nucleaire neutrofielen, PMN's) en niet afhankelijk van antilichamen, B- of T-cellen15.
Flagelline is het structurele component van het bacteriële flagellum. In zijn monomere vorm wordt het herkend door twee Pathogen Recognition Receptors (PRR's), TLR5 die extracellulair FliC16 detecteert en NLRC4/NAIP5 inflammasoom dat intracellulair flagelline detecteert17,18. Wanneer FliC wordt gedetecteerd door de PRR's, wordt een belangrijke ontstekingsreactie geactiveerd. Wij en anderen hebben aangetoond dat instillatie van gezuiverd FliC uit Salmonella enterica serovar Typhimurium in de longen leidt tot een snelle productie van chemokines en cytokinen, vooral wanneer het wordt herkend door het longepitheel, dat op zijn beurt de recrutering van immuuncellen naar de luchtwegen, voornamelijk PMN's, orkestreert15,19-21. Hoewel tijdelijk, zou de substantiële neutrofieleninfiltratie die plaatsvindt in de luchtwegen na nasale toediening van FliC een zorg kunnen zijn als we gaan naar klinische therapieën voor menselijk gebruik. Overmatige ontsteking zou nadelig kunnen zijn voor de functie van de longen. Bovendien is aangetoond dat intranasale toediening van immunostimulerende moleculen gezichtsverlamming en/of hersentoxiciteit kan veroorzaken22-24.
Sublinguale immunotherapie biedt een veiligere alternatief om het immuunrespons in de luchtwegen te moduleren in vergelijking met de intranasale route. Het is niet-invasief, pijnloos, eenvoudig en heeft een goede patiëntcompliantie25. Verder, zoals eerder vermeld, kan het beschermende reacties in het respiratoire slijmvlies induceren zonder de risico's die geassocieerd zijn met directe intranasale of intrapulmonale toediening van formuleringen. De sublinguale route kan alternatief worden gebruikt om moleculen te leveren die grote effecten hebben op het immuunsysteem van de longen, maar die zijn bewezen giftig of grote ontsteking veroorzaken wanneer intranasaal worden toegediend. Naast deze voordelen hebben formuleringen voor sublinguale immunotherapie lagere productiekosten, aangezien niet-steriele producten via deze route kunnen worden geleverd en endotoxic shock geen zorg is voor SLIT. Aan de andere kant is het vermeldenswaard dat hogere doses van de immunostimulerende verbindingen nodig zijn in vergelijking met die gebruikt door intranasale of parenterale routes om een immuunrespons in de longen te induceren; ook zijn hoog geconcentreerde oplossingen nodig bij gebruik van het muismodel van SLIT, aangezien de anatomische plaats waar de formuleringen worden afgezet klein is.
Op basis van onze eerder gepubliceerde gegevens, ontwikkelden we een beschermingsmodel dat gebruik maakt van sublinguale immunotherapie met flagelline als modelimunostimulerend middel. We toonden aan dat een enkele dosis flagelline 60% overleving induceerde tegen invasieve pneumokokkenpneumonie veroorzaakt door de serotype 1-stam, terwijl alle muizen in de controlegroep binnen 5 dagen aan de infectie stierven. Flowcytometrie-analyse toonde aan dat een hoger aantal PMN's werd gerekruteerd in de luchtwegen van beschermde dieren na sublinguale behandeling met flagelline, wat su

