Name: Visualiseren Non-lytische Exocytosis van Cryptococcus neoformans Van Macrofagen behulp Digital Light Microscopy (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 2 s
Description: Leer de visualisatie van niet-lytische exocytose van Cryptococcus neoformans uit macrofagen met digitale lichtmicroscopie. Deze methode maakt real-time observatie van gastheer-pathogeen interacties gedurende 24 uur mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit onderzoek werd mede ondersteund door NIH awards 5T32AI07506, 5R01AI033774, 5R37AI033142, 5R01AI052733.

Alle dierlijke werk werd gedaan in overeenstemming met de voorschriften en richtlijnen van het Institute for Animal Studies aan Albert Einstein College of Medicine. 1 Groei Voorwaarden van C. neoformans H99 (serotype A) <ol><li> Grow individuele C. neoformans (Cn) kolonies op Sabouraud agar platen. </li><li> Een dag voorafgaand aan het experiment, selecteer een kolonie en te enten 10 ml Sabouraudvloeistof. </li><li> Laat kweek overnacht groeien bij 37 ° C schudden met een snelheid van 250 rpm. </li></ol> 2 Isolatie en vervaardiging van primaire Bone macrofagen van C57 / Bl6 Muizen <ol><li> Euthanaseren muizen door het plaatsen van dieren in een CO 2 kamer totdat niet meer ademen. Als tweede maatregel, cervicaal ontwrichten de nek voor het begin van dissectie. Steriliseren hele lichaam met 70% ethanol. </li><li> Verwijder beide dijbenen en scheenbeen en plaats botten in steriele DMEM. </li><li> Verwijder overtollig weefsel en spieren met behulp van devoud doekjes totdat botten zijn volledig schoon. </li><li> Plaats alleen intacte botten in een petrischaal met 70% ethylalcohol en incubeer gedurende 3 min voor geassocieerde micro-organismen te doden. Verwijder de botten en plaats in petrischaal met steriele DMEM. </li><li> Gesneden uiteinden van de botten voorzichtig. Houd bot over een lege 50 ml conische buis op ijs geplaatst en zorgvuldig spoelen 10 ml koud DMEM met een 25 G naald door elk been. OPMERKING: Elke muis zal 4 botten (2 dijbenen, scheenbenen 2) opleveren. Daarom moet men muis ongeveer 40 ml celsuspensie verkregen. </li><li> Centrifugeer celsuspensie bij kamertemperatuur gedurende 10 min bij 650 x g. </li><li> Gedurende deze centrifugatie bereiden en filter gesteriliseerd beenmerg macrofagen toevoeren media bestaande uit DMEM gesupplementeerd met 20% L929, 10% foetaal kalfsserum, 10% NCTC-109, 1% Pen-Strep, 1% HEPES, 1% L-Glutamine , 1% niet-essentiële aminozuren, 0,1% 2-Mercaptoethanol. </li><li> Hersuspendeer resulterende pellet met 10 ml van het voeden van de media. Pass cel suspension door een 70 micrometer cel zeef om celklonten verstoren en verwijder grof vuil. </li><li> Plaat 1 ml celsuspensie in 10 ml van het voeden van de media in Petri-schalen die zijn opgegeven voor weefselkweek gebruik (voor een totaal van 10 platen). </li><li> Laat cellen hechten bij 37 ° C met 10% CO2. Voeg 5 ml verse voeding media op dag 3 Op dag 7, volledig vervangen van de voeding media en macrofagen zijn klaar om te worden gebruikt. </li><li> De dag voorafgaand aan het experiment, los macrofagen uit plaat door het verwijderen van het voeden van de media en voeg 5 ml van een zachte cel strippen reagens tot het bord. </li><li> Incubeer gedurende 5-10 minuten bij 37 ° C en macrofagen schaffen voorzichtig pipetteren. </li><li> Pellet cellen door centrifugatie bij 650 xg gedurende 10 minuten. </li><li> Resuspendeer pellet in 1 ml van het voeden van de media. Met een 1:20 verdunning, bereken de concentratie van macrofagen door pipetteren 10 ui celsuspensie