Name: Isolatie en Excisie van Muriene Aorta; Een veelzijdige techniek in de studie van hart- en vaatziekten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 25 s
Description: Leer de isolatie en excisie van de murine aorta voor hart- en vaatziektenonderzoek. Deze methode maakt gedetailleerde analyses van aortapathologie en moleculaire veranderingen mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs hebben geen dankbetuigingen.

Alle dierlijke procedures werden uitgevoerd met de goedkeuring van de Institutional Animal Care en gebruik Comite van de Universiteit van Cincinnati en in overeenstemming met de Gids voor de zorg en het gebruik van proefdieren van de National Institutes of Health (NIH Publication No. 85-23, herzien in 1996). 1. Voorbereiding van de muis <ol><li> Euthanaseren door het blootstellen van het dier naar een supratherapeutische dosis verdoving, isofluraan ingeademd door te voeren. Controleer primaire euthanasie via teen knijpen als een schadelijke stimulus. Secundaire methode van euthanasie, diafragma snijden, zal plaatsvinden in een aanstaande stap. Alternatieve methoden kunnen gebruikt verleend euthanasie wordt verkregen worden. </li><li> Sanitizie het buitenoppervlak van de muis door sproeien de vacht langs de buikstreek, waarbij de eerste sneden worden gemaakt, met 70% ethanol tot het punt van vocht waardoor de vacht nat met ethanol en losse / droog haren niet voorkomen de regio. </li><li> Leg de muis op een surgische boord in rugligging met de bovenste en onderste aanhangsels verlengd naar buiten. </li><li> Beveiligde aanhangsels aan de raad met behulp van chirurgische tape. </li></ol> 2. Isolatie van het hart en de aorta <ol><li> Na een goede positionering van de muis, een tang te lokaliseren en isoleren buikhuid alleen inferieur aan de processus xiphoideus van het sternum. </li><li> Maak de spanning door het opheffen van de huid recht omhoog en gebruik een schaar om de oppervlakkige huid te verwijderen, waardoor de superieure deel van het buikvlies en inferieure deel van de borstholte. </li><li> Voer de peritoneale holte door het opheffen van de processus xiphoideus en maken laterale incisies alleen inferieur aan het proces langs de subcostal marges. </li><li> Ontleden tot in de borstholte, gaan door het membraan, en zorg ervoor dat het hart of de grote bloedvaten niet te verscheuren. </li><li> Verleng de laterale incisies gemaakt in stap 2.3 craniaal aan het voorste gedeelte van de ribbenkast te verwijderen. Indiennoodzakelijk, bevrijden het hart van de voorste borstwand behulp stompe dissectie. </li><li> Reinig de borstholte van vreemde bloed en vocht met behulp van een steriel gaasje om materiaal te absorberen. Nadat het gebied is meer zichtbaar is, verwijdert de longen naar het hart en de aorta beter bloot. </li></ol> 3. perfusie van het hart en de aorta OPMERKING: Om het bloed te verkrijgen via cardiale punctie, doe dat enkel voorafgaand aan deze stap. <ol><li> Vul een 10 cc spuit met 10 ml steriel ijskoude 1x fosfaatbufferoplossing (PBS), en bevestig een 25 gauge naald op de spuit. </li><li> Steek voorzichtig de naald in de linker ventrikel van het hart. </li><li> Snijd de rechterboezem om drukopbouw te verlichten van perfusie. Perfuseren de inhoud van de spuit in de muis over 2-3 min. </li><li> Gebruik steriel gaas bij de opening in het rechter atrium perfusievloeistof absorberen. </li></ol> 4. Isolatie en Excisie van de Aorta <ol><li> Na voltooiing van perfusion, steriel gaas resterende vloeistof vertroebeling van het gezichtsveld in de borstholte absorberen. </li><li> Expose het maag-inhoud door te snijden caudaal door de buikwand, de uitbreiding van de incisie aan de suprapubische gebied. Verder uit te breiden de incisie in de richting van de onderste ledematen bilateraal voor de huid flappen die kunnen worden vastgepind of weggesneden creëren. </li><li> Verwijder de lobben van de lever, pancreas, maag, milt en darmen beter te visualiseren de aorta. Wees voorzichtig bij het ontleden van de buurt van de perirenaal regio, zoals de aorta is oppervlakkig op de takken van de nierslagaders. OPMERKING: Voer deze stap in een nauwkeurige en laten inschrijven wijze als het maagdarmkanaal is rijk aan bacteriën die de neiging verhoogt voor besmetting. </li><li> Spoel het gebied met 1x PBS en verwijder alle vloeistof door absorptie met een steriel gaasje. </li><li> Met behulp van steriele microscissors en microforceps, scheiden de aorta van de wervelkolom dorsaal en de slokdarm ventraal.Het beste is om stompe dissectie en met behulp van een dissectie microscoop voor dit gebruiken. OPMERKING: Bij het isoleren van de aorta, start caudaal in de iliacale bifurcatie en bewegen craniaal schoonmaken en scheiden van de aorta van het dorsale oppervlak van de holte of start craniaal de halsslagaders en brachycefale slagaders ontleden caudaal. Ofwel methode is geschikt en is aan de onderzoekers comfort. </li><li> Verwijder de perivasculaire vetweefsel met fijne microscissors zeker te een deel van de aortawand niet te verwijderen. Dit is essentieel om de mogelijkheden te beperken voor fibroblast verontreiniging bij kweken aorta gladde spiercellen. </li></ol>

