Name: Lokalisatie, identificatie, en Excisie van Muriene Adipose Depots (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Leer de identificatie en excisie van vetweefsels bij volwassen muizen met minimale dissectie en besmetting. Deze methode ondersteunt histologische en moleculaire analyses van adipocyten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs hebben geen erkenningen.

OPMERKING: Alle dierlijke procedures werden uitgevoerd met de goedkeuring van de Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) van de Universiteit van Cincinnati en in overeenstemming met de Gids voor de zorg en het gebruik van proefdieren van de National Institutes of Health (NIH-publicatie nr . 85-23, herzien in 1996). 1. Euthanaseren en steriliseer de muis <ol><li> Plaats de muis in een dropbox met een supratheraputic dosis isofluraan en laten inhaleren van kracht. Zodra de muis wordt gedood, te verwijderen uit de doos. </li><li> Cervicaal ontwrichten als een tweede middel van euthanasie. </li><li> Steriliseer het buitenoppervlak van de muis door het reinigen van het dier met 70% ethanol. </li></ol> 2. Identificatie en isolatie van Drie Verschillende Adipose Depots <ol><li> Bruin vetweefsel (BAT) Isolatie: <ol><li> Zorg ervoor dat de vacht is nat van de alcohol reiniging om te helpen bij het doorsnijden van de epidermale en dermale Layers. </li><li> Plaats de muis in een liggende positie met de rug tegen de tafel. </li><li> Pak de huid net onder het middenrif met een pincet, een lift en incisie met een schaar. </li><li> Snijd dwars over de omtrek van de muis om het buikvlies bloot. </li><li> Onthullen de vlindervormige BAT depot door degloving de bovenste helft van de muis. Houd de onderste aanhangsels en buik in de ene hand en tot het trekken van de huid in de richting van het hoofd. </li><li> Richt de muis, zodat deze gevoelig op de tafel is geplaatst. Wees voorzichtig niet om de blootgestelde depot besmetten met haar. </li><li> Schoon chirurgische instrumenten en verandering naar een vers paar handschoenen. </li><li> Zoek de schouderbladen en de bijbehorende depot. Verwijder zorgvuldig de oppervlakkige wit vetweefsel boven op de vlinder en vervolgens ontleden de vlinder van interscapular bruin vet. Wees voorzichtig om de spier nauw verbonden met het bruine vet te vermijden. Opmerking: Het gebruik van een dissectie microscoop wordt aanbevolen voor het verwijderen van het white vet, alsmede de scheiding van het bruine vetweefsel van het schouderblad. </li><li> Verwijder vet depot en naar een 2 ml microcentrifugebuis. </li><li> Indien RNA of eiwit te extraheren invriezen weefsel door onderdompeling in vloeibare stikstof en bewaar bij -80 ° C. Bevriezen van het monster in een keer om degradatie te voorkomen. Als kweken, bedek het weefsel in DMEF-12 en ingesteld op ijs totdat alle monsters worden verzameld voor cultuur (aanvullende informatie). </li></ol></li><li> Isolatie van subcutane VetWeefsel (SQ), een wit vetweefsel Depot (WAT): <ol><li> Zet op een vers paar handschoenen om niet cross-besmetten tussen vet depots. </li><li> Onthullen de lies, driehoekige SQ depots door De handschoenen in de onderste helft van de muis. Houd de bovenste aanhangsels en thorax in de ene hand en het trekken van de huid naar beneden in de richting van de voeten met de andere hand. </li><li> Richt de muis in een rugligging terwijl ze voorzichtig niet om de blootgestelde depot met haar besmetten. </li><li> Schoon surgical instrumenten en verandering naar een vers paar handschoenen. </li><li> Ontleden zorgvuldig de driehoeken van SQ vet. Pas op dat u het monster besmetten met spier, naburig vet, melkklieren of op welke schepen snijden en vervuilen het monster met bloed. LET OP: Het gebruik van een dissectie microscoop wordt aanbevolen als de grenzen niet duidelijk zijn omschreven. </li><li> Verwijder vet depots en transfer naar 2 ml microcentrifugebuizen. </li><li> Indien RNA of eiwit te extraheren invriezen weefsel door onderdompeling in vloeibare stikstof en bewaar bij -80 ° C. Bevriezen van het monster in een keer om degradatie te voorkomen. </li><li> Voor het kleuren, herstellen of te verankeren in oktober Als kweken, bedek het weefsel in DMEF-12 en ingesteld op ijs totdat alle monsters worden verzameld voor cultuur (aanvullende informatie). </li></ol></li><li> Isolatie van Gonadale Vet een Visceral VetWeefsel (BTW) en wit vetweefsel (WAT) Depot: <ol><li> Zet op een vers paar handschoenen om niet cross-besmetten tussen vet depots. </li><li> Met scissors, snijd het buikvlies dwars, direct onder het middenrif. Snijd het buikvlies van het middenrif tot het rectum midden coronaalwaarts aan buikorganen bloot. </li><li> Zoek de testes of ovaria en identificeren van de bijgevoegde wit vetweefsel, bekend als de epididymis vet bij mannen of gonadale adipose bij vrouwen. </li><li> Schoon chirurgische instrumenten en verandering naar een vers paar handschoenen </li><li> Ontleden zorgvuldig