<table><tbody><tr><td>Ketamine-oplossing (50 mg/ml)</td><td>Pharma Service, Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xilacine-oplossing (2 %)</td><td>Portinco S.A., Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steriele 1 ml-spuit</td><td>Modern, Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steriele 27 G-naald</td><td>Modern, Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>General Electric Health Care</td><td>E15885</td><td></td></tr><tr><td>Foetaal runderserum</td><td>ATCC</td><td>302020</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline/Streptomycine-oplossing</td><td>SIGMA</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Steriele PBS zonder Ca2+/Mg2+</td><td>PAA</td><td>H21002</td><td></td></tr><tr><td>Type-I Collageenase</td><td>Life Technologies/Gibco</td><td>17100017</td><td></td></tr><tr><td>Deoxyribonuclease I (DNAse-I)</td><td>SIGMA</td><td>D4513</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Life Technologies/Gibco</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>PerCP-Cy5.5 geconjugeerd rat anti muis IgG2b anti CD11b</td><td>BD</td><td>550993</td><td>Clone M1/70</td></tr><tr><td>APC geconjugeerd hamster anti muis IgG1 anti CD11c</td><td>BD</td><td>550261</td><td>Clone HL3&nbsp;</td></tr><tr><td>APC-Cy7 geconjugeerd rat anti muis IgG2a anti Ly6G</td><td>BD</td><td>560600</td><td>Clone 1A8</td></tr><tr><td>Steriele zoutoplossing</td><td>Laboratorio Farmaco Uruguayo, Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tryptic Soy Agar</td><td>BD Difco, France</td><td>236950</td><td></td></tr><tr><td>Defibrinerend schapenbloed</td><td>Biokey, Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steriele Petri-schalen</td><td>Greiner</td><td>633180</td><td></td></tr><tr><td>p10 Pipet</td><td>Gilson</td><td>F144802</td><td></td></tr><tr><td>p20 Pipet</td><td>Eppendorf</td><td>3120000097</td><td></td></tr><tr><td>p200 Pipet</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td></td></tr><tr><td>p200 Pipet</td><td>Capp</td><td>C200</td><td></td></tr><tr><td>p200 Pipet</td><td>Eppendorf</td><td>3120000054</td><td></td></tr><tr><td>p1000 Pipet</td><td>Eppendorf</td><td>3120000062</td><td></td></tr><tr><td>Steriele filtertips p10</td><td>Greiner</td><td>771288</td><td></td></tr><tr><td>Steriele filtertips p200</td><td>Greiner</td><td>739288</td><td></td></tr><tr><td>Steriele filtertips p1000</td><td>Greiner</td><td>750288</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>BIOSAN</td><td>V1-plus</td><td></td></tr><tr><td>Roestvrijstalen pincet met fijne punt&nbsp;</td><td>SIGMA</td><td>Z168785/Z168777</td><td>Gebogen en recht</td></tr><tr><td>Bindweefsel pincet</td><td>SIGMA</td><td>F4392</td><td>Lengte 8 inches</td></tr><tr><td>Microdissectie pincet</td><td>SIGMA</td><td>F4017</td><td>Recht&nbsp;</td></tr><tr><td>Microdissectie pincet</td><td>SIGMA</td><td>F4142&nbsp;</td><td>Gebogen</td></tr><tr><td>Mayo schaar</td><td>SIGMA</td><td>Z265993&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Scalparel</td><td>SAKIRA MEDICAL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steriele Biopsie Punch &Oslash; 3mm</td><td>Stiefel Laboratories Ltd.</td><td>2079D</td><td>5 mm diameter kan ook worden gebruikt</td></tr><tr><td>Steriele 1.5 ml-buisjes</td><td>Deltalab</td><td>200400P</td><td></td></tr><tr><td>Steriele 15 ml-buisjes</td><td>Greiner</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>Steriele 50 ml-buisjes</td><td>Greiner</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Steriele serologische pipetten 5 ml</td><td>Greiner</td><td>606160</td><td></td></tr><tr><td>Steriele serologische pipetten 10 ml</td><td>Greiner</td><td>607160</td><td></td></tr><tr><td>Steriele serologische pipetten 25 ml</td><td>Greiner</td><td>760180</td><td></td></tr><tr><td>Biologische veiligheidskast, klasse II</td><td>Thermo Scientific</td><td>1300 series, type A2</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Isolator&nbsp;Rack</td><td>RAIR&nbsp;IsoSystem&nbsp;</td><td>76144W</td><td>Super&nbsp;Mouse&nbsp;1800 AllerZone&nbsp;</td></tr><tr><td>Gekoelde microcentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>Legend Micro 21R</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge</td><td>Heraeus</td><td>Biofuge-pico</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Thermo Scientific</td><td>Sorval ST40R</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Incubator&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>Model&nbsp; 3111</td><td></td></tr><tr><td>Steriele dunne punt pasteur pipetten</td><td>Deltalab</td><td>D210022</td><td></td></tr><tr><td>Steriele pasteur pipetten</td><td>Deltalab</td><td>200007</td><td></td></tr><tr><td>Steriele 24-well plate</td><td>Greiner</td><td>662160</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue-oplossing&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>T10282</td><td></td></tr><tr><td>Automatische Celteller - Countess</td><td>Life Technologies</td><td>C10227&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Countess Celtellingkamer Slides</td><td>Life Technologies</td><td>C10312</td><td></td></tr><tr><td>Flow Cytometry Tubes</td><td>BD</td><td>343675</td><td></td></tr><tr><td>Flow Cytometer - FACS Canto-II</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Real Time PCR Instrument - Rotor Gene Q of ABI 7900</td><td>Qiagen / Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trizol Reagent</td><td>Life Technologies</td><td>15596-026</td><td>Moleculair Biologie Grad</td></tr><tr><td>DNAse-I</td><td>Life Technologies</td><td>18068-015</td><td>Moleculair Biologie Grad</td></tr><tr><td>DNAse-I Buffer 10X</td><td>Life Technologies</td><td>18068015</td><td>Moleculair Biologie Grad</td></tr><tr><td>EDTA 25 mM</td><td>Life Technologies</td><td>18068015</td><td>Moleculair Biologie Grad</td></tr><tr><td>Ultra-Pure Water</td><td>Life Technologies</td><td>10977</td><td>Moleculair Biologie Grad</td></tr><tr><td>RNAse Out</td><td>Life Technologies</td><td>100000840</td><td>Moleculair Biologie Grad</td></tr><tr><td>Random Hexamer Primers</td><td>Life Technologies</td><td>N8080127</td><td>Moleculair Biologie Grad</td></tr><tr><td>M-MLV-RT buffer</td><td>Life Technologies</td><td>18057-018</td><td>Moleculair Biologie Grad</td></tr><tr><td>M-MLV-RT enzym</td><td>Life Technologies</td><td>28025-021</td><td>Moleculair Biologie Grad</td></tr><tr><td>QuantiTect Syber Green PCR Kit</td><td>Qiagen</td><td>204143</td><td>Moleculair Biologie Grad</td></tr><tr><td>Specifieke primers&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td></td><td>Moleculair Biologie Grad</td></tr></tbody></table>

