Name: Een nieuwe techniek voor de kwantitatieve analyse van haaruitval in Muizen met behulp van grijstinten Analyse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: Leer een methode voor kwantitatieve analyse van haaruitval bij muizen met behulp van grijstintenanalyse op een gel-imager. Deze reproduceerbare techniek meet lichtabsorptie om haartherapieën objectief te evalueren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We willen het Children’s Hospital bij Montefiore, Department of Pediatrics, bedanken voor hun steun voor deze studies. We willen ook de National Alopecia Areata Foundation bedanken voor de financiële steun voor het uitvoeren van studies met C3H/HeJ geënte muizen.

Ethiek Verklaring: Alle studies met dieren moeten door de IACUC van de instelling worden goedgekeurd (voor de gegevens die volgt, werden protocollen goedgekeurd door de Montefiore IACUC, protocol # 11-6-240 en # 13-7-100). Dieren worden voorzien lichte verdoving zoals geïndiceerd voor enig doel waardoor ze nog tijdens het fotograferen, er geen pijnlijke procedures vereist voor dit protocol. 1. Verwerving van Foto <ol><li> Stel focus en gezichtsveld voor gel imager gebruik van papier met gedrukte tekst. Controleer uniformiteit van de lichtbron heel gefotografeerd regio. Om ervoor te zorgen uniformiteit, gebruik dan een gel imager met een ingebouwde lichtbron voor reflectieve fotografie. Heeft een transillumination lichtbron niet gebruiken, omdat dit een silhouet van het dier, die niet geschikt is voor verdere grijstinten analyse zou maken. OPMERKING: Dit zal de muis te plaatsen enigszins onscherp, die optische middeling biedt in de hele regio van belang (ROI) en zalhelpen verminderen quantale fouten voor zeer kleine (dwz &lt;10 pixel) regio&#39;s van belang. Grotere gebieden van belang zal niet worden beïnvloed door deze minor focussen aanpassing, noch zullen zij worden beïnvloed door verschillen in de grootte van het dier. </li><li> Verdoven dieren met ketamine (100 mg / ml) / xylazine (20 mg / ml) (2: 1), daar dit een snelle verdoving effect en snel herstel en optimaal is voor het fotograferen van meerdere dieren. OPMERKING: Anesthesie wordt bevestigd wanneer het dier is nog steeds genoeg om fotografie mogelijk te maken. Zoals dieren meestal herstellen van deze lichte verdoving binnen 10-15 minuten, heeft de dierenarts niet aanbevolen gebruik van oogzalven. </li><li> Plaats verdoofde dieren op gel imager in verticale uitlijning (zo dicht mogelijk parallel). <ol><li> Voor dorsale foto&#39;s, plaatst u de dieren in buikligging met ledematen verlengd. </li><li> Voor ventrale foto&#39;s, plaatst dieren in rugligging, zorg dat de dieren niet zijdelings gedraaid. </li&gt; </ol></li><li> Plaats grijstinten standaard in gefotografeerd regio. </li><li> Sluiten toegangsdeur. Belangrijk: Ambient licht kan verschillen in de blootstelling te introduceren. </li><li> Set F-stop aan een vordering die de regio van belang plaatst binnen het lineaire bereik van de overname (lezen F-stop). LET OP: De meeste systemen wordt weergegeven waar het beeld is verzadigd. </li><li> Neem foto. </li><li> Verandering F-stop naar een andere belichtingsinstelling die de regio van belang plaatst binnen het lineaire bereik door het verhogen of verlagen van de F-stop door 1, zodanig dat zowel de standaard en de regio van belang blijven in een lineaire reeks van acquisitie (referentie F- stop). </li><li> Neem foto. </li><li> Zodra fotografie is voltooid, plaatst dieren op een opwarming tafel en bewaken totdat ze borstligging kan handhaven. Terug dieren hun kooien. De terugkeer van de groep dieren aan de vivarium zodra alle dieren zijn volledig hersteld. </li></ol> 2. Kwantificering van lichtabsorptie &lt;/ P&gt; <ol><li> Mark regio&#39;s van de rente op de beelden van de dieren met behulp van meegeleverde software voor gel imager. <ol><li> Voor gehele dier dorsaal aanzicht, gebruikt een rechthoekig of ovaal beeld uitstrekt vanaf de bovenste ledematen van de onderste ledematen, zich zijdelings zoveel mogelijk zodanig dat geen deel van de doos voorbij de achterzijde van het dier zoals weergegeven in figuur 1A. OPMERKING: Men kan ook markeren het gebied van belang met behulp van een vrije hand tekengereedschap. </li><li> Voor hele dier ventrale uitzicht, gebruik 2 rechthoeken: één voor het bekken en een voor de borst zoals weergegeven in figuur 1B. </li><li> Voor een kleinere regio van belang, dat wil zeggen, de plaats van toediening van het geneesmiddel, merk naargelang het geval. </li></ol></li><li> Mark regio (&#39;s) van de rente op grijstinten absorptie standaard. </li><li> Neem absorptie van elk van de gemarkeerde gebieden van belang. </li></ol> 3. Analyse Absorptie niveaus obtained voor de gebieden van belang moet worden genormaliseerd om de achtergrond standaard voor vergelijking van foto&#39;s. De relatie van de blootstelling aan de absorptie is log-log (dat wil zeggen, de relatie is lineair tussen log (blootstelling) en log (absorptie)). Met deze verhouding, kan de absorptie van het interessegebied genormaliseerd op een standaard achtergrondwaarde, waardoor absorpties rechtstreeks tussen verschillende foto, ook degene die op verschillende tijdstippen (bijv seriële metingen binnen een protocol) vergeleken worden. De procedure voor het uitvoeren van deze correcties wordt gedetailleerd beschreven in optionele stappen 3.1 en 3.2. <ol><li> (Optioneel) Plot curve van log (exposure) vs. log (absorptie) met waarden verkregen uit grijstinten absorptie standaard. </li><li> (Optioneel) Pas variaties in de kwaliteit van elke foto als volgt: <ol><li> Selecteer F-stop voor het lezen (zoals bepaald in stap 1.6) en F-stop voor de referentie (zoals bepaald in sTEP 1.8). </li><li> Bereken de gemiddelde absorptie van de standaard in alle foto&#39;s op het lezen van F-stop. Dit gemiddelde is de Reference Standard Value (RSV). </li><li> Bereken het verschil in absorptie tussen het lezen en referentie F-stop instellingen in elke foto voor de standaard (delta-S) en voor elke toegezegd ROI (delta-ROI-1, delta-ROI-2 ... ..delta-ROI-X) </li><li> Bereken de gecorrigeerde absorptie voor elke ROI als volgt: Gecorrigeerde absorptie (ROI-X) = Absorptie (ROI-X) bij het lezen van F-stop + (RSV - absorptie van standaard bij het lezen van F-stop) * (delta-ROI-X / delta-S) </li></ol></li><li> Compileren experimentele data en data-analyses uit te voeren met behulp van standaard statistische technieken voor continue variabelen (dat wil zeggen, ANOVA, T-test). </li></ol>