op een hemocytometer. </li><li> Met behulp van 14 mm glazen bodem petrischaaltjes, plaat eenconcentratie van 1 x 10 5 macrofagen rechtstreeks op het binnenoppervlak vormt waarvan maximaal 200 gl houdt, zodat voorzichtigheid om deze hoeveelheid niet overschrijden zoals getoond in figuur 4. </li><li> Laat de cellen hechten aan de glazen petrischaal door het plaatsen van de vaat in een 37 ° C incubator gedurende 1 uur. </li><li> Voeg 1-2 ml voeden medium aangevuld met LPS op 1 mg / ml en IFNg bij 500 u / ml en laat cellen overnacht geïncubeerd. </li></ol> 3 co-incubatie van Primaire muizenmacrofagen en C. neoformans <ol><li> Op de dag van het experiment, verwijdert 1 ml overnacht kweek geïnoculeerd en pellet gistcellen door centrifugeren gedurende 5 minuten bij 420 x g. </li><li> Was de cellen 3 maal met steriel PBS tot media-en extracellulaire cryptococcal producten te verwijderen, zoals de polysaccharide glucuronoxylomannan (GXM) met de snelheid en de tijd hierboven vermeld. </li><li> Resuspendeer celpellet in 1 ml steriel PBS en een 1: 100 verdunning. Pipetteer 10 ul tverdunning hij op een hemocytometer en tel cellen. Voeg gistcellen een MOI van 1: 5. Bijvoorbeeld, als er 1 x 10 5 macrofagen / putje, maak een celsuspensie van 5 x 10 6 / ml Cn en voeg 100 ul van deze oplossing voor een totaal van 5 x 10 5 Cn. </li><li> Voeg berekende volume cryptococcus celsuspensie 1 ml voeden media met de mAb 18B7 antilichaam bij een concentratie van 10 ug / ml. Incubeer celsuspensie bij kamertemperatuur gedurende 5 minuten. </li><li> Verwijder invoeren vanuit glazen bodem petrischaal en was 1x met steriele PBS. Voeg 100 ul van opsonized Cn direct goed. </li><li> Laat cellen geïncubeerd gedurende 2 uur bij 37 ° C met 10% CO2. </li><li> Na co-incubatie, controleren door de microscoop dat macrofagen Cn hebben geïnternaliseerd. Om in aanmerking geïnternaliseerd moeten cryptococcal cellen duidelijk te zien binnen de grenzen van de macrofaag. </li><li> Was de petrischaal 3x met steriel PBS om alle extracellula verwijderenr Cn. </li><li> Voeg 1-2 ml van het voeden van de media, zonder de toevoeging van mAb 18B7, en het opzetten van de microscoop. </li></ol> 4 Visualiseren Non-lytische Exocytosis in Real-time gebruik te maken van Digital Light Microscopy OPMERKING: Om deze experimenten uit te voeren, een microscoop die wordt geleverd met een bijgevoegd incubatie kamer die CO 2 levering en de verwarming is vereist omvat. <ol><li> Voorafgaand aan het experiment, pre-warm het incuberen kamer gedurende ten minste 30 min tot 37 ° C. Controleer of de CO 2 uitleest 5% bij aanvang van de proef. </li><li> Plaats glazen bodem petrischaal op microscoop platform, dek af met CO 2 deksel, en sluit alle deuren om geen warmte ontsnapt verzekeren. </li><li> Met behulp van de 10x doelstelling met de microscoop in fase contrast, focus op een duidelijk gebied van geïnfecteerde macrofagen. Op basis van het experiment, bepalen de doelstelling door het aantal macrofagen moeten worden bestudeerd. </li><li> Opgezet microscoop software om take een afbeelding om de 4 min voor een 24-uurs periode. </li><li> Na 24 uur wordt het experiment voltooiing hebben bereikt en een totaal van 361 beelden zullen zijn verzameld. Deze beelden exporteren als .jpegs op een 5% compressie. Met behulp Afbeelding J software, beelden bekijken als een Visual Stack op 5 beelden per sec. Als de film moet worden bekeken voor publicatie of een presentatie, sla het op als ofwel een AVI of MOV-bestand, afhankelijk van welk formaat het beste werkt voor de kijker. </li></ol>