sublinguale immunotherapie als een alternatief voor bescherming tegen acute luchtwegeninfecties induce

Sublingual Immunotherapy as an Alternative to Induce Protection Against Acute Respiratory Infections

De sublinguale route is veel gebruikt om kleine moleculen in de bloedbaan af te geven en de immuunrespons op verschillende plaatsen te moduleren. Het is aangetoond dat het effectief humorale en cellulaire reacties induceert op systemische en mucosale locaties, namelijk de longen en het urogenitale kanaal. Sublinguale vaccinatie kan bescherming bevorderen tegen infecties in de lagere en bovenste luchtwegen; het kan ook tolerantie voor allergenen bevorderen en astmasymptomen verminderen. Modulatie van de immuunrespons van de longen door sublinguale immunotherapie (SLIT) is veiliger dan directe toediening van formuleringen via de intranasale route omdat het geen afgifte van potentieel schadelijke moleculen rechtstreeks in de luchtwegen vereist. In tegenstelling tot intranasale toediening, worden bijwerkingen die betrekking hebben op hersentoxiciteit of gelaatsverlamming niet bevorderd door SLIT. De immuunmechanismen die ten grondslag liggen aan SLIT blijven onduidelijk en het gebruik ervan voor de behandeling van acute longinfecties is nog niet onderzocht. Daarom is de ontwikkeling van geschikte diermodellen voor SLIT nodig om de mogelijke voordelen verder te onderzoeken.
Dit werk laat zien hoe sublinguale toediening van therapeutische middelen bij muizen kan worden uitgevoerd om hun vermogen om te beschermen tegen acute pneumokokkenpneumonie te evalueren. Technische aspecten van het omgaan met muizen tijdens sublinguale inoculatie, nauwkeurige identificatie van sublinguale mucosa, lymfeklieren die afvoeren en isolatie van weefsels, bronchoalveolaire lavage en longen worden geïllustreerd. Protocollen voor de bereiding van eencellige suspensie voor FACS-analyse worden in detail beschreven. Andere downstream toepassingen voor de analyse van de immuunrespons worden besproken. Technische aspecten van de bereiding van Streptococcus pneumoniae inoculum en intranasale uitdaging van muizen worden ook uitgelegd.
SLIT is een eenvoudige techniek die het screenen van kandidaatmoleculen mogelijk maakt om de immuunrespons van de longen te moduleren. Parameters die van invloed zijn op het succes van SLIT zijn gerelateerd aan moleculaire grootte, gevoeligheid voor afbraak en stabiliteit van hoog geconcentreerde formuleringen.