<ol><li>McAndrews, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Hair+Loss+Association%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">American Hair Loss Association.</a> , 
 <a target="_blank" href="http://www.americanhairloss.org/men_hair_loss/introduction.asp">http://www.americanhairloss.org/men_hair_loss/introduction.asp</a> (2011).</li>
<li>Safavi, K. H., Muller, S. A., Suman, V. J., Moshell, A. N., Melton, L. J. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+alopecia+areata+in+Olmsted+County%2C+Minnesota%2C+1975+through+1989%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clin+Proc%22%5BJournal%5D)">Incidence of alopecia areata in Olmsted County, Minnesota, 1975 through 1989.</a> Mayo Clin Proc. 70 (7), 628-633 (1995).</li>
<li>Hussein, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy-induced+alopecia%3A+new+developments%5BTitle%5D)+AND+%22South+Med+J%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy-induced alopecia: new developments.</a> South Med J. 86 (5), 489-496 (1993).</li>
<li>Trueb, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy-induced+hair+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Skin+Therapy+Lett%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy-induced hair loss.</a> Skin Therapy Lett. 15 (7), 5-7 (2010).</li>
<li>Sato, N., Leopold, P. L., Crystal, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+adenovirus-mediated+expression+of+Sonic+hedgehog+gene+on+hair+regrowth+in+mice+with+chemotherapy-induced+alopecia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Effect of adenovirus-mediated expression of Sonic hedgehog gene on hair regrowth in mice with chemotherapy-induced alopecia.</a> J Natl Cancer Inst. 93 (24), 1858-1864 (2001).</li>
<li>McGarvey, E. L., Baum, L. D., Pinkerton, R. C., Rogers, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+sequelae+and+alopecia+among+women+with+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Pract%22%5BJournal%5D)">Psychological sequelae and alopecia among women with cancer.</a> Cancer Pract. 9 (6), 283-289 (2001).</li>
<li>Baxley, K. O., Erdman, L. K., Henry, E. B., Roof, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alopecia%3A+effect+on+cancer+patients%27+body+image%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Nurs%22%5BJournal%5D)">Alopecia: effect on cancer patients' body image.</a> Cancer Nurs. 7 (6), 499-503 (1984).</li>
<li>Stough, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+effect%2C+pathophysiology%2C+and+management+of+androgenetic+alopecia+in+men%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clin+Proc%22%5BJournal%5D)">Psychological effect, pathophysiology, and management of androgenetic alopecia in men.</a> Mayo Clin Proc. 80 (10), 1316-1322 (2005).</li>
<li>Ogunmakin, K. O., Rashid, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alopecia%3A+the+case+for+medical+necessity%5BTitle%5D)+AND+%22Skinmed%22%5BJournal%5D)">Alopecia: the case for medical necessity.</a> Skinmed. 9 (2), 79-84 (2011).</li>
<li>Olsen, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized+clinical+trial+of+5%25+topical+minoxidil+versus+2%25+topical+minoxidil+and+placebo+in+the+treatment+of+androgenetic+alopecia+in+men%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Acad+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A randomized clinical trial of 5% topical minoxidil versus 2% topical minoxidil and placebo in the treatment of androgenetic alopecia in men.</a> J Am Acad Dermatol. 47 (3), 377-385 (2002).</li>
<li>Rossi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1+mg+daily+administration+on+male+androgenetic+alopecia+in+different+age+groups%3A+10-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatol+Ther%22%5BJournal%5D)">1 mg daily administration on male androgenetic alopecia in different age groups: 10-year follow-up.</a> Dermatol Ther. 24 (4), 455-461 (2011).</li>
<li>Gibbons, R. D., Fiedler-Weiss, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer-aided+quantification+of+scalp+hair%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatol+Clin%22%5BJournal%5D)">Computer-aided quantification of scalp hair.</a> Dermatol Clin. 4 (4), 627-640 (1986).</li>
<li>Fleming, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+a+structural+analysis+of+dermatoscopic+imagery%5BTitle%5D)+AND+%22Comput+Med+Imaging+Graph%22%5BJournal%5D)">Techniques for a structural analysis of dermatoscopic imagery.</a> Comput Med Imaging Graph. 22 (5), 375-389 (1998).</li>
<li>Chamberlain, A. J., Dawber, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+evaluating+hair+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Australas+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Methods of evaluating hair growth.</a> Australas J Dermatol. 44 (1), 10-18 (2003).</li>
<li>The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale*. , Imatest. 
 