<ol><li>Voelz, K., May, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryptococcal+Interactions+With+the+Host+Immune+System%5BTitle%5D)+AND+%22Eukaryotic+cell%22%5BJournal%5D)">Cryptococcal Interactions With the Host Immune System.</a> Eukaryotic cell. 9 (6), 835-846 (2010).</li>
<li>Johnston, S. A., May, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryptococcus+interactions+with+macrophages%3A+evasion+and+manipulation+of+the+phagosome+by+a+fungal+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+microbiology%22%5BJournal%5D)">Cryptococcus interactions with macrophages: evasion and manipulation of the phagosome by a fungal pathogen.</a> Cellular microbiology. 15 (3), 403-411 (2012).</li>
<li>Sabiiti, W., May, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+infection+by+the+human+fungal+pathogen+Cryptococcus+neoformans%5BTitle%5D)+AND+%22Future+microbiology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of infection by the human fungal pathogen Cryptococcus neoformans.</a> Future microbiology. 7 (11), 1297-1313 (2012).</li>
<li>Bliska, J. B., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+pathogenic+bacteria+and+fungi+%E2%80%94+a+case+of+convergent+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Intracellular pathogenic bacteria and fungi — a case of convergent evolution.</a> Nature Reviews Microbiology. 7, 165-171 (2008).</li>
<li>Alvarez, M., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-to-cell+spread+and+massive+vacuole+formation+after+Cryptococcus+neoformans+infection+of+murine+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+immunology%22%5BJournal%5D)">Cell-to-cell spread and massive vacuole formation after Cryptococcus neoformans infection of murine macrophages.</a> BMC immunology. 8 (1), 16(2007).</li>
<li>Ma, H., Croudace, J. E., Lammas, D. A., May, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+cell-to-cell+spread+of+a+pathogenic+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+immunology%22%5BJournal%5D)">Direct cell-to-cell spread of a pathogenic yeast.</a> BMC immunology. 8, 15(2007).</li>
<li>Alvarez, M., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagosome+extrusion+and+host-cell+survival+after+Cryptococcus+neoformans+phagocytosis+by+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Phagosome extrusion and host-cell survival after Cryptococcus neoformans phagocytosis by macrophages.</a> Curr Biol. 16 (21), 2161-2165 (2006).</li>
<li>Ma, H., Croudace, J. E., Lammas, D. A., May, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expulsion+of+live+pathogenic+yeast+by+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Expulsion of live pathogenic yeast by macrophages.</a> Curr Biol. 16 (21), 2156-2160 (2006).</li>
<li>Johnston, S. A., May, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+fungal+pathogen+Cryptococcus+neoformans+escapes+macrophages+by+a+phagosome+emptying+mechanism+that+is+inhibited+by+Arp2%2F3+complex-mediated+actin+polymerisation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+pathogens%22%5BJournal%5D)">The human fungal pathogen Cryptococcus neoformans escapes macrophages by a phagosome emptying mechanism that is inhibited by Arp2/3 complex-mediated actin polymerisation.</a> PLoS pathogens. 6 (8), (2010).</li>
<li>Carnell, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+polymerization+driven+by+WASH+causes+V-ATPase+retrieval+and+vesicle+neutralization+before+exocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Actin polymerization driven by WASH causes V-ATPase retrieval and vesicle neutralization before exocytosis.</a> The Journal of cell biology. 193 (5), 831-839 (2011).</li>
<li>Voelz, K., Lammas, D. A., May, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+signaling+regulates+the+outcome+of+intracellular+macrophage+parasitism+by+Cryptococcus+neoformans%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Cytokine signaling regulates the outcome of intracellular macrophage parasitism by Cryptococcus neoformans.</a> Infection and immunity. 77 (8), 3450-3457 (2009).</li>
<li>Bain, M. J., Lewis, E. L., Okai, B., Quinn, J., Gow, A. R. N., Erwig, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-lytic+expulsion%2Fexocytosis+of+Candida+albicans+from+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Fungal+genetics+and+biology%22%5BJournal%5D)">Non-lytic expulsion/exocytosis of Candida albicans from macrophages.</a> Fungal genetics and biology. 49 (9), 677-678 (2012).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat we geen concurrerende financiële belangen of andere belangenconflicten.