Sublinguale immunotherapie succes kan worden gebruikt immuunrespons longen moduleren. We toonden aan dat een enkele dosis van flagelline, de TLR5 en NLRC4 agonist kunnen aanzienlijke opwaartse regulatie van het mRNA dat codeert voor het induceren chemokines CXCL1, CCL20 en het cytokine IL-6 vergeleken met zoutoplossing behandelde controles. Voudige inductie van mRNA niveaus piek van 8 uur na SLIT en terug naar basale niveaus na 20 uur (figuur 1). Wanneer SLIT werd toegepast 2 uur vóór intranasale infectie met S. Pneumoniae, niveaus van CXCL1 en IL6 mRNA bleef aanzienlijk opgereguleerd zelfs 24 uur na SLIT vergelijking met niet behandelde dieren (figuur 2). Analyse van de celpopulaties in BAL en longweefsel door FACS gebleken dat dieren behandeld met FliC door sublinguale route aantal neutrofielen was toegenomen in de luchtwegen, maar niet in de longen weefsel (Figuur 3). <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Tenslotte overleving na pneumococcal challenge vergeleken bij dieren die eerder met FliC behandeld met sublinguale route of met zoutoplossing als controle. Zoals getoond in figuur 4, SLIT met flagelline bevorderde verhoogde overleving en bescherming tegen acute pneumokokkenpneumonie. <img alt="Figuur 1" fo:content-width="6.7in" src="/files/ftp_upload/52036/52036fig1highresV2.jpg" width="680" /> Figuur 1 Kinetiek van transcriptionele profiel de longen na sublinguale immunotherapie met flagelline. Acht tot 10 weken oude BALB / c muizen (n = 4) werden met 10 ug van flagelline of zoutoplossing behandeld door sublinguale route onder verdoving. De longen werden op verschillende tijdstippen verzameld en in nucleïnezuur conserveermiddel. Totaal RNA extractie werd uitgevoerd en cDNA werd gesynthetiseerd. mRNA niveaus werden geëvalueerd door real time PCR gebruikt in Tabl vermelde specifieke primerse 1 Relatieve kwantificatie werd uitgevoerd volgens ACt methode met ACTB mRNA niveaus voor normalisatie. Resultaten worden weergegeven als voudige toename vergeleken met zoutoplossing behandelde groep mediaan ± SEM. Sterretjes geven significante verschillen (p &lt;0,05) berekend volgens Mann-Whitney test. De resultaten zijn representatief voor 2 onafhankelijke experimenten. <img alt="Figuur 2" fo:content-width="6.2in" src="/files/ftp_upload/52036/52036fig2highresV2.jpg" width="660" /> Transcriptionele profiel Figuur 2 longen tijdens pneumococcen pneumonie na sublinguale immunotherapie met flagelline (n n = 4 voor controlegroep en = 7 voor behandelde groep). Acht tot 10 weken oude BALB / c muizen werden met 10 ug van flagelline of zoutoplossing behandeld met sublinguale route onder narcose. 2 uur later werden de muizen uitgedaagd door intranasale route met de minimale dodelijke dosis (MLD), waardoor 100% mortaliteit van een klinisch isolaat van S. pneumoniae serotype 1 E1585, overeenkomend met 4x10 5 CFU / 50 pl. De longen werden 24 uur na prikkeling verzameld en opgeslagen in nucleïnezuur stoffen tot RNA-extractie en cDNA-synthese werden uitgevoerd. Real time PCR werd uitgevoerd (zie primer lijst in tabel 1) en relatieve kwantificatie werd uitgevoerd volgens ACt met gebruik ACTB mRNA niveaus voor normalisatie. Resultaten worden weergegeven als voudige