zowel epididymaal vet depots van de testes, epididymis, en zaadleiders. Of als vrouwelijke, zorgvuldig ontleden zowel gonadale vetkussentjes van de eierstokken. </li><li> Verwijder vet depots en overbrengen naar 2 ml microcentrifugebuisjes. </li><li> Indien RNA of eiwit te extraheren invriezen weefsel door onderdompeling in vloeibare stikstof en bewaar bij -80 ° C. Bevriezen van het monster in een keer om degradatie te voorkomen. </li><li> Voor het kleuren, herstellen of te verankeren in oktober Als kweken, bedek het weefsel in DMEF-12 en ingesteld op ijs totdat alle monsters worden verzameld voor cultuur (aanvullende informatie). </li&gt; </ol></li></ol> 3. Isolatie van Perivasculaire VetWeefsel (PVAT) <ol><li> Isolatie van het Hart: <ol><li> Leg de muis in een liggende positie met de bovenste en onderste aanhangsels naar buiten verlengd. </li><li> Beveiligde appendages met behulp van chirurgische tape. </li><li> Na het plaatsen van de muis, zoals hierboven vermeld, maakt de spanning door het op te tillen de zwaardvormig proces met een pincet. Snijd horizontaal door het membraan, waardoor de onderste gedeelte van de borstholte. </li><li> Met behoud spanning, verheffende de processus xiphoideus, dwars door de ribbenkast craniaal naar de kop, om de zijde van het borstbeen. </li><li> Pak de ribbenkast gewoon inferieur aan het sleutelbeen en snijd langs de onderste lengte van het sleutelbeen uit naar de oksel in beide richtingen. De borstholte en de inhoud (hart, longen, etc.) moet nu duidelijk zichtbaar. </li><li> Reinig de borstholte van vreemde bloed en vocht door steriele gaUze om de vloeistof te absorberen. Als het verzamelen van organen of schepen er zeker van te overvloedig (aanvullende informatie). </li><li> Zodra het gebied is vrijgemaakt van vloeistof, snijd de bronchiën en bevestigen van schepen naar de longen te verwijderen, waardoor een betere belichting van het hart. </li></ol></li><li> Lokalisatie en Excisie van Aorta Perivasculaire VetWeefsel (PVAT): <ol><li> Verwijder de volgende organen aan de inferieure gedeelten van de aorta beter identificeren: lever, maag, milt, pancreas, darmen en colon. </li><li> Begin eerst met identificatie van de maag en de slokdarm. Snij de slokdarm in de maag-slokdarm overgang naar de maag uit het lichaam bevrijden. </li><li> Vervolgens bepalen de darmen en de omringende mesenterium. Snijd oppervlakkig door mesenterium, want het ligt zeer dicht tegen de renale deel van de aorta, dan &quot;lopen de darm.&quot; </li><li> Snijd de colon vrij zo dicht bij het rectum mogelijk. Aldus vrijmaken van de maag, darm en colon van de muis. </li><li> Reverplaats de maag, darm, dikke darm, alvleesklier en milt door snijden door het bevestigen mesenterium en vaten. De pancreas en milt moet vrij komen met de maag, darm en colon. </li><li> Verwijder de lever door snijden door de levervenen en bevestigen mesenterium, verwijder alle lobben. </li><li> Knip de viscerale laag en vet rondom de nieren. Laat de nieren aan de aorta in vivo te dienen als geografische merkers voor verschillende segmenten van de aorta. </li><li> Spoel het gebied met steriele 1x PBS en verwijder alle vloeistof door absorptie met een steriel gaasje. </li><li> Met behulp van micro-schaar en micro-tang, scheid de aorta van de dorsale gehechtheid aan de wervelkolom en de ventrale gehechtheid aan de slokdarm. </li><li> Isoleer de aorta door het volgen en losmaken van de aorta de lengte van de aorta descendens uit de oorsprong in het hart naar de vertakking van de iliacale regio. </li><li> Identificeren en de subclavia schepen te isoleren. Deze schepen te isolerenvan de nek naar de aorta wortel naar de aorta knooppunt en wortel in het hart beter bloot. </li><li> Verwijder de thymus knip de brachycefale slagader, de linker gemeenschappelijke halsslagader en de linker subclavia, waardoor beweging van het hart. </li><li> Met de hulp van een dissectie microscoop, bekijk de perivasculair vetweefsel (PVAT) laag rond de aorta. </li><li> Het nemen van grote zorg om niet knijpen of knijp de PVAT, trek de PVAT weg van de aorta met micro-tang. Voorzichtig snijden de bevestiging van de PVAT de aorta met micro-schaar vanaf de thorax alleen superieur aan waar het diafragma bevindt. OPMERKING: Een dissectie microscoop wordt aanbevolen. </li><li> Herhaal dit proces de gehele lengte van de aorta, eindigend bij de infrarenale aorta gebied, dat zich net boven de iliacale bifurcatie van de aorta vat. </li><li> Als aortaboog PVAT gewenst is, gebruikt dezelfde methode om de PVAT uit de mindere c verwijderenurvature van de boog. </li><li> Plaats PVAT monsters in 2 ml microcentrifugebuis (s). </li><li> Indien RNA of eiwit te extraheren invriezen weefsel door onderdompeling in vloeibare stikstof en bewaar bij -80 ° C. Bevriezen van het monster in een keer om degradatie te voorkomen. Als kweken, bedek het weefsel in DMEF-12 en ingesteld op ijs totdat alle monsters worden verzameld voor cultuur (aanvullende informatie). LET OP: Extra vet depots te overwegen of geïnteresseerd zijn in een uitgebreide vet depot analyse zijn: retroperitoneale, mesenteriale, omental, pericardiale en knieholte. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+obesity+in+the+United+States%2C+2009-2010%5BTitle%5D)+AND+%22NCHS+Data+Brief%22%5BJournal%5D)">Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010.</a> NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).</li>