Hier hebben wij een werkwijze waarmee schimmel-macrofaag interacties kunnen worden opgenomen en in real time geanalyseerd gedurende een periode van 24 uur beschreven. Ons laboratorium heeft dit protocol gebruikt om veel van de temporele aspecten van niet-lytische exocytose bestuderen en blijft real-time microscopie om de morfologische componenten die dit proces omringen bepalen. Voor deze techniek om ideale resultaten op, moet speciale aandacht worden besteed aan bepaalde stappen in het prot...

De fasen van een schimmelinfectie tussen cryptococcal cellen en macrofagen zijn goed gedocumenteerd 1-3. Na gistcellen worden opgenomen door macrofagen, kan een verscheidenheid aan interacties optreden: de macrofaag kan lyseren vrijgeven zijn fungale lading in de extracellulaire ruimte, of het kan de besmetting te bestrijden door hem de gistcellen binnen de grenzen van de cellulaire membraan 4. Echter, enkele jaren geleden een nieuwe resultaat is beschreven onafhankelijk door twee groepen: niet-lytische exocytose, een werkwijze waarbij een macrofaag uitgewist sommige of alle cryptokokkeninfecties cellen in het omringende milieu of een naburige cel en zowel de gastheer en pathogeen blijven levensvatbaar 5 -8. Verschillende studies hebben geprobeerd om de moleculaire mechanismen achter deze interactie te begrijpen, maar we nog steeds hebben niet een volledige greep op wat drijft dit fenomeen. De mogelijkheid om beelden in real-time vastleggen en dan vervolgens meerdere infecteren analyserened macrofagen maakt het mogelijk om veel vragen over de fysische eigenschappen omringende niet-lytische exocytose met betrekking tot de timing, de ruimtelijke capaciteit, veranderingen in morfologie en zelfs stress van macrofagen tijdens een schimmelinfectie te beantwoorden. Doordat de cellen worden gehuisvest in een omgeving die vergelijkbaar is met die van een incubator, kunnen we de dynamische aard van macrofaag-schimmel cel interacties blik. Onderzoekers hebben deze techniek gebruikt om diverse onderdelen van dit proces te bestuderen. De rol van de phagosome hierbij is duidelijk gemaakt met fluorescerende kleuring en actine blokkers 9, terwijl een andere groep gebruikt deze methode aan te tonen dat de niet-lytische exocytose werd geblokkeerd in cellen die had WASH kiemvormende eiwitdomeinen geschrapt 10. Het effect van cytokine signalering is ook vastgesteld met behulp van real-time microscopie 11. Deze werkwijze is niet beperkt tot C. neoformans zoals ook werd waargenomen met Candida albicans, another schimmelpathogeen dat de mogelijkheid om macrofagen infecteren 12 heeft. Deze bevindingen zijn voorbeelden van hoe deze methode een schat aan informatie kan verstrekken aan een gebied dat we zo weinig weten.

<table><tbody><tr><td>Sabouraud Dextrose Agar</td><td>BD</td><td>DF0109-17-1</td><td></td></tr><tr><td>Sabouraud Dextrose Broth</td><td>BD</td><td>DF0382-17-9</td><td></td></tr><tr><td>Dubelcco's Modified Eagle's Medium (DMEM)</td><td>Corning Cellgro</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Calf Serum (FCS)</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S12450</td><td></td></tr><tr><td>NCTC 109</td><td>Invitrogen</td><td>21340-039</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>HEPES Buffer</td><td>Corning Cellgro</td><td>25-060-Cl</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Invitrogen</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Non-essential Amino Acids</td><td>Corning Cellgro</td><td>25-025-Cl</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Invitrogen</td><td>21985-023</td><td>Toxisch</td></tr><tr><td>3003 Tissue Culture Petri Dishes&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>08772E</td><td></td></tr><tr><td>CellStripper</td><td>Corning Cellgro</td><td>25-056-Cl</td><td></td></tr><tr><td>Mat-tek Glass Bottom Culture Dishes</td><td>MatTek</td><td>P35GC-1.5-14-C</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma</td><td>L3137</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IFN-g</td><td>Roche</td><td>NC 9222016</td><td></td></tr><tr><td>mAb 18B7</td><td>Non-commercieel antilichaam geproduceerd in ons lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Axiovert 200M Microscoop met incubatiekamer</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

visualiseren non-lytische exocytosis van cryptococcus neoformans van macrofagen behulp digital light microscopy