toename vergeleken met zoutoplossing behandelde groep mediaan ± SEM. Sterretjes geven significante verschillen (p &lt;0,05) berekend volgens Mann-Whitney test. <img alt="Figuur 3" fo:content-width="6.5in" src="/files/ftp_upload/52036/52036fig3highresV2.jpg" width="680" /> Figuur 3 Analyse van polymorfonucleaire neutrofielen (PMN) werving in het weefsel en de luchtwegen de longen &#39;na SLIT. Acht tot10 weken oude BALB / c muizen (n = 4) werden met 10 ug van flagelline of zoutoplossing behandeld door sublinguale route onder verdoving. 2 uur later werden de muizen uitgedaagd door intranasale route met de MLD van S. pneumoniae serotype 1 E1585. 24 uur na provocatie, BAL werd uitgevoerd en de longen werden verwerkt voor FACS-analyse. PMN werden geïdentificeerd als Ly6G hoog / CD11b hoog / CD11c negatieve cellen en van de FCS-SSC profiel. Resultaten worden uitgedrukt als percentage van PMN ten opzichte van de totale celaantallen in BAL of longen. Balken geven mediaan ± SEM. Sterretjes geven significante verschillen (p &lt;0,05) berekend volgens eenrichtingsverkeer Mann-Whitney test. <img alt="Figuur 4" fo:content-width="5.3in" src="/files/ftp_upload/52036/52036fig4highresV2.jpg" width="530" /> Figuur 4 SLIT met flagelline muizen beschermt tegen acute pneumokokkenpneumonie. </strong&gt; Acht tot 10 weken oude BALB / c muizen (n = 8) werden met 10 ug van flagelline of zoutoplossing behandeld door sublinguale route onder verdoving. 2 uur later werden de muizen uitgedaagd door intranasale route met de MLD van S. pneumoniae serotype 1 E1585. Overleving werd beoordeeld op een dagelijkse basis. Kaplan-Meier curves werden met elkaar vergeleken op basis Log-rank (Mantel-Cox) test. Sterretjes geven significante verschillen (p &lt;0,05) .Results zijn representatief voor 2 onafhankelijke experimenten. <table align="center" border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody align="center"><tr><td> Naam </td><td> Sequentie 5&#39;-3 &#39; </td><td> PCR-product lengte (bp) </td></tr><tr><td> mB-actin_F </td><td> GCTTCTTTGCAGCTCCTTCGT </td><td rowspan="2"> 68 </td></tr><tr><td> mB-actin_R </td><td> CGTCATCCATGGCGAACTG </td></tr><tr><td>mCCL20_F </td><td> TTTTGGGATGGAATTGGACAC </td><td rowspan="2"> 69 </td></tr><tr><td> mCCL20_R </td><td> TGCAGGTGAAGCCTTCAACC </td></tr><tr><td> mCXCL1_F </td><td> CTTGGTTCAGAAAATTGTCCAAAA </td><td rowspan="2"> 84 </td></tr><tr><td> mCXCL1_R </td><td> ACGGTGCCATCAGAGCAGTCT </td></tr><tr><td> mIL-6_F </td><td> GTTCTCTGGGAAATCGTGGAAA </td><td rowspan="2"> 78 </td></tr><tr><td> mIL-6_R </td><td> AAGTGCATCATCGTTGTTCATACA </td></tr><tr><td> mTNFalpha_F </td><td> CATCTTCTCAAAATTCGAGTGACAA </td><td rowspan="2"> 63 </td></tr><tr><td> mTNFalpha_R </td><td> CCTCCACTTGGTGGTTTGCT </td></tr><tr><td> mCxcl2_F </td><td> CCCTCAACGGAAGAACCAAA </td><td rowspan="2"> 72 </td></tr><tr><td> mCxcl2_R </td><td> CACATCAGGTACGATCCAGGC </td></tr></tbody></table> Tabel 1 Primer lijst gebruikt voor real-time PCR analyse. Specifieke primer sequenties gebruikt voor qPCR analyse. Forward en reverse primers voor muis ACTB, Cccl20, CXCL1, IL6, TNFA en CXCL1 worden gepresenteerd als 5&#39;-3&#39;-sequenties en de verwachte duur product staat in basenparen (bp).