 <a target="_blank" href="http://www.imatest.com/docs/q13/">http://www.imatest.com/docs/q13/</a> Forthcoming.</li>
<li>Freyschmidt-Paul, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+alopecia+areata+in+C3H%2FHeJ+mice+with+the+topical+immunosuppressant+FK506+%28Tacrolimus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Treatment of alopecia areata in C3H/HeJ mice with the topical immunosuppressant FK506 (Tacrolimus).</a> Eur J Dermatol. 11 (5), 405-409 (2001).</li>
<li>Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Matsushita, O., Sakon, J., Gensure, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+and+prevention+of+chemotherapy-induced+alopecia+with+PTH-CBD%2C+a+collagen-targeted+parathyroid+hormone+analog%2C+in+a+non-depilated+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Drugs%22%5BJournal%5D)">Treatment and prevention of chemotherapy-induced alopecia with PTH-CBD, a collagen-targeted parathyroid hormone analog, in a non-depilated mouse model.</a> Anticancer Drugs. 25 (1), 30-38 (2014).</li>
<li>Peters, E. M., Foitzik, K., Paus, R., Ray, S., Holick, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+strategy+for+modulating+chemotherapy-induced+alopecia%2C+using+PTH%2FPTHrP+receptor+agonist+and+antagonist%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A new strategy for modulating chemotherapy-induced alopecia, using PTH/PTHrP receptor agonist and antagonist.</a> J Invest Dermatol. 117 (2), 173-178 (2001).</li>
<li>Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Seymour, A., Sakon, J., Gensure, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+hormone+linked+to+a+collagen+binding+domain+promotes+hair+growth+in+a+mouse+model+of+chemotherapy+induced+alopecia+in+a+dose-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Anti-cancer+drugs%22%5BJournal%5D)">Parathyroid hormone linked to a collagen binding domain promotes hair growth in a mouse model of chemotherapy induced alopecia in a dose-dependent manner.</a> Anti-cancer drugs. 25 (7), 819-825 (2014).</li>
</ol>