<ol><li>Go, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2014+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 129 (3), 28-292 (2014).</li>
<li>Ross, R., Harker, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperlipidemia+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Hyperlipidemia and atherosclerosis.</a> Science. 193 (4258), 1094-1100 (1976).</li>
<li>Clouse, W. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+aortic+dissection%3A+population-based+incidence+compared+with+degenerative+aortic+aneurysm+rupture%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clin+Proc%22%5BJournal%5D)">Acute aortic dissection: population-based incidence compared with degenerative aortic aneurysm rupture.</a> Mayo Clin Proc. 79 (2), 176-180 (2004).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse models of abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24 (3), 429-434 (2004).</li>
<li>Pleumeekers, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aneurysms+of+the+abdominal+aorta+in+older+adults.+The+Rotterdam+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Aneurysms of the abdominal aorta in older adults. The Rotterdam Study.</a> Am J Epidemiol. 142 (12), 1291-1299 (1995).</li>
<li>Brophy, C. M., Reilly, J. M., Smit, G. J., Tilson, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+inflammation+in+nonspecific+abdominal+aortic+aneurysm+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">The role of inflammation in nonspecific abdominal aortic aneurysm disease.</a> Ann Vasc Surg. 5 (3), 229-233 (1991).</li>
<li>Ray, J. L., Leach, R., Herbert, J. M., Benson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+vascular+smooth+muscle+cells+from+a+single+murine+aorta%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Isolation of vascular smooth muscle cells from a single murine aorta.</a> Methods Cell Sci. 23 (4), 185-188 (2001).</li>
<li>Weiss, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+murine+cardiovascular+system+with+magnetic+resonance%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging the murine cardiovascular system with magnetic resonance.</a> Circ Res. 88 (6), 550-551 (2001).</li>
<li>Graham, E. L., Balla, C., Franchino, H., Melman, Y., del Monte, F., Das, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+culture%2C+and+functional+characterization+of+adult+mouse+cardiomyoctyes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation culture, and functional characterization of adult mouse cardiomyoctyes.</a> J Vis Exp. (79), 50289(2013).</li>
<li>Wassef, M., Upchurch, G. R. Jr, Kuivaniemi, H., Thompson, R. W., Tilson, M. D. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+and+opportunities+in+abdominal+aortic+aneurysm+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Challenges and opportunities in abdominal aortic aneurysm research.</a> J Vasc Surg. 45 (1), 192-198 (2007).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Aorta-aandoeningen kunnen leiden tot significante systemische pathologie en mogelijk de dood in ernstige gevallen. De behandelingsopties zijn momenteel beperkt, daarom is verder onderzoek op dit gebied noodzakelijk10. Muizenmodellen zijn ideaal om de ziekteprogressie en potentieel therapeutische opties verder te bestuderen4. Daarom zal de succesvolle voltooiing van de in dit manuscript beschreven methode onderzoekers de hulpmiddelen bieden om de ziekteprogressie en de werkzaamheid van geneesmiddelen...