Het huidige werk illustreert het gemak van het gebruik van sublinguale immunotherapie om de aangeboren immuunrespons in de longen te versterken en bescherming te bieden tegen acute pneumokokkenpneumonie bij muizen.

Sublinguale immunotherapie als een alternatief voor bescherming tegen acute luchtwegeninfecties Induce

Sublingual route has been widely used to deliver small molecules into the bloodstream and to modulate the immune response at different sites. It has been ...

Het algemene doel van deze procedure is om sublinguale immunotherapie te gebruiken om de aangeboren immuunrespons in de longen te stimuleren en comfortbescherming te bieden tegen dodelijke pneumokokkenpneumonie. Bij muizen bestaat de eerste stap uit het toedienen van een oplossing met het immunostimulerende middel flag in de sublinguale mucosa van een geanesthetiseerde muis. Vervolgens wordt een suspensie met een dodelijke dosis van een genetische stam van streptokokkenpneumonie intranasaal toegediend aan geanesthetiseerde muizen die eerder met flatline of zoutoplossing als controle waren behandeld.Broncho bilar lage wordt uitgevoerd om subpopulaties die de luchtwegen infiltreren te analyseren en longweefsel wordt verwerkt om een enkele celsuspensie te verkrijgen voor fenotypische karakterisering van de celpopulatie. Door multiparametrische flowcytometrie kunnen ook de onderkaaks, een accessoire onderkaakslymfeklieren evenals sublinguaal weefsel worden verwerkt om flowcytometrie of andere downstream analyse uit te voeren. Cellenpopulaties die de luchtwegen infiltreren.Longen of sublinguaal mucosa kunnen worden geïdentificeerd door immuunfenotypering en multiparametrische flowcytometrie. Immuunactivatie in verschillende weefsels na sublinguaal immunotherapie kan ook worden geanalyseerd door het transcriptieprofiel te bestuderen door realtime PCR. Welkom in het Laboratorium voor Vaccinonderzoek op het Departement Biotechnologie, we zijn gevestigd op de school van geneeskunde, universiteit van U. Een van de belangrijkste interesses van ons lab is om nieuwe strategieën te genereren voor immuuninterventie tegen respiratoire infecties. De intranasale route is met succes gebruikt voor de levering van immunostimulerende middelen om longinfecties of verschillende atheologieën te behandelen of te voorkomen.We hebben aangetoond dat intranasale levering lin, het component van bacterieel gel, effectief kan worden gebruikt om een lopende longinfectie bij STO-muizen te doorbreken. Hoewel de intranasale route normaal gesproken een lage dosis van het therapeutische middel vereist en een sterke respons in de luchtwegen induceert, heeft het enkele nadelen zoals de mogelijkheid van toxiciteit voor het centrale zenuwstelsel en facia-verlamming geassocieerd met absorptie van immunostimulerende verbindingen via de orale zenuwen. Daarom hebben we een model van UAL-immunotherapie opgezet als een alternatief om beschermende immuniteit tegen pneumokokkenpneumonie te induceren.Sublinguaal immunotherapie biedt een veiligere alternatief vergeleken met intranasale installatie. Het is niet-invasief, pijnloos en eenvoudig. Hoewel het hogere doses van een therapeutisch middel kan vereisen, kan het worden gebruikt om NA of farmaceutische producten af te leveren om uiteindelijk de immuunrespons in de lengte te moduleren.We zullen u nu laten zien hoe u sublinguaal toediening bij muizen uitvoert met flatteren als een therapeutisch middel. Subin-immunotherapie met flatteren kan uiteindelijk muizen beschermen tegen een dodelijke intranasale uitdaging met een streptokokkenpneumonie door een aangeboren immuunrespons in de long te activeren. We zullen ook de karakterisering van lengte, aangeboren respons tijdens infectie en na sublinguaal immunotherapie aanpakken met behulp van flowgeometrie en realtime PCR.Ten slotte zullen we u laten zien hoe u lokale graining-lymfeklieren en sublinguaal