Auteurs hebben niets te onthullen.

In dit rapport wordt een gedetailleerde beschrijving gegeven van een nieuwe techniek voor het kwantificeren van haarverlies bij knaagdieren. Deze techniek maakt gebruik van een gel imager voor het verwerven en analyseren, apparatuur die gemakkelijk beschikbaar in de meeste laboratoria. De metingen hebben aangetoond robuust kleine variaties in de techniek (figuren 4-5) zijn, en zijn goed gecorreleerd aan de mate van visuele haarverlies bij behandelingsvormen (figuur 6). Deze technieken z...

Alopecia (haaruitval) kan een psychologisch en emotioneel belastend evenement met meerdere oorzaken zijn. Mannelijke kaalheid is de meest voorkomende oorzaak van alopecia, die ongeveer tweederde van de mannen van 35 jaar 1. Een vergelijkbaar patroon van haarverlies kan worden waargenomen bij vrouwen met polycysteus ovarium syndroom. In beide van deze aandoeningen, is de haaruitval androgeen bemiddeld. Alopecia kan ook optreden als een auto-immuunziekte, alopecia areata, die 1,7% van de bevolking treft 2. Alopecia kan optreden als een neveneffect van sommige medische behandelingen, zoals chemotherapie 3. Een hoog percentage (65-85%) van de chemotherapie patiënten ervaren een zekere mate van alopecia 4,5. De psychologische gevolgen van haaruitval zijn goed bestudeerd in de chemotherapie setting. Chemotherapie geïnduceerde alopecia kan leiden tot angst, depressie, een negatief lichaamsbeeld, verminderd zelfrespect en een verminderd gevoel van welzijn 6,7. Een hoge percentage (47-58%) van de vrouwelijke kankerpatiënten verhelpen haaruitval de meest traumatische aspect van chemotherapie, en tot 8% daling behandeling van angst haaruitval 4,6. Er zijn ook aanwijzingen in alopecia androgenetica om therapie om psychologische en zelfs medische gevolgen van haaruitval 8,9 verminderen ondersteunen. Evenzo is alopecia areata gemeld ernstige psychologische gevolgen 2 hebben, en de fragmentarische aard van de haaruitval kan leiden tot een onaangename cosmetisch resultaat dan de meeste andere oorzaken van haarverlies. Hoewel geneesmiddelen met milde anti-androgene effecten (effecten, spironolacton) werd gebruikt met beperkt succes als therapie voor alopecia, de eerste effectieve medicatie voor alopecia was minoxidil 10. Deze antihypertensieve heeft een waargenomen bijwerking veroorzaken haargroei en wordt nu gebruikt als topische therapie voor vele vormen van alopecia. Echter, de reacties zijn vaak onvolledig, met een aantal onderwerpen waarin slechts langzaaming van haar verlies in plaats van werkelijke hergroei 10. Finasteride is een competitieve antagonist II 5α-reductase type welk blokken omzetting van testosteron in dihydrotestosteron, wat resulteert in verbetering van androgene alopecia ten koste van gedeeltelijke systemische androgeen blokkade. Respons met lange termijn (10 jaar) therapie zijn ongeveer 50% 11. Kortom, ondanks aanzienlijke onderzoek op dit gebied, is er nog geen adequate behandeling voor haarverlies. Al decennia lang hebben wetenschappers en clinici meetmethoden hoofdhuid haargroei in klinische studies onderzocht. Met de ontwikkeling van geneesmiddelen die de behandeling van alopecia, is er een grotere behoefte aan betrouwbare, economische en minimaal invasieve wijze meten haargroei en specifiek respons op therapie geweest. Beeldanalyse technologie voor een nauwkeurige kwantificering van haardichtheid bij patiënten met haaruitval aandoeningen leverde consistente en betrouwbare resultaten in het verleden met verschillende techniques, inclusief analyse van de gedigitaliseerde beelden 12, beeldanalyse van individuele haren en huidletsels 13, en microscopische scannen naar haar massa te kwantificeren in een bepaald hoofdhuid regio 14. Helaas, terwijl de bovenstaande methodieken betere beoordeling van de werkzaamheid hebben geleverd voor de haargroei bevorderende interventies in klinische studies, deze methoden niet zijn toegepast om knaagdieren studies in preklinische onderzoeken. Ons doel is om een ​​consistente en betrouwbare methode om haaruitval bij muizen, waardoor de onderzoekers om nauwkeuriger te beoordelen en nieuwe therapeutische benaderingen voor verschillende vormen van alopecia vergelijken kwantificeren ontwikkelen. We hebben een methode met behulp van apparatuur direct beschikbaar in de meeste laboratoria die een snelle en betrouwbare kwantificering van haardichtheid bij muizen met bruin of zwart haar zal toestaan ​​ontwikkeld. Deze methode is getest in muismodellen van chemotherapie-geïnduceerde alopecia, alopecia areata en alopecia uit waxing. Een gedetailleerd protocol wordt gepresenteerd voor het uitvoeren van deze metingen, waaronder de goedkeuring gegevens van C57BL / 6 en C3H / HeJ stammen van muizen. Omdat deze techniek berust op het opsporen lichtabsorptie van pigmenten in de haarschacht, kan het niet worden gebruikt om de haargroei te detecteren in witte muizen of albino muizen.