<li>Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+obesity+and+trends+in+the+distribution+of+body+mass+index+among+US+adults%2C+1999-2010%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index among US adults, 1999-2010.</a> 307 (5), 491-497 (2012).</li>
<li>Cawley, J., Meyerhoefer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+medical+care+costs+of+obesity%3A+an+instrumental+variables+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Health+Economics%22%5BJournal%5D)">The medical care costs of obesity: an instrumental variables approach.</a> Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).</li>
<li>Obesity accounts for 21 percent of U.S. health care costs, study finds. , Cornell University. Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.sciencedaily.com/releases/2012/04/120409103247.htm">http://www.sciencedaily.com/releases/2012/04/120409103247.htm</a> (2012).</li>
<li>Marder, W., Chang, S. Childhood Obesity: Costs, Treatment Patterns, Disparities in Care, and Prevalent Medical Conditions. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarder%2C+W+%22Thomson+Medstat+Research+Brief%22">Thomson Medstat Research Brief</a>. , (2006).</li>
<li>Cortez, M., Carmo, L. S., Rogero, M. M., Borelli, P., Fock, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-fat+diet+increases+IL-1%2C+IL-6%2C+and+TNF-%CE%B1+production+by+increasing+NF-%CE%BAB+and+attenuating+PPAR-%CE%B3+expression+in+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">A high-fat diet increases IL-1, IL-6, and TNF-α production by increasing NF-κB and attenuating PPAR-γ expression in bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Inflammation. 36 (2), 379-386 (2013).</li>
<li>Sanchez-Gurmaches, J., Hung, C. M., Sparks, C. A., Tang, Y., Li, H., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PTEN+loss+in+the+Myf5+lineage+redistributes+body+fat+and+reveals+subsets+of+white+adipocytes+that+arise+from+Myf5+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">PTEN loss in the Myf5 lineage redistributes body fat and reveals subsets of white adipocytes that arise from Myf5 precursors.</a> Cell Metab. 16 (3), 348-362 (2012).</li>
<li>Sethi, J. K., Vidal-Puig, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thematic+review+series%3A+adipocyte+biology.+Adipose+tissue+function+and+plasticity+orchestrate+nutritional+adaptation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Thematic review series: adipocyte biology. Adipose tissue function and plasticity orchestrate nutritional adaptation.</a> J Lipid Res. 48 (6), 1253-1262 (2007).</li>
<li>Aarsland, A., Chinkes, D., Wolfe, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+and+whole-body+fat+synthesis+in+humans+during+carbohydrate+overfeeding%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Hepatic and whole-body fat synthesis in humans during carbohydrate overfeeding.</a> Am J Clin Nutr. 65 (6), 1774-1782 (1997).</li>
<li>Park, A., Kim, W. K., Bae, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinction+of+white%2C+beige+and+brown+adipocytes+derived+from+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Distinction of white, beige and brown adipocytes derived from mesenchymal stem cells.</a> World J. Stem Cells. 6 (1), 33-42 (2014).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beige+adipocytes+are+a+distinct+type+of+thermogenic+fat+cell+in+mouse+and%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Beige adipocytes are a distinct type of thermogenic fat cell in mouse and.</a> 150 (2), 366-376 (2012).</li>
<li>Giralt, M., Villarroya, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White%2C+brown%2C+beige%2Fbrite%3A+different+adipose+cells+for+different+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">White, brown, beige/brite: different adipose cells for different functions.</a> Endocrinology. 154 (9), 2992-3000 (2013).</li>
<li>Casteilla, L., Pénicaud, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling%3A+factors+in+selection+and+depot+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods Mol. Biol. 456, 23-38 (2008).</li>
<li>Grant, R., Youm, Y. H., Ravussin, A., Dixit, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+adipose+tissue+leukocytosis+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantification of adipose tissue leukocytosis in obesity.</a> Methods Mol. Biol. 1040, 195-209 (2013).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen of andere belangenconflicten hebben.