weefsel verzamelt voor verdere analyse. Na het bereiden van de oplossing van het te testen stimulerende middel, verdooft u de dieren door 200 microliter van de Ketamine OSI-oplossing toe te dienen door intraperitoneale injectie. De oplossing die het immunostimulant bevat in een maximaal volume van 10 microliter. Neem vervolgens de muis met uw linkerhand en houd hem vast met uw duim en wijsvinger met uw vrije hand.Plaats voorzichtig de gesloten pincetten onder de tong en houd deze op zijn plaats. Neem met uw middelvinger en ringvinger de pipet en breng de oplossing aan op de vloer van de mond en de dorsale zijde van de tong. Verwijder de pincetten en laat de mond drie tot vijf minuten rusten voordat u hem terug in de kooi plaatst.Belangrijke kenmerken van deze techniek zijn het totale volume dat wordt gebruikt om de dieren te behandelen en de anesthesie. De kleine omvang van de orale holte van muizen beperkt het maximale volume dat kan worden toegediend tot de sublinguaal ratio tot 10 microliter. Zodra de dosis is bepaald, moet u de concentratie van het monster aanpassen aan dat maximale volume.Grotere volumes kunnen ongewenst slikken of aspiratie van de oplossing veroorzaken. Anesthesie is cruciaal om slikken te voorkomen en om penetratie van de stoffen door het epitheel mogelijk te maken. We adviseren u om geen inhalatie voor anesthesie te gebruiken, omdat de muizen te snel wakker zullen worden.Merk op dat sommige injecteerbare anesthetica speekselvloed kunnen veroorzaken bij muizen. Als dat gebeurt, gebruik een klein stukje fit of papier om de overmatige speekselvloed te elimineren voordat u de oplossing met het therapeutische middel toepast. De dosis van het therapeutische middel moet worden aangepast om het effect te maximaliseren en het testen van verschillende doses wordt sterk aanbevolen. Als u eerder uw verbinding intranasaal heeft gebruikt, zou een dosis vijf tot tien keer hoger een goed startpunt zijn om te testen.Test uw therapeutische middel door de sublinguale route. Merk op dat de absorptie door het epitheel beperkt zal zijn door de grootte van het molecuul. Een aliquot van eerder bereid werkstock van streptokokkenpneumonie met een bekend aantal bacteriële CFU's centrifugeert gedurende vijf minuten bij 2.500 Gs en gooit de supernat weg. Suspend In één milliliter steriel zoutoplossing en centrifugeer opnieuw. Gooi opnieuw de supernatant weg en laat het rusten.Suspendeer de pellet in het juiste volume steriel zoutoplossing om een suspensie van vier keer 10 tot vijf CFU's in 50 microliter te verkrijgen, wat overeenkomt met de minimale bacteriële dosis van de gebruikte partikelserotype die 100% sterfte veroorzaakt in bulb C. Muizen nemen 50 microliter van de bacteriële suspensie en instilleren voorzichtig het totale volume in de neusgaten van een eerder geanesthetiseerde muis. Houd de muis rechtop gedurende twee minuten en laat hem twee minuten in dorsale positie rusten. Na de uitdaging bevestigt u de CFU-aantallen in de bacteriële suspensie door seriële tienvou

sublingual-immunotherapy-as-an-alternative-to-induce-protection

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Profylactische en therapeutische vaccinatie vaak niet sterke immuunrespons stimuleren door week afvoer van het vaccin knooppunten en daardoor slechte medewerking van immuuncellen lymfe. Door directe injectie van vaccin lymfeklieren, zogenaamde intralymfatische injectie vaccindoeltreffendheid sterk worden verbeterd en vaccindoses worden verminderd.

Intralymfatische Immunotherapie en Vaccinatie in Muizen

Intratracheale intubatie-gemedieerde (IMIT) instillatie van reagentia is een uitstekend invasieve methode voor het bestuderen ademhalingsziekte, alsmede een werkwijze voor het indruppelen therapeutische reagentia direct in de longen. Het is een snelle en zeer reproduceerbare werkwijze die geschikt is voor preklinische proeven.