<table><tbody><tr><td>KODAK Gel Logic 100 Imaging System</td><td>Eastman Kodak Company, Rochester, NY, USA</td><td></td><td>Gel-imager voor het verkrijgen en analyseren van foto's, moet beschikken over een ingebouwde lichtbron voor reflectiefotografie.</td></tr><tr><td>The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale</td><td><a href="http://www.imatest.com/docs/q13/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Imatest</a></td><td></td><td>Grijschaalstandaard</td></tr><tr><td>C57BL/6J Mice</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine</td><td></td><td>Muizen voor representatieve studie</td></tr><tr><td>C3H/HeJ engrafted mouse</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine</td><td></td><td>Muizen voor representatieve studie</td></tr></tbody></table>

een nieuwe techniek voor de kwantitatieve analyse van haaruitval in muizen met behulp van grijstinten analyse

A New Technique for Quantitative Analysis of Hair Loss in Mice Using Grayscale Analysis

Alopecia is een veel voorkomende vorm van haaruitval die kan optreden in veel verschillende omstandigheden, met inbegrip van mannelijke kaalheid, polycysteus ovarium syndroom, en alopecia areata. Alopecia kan ook optreden als bijwerking van chemotherapie bij kankerpatiënten. In deze studie, ons doel was om een ​​consistente en betrouwbare methode voor haaruitval bij muizen, waarmee onderzoekers nauwkeurig vast en nieuwe therapeutische benaderingen voor deze verschillende vormen van alopecia vergelijken kwantificeren ontwikkelen. De werkwijze gebruikt een standaard gel imager verkrijgen en verwerken afbeeldingen muizen meten van de lichtabsorptie, die optreedt in ruwe verhouding tot de hoeveelheid zwart (of grijs) haar op de muis. Gegevens die zijn gekwantificeerd op deze manier kunnen vervolgens worden geanalyseerd met behulp van standaard statistische technieken (dat wil zeggen, ANOVA, T-test). Deze methode werd getest in muismodellen van chemotherapie-geïnduceerde alopecia, alopecia areata en alopecia van waxen. In dit rapport, het gedetailleerd protocol is presteerde voor het uitvoeren van deze metingen, waaronder de goedkeuring gegevens van C57BL / 6 en C3H / HeJ stammen van muizen. Deze nieuwe techniek biedt een aantal voordelen, waaronder relatieve eenvoud van toepassing, afhankelijkheid van apparatuur die gemakkelijk beschikbaar in de meeste laboratoria en toepassing van een objectief, kwantitatieve beoordeling die is robuuster dan subjectieve beoordelingen. Verbeteringen in de kwantificering van de haargroei bij muizen zal studie van alopecia modellen te verbeteren en de evaluatie van veelbelovende nieuwe therapieën te vergemakkelijken in preklinische studies.