Obesitas kan leiden tot een groot scala aan morbiditeit en het volledige begrip van de rol die vet speelt is niet helemaal duidelijk; daarom voortgezet onderzoek op het gebied van vet is noodzakelijk. Diermodellen, in het bijzonder murine modellen ideaal voor eerste onderzoek in de progressie van de ziekte en het testen van potentiële farmaceutische behandelingen. Bij gebruik van deze modellen nauwkeurige isolatie en excisie van vet depots is een uiterst belangrijk en noodzakelijk hulpmiddel in de studie van de patholog...

Vet maakte een opvallende verschijning in de media-aandacht, als gevolg van obesitas dramatische stijging in de laatste decennia van de 20e eeuw. Obesitas treft momenteel meer dan een derde van de volwassenen en 17% van de kinderen en adolescenten in de Verenigde Staten (VS) 1. Verspreid over alle etnische groepen, heeft statistisch onderzoek rond de obesitas-epidemie aangetoond dat niet-Spaanse zwarten hebben de hoogste leeftijd gecorrigeerde snelheid van obesitas (49,5%) in vergelijking met de Mexicaanse Amerikanen (40,4%), alle Iberiërs (39,1%), en niet- Spaanse blanken (34,3%) 2. Het economische effect van obesitas is ook een groeiende zorg voor de gezondheidszorg. In 2012 werd geschat dat de jaarlijkse medische kosten van de zorg voor obesitas in de VS in 2005 was $ 190.200.000.000, bijna 21% van de totale medische uitgaven begroting. Helaas, werd obesitas bij kinderen naar schatting verantwoordelijk voor $ 14000000000 in directe medische kosten om alleen te zijn. Statistisch werd vastgesteld dat de gemiddelde medische kostenpersonen met obesitas was $ 2741 hoger per jaar dan die zonder deze morbiditeit 3-5. Obesitas is een belangrijke risicofactor voor een verscheidenheid van aandoeningen zoals: type 2 diabetes, dyslipidemie, hart- en vaatziekten, kanker, spier- skelet aandoeningen en chronische ontsteking. Obesitas is sterk verbonden met de pathogenese van metabool syndroom en andere chronische ziekten 6-8. Met zulke drastische en negatieve verbindingen tussen obesitas en andere comorbiditeiten, heeft wetenschappelijk onderzoek aandacht aan beter inzicht in de huidige epidemie en de diverse en cruciale rol gespeeld door vetweefsel. Historisch, werd vetweefsel onbelangrijk beschouwd en werd alleen gezien als een eenvoudige vulling weefsel. Momenteel is vet is aangetoond dat vele essentiële rol spelen in de functie van het lichaam in: stofwisseling, hormoonhuishouding, ontstekingen, bescherming en isolatie 9. Vetweefsel is voornamelijk samengesteld uitadipocyten maar bevat ook pericyten, endotheelcellen, monocyten, macrofagen en pluripotente stamcellen 8. Vetweefsel wordt verspreid door het hele lichaam in verschillende depots. De belangrijkste depots kan subdermaal worden gevonden, subcutaan, intramusculair, en viscerally 10. Adipose depots is aangetoond depot specifieke metabolische profielen daarvan, die een depot specifiek gevoeligheid voor obesitas en verwante aandoeningen 8 hebben. Traditioneel is het vetweefsel is ingedeeld in twee hoofdtypen: wit vetweefsel (WAT) en bruin vetweefsel (BBT); hoewel de recente literatuur geeft aan dat de aanwezigheid van een derde groep gedoopt Brite of beige vet 11. Vetweefsel is aangetoond dat verschillende kleuren, morfologieën, metabolische functies, biochemische eigenschappen en genetische expressiepatronen 10 hebben. Adipocyten in Wat hebben een enkele, grote lipide druppel en variabele hoeveelheden mitochondria. WATis dominant in subcutane en viscerale plaatsen van het lichaam. WAT functioneert voornamelijk als gebied van energie-opslag en bescherming orgel. Adipocyten in BAT hebben een multiloculaire morfologie en overvloedige mitochondriën. BAT ligt voornamelijk in de nek en grote bloedvaten van de thorax, en de scapulae 12. BAT voornamelijk functies in-energie besteden gedrag dat thermogenese 7 reguleren. Brite of beige vet is aangetoond dat een analoge morfologie en expressie BAT delen maar bleek te zijn ontstaan ​​uit witte adipocyten 11. De beschreven chirurgische methode in dit manuscript geeft onderzoekers het vermogen om verschillende effecten die factoren als analyse: milieu, farmaceutica en genetica hebben op vet; alsmede de positieve of negatieve rol speelt adipose ziekte en de algehele gezondheid. Ook biedt een manier te identificeren en te isoleren verschillende vetweefsel tebeter zorgen voor begrip van de biochemische relaties en verschillen tussen de depots. Dit kan helpen bij het bepalen van de relatie tussen locatie, functie en soorten vet in het lichaam. Deze methode doet dit door het verschaffen van middelen voor het grove visualisatie, analyse van genexpressie, eiwitexpressie analyse, histologisch onderzoek, en isolatie van primaire cellijnen in vitro studies. Momenteel zijn er vele artikelen die inzicht in de metabolische gedrag van verschillende vet depots, evenals hun anatomische locaties verschaffen; maar voorzien niet in een diepgaande methode over hoe om specifiek te lokaliseren, te identificeren en isoleren van deze depots. Deze chirurgische methode een nauwkeurige techniek maakt isolatie van meerdere depots met een minimale hoeveelheid dissectie en verontreiniging in vergelijking met andere werkwijzen ontwikkeld voor het isoleren van één of twee depots 13-14. Het doel van dit protocol is te voorzieneen nauwkeurige werkwijze voor de identificatie en isolatie van verschillende vetdepots van verschillende anatomische locaties.