De aorta speelt een centrale rol in cardiovasculaire functie leveren het lichaam met zuurstofrijk bloed en vergelijkbaar met andere delen van het lichaam, is vatbaar voor ziekten. Voorkomende aorta ziekten omvatten atherosclerose en aneurysma, waarin de resultaten van genetische en omgevingsfactoren zoals voeding, roken en sedentaire levensstijl 1 zijn. Atherosclerose is de afzetting van calcium en op lipide gebaseerde plaque de aortawand typisch in patiënten met chronische hyperlipidemie 2. Aneurysma&#39;s worden gekenmerkt door afbraak van de structurele componenten van de aorta en verdunning van de vaatwand, gevolgd door een vergrote diameter die uiteindelijk kunnen leiden tot scheuren 3. Diermodellen zijn belangrijke instrumenten gebruikt om het mechanisme van ziekte en werkzaamheid van mogelijke behandelingen bestuderen. Vaak gebruikte diermodellen in cardiovasculair onderzoek, specifiek onderzoek zijn vasculaire en metabole stoornissenonder andere genetisch gemodificeerde muizen aan lipide niveaus zoals apolipoproteïne E-gen knock-out en low density lipoprotein receptor knockout muizen 4 veranderen. De meeste methoden mechanismen van ziekte en werkzaamheid van de therapie te evalueren omvatten de isolatie en excisie van de aorta. Als de aorta is gelokaliseerd en geïsoleerd, kunnen morfometrische analyse bepaald, zoals aanwezigheid van aneurysma, typisch gedefinieerd als een stijging van meer dan 50% in diameter 5. Na noodzakelijk situ analyse is voltooid, kan de aorta worden uitgesneden voor verdere analyse. Een uitgesneden aorta kan worden diepgevroren moleculaire studies zoals eiwitten en / of genexpressie testen of die bevestigd met 4% paraformaldehyde en later ingebed, coupes en gekleurd voor histologische analyse. Histologische analyse van de aorta kan aantonen gemeenschappelijke kenmerken van de aorta zoals structurele afbraak, plaquevorming en infiltratie van leukocyten &lt;sup&gt; 6,7. Bovendien kan een uitgesneden aorta worden gebruikt om primaire cellijnen waaronder endotheel- en gladde spiercellen die vervolgens kan worden gebruikt voor een verscheidenheid van in vitro studies 7 isoleren. Momenteel zijn er geen andere methoden om deze grondige karakterisering van de aorta verstrekken en voorzien bedrijven met hulpmiddelen om verdere studie hart- en vaatziekten. Beeldvormende modaliteiten zoals magnetische resonantie beeldvorming, computertomografie en echografie zijn de dichtstbijzijnde methoden om de aorta morfologisch, maar dit is moeilijk in kleine dieren en het verkrijgen van een apparaat met voldoende techniek is duur 8. Onsterfelijk gemaakte cellijnen zijn verkrijgbaar mogelijke mechanismen van ziekte en werkzaamheid van therapieën, maar de artificiële aard van deze cellen beperkend bestuderen van de effecten op de cel levenscyclus en apoptose 9 onderzoeken. De algemene doelstelling vandit manuscript is de steriele isolatie en excisie van het muizen aorta bij het onderzoek van hart- en vaatziekten tonen.

<table><tbody><tr><td>Isofluraan</td><td>Med-Vet International</td><td>#RXISO-250</td><td></td></tr><tr><td>70% ethanol</td><td>Fisher</td><td>07-678-001</td><td></td></tr><tr><td>Fosfaat gebufferde zoutoplossing</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5368-10PAK</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgisch tape</td><td>3M</td><td>1527-1</td><td></td></tr><tr><td>Steriele gaas</td><td>Dukal Corporations</td><td>1312</td><td></td></tr><tr><td>25 gauge naald</td><td>BD</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>10 ml spuit</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr></tbody></table>

isolatie en excisie van muriene aorta; een veelzijdige techniek in de studie van hart- en vaatziekten

