Name: Chirurgische methode voor viraal gemedieerde Gene Levering aan de Mouse Inner Ear door het ronde venster membraan (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Leer een post-auriculaire chirurgische methode voor virale gentherapie in het muisachtige binnenoor via het ronde venster membraan. Deze techniek minimaliseert bloedverlies en mortaliteit.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk wordt ondersteund door een R21-subsidie van de National Institutes of Health en door een subsidie van Hearing Research, Incorporated.

OPMERKING: Alle procedures en dierlijke behandeling nageleefd NIH ethische richtlijnen en goedgekeurd protocol eisen van de Institutional Animal Care en gebruik Comite van de Universiteit van Californië, San Francisco. 1. Voorbereiding van de Animal voor Heelkunde <ol><li> Het uitvoeren van chirurgische ingrepen in een schone, gewijd ruimte. Autoclaaf alle chirurgische instrumenten steriliseren met een glazen kraal sterilisator vóór de ingreep. OPMERKING: In dit protocol gebruiken postnatale dag 10-12 (P10-12) FVB muizen. Verschillende leeftijden en muizenstammen kunnen worden gebruikt om de behoeften van een specifiek project te voldoen. Muizen ouder dan P40 kan een uitdaging zijn, omdat de bulla bot wordt nog lastiger. </li><li> Verdoven de muizen met intraperitoneale injectie van een mengsel van ketamine hydrochloride (100 mg / kg), xylazine hydrochloride (10 mg / kg) en acepromazine (2 mg / kg). Begin chirurgische voorbereiding pas nadat het dier niet meer reageert op pijnprikkels, zoals teen knijpen. Als necessary toedienen van een booster dosis (een vijfde van de oorspronkelijke dosis) van het verdovingsmiddel cocktail aan het oorspronkelijke verdoving vlak herstellen. OPMERKING: Wees voorzichtig bij deze stap, omdat het grootste deel van de sterfte op deze leeftijd wordt veroorzaakt door een overdosis verdovingsmiddel. </li><li> Bedek de ogen van het dier met een beschermende oogzalf om de ogen vochtig te houden tijdens anesthesie onderdrukken knipperreflex het dier. </li><li> Plaats de muis met uitgebreide hals op een verwarmingselement in de hele procedure totdat de muis is helemaal wakker, tot post-anesthesie onderkoeling te voorkomen. </li><li> Scheer de linker post-auriculaire regio met een tondeuse en desinfecteren met 70% ethanol en povidonjood voordat chirurgische manipulatie. </li></ol> 2. de chirurgische ingreep en Vector Injection <ol><li> Gebruik een post-auriculaire benadering van het trommelvlies bulla bloot. Incise het onderhuidse weefsel met kleine schaar om de post-auriculaire spier bloot. Na het terugtrekken van de vetweefsel aan The dorsale zijde van de insnijding, scheid de spieren naar rechts en links loodrecht op de insnijding voor het temporale bot bloot. Zorg ervoor dat deze incisie is lang genoeg om comfortabel met voldoende visualisatie. </li><li> Perforeren de tympanische bulla met een 25 G naald en vergroten het gat zo nodig met een pincet door pellen het bot terug toegang tot het basale begin van het slakkenhuis toe en vervolgens verwijden voldoende om de stapediale slagader en het ronde venster membraan te visualiseren (RWM) . </li><li> Prik de RWM zachtjes in het centrum met een borosilicaat capillaire pipet. Observeren vloeistof uitstroom door de RWM op dit punt; dit is normaal. Wacht tot de uitstroom is gestabiliseerd (de uitgevloeid vloeistof uit het slakkenhuis wordt gedroogd met een steriele filter papier). LET OP: Wees voorzichtig bij het vasthouden en het bevorderen van de glazen naald zodat de RWM perforatie is zo klein mogelijk. Afhankelijk van de microscoop gebruikt, houdt u de pipetten met een micromanipulator of met de hand met behulp van een pipethouder. </li><li> Bereid de pipetten voor injectie met een pipet trekker op dezelfde manier patchklem pipetten worden bereid. Zorg ervoor dat de tip diameter is groot (ongeveer 15 micrometer in diameter), zodat pipetteren het virus in en uit is eenvoudig te doen. </li><li> Opstellen 1-2 pi AAV1-VGLUT3, AAV1-GFP of AAV2-GFP in een injectie pipet. Nadat de efflux gestabiliseerd (5 tot 10 min), microinject deze vast volume in de scala tympani door