<table><tbody><tr><td>Isofluraan</td><td>Med-Vet International</td><td>#RXISO-250</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>Fisher</td><td>07-678-001</td><td></td></tr><tr><td>DMEF-12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D-6421</td><td>Verwarm in waterbad voordat u het op weefsel aanbrengt.</td></tr><tr><td>2 ml Microcentrifugebuisjes</td><td>Midsci</td><td>MCT-200-C-S</td><td></td></tr><tr><td>Fosfaat gebufferde zoutoplossing</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5368-10PAK</td><td></td></tr></tbody></table>

lokalisatie, identificatie, en excisie van muriene adipose depots

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

Obesitas is de afgelopen decennia dramatisch toegenomen en treft meer dan een derde van de volwassen Amerikaanse bevolking. Het economische effect van obesitas bereikte in 2005 een verbluffende som van $190,2 miljard aan directe medische kosten alleen al. Obesitas is een belangrijk risicofactor voor een groot aantal ziekten. Historisch gezien was er weinig bekend over vetweefsel en zijn belangrijke en essentiële functies in het lichaam. Bruin en wit vet zijn de twee hoofdtypen vetweefsel, maar de huidige literatuur heeft een nieuw type vet geïdentificeerd, brite of beige vet genoemd. Onderzoek heeft aangetoond dat vetafzettingen specifieke metabole profielen hebben en dat bepaalde afzettingen een neiging tot obesitas en andere gerelateerde aandoeningen mogelijk maken. Het doel van dit protocol is om onderzoekers de mogelijkheid te bieden om vetafzettingen te identificeren en te verwijderen die de analyse van verschillende factoriële effecten op vetweefsel mogelijk maken; evenals de gunstige of schadelijke rol die vetweefsel speelt bij ziekten en de algehele gezondheid. Isolatie en verwijdering van vetafzettingen stelt onderzoekers in staat om zowel grove morfologische veranderingen als histologische veranderingen te bekijken. Het geïsoleerde vet kan ook worden gebruikt voor moleculaire studies om transcriptionele en translationele veranderingen te evalueren of voor in vitro experimenten om doelwitten van belang en werkingsmechanismen te ontdekken. Deze techniek is superieur aan andere gepubliceerde technieken vanwege het ontwerp dat het mogelijk maakt om meerdere depots met eenvoud en minimale besmetting te isoleren.

Identificatie en lokalisatie van lies subcutaan vetweefsel, interscapular bruin vetweefsel, viscerale epididymale adipose (figuur 1), alsook de aortaboog perivasculaire vet, thoracale aorta vetweefsel, bijnieren aorta vet en de infrarenale aorta adipose (figuur 2) werd met succes gebruikt beschreven chirurgische methode. Histologisch onderzoek en differentiatie tussen BAT en WAT monsters werden positief beoordeeld met hematoxyline en eosine (H &amp; E) kleuring (figuur 3).</stro...

Als gevolg van de drastische en negatieve verband tussen obesitas en andere comorbiditeiten, onderzoek naar de rol vetweefsel speelt bij de ziekte en de algehele gezondheid gerechtvaardigd is. We presenteren een protocol voor isolatie en excisie van vet depots waardoor de studie van adipose gebruik in situ en in vitro methoden.