Deze techniek werd gevalideerd met C3H / HeJ geënt muizen, de muis-model van alopecia areata 16. Deze dieren ontwikkelen wereldwijde haaruitval die vordert geleidelijk in de tijd. Echter, de haaruitval optreedt in patches, en kan variëren van een muis naar het volgende, de invoering van aanzienlijke variabiliteit en het verhinderen van kwalitatieve beoordelingen. Dit model bood de gelegenheid om correlaties tussen de metingen van de optische dichtheid te testen op verschillende locaties op de muis als een beo...

Alopecia is een veelvoorkomende vorm van haarverlies die kan optreden in veel verschillende omstandigheden, inclusief als een bijwerking van chemotherapie. We hebben een methode ontwikkeld om haarverlies bij muizen te kwantificeren, waarbij we een standaard gel imager gebruiken om een grijswaardenanalyse uit te voeren, om de studie van veelbelovende nieuwe alopecia-therapieën te vergemakkelijken.

Een nieuwe techniek voor de kwantitatieve analyse van haaruitval in Muizen met behulp van grijstinten Analyse

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including male-pattern hair loss, polycystic ovarian syndrome, and ...

Het algemene doel van deze procedure is om een kwantificering van de haardichtheid te verkrijgen met behulp van lichtabsorptie. Dit wordt bereikt door eerst dieren te fotograferen op een gel-imager. De volgende stappen zijn het definiëren van een interessegebied op de foto en het bepalen van de lichtabsorptie binnen het interessegebied.Vervolgens wordt de lichtabsorptie vergeleken met een fotografische standaard. Uiteindelijk kan de lichtabsorptie worden gemiddeld tussen gelijk behandelde dieren om de effecten van een interventie op de haargroei te laten zien. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat het onbevooroordeeld, kwantificeerbaar en reproduceerbaar is.Dit is uiterst belangrijk omdat het je toestaat om standaarden te gebruiken, statistische technieken zoals Inova om de statistische significantie van de resultaten te bepalen. Gebruik voor dit protocol een gel-imager met een ingebouwde lichtbron voor reflectieve fotografie. Dit zorgt voor een goede lichtuniformiteit, terwijl trans-verlichting een silhouet creëert dat ongeschikt is voor analyse.Begin met het voorbereiden van de gel-imager, stel de focus en het zichtveld in. Met behulp van wat afgedrukte tekst kan de muis lichtjes onscherp zijn, omdat dit eigenlijk werkt. Om kwantale fouten in kleine interessegebieden te verminderen, verifieer vervolgens de uniformiteit van de lichtbron over het gefotografeerde gebied met als doel een uitstekende optische gemiddelde bij het interessegebied.Bereid vervolgens het dier voor. Selecteer een verdovingsmiddel met een snel begin en korte werkingsduur en geef net genoeg toe om de dieren stil te houden tijdens de fotografie. Plaats nu de dieren verticaal op de imager en zo dicht mogelijk parallel.Voor dorsale foto's plaats je de dieren in een buikligging met hun ledematen uitgestrekt. Voor ventrale foto's plaats je de dieren in een rugligging. Zorg ervoor dat ze niet lateraal geroteerd zijn.Absorptiewaarden kunnen tussen afbeeldingen worden getrokken, maar dit is niet waarvoor de machine is ontworpen. Het toevoegen van een grijstonstandaard stelt ons in staat om de absorptiewaarden te normaliseren bij het samenstellen van de gegevens. Plaats nu de grijstonstandaard in het gefotografeerde gebied.Sluit vervolgens de kamer en verminder de omgevingsverlichting die de kamer via de camera binnen zou kunnen komen. Stel de F-stop in op een belichting die het interessegebied niet oververzadigd of onderbelicht maakt. Maak vervolgens een foto.Als de F-stop zo wordt gekozen dat het beeld verzadigd is, zal de grijstonstand waarde vaststaan op de waarde en B van geen enkel nut. Verander vervolgens de F.Stop met één, houd het interessegebied en de standaard in een lineair belichtingsbereik, en maak een tweede foto met de fotografie voltooid. Leg de dieren op