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

Hart- en vaatziekten zijn een brede term die ziekten van het hart en/of bloedvaten beschrijft. De belangrijkste bloedvat die het lichaam van zuurstofvoorzien bloed voorziet is de aorta. De aorta kan worden aangetast bij ziekten zoals atherosclerose en aneurysma. Onderzoekers die deze ziekten onderzoeken, zouden baat hebben bij directe observatie van de aorta om de progressie van de ziekte te karakteriseren en om de werkzaamheid van mogelijke therapieën te evalueren. Het doel van dit protocol is om de juiste isolatie en excisie van de aorta te beschrijven om onderzoekers te helpen die onderzoek doen naar hart- en vaatziekten. Isolatie en excisie van de aorta stellen onderzoekers in staat om naar grove morfometrische veranderingen te kijken, evenals om het weefsel te bewaren en te kleuren om naar histologische veranderingen te kijken indien gewenst. De aorta kan worden gebruikt voor moleculaire studies om eiwit- en genexpressie te evalueren om doelwitten van belang en werkingsmechanismen te ontdekken. Deze techniek is superieur aan beeldvormingsmodaliteiten omdat deze inherente beperkingen in technologie en kosten hebben. Bovendien kunnen primaire geïsoleerde cellen van een vers geïsoleerde en uitgesneden aorta onderzoekers in staat stellen om verdere in situ en in vitro assays uit te voeren. De isolatie en excisie van de aorta heeft echter de beperking dat het dier moet worden geofferd, maar in dit geval wegen de voordelen zwaarder dan het nadeel, aangezien het de meest veelzijdige techniek is in de studie van aorta-aandoeningen.

Na voltooiing van de procedure, zal er een intacte aorta afkomstig uit het hart, afdalen in de borst- en buikholte, met de nierslagaders nog steeds verbonden (figuur 1A) zijn. Vanaf hier kunnen de aorta worden afgebeeld in situ morfometrische veranderingen die diagnostisch in de studie van abdominale aorta aneurysma (figuur 1B en 1C) zijn kwantificeren. Vervolgens kan de aorta verwijderd, gefixeerd en gekleurd te kijken histologische veranderingen. Een algemene...

Pathologie van de aorta kan leiden tot ernstige morbiditeit en mortaliteit, daarom is onderzoek naar de progressie van de ziekte en mogelijke therapieën gerechtvaardigd. Hier presenteren we een protocol om de muisaorta te isoleren en te verwijderen om onderzoekers te helpen bij hun onderzoek naar hart- en vaatziekten.

Isolatie en Excisie van Muriene Aorta; Een veelzijdige techniek in de studie van hart- en vaatziekten

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Het algemene doel van deze procedure is om de muis aorta steriel, te isoleren en te excideren. Dit wordt bereikt door eerst het borst- en buikholte bloot te leggen. De tweede stap is perfusie met koude, steriele zoutoplossing.Vervolgens worden de organen van de borst- en buikholten verwijderd, waarbij het hart aan de aorta blijft gehecht. De laatste stap is het excideren van het perivasculair vetweefsel en het adventitiaweefsel van de aorta. Uiteindelijk wordt een dissectiemicroscoop gebruikt om te verifiëren dat al het omliggende weefsel is verwijderd en dat de aorta kan worden gebruikt voor verschillende experimentele analyses.Deze techniek is dus nuttig om belangrijke vragen in het cardiovasculaire onderzoeksgebied te beantwoorden, zoals de ontwikkeling van aneurysma en de vorming van atherosclerotische plaques. En dus kunt u deze bekijken door te kijken naar veranderingen in de moleculaire biologie, zoals gen- en eiwitexpressie. Na het euthanaseren van de muis, verifieert u de euthanasiestad door een teenprik.Steriliseer vervolgens de huid door de buikvacht nat te maken met 70% ethanol. Bevestig vervolgens de muis op het operatiebord in rugligging met de ledematen uitgestrekt.

isolation-excision-murine-aorta-versatile-technique-study

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

We beschrijven een techniek waarbij een deel van de abdominale aorta van een muis getransplanteerd orthotopically is om net onder de nierslagaders in een allogene of syngene ontvanger. Deze techniek kan nuttig zijn in studies waarin transplantatie van grote slagaders van gelijke grootte is als voordelig.

Orthotope Aorta Transplantatie in Muizen voor de Studie van vasculaire aandoeningen

In this video, we demonstrate a procedure for the surgical removal of the aorta from miniature pigs. Endothelial cells harvested from these isolated aortae can be further cultured in in vitro conditions to study coagulation and immune responses.