Lokalisatie, identificatie, en Excisie van Muriene Adipose Depots

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

Het algemene doel van deze procedure is om de identificatie en excisie van vetafzettingen te demonstreren voor de analyse van verschillende factoriële effecten op en door vet. Dit wordt bereikt door eerst de inwendige organen en vetafzettingen van een volwassen muis bloot te leggen. In de tweede stap worden de organen en overtollig weefsel verwijderd om de depots beter zichtbaar te maken, waardoor de identificatie van de depots op hun overeenkomstige locaties mogelijk wordt.In de laatste stap wordt het vetweefsel met speciale zorg verwijderd om besmetting te voorkomen. Uiteindelijk zorgen de isolatie en excisie van deze depots voor weefsel voor histologische analyse, eiwitexpressie, enzymactiviteit en genexpressieanalyse, evenals voor in vitro-studies. Het belangrijkste voordeel van dit specifieke protocol ten opzichte van bestaande methodologieën is dat het meerdere depotisolaties met minimale dissectie mogelijk maakt, evenals minimale besmetting.Deze procedure kan dus helpen om vragen over het veld van obesitas te beantwoorden. Bijvoorbeeld, de schadelijke of zelfs de gunstige effecten van vetweefsel op menselijke ziekten. Om bruin vetweefsel te isoleren, begint u door een geëuthanaseerd volwassen muis in de rugligging te plaatsen met de rug tegen de tafel.Gebruik vervolgens een pincet om de huid net onder het diafragma op te tillen en snijd de huid met een schaar. Snijd dwars rond de omtrek van de muis om het buikvlies bloot te leggen. Houd dan de onderste ledematen en buik in één hand en trek de huid met de andere hand omhoog naar het hoofd om de bovenste helft van de muis te ontdoen en het vlindervormige bruine vetdepot of vleermuis te onthullen.Loceer vervolgens de scapus en het overeenkomstige vleermuisdepot. Gebruik vervolgens een dissectiemicroscoop om voorzichtig eventueel oppervlakkig wit vet bovenop de vlinder te verwijderen en het interscapulaire bruine vet te dissecteren, waarbij u ervoor zorgt dat u geen bijbehorend spierweefsel raakt. Om het subcutane of subq vetweefsel te isoleren, houdt u de bovenste ledematen en het borstbeen in één hand en trekt u de huid met de andere hand naar de voeten om de onderste helft van de muis te ontdoen en de driehoekige inguinale subq-afzettingen te onthullen.Plaats de muis vervolgens terug in de rugligging en dissecter de driehoeken van subq vet voorzichtig om het gonadale vet uit de buikholte te isoleren. Gebruik een schaar om het buikvlies dwars recht onder het diafragma door te snijden. Snijd vervolgens het buikvlies van het diafragma naar de endeldarm, midcoronaal om de buikorganen bloot te leggen en dissecter zorgvuldig beide epidermale vetdepots van de testes epi en vasa deia.Om het perivasculare vetweefsel te isoleren, houdt u het dier in de rugligging en strekt u de bovenste en onderste ledematen naar buiten. Til vervolgens met een pincet het xiphoïde proces op om spanning over de bovenkant van het lichaam te creëren en snijd horizontaal door het diafragma, waardoor het onderste gedeelte van de borstholte wordt blootgelegd. Snijd door de ribbenkast superieur richting het hoofd net naast het borstbeen