De Swimmeret Systeem van rivierkreeftjes: Een praktische gids voor de dissectie van de Nerve Koord en extracellulaire Opnamen van de Motor van het Patroon

Het algemene doel van deze procedure is om de abdominale zenuwstreng van de rivierkreeft te dissecteren om deze te gebruiken in elektrofysiologische studies. Dit wordt bereikt door de rivierkreeft eerst te verdoven. Vervolgens wordt een grof dissectie uitgevoerd om de ventrale plaat van de rivierkreeft te isoleren.

Daarna wordt een fijne dissectie uitgevoerd om het centrale zenuwstelsel volledig te isoleren van de raic-ganglia naar abdominale ganglia. Een zes. Ten slotte wordt de ganglionschede van alle ganglia verwijderd om elektrofysiologische experimenten te vergemakkelijken.

Uiteindelijk worden de ketting van abdominale ganglia gebruikt voor extra- of intracellulaire opnames. Om de coördinatie van centrale patroongeneratoren te bestuderen of om de morfologie en de synaptische context van geïdentificeerde neuronen te onderzoeken. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van neurowetenschappen, zoals het bieden van praktische ervaring met de functie van zenuwnetwerken om fic FLA-commotie in het geïsoleerde zenuwstelsel te kunnen opnemen, of om de morfologie van abdominale ganglia of die van specifieke neuronen te karakteriseren.

Hoewel deze methode inzicht kan geven in het zwemsnelheidssysteem van rivierkreeft. Het kan ook worden toegepast op andere systemen zoals een neuronaal netwerk dat het staartflipgedrag in rivierkreeft aanstuurt. Werkend met de rivierkreeft Pacific Stacia Linea Guus. Na het verdoven van een dier volgens het tekstprotocol, wordt de buikzijde naar boven gehouden en worden beide klauwen bij de basen dicht bij de thorax met sterke scharen afgesneden.

Vervolgens worden de linker en rechter euro-poten verwijderd. Plaats het dier met de buikzijde naar boven in een dissectieschaal gevoerd met zwart sard voordat u koude zoutoplossing gebruikt om door de klauwopening te perfunderen. Gebruik vervolgens sterke scharen om een enkele dwarssnede te maken net achter de ogen van de rivierkreeft om hem te onthoofden.

Vervolgens worden alle looppoten bij de basisgewrichten verwijderd om de buik samen met de laatste thoracale segmenten van de rest van de thorax te isoleren. Steek de punt van de schaar in de opening van het tweede loopbeen en snijd naar de andere kant. Nadat de snede naar beide zijden is uitgebreid door de thorax en enkele interne organen zijn blootgelegd zoals beschreven in het tekstprotocol, verwijdert u het voorste deel van de thorax.

Verwijder nu de interne organen en spoel het dier met koude zoutoplossing. Ga door met de dissectie met een snede op een maximale laterale positie tussen de lumon en de zwemratten door de hele lengte van de sternale plaat. Maak dezelfde snede aan de andere kant.

Plaats de buik van de rivierkreeft met de buikzijde naar boven in de dissectieschaal. Gebruik insectenpinnen om het specimen achteraan op het tellson en vooraan op de overblijfselen van de carabase te fixeren. Vul de schaal met rivierkreeft-zoutoplossing zodat deze het specimen bedekt.

Gebruik grove pincetten in de linkerhand om door een loopbeenopening te grijpen en het specimen open te trekken. Identificeer de grote twee dorsale flexorspierstrengen. Fixeer ze en snijd hun ventrale basen evenals de sternaal slagader af.

Bloot de eerste abdominale ganglia A een en bijbehorende zenuwen N een N twee. Ga nu naar het tweede abdominale segment. Verwijder de basis van de spierstrengen dicht bij de ventrale basis.

Het abdominale ganglion A twee is nu zichtbaar met de bijbehorende zenuwen N een, N twee en N drie. Doorsnijd de zenuwen N drie op de meest afgelegen positie van de zenuwstreng. Herhaal deze stappen voor de volgende drie abdominale segmenten met de abdominale ganglia.

Een drie tot een vijf. Wanneer het abdominale ganglion bereikt wordt, een zes. Snijd de sternaal plaat achter de zenuwen van een zes.

Bewaar het ventrale deel en speld het vast. Dorsaalzijde omhoog in de schaal gevuld met zoutoplossing onder de microscoop. Gebruik pincetten om de meest voorste delen van het cephalon thoracale stern te verwijderen.

Snijd vervolgens de spieren tussen de resterende exoskelettale structuren. Nadat u voorzichtig het voorste uiteinde van de ventrale zenuwstreng hebt opgetild, snijd de thoracale zenuwen lateraal door. Concentreer u op een een en snijd de zenuwen N een en N twee van een een op een maximum van één centimeter in lengte voor het vastpinnen ervan.

Ga vervolgens naar A twee en identificeer de N een, N twee en N drie zenuwen van dit segment. De zenuwen n een van abdominale ganglia, een twee tot een vijf. Bevinden zich tussen twee sternale cuticulaire ontvouwingen in elk segment en worden bedekt door musculatuur.

Begin vervolgens aan de laterale rand van de buik met een snede langs de posterieure sternale cuticulaire invouwing en ga naar de middenlijn Na het ontdekken van N een volgens het tekstprotocol. Snijd indien nodig de zenuw zo distaal mogelijk. Ga naar de contralaterale zijde en begin met het isoleren van de zenuw N een vanaf de middenlijn nabij het ganglion door te snijden langs de posterieure sternale cuticulaire ontvouwing.

Snijd nu de zenuwen N twee van dit ganglion op een geschikte lengte voor het vastpinnen. Herhaal vervolgens de stappen die zijn getoond voor abdominale ganglia. Een twee voor een drie tot een vijf zo distaal mogelijk.

Snijd de zenuwen van ganglion een zes. Gebruik pincetten om meerdere zenuwen van een zes vast te grijpen om het ganglion op te tillen en begin met het isoleren van de ketting van ganglia van de sternale plaat. Na volledige isolatie van de zenuwstreng, brengt u de ketting van ganglia over naar een petrischaal gevoerd met duidelijke sill guard en gevuld met zoutoplossing met behulp van kleine pincetten gesneden uit roestvrij staal draad terwijl u een lichte stretch-touch toepast.

Speld de ketting van ganglia in een rechte lijn met de zenuwstreng gerangschikt met de dorsale zijde omhoog. Bewaar alleen de laatste twee thoracale ganglia en speld de thoracale zenuwen opzij. Speld de zenuwen van een een uit op