Visualizing Non-lytic Exocytosis of Cryptococcus neoformans from Macrophages Using Digital Light Microscopy

Veel aspecten van de infectie van macrofagen door Cryptococcus neoformans zijn uitgebreid onderzocht en goed gedefinieerd. Echter, een specifieke interactie die niet duidelijk wordt begrepen non-lytische exocytose. In dit proces worden gistcellen in de extracellulaire ruimte vrijgemaakt door een slecht begrepen mechanisme dat zowel de macrofaag en Cn levensvatbare bladeren. Hier beschrijven we hoe een groot aantal individueel geïnfecteerde macrofagen volgen een 24 uur infectie periode van tijd verstreken microscopie. Geïnfecteerde macrofagen zijn ondergebracht in een droogstoof met een CO 2 atmosfeer bevestigd aan een microscoop die onder dezelfde voorwaarden als een celcultuur incubator biedt. Levende digitale microscopie kan informatie over de dynamische interacties tussen een gastheer en ziekteverwekker die niet beschikbaar is in statische beelden te leveren. Het kunnen elke geïnfecteerde cel visualiseren kan aanwijzingen geven hoe macrofagen behandelen schimmelinfecties, en vice versa. Deze techniek isa krachtig instrument in de dynamiek die achter een complex fenomeen te bestuderen.

De beelden die deze techniek levert kan op verschillende manieren informatie omringende wat er na cellen C. hebben gefagocyteerd verzamelen geanalyseerd neoformans. Zoals te zien in figuur 1, zijn er ongeveer 100 macrofagen die ofwel of geen infectie. Elk van deze macrofagen geeft de kijker de kans om gastheer-pathogeen interacties te bestuderen op een zeer microscopisch niveau. Zoals figuren 2 en 3 tonen, zijn er verschillende uitkomsten die kan voork...

We beschrijven hoe om te visualiseren macrophage- C. neoformans (Cn) interacties in real time, met bijzondere nadruk op het proces van niet-lytische exocytose middels digitale lichtmicroscopie. Met deze techniek individueel geïnfecteerde macrofagen kunnen worden bestudeerd om verschillende aspecten van dit verschijnsel bepalen.

Visualiseren Non-lytische Exocytosis van Cryptococcus neoformans Van Macrofagen behulp Digital Light Microscopy

Many aspects of the infection of macrophages by Cryptococcus neoformans have been extensively studied and well defined. However, one particular ...

Het algemene doel van deze procedure is om niet-lytische exocytose van cryptococcus neoformans uit primaire beenmergneuron-macrofagen te visualiseren. Dit wordt bereikt door eerst het beplaten en infecteren van geactiveerde neuro-macrofagen met schimmelcellen om fagocytose en internalisatie van Xeomin mogelijk te maken. De tweede stap is het verwijderen van extracellulaire schimmelcellen om een duidelijke monolaag van geïnfecteerde en niet-geïnfecteerde macrofagen te garanderen.Vervolgens worden macrofagen 24 uur in een kooldioxide temperatuurgecontroleerde kamer geïncubeerd en gedurende 24 uur geregistreerd om gevallen van niet-lytische exocytose en andere interacties vast te leggen. De laatste stap is het maken van een film door alle frames die in een periode van 24 uur zijn gemaakt, samen te drukken. Uiteindelijk wordt macrofaagvisualisatie met digitale lichtmicroscopie gebruikt om de verscheidenheid aan niet-lytische exocytosetypen die macrofagen gedurende een 24-uurs infectie ondergaan, te observeren.Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het veld van gastheer-pathogeen interactie, zoals timing en kwantificering van cellulaire gebeurtenissen. Se

visualizing-non-lytic-exocytosis-cryptococcus-neoformans-from

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Source: Lê-Bury, G., et al. Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates live confocal imaging of HIV-1-infected human macrophages to visualize and quantify phagosome migration using GFP fluorescence and bright field tracking, providing insights into how HIV alters intracellular trafficking during Fc receptor–mediated phagocytosis.