en pak vervolgens de ribbenkast net inferieur aan het sleutelbeen op.Snijd langs de inferieure lengte van het sleutelbeen naar de oksel in beide richtingen. De borstholte en de inhoud ervan zouden nu duidelijk zichtbaar moeten zijn. Zodra het gebied is ontdaan van vocht, snijdt u de bronchiën en de aangehechte bloedvaten om de longen te verwijderen en het hart bloot te leggen.Nadat de maag en de slokdarm zijn geïdentificeerd, snijdt u de slokdarm op de gastro-oesofageale overgang om de maag te bevrijden. Identificeer vervolgens de darmen en het omringende mesenterium. Snijd oppervlakkig door het mesenterium en snijd vervolgens de dikke darm zo dicht mogelijk bij de endeldarm om de maag, darm, dikke darm, pancreas en milt te bevrijden.Wanneer de organen zijn verwijderd, snijd door de leveraders en de verbindende mesenterium en verwijder alle lobben van de lever. Snijd de viscerale laag en het vet rond de nieren weg, laat de nieren in vivo aan de aorta gehecht om als geografische markeringen voor de verschillende segmenten van de aorta te dienen. Vervolgens, wanneer het gebied rond de nieren duidelijk is, gebruikt u microscharen en micropincetten om de aorta los te maken van zijn dorsale hechting aan de wervelkolom en zijn ventrale hechting aan het slokdarm.In de thorax, volg en los de aorta vanaf de oorsprong in het hart tot de bifurcatie in het iliacale gebied. Om het aortische vetweefsel te isoleren, kunnen op dit punt de subclaviaanse bloedvaten worden geïdentificeerd. Isoleer deze vaten van de nek tot de aortawortel om de aortaverbinding en de wortel in het hart beter zichtbaar te maken.Verwijder vervolgens de thymus en snijd de brachiocephalic, de linkergemeenschappelijke halsslagader en de linkersubclaviaanse slagader om beweging van het hart mogelijk te maken. Gebruik vervolgens een dissectiemicroscoop om het perivasculare vetweefsel of P VVA T-laag rond de aorta te bekijken. Gebruik vervolgens micropincetten om voorzichtig het weefsel van de aorta te trekken en microscharen om voorzichtig de hechting van het PVAT aan de aorta te snijden, beginnend in het thoracale gebied, net superieur waar het diafragma zich bevindt.Gebruik vervolgens micropincetten om voorzichtig het weefsel van de aorta te trekken en microscharen om voorzichtig de hechting van het PVAT aan de aorta te snijden, beginnend in het thoracale gebied, net superieur waar het diafragma zich bevindt. Herhaal dit proces over de gehele lengte van de aorta en eindig in het infrarenale aortische gebied, gelegen net superieur van de iliacale bifurcatie van het aortavat en inferieur van de renale takken vleermuis. En wat monsters kunnen worden gedifferentieerd door histologische analyse met h en e-kleuring primaire cellijnen van subcutane adipocyten en perivascular.Adipocyten kunnen vervolgens worden gekweekt en gedifferentieerd van preadipocyten tot adipocyten voor microarray-analyse. In deze representatieve afbeeldingen is bij

localization-identification-and-excision-of-murine-adipose-depots

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

In this video, we demonstrate the surgical procedure to isolate the subcutaneous white adipose tissue and interscapular brown adipose tissue from a newborn mouse.