Intubatie-gemedieerde Intratracheaal (IMIT) Blaasinstillatie: een niet-invasieve, Lung-specifieke Delivery System

Er is een algemene kennisgebrek over hoe vaccins werken. Hier stellen we het gecombineerde gebruik van omgekeerde genetica en botmerg chimerische muizen voor om inzicht te krijgen in de vroege gastheer immuunreacties op vaccins met een speciale focus op dendritische cellen en T-cel immuniteit.

Intranasale toediening van recombinante Influenza Vaccines in Chimerisch muismodellen om mucosale immuniteit bestuderen

We demonstreren de procedure voor intra-tracheale inoculatie van Haemophilus influenzae in de onderste luchtwegen van muizen. Dit is een zeer nuttige tool om signaleringsroutes te bestuderen die luchtwegontsteking reguleren in muismodellen.

Intratracheale toediening van<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; In muismodellen om te studeren luchtwegontsteking

Wij beschrijven hierin de methodologie die we hanteerden om de beschermende werkzaamheid en longimmuunrespons te vergelijken die werd geïnduceerd door intranasale en subcutane immunisatie met BCG in een muismodel. Onze resultaten tonen de voordelen van longvaccinatie aan en suggereren een rol voor IL17-gemedieerde respons in vaccin-geïnduceerde bescherming.

Beschermende werkzaamheid en Pulmonale immuunrespons na subcutane en intranasale BCG Administration in Muizen

Beschreven is de voorbereiding van de antigene Liposomale nanodeeltjes en hun gebruik in stimulerende B-cel activatie in vitro en in vivo. Consistente en robuuste antilichaam reacties geleid tot de ontwikkeling van een nieuw model van de pindaallergie. Het protocol voor het genereren van antigene liposomen kan worden uitgebreid tot verschillende antigenen en immunisatie modellen.

Antigene liposomen voor generatie van ziekte-specifieke antilichamen

Hier presenteren we een elegante protocol voor in vivo evaluatie van vaccin effectiviteit en host immuunrespons. Dit protocol kan worden aangepast voor vaccin modellen die studeren virale, bacteriële of parasitische ziekteverwekkers.

Evaluatie van de Host-Pathogen reacties en werkzaamheid van het vaccin in muizen

Hier gepresenteerd is een stap-voor-stap procedure om acute longschade in muizen induceren door directe intratracheal lipopolysaccharide instillatie en uit te voeren FACS analyse van bloedmonsters, bronchoalveolaire lavage vloeistof, en longweefsel. Minimale invasieve, eenvoudige handling, goede reproduceerbaarheid, en titratie van de ziekte ernst zijn voordelen van deze aanpak.

Inducerende acute Long blessure bij muizen door directe Intratracheal lipopolysaccharide instillatie

Dit artikel beschrijft en demonstreert de toediening van intranasale vaccins en de verzameling van melk van zogende konijnen (Oryctolagus cuniculus) als een middel om mucosale immuniteit te beoordelen in een translationeel geschikt model van maternale immunisatie.

Intranasale immunisatie en melkverzameling in studies naar maternale immunisatie bij Nieuw-Zeelandse witte konijnen (Oryctolagus cuniculus)

In deze studie is aangetoond dat een niet-invasieve endotracheale installatietechniek ALI bij ratten ontwikkelt met behulp van een basislaryngoscoop om een precieze LPS-afgifte aan de longen te garanderen. De LPS wordt toegediend via een endotracheale buis met behulp van een laryngoscoop. De omvang van het longletsel wordt op meerdere tijdstippen beoordeeld.

Niet-invasieve endotracheale toediening van lipopolysaccharide om acute longschade bij knaagdieren te induceren

Leer sublinguale immunotherapie om de aangeboren immuunrespons in de longen te versterken en bescherming te bieden tegen pneumokokkenpneumonie bij muizen. Deze methode biedt een veilig alternatief voor intranasaal toedienen.

Sublinguale immunotherapie als een alternatief voor bescherming tegen acute luchtwegeninfecties Induce

Meer video's verkennen