een opwarmingstafel en bewaak ze totdat ze hersteld zijn.Sternale liggende. Breng de dieren vervolgens terug naar hun kooien en uiteindelijk naar het dierenlaboratorium voor volledige herstel. Om de lichtabsorptie te kwantificeren met behulp van de gel-imagingsoftware, markeer de interessegebieden op de afbeeldingen van de dieren voor een volledige dorsale weergave van het dier.Gebruik een rechthoekige afbeelding, een ovale afbeelding of een freehand-tool om een ruimte te omlijnen van de bovenste ledematen tot de onderste ledematen, zo veel mogelijk lateraal uitstrekkend. Blijf binnen de marges van de achterkant van het dier voor een volledige ventrale weergave van het dier. Gebruik twee rechthoeken.Eén om het bekkengebied te bedekken, dat is verzorgd, en één om het borstgebied te bedekken, dat niet verzorgd is. Kleinere interessegebieden, zoals waar een medicijn werd toegediend, kunnen ook worden gemarkeerd zoals vereist. Markeer vervolgens het interessegebied op de grijstondabsorptiestandaard.Neem vervolgens de absorptie op van elk gemarkeerd interessegebied voor vergelijking tussen foto's. Normaliseer de absorptieniveaus naar de achtergrondstandaard met behulp van een log-log relatie van blootstelling tot absorptie. Om dit te doen, tekend een curve van de log van blootstelling tegen de log van absorptie.Gebruik waarden verkregen uit de grijstondabsorptiestandaard, pas vervolgens aan voor variaties in de standaard van elke foto als volgt. Selecteer eerst de F-stop voor het lezen van de ROI en de F-stop voor de referentie en bereken de gemiddelde absorptie van de standaard in alle foto's bij de lees-F-stop. Dit gemiddelde is de referentiestandaardwaarde of de RSV.Bereken vervolgens het verschil in absorptie tussen de lees- en referentie-F-Stop instellingen in elke foto en maak dezelfde berekeningen voor de standaard en voor elke gedefinieerde ROI. Gebruik nu gegevens van één F-stop, bereken de gecorrigeerde absorptie voor elke ROI met behulp van de getoonde formule. Pas vervolgens standaard statistische methoden toe om de gegevens te analyseren. C3 HHEJ engrafted muizen, die een model voor alopecia ADA waren, werden geanalyseerd met behulp van de beschreven methode bij verschillende blootstellingen.Variaties in niet-overlappende ROI waren strak gecorreleerd zoals verwacht. Vergelijkbare vergelijkingen produceerden dezelfde strakke correlatie over een periode van drie weken. De muizen werden gefotografeerd om hun verwachte haarverlies te kwantificeren.80%van de gefotografeerde muizen vertoonde haarverlies in dit tijdsbestek. Ter vergelijking, normale C 57 zwarte zes muizen vertoonden geen haarverlies in dezelfde tijdsperiode. In een tweede studie werd chemotherapie-geïnduceerde alopecia gekwantificeerd met behulp van de beschreven techniek.Muizen werden gedurende drie weken behandeld met cyclofosfamide en na twee maanden vertoonden ze significant haarverlies vergeleken met controles. Eenmaal onder de knie, kan elk beeld in minder dan vijf minuten worden geanalyseerd. Na het bekijken van deze video, zou je een goed begrip moeten hebben van hoe je de hoeveelheid haargroei bij knaagdieren kunt kwantificeren met behulp van een standaard gel-imaging systeem.

a-new-technique-for-quantitative-analysis-hair-loss-mice-using

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Weefsel-specifieke analyse van een haarfollikel regeneratie model met behulp van lentivirus tot winst-of verlies-van-functie bemiddelen.

Snelle Genetische analyse van epitheliale-mesenchymale signalering tijdens haar regeneratie

This video demonstrates a method for grafting human skin onto an immunodeficient mouse with a suppressed neutrophil response. The method involves applying human split-thickness skin to the mouse's graft bed, sealing it, and covering it for recovery. Eventually, the human skin adheres to the mouse's skin, establishing vascularization and circulation, resulting in a successful skin xenograft.