White and Brown Adipose Depot Collection from Mouse Pup: A Surgical Procedure to Harvest the White Adipose Tissue and Brown Adipose Tissue from Mouse Pup

Vetweefsel (AT) kan de homeostase van het hele lichaam beïnvloeden, daarom is het begrijpen van de moleculaire mechanismen van adipocytendifferentiatie en -functie van belang. We bieden een protocol voor het verkrijgen van nieuwe inzichten in deze processen door adipocytenhomeostase, differentiatie en blootstelling aan hypoxie te analyseren als een model voor geïnduceerde adipocytenapoptose.

Mechanisme van de verordening van Adipocyte Numbers in volwassen organismen door differentiatie en apoptose Homeostasis

We presenteren de technieken die nodig zijn om de stromale vasculaire fractie (SVF) te isoleren uit de inguinale (subcutane) en perigonale (viscerale) vetweefsel depots van muizen om hun genexpressie en collagenolytische activiteit te beoordelen. Deze methode omvat de verrijking van Sca1high vet-afgeleide stamcellen (ASCs) met behulp van immunomagnetische celscheiding.

Immunomagnetische Scheiding van Fat Depot-specifieke SCA1<sup&gt; hoog</sup&gt;-Vetcellen afgeleide stamcellen (ASC)

Adipocytes bestaan in discrete depots en hebben verschillende rollen binnen hun unieke micro-omgevingen. Aangezien regionale verschillen in het adipocyten karakter en de functie worden blootgelegd, is gestandaardiseerde identificatie en isolatie van depots cruciaal voor de vooruitgang van het veld. Hierin presenteren we een gedetailleerd protocol voor de excisie van verschillende muis vetweefdepots.

Identificatie en dissectie van diverse muis Vetweefdepots

Het doel van dit protocol is om fluorescerend gelabelde liposomen te synthetiseren en flowcytometrie te gebruiken om in vivo lokalisatie van liposomen op cellulair niveau te identificeren.

Voorbereiding, toediening en beoordeling van in vivo weefselspecifieke cellulaire opname van fluorescerende kleurstof-gelabelde liposomen

Dit protocol beschrijft de technische benadering om adipogene en fibro-inflammatoire stromale celsubpopulaties te isoleren uit intra-abdominale witte vetweefseldepots (WAT) van muizen door middel van fluorescentie-geactiveerde celsortering of immunomagnetische parelscheiding.

Isolatie van adipogene en fibro-inflammatoire stromale celsubpopulaties uit intra-abdominale vetdepots van muizen

Dit protocol beschrijft een methode voor de dissectie van vetdepots van muizen en de isolatie en vertering van de respectieve slagaders om de endotheelcelpopulatie te bevrijden en vervolgens te identificeren. Vers geïsoleerde cellen die worden gebruikt in downstream-toepassingen zullen het begrip van vasculaire celbiologie en de mechanismen van vasculaire disfunctie bevorderen.

Isolatie en identificatie van vasculaire endotheelcellen uit verschillende vetdepots voor downstreamtoepassingen

Dit protocol beschrijft de semi-geautomatiseerde isolatie van de stromale vasculaire fractie (SVF) uit muizenvetweefsel om preadipocyten te verkrijgen en adipocytendifferentiatie in vitro te bereiken. Het gebruik van een weefseldissociator voor collagenasevertering vermindert experimentele variatie en verhoogt de reproduceerbaarheid.

Semi-geautomatiseerde isolatie van de stromale vasculaire fractie uit muizenwit vetweefsel met behulp van een weefseldissociator

Hier bieden we een praktische procedure voor het ontleden en uitvoeren van histologische en genexpressie-analyses van supraclaviculair bruin vetweefsel bij muizen.

Dissectie, histologische verwerking en genexpressieanalyse van supraclaviculaire bruine vetweefsel bij muizen

De grootte en kwetsbaarheid van rijpe vetcellen hebben de technieken en hulpmiddelen die beschikbaar zijn voor hun studie en isolatie beperkt. Hier wordt een protocol beschreven voor de isolatie van rijpe muizenadipocyten, dat gemakkelijk kan worden aangepast voor verschillende vetdepots en muizendiëten.

Isolatie en kweek van primaire adipocyten van muizen van magere en zwaarlijvige muizen

Leer de identificatie en excisie van vetweefsels bij volwassen muizen met minimale dissectie en besmetting. Deze methode ondersteunt histologische en moleculaire analyses van adipocyten.

Lokalisatie, identificatie, en Excisie van Muriene Adipose Depots

Meer video's verkennen