Live Imaging of Phagosome Migration in HIV-1-Infected Human Macrophages

In this video, we demonstrate a cytotoxicity assay to assess Cryptococcus neoformans, a pathogenic fungus, infection in macrophages. The cytotoxicity is determined by the release of cytoplasmic lactate dehydrogenase enzyme due to macrophage lysis caused by Cryptococcus neoformans infection.

A Lactate Dehydrogenase Release Assay to Detect Cryptococcus neoformans Infection in Macrophages

We beschrijven werkwijzen voor levende cellen videomicroscopie...

Live-cel Video Microscopie van pathogene schimmel Fagocytose

Hier laten we zien hoe beeldcytometrie kan worden gebruikt voor kwantificering van pathogene schimmels in samenhang met gastheercellen in kweek. Deze techniek kan worden gebruikt als alternatief voor CFU opsomming.

Gebruik van Afbeelding Cytometry voor kwantificering van pathogene schimmels in associatie met gastheercellen

Een werkwijze om het vermogen van geïsoleerde muis alveolaire macrofagen om de groei van Aspergillus gefagociteerde sporen bedienen door confocale microscopie evalueren.

Evaluatie anti-schimmel activiteit van geïsoleerde alveolaire macrofagen door confocale microscopie

In dit artikel wordt een protocol beschreven voor de infectie van macrofagen met Cryptococcus neoformans. Ook wordt een methode uitgelegd voor het verminderen van sterolen in de macrofagen. Deze protocollen bieden een leidraad om schimmelinfecties in vitro te bestuderen en de rol van sterolen in dergelijke infecties te onderzoeken.

Macrofagen Cholesterol Uitputting en het effect daarvan op de Fagocytose van<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

Hier beschrijven we een microscoopgebaseerde techniek om de vroege cascades van gebeurtenissen tijdens fagocytose van pathogenen zoals de schimmels Candida albicans en deeltjes die groter zijn dan 0,5 µm, waaronder zymosan en IgG-gecoate kralen, te visualiseren en te kwantificeren.

Het visualiseren van de vroege stadia van Phagocytosis

Efferocytosis, de fagocytische verwijdering van apoptotic cellen, is nodig om de homeostase te handhaven en wordt vergemakkelijkt door de receptoren en signaalroutes waarmee voor de erkenning, de engulfment, en de internalisering van de apoptotic cellen. Hierin presenteren wij een fluorescentie microscopie protocol voor de kwantificering van efferocytosis en de activiteit van efferocytic signaalroutes.

Kwantificering van Efferocytosis door eencellige fluorescentie microscopie

Dit papier is een protocol voor de voorbereiding van een co-cultuur van crypto Kokken cellen en eencellige die wordt bestudeerd met behulp van stilstaand, fluorescerende beelden en hoge-resolutie transmissie elektronen microscoop beelden. Hier wordt geïllustreerd hoe kwantitatieve gegevens dergelijke kwalitatieve informatie kunnen aanvullen.

Aanvullend gebruik van microscopische technieken en fluorescentie lezen in het bestuderen van interacties Cryptococcus-amoeba

Dit protocol beschrijft een techniek voor het visualiseren van macrofaag gedrag en overlijden in embryonale zebravis tijdens infectie met Mycobacterium de . Stappen voor de bereiding van bacteriën, infectie van de embryo's, en intravital microscopie zijn opgenomen. Deze techniek kan worden toegepast op de observatie van cellulaire gedrag en overlijden in soortgelijke scenario's met betrekking tot infectie of steriele ontsteking.

Visualisatie van macrofaag lytische celdood tijdens mycobacteriële infectie in zebravis-embryo's via Intravital microscopie

Leer de visualisatie van niet-lytische exocytose van Cryptococcus neoformans uit macrofagen met digitale lichtmicroscopie. Deze methode maakt real-time observatie van gastheer-pathogeen interacties gedurende 24 uur mogelijk.

Visualiseren Non-lytische Exocytosis van Cryptococcus neoformans Van Macrofagen behulp Digital Light Microscopy

Meer video's verkennen