A Technique for Human Skin Grafting in a Mouse Model

This video demonstrates the combined recording of mechanically stimulated afferent output and nerve terminal labeling in the hair follicles of a mouse pinna. It outlines the steps involved in the mechanical stimulation of hair follicle nerve terminals before and after exposure to a fluorescent membrane dye, electrophysiology recording of the generated action potentials, and visualization of the nerve terminal labeling in the hair follicles.

Combined Recording of Mechanically Stimulated Afferent Output and Nerve Terminal Labelling in Mouse Hair Follicles

Zoogdierhuid bevat een divers scala aan structuren - zoals haarfollikels en zenuwuiteinden - die onderscheidend patronen van ruimtelijke organisatie vertonen. Het analyseren van de huid als een platte berg maakt gebruik van de 2-dimensionale geometrie van dit weefsel tot volledige dikte van hoge-resolutie afbeeldingen van de huid structuren te produceren.

Flat Mount beeldvorming van de huid van muizen en de toepassing ervan op de Analyse van Haarzakje Patterning en Sensorische Axon morfologie

Dit protocol beschrijft hoe bilaterale excisionale wonden met volledige dikte bij muizen kunnen worden gegenereerd en hoe u de wonden vervolgens controleren, oogsten en voorbereiden op morfometrische analyse. Inbegrepen is een diepgaande beschrijving van het gebruik van seriële histologische secties om morfometrische defecten te definiëren, nauwkeurig te kwantificeren en op te sporen.

Murine Excisional Wound Healing Model en Histological Morphometric Wound Analysis

Hier beschrijven we in detail een methode, die is gebaseerd op microcomputertomografie, om 3D-modellen van craniomaxillofaciale botten bij muizen te segmenteren en te meten, voor een betere beoordeling van de craniomaxillofaciale botontwikkeling bij muizen dan wat mogelijk is met de huidige methoden.

Analyse van craniomaxillofaciale misvormingen bij muizen met behulp van driedimensionale microcomputertomografie

Capillulatoscopie is een toegankelijk hulpmiddel voor directe, goedkope en niet-invasieve visualisatie van microvasculatuur. Het doel van dit protocol is om onderzoekers in staat te stellen capilloscopie te gebruiken voor de visualisatie van perifere microvasculaire morfologie in de nagelbedden van muizen.

Niet-invasieve visualisatie van microvasculaire morfologie van nagelbedden bij muizen met behulp van capilloscopie

Het doel van dit protocol is om instructies en richtlijnen te geven voor het beoordelen van fysieke kwetsbaarheid bij C57Bl/6x129J laboratoriummuizen. Specifieke details met betrekking tot elke maatstaf die wordt gebruikt in de fysieke kwetsbaarheidsindex worden toegelicht. Er worden ook verschillende methoden gepresenteerd voor het rapporteren van kwetsbaarheidsresultaten.

Beoordeling van kwetsbaarheid in een ouder wordend muismodel

Deze studie presenteert een in vivo twee-foton beeldvormingsbenadering om de structuren van laag-drempel mechanoreceptor (LTMR) axonterminalen in de voorpoothuid van muizen te visualiseren. Met behulp van herhaalde, hoogresolutiebeeldvorming van individuele axonen biedt deze methode een nieuw platform voor het bestuderen van de structuur en functie van het cutane sensorische circuit tijdens de ontwikkeling en bij volwassenen.

Intravitale tweefotonbeeldvorming van aanrakingssensorische axonmorfologie in muizenhuid

Dit artikel beschrijft een nieuw protocol en reagensset ontworpen voor de gevoelige meting van de neurotoxische effecten van verbindingen en behandelingen op co-culturen van neuronen en astrocyten met behulp van hoge inhoudsanalyse. Resultaten tonen aan dat de hoge inhoudelijke analyse een spannende nieuwe technologie voor neurotoxiciteit assessment vertegenwoordigt.

Een Neuronale en astrocyte co-cultuur assay voor High Content Analysis van neurotoxiciteit

Leer een methode voor kwantitatieve analyse van haaruitval bij muizen met behulp van grijstintenanalyse op een gel-imager. Deze reproduceerbare techniek meet lichtabsorptie om haartherapieën objectief te evalueren.

Een nieuwe techniek voor de kwantitatieve analyse van haaruitval in Muizen met behulp van grijstinten Analyse

Meer video's verkennen