Porcine Aorta Isolation: A Surgical Procedure to Excise the Thoracic Aorta From Miniature Pigs for Downstream Analysis

We beschrijven procedures om atherosclerotische laesies in muismodellen te kwantificeren en te karakteriseren door middel van nauwkeurig snijden van de aortasinus en de ascenderende aorta, gecombineerd met histochemische en immunohistochemische analyse.

Kwantitatieve analyse en karakterisering van atherosclerotische laesies in de muis aortasinus

De vasculaire endotheelcellen spelen een belangrijke rol bij veel belangrijke cardiovasculaire aandoeningen. Dit artikel beschrijft een eenvoudige methode om endotheelcellen te isoleren en uit te breiden van de muisaorta zonder het gebruik van speciale apparatuur. Ons protocol biedt een effectieve manier om mechanismen in de fysiopathologie van endotheelcellen te identificeren.

Isolatie en Primaire Cultuur van de muis endotheelcellen

Het doel van dit protocol is de isolatie en kweektechnieken van murine primaire vasculaire gladde spiercellen (VSMC's) van de coronaire circulatie demonstreren. Zodra VSMC's werden geïsoleerd, kunnen ze worden gebruikt voor vele standaard kweektechnieken.

Isolatie van muizen coronaire vasculaire gladde spiercellen

Restenosis na cardiovasculaire procedures (bypass operatie, angioplastie of stenting) is een significant probleem waardoor de duurzaamheid van deze procedures wordt verminderd. Een ideale therapie zou de proliferatie van gladde spiercellen (VSMC) verhinderen, terwijl het bevorderen van regeneratie van het endothelium. We beschrijven een model voor gelijktijdige beoordeling van VSMC proliferatie en endotheliale functie in vivo.

Murine Aortic Crush Injury: Een Efficiënt<em&gt; In Vivo</em&gt; Model van gladde spiercel proliferatie en endotheliale functie

Protocollen voor het bestuderen van de embryonale en perinatale lymfkliertest aorta met behulp van in vivo klonale analyse en lot toewijzing, aorta explantaten en geïsoleerde gladde spier cellen zijn gedetailleerd hier. Deze uiteenlopende benaderingen vergemakkelijken het onderzoek van de morfogenese van de embryonale en perinatale aorta in normale ontwikkeling en de pathogenese in ziekte.

Met behulp van In Vivo en weefsel en cel Explant benaderingen te bestuderen van de voedselproductie en de pathogenese van de embryonale en perinatale Aorta

Hier presenteren we een protocol van heterotopische aorta transplantatie in muizen met behulp van de niet-hecht manchet techniek in een cervicale Murine model. Dit model kan worden gebruikt om de onderliggende pathologie van chronische transplantaat vasculopathie (CAV) te bestuderen en kan helpen bij het evalueren van nieuwe therapeutische middelen om de vorming ervan te voorkomen.

Murine cervicaal aorta transplantatie model met behulp van een gemodificeerde niet-hecht manchet techniek

Dit protocol beschrijft modificaties van de Langendorff-methode, waaronder de diepte van aorta-cannulatie voor gelijktijdige isolatie van atriale en ventriculaire myocyten van volwassen muizen.

Modificaties van de Langendorff-methode voor gelijktijdige isolatie van atriale en ventriculaire myocyten van volwassen muizen

We presenteren een methode voor het isoleren van endotheelcellen en kernen uit het lumen van muiscarotisslagaders die zijn blootgesteld aan stabiele of verstoorde stroomomstandigheden om eencellige omics-experimenten uit te voeren.

Isolatie van endotheelcellen uit het lumen van muisslagaders voor eencellige multi-omics-experimenten

Dit protocol biedt een uitgebreide methodologie voor de kwantitatieve analyse van atherosclerotische plaques om meer diepgaand onderzoek naar de mechanismen en progressie van atherosclerose mogelijk te maken.

Isolatie en analyse van aortaboog- en wortellaesies in een atherosclerotisch muismodel

Leer de isolatie en excisie van de murine aorta voor hart- en vaatziektenonderzoek. Deze methode maakt gedetailleerde analyses van aortapathologie en moleculaire veranderingen mogelijk.

Isolatie en Excisie van Muriene Aorta; Een veelzijdige techniek in de studie van hart- en vaatziekten

Meer video's verkennen