hetzelfde gat eerder in RWM. </li><li> Snel sluiten RW niche na het uittrekken van de pipet met een kleine stekker van de spieren en zet hem vast met een kleine druppel weefsel lijm geplaatst op de spier om lekkage van de ronde venster te vermijden. OPMERKING: Sluit dit gat heel goed na de naald wordt verwijderd met een kleine stekker van de spier aan een perilymfe lekkage van de cochlea-deze stap te voorkomen is het van cruciaal belang om gehoor te beschermen. Mislukking te verzegelen volledig de RWM zal resulteren in gehoorverlies in de tijd. </li><li> Na injectie, hebben betrekking op degat in de auditieve bulla met vetweefsel, de terugkeer van de post-auriculaire spieren en vetweefsel in de normale stand en hechten van de wond in lagen met een 6-0 of kleiner absorbeerbare chroomzuur hechtdraad. </li><li> Ontsmet de wond met povidonjood. </li></ol> 3. postoperatieve zorg <ol><li> Plaats muizen in een warme kooi en laat ze niet onbeheerd achter tot ze volledig hersteld verplaats ze dan terug met de moeder. Het wordt aanbevolen om de man uit de kooi te verwijderen alvorens de pups terug met de moeder. </li><li> Onderhuids Carprofen (2 mg / kg) voor postoperatief analgesie en elke 24 uur daarna gedurende 3 dagen, ontsteking en pijn te verminderen. Dagelijks toezicht op de dieren tekenen van angst, abnormaal gewichtsverlies, pijn of infectie. Algemeen door de 3 dagen na de operatie alle muizen normaliter handelen. Als enige tekenen van nood of ziekte verschijnen in een muis na de 3 e dag, overwegen euthanizing tHij muis als per institutionele richtlijnen. </li></ol> 4. Beoordeling van Cochlear Functie Na Viral Bezorging Met behulp van BAER-test (ABR) Recordings OPMERKING: De auditieve hersenstam respons (ABR) is een auditieve evoked potential onttrokken lopende elektrische activiteit in de hersenen en opgenomen via elektroden onder de hoofdhuid geplaatst. Het dier wordt gestimuleerd met geluid. De resulterende opname bestaat uit vijf golven die de elektrische activiteit van opeenvolgende punten in de gehoorbaan in de eerste 10 msec na het begin van een auditieve stimulus geven. <ol><li> Verdoven muizen door intraperitoneale injectie van een mengsel van ketamine hydrochloride en xylazinehydrochloride zoals beschreven in paragraaf 1.2 van dit protocol, maar dan zonder acepromazine. </li><li> Plaats de muis op een verwarming pad gedurende de gehoortest totdat de muis is helemaal wakker, tot post-anesthesie onderkoeling te voorkomen. OPMERKING: Gebruikde volgende geluid stimuli in dit experiment: klik (5 msec duur; 31 Hz presentatie tarief). </li><li> Plaats subdermale naald elektroden bij de top onder de oorschelp van het linkeroor (referentie), en onder het contralaterale oor (grond) en gestart ABRs zoals eerder beschreven in een geluiddichte kamer 27,28. Record ABR golfvormen in 5 dB geluidsdruk intervallen af ​​van de maximale amplitude. </li><li> Bepaal ABR drempels na de operatie zo vroeg als 4 dagen na virale aflevering Opmerking drempel wordt gedefinieerd als de laagste stimulus niveau waarop respons pieken golven I-V waren duidelijk en herhaaldelijk aanwezig visuele inspectie. </li><li> Meet zwaai ik naar de activiteit te analyseren vanuit de cochleaire zenuw. De laagste prikkelniveau dat een detecteerbaar ABR golfvorm oplevert wordt gedefinieerd als de drempelwaarde. </li></ol> 5. Cochlear Transgene Protein Expression Met behulp van immunofluorescentie <ol><li> Verdoven muizen door een overdosis van intraperitoneal injectie van een mengsel van ketamine hydrochloride en xylazinehydrochloride zoals beschreven in paragraaf 1.2 van dit protocol, maar dan zonder acepromazine. </li><li> Onthoofden het hoofd pas nadat het dier niet meer reageert op pijnprikkels, zoals teen knijpen. </li><li> Ontleden de cochleae uit en het proces voor de hele-mount immunofluorescentie zoals beschreven 26. Een gedetailleerd protocol van cochleaire whole-mount immunofluorescentie met behulp van anti-VGLUT3 en anti-myosine 7a antilichamen wordt beschreven in Akil et al., 2013 29. </li><li> Voor GFP labeling, incubeer de cochleaire hele mounts nacht bij 4 ° C met een konijn anti-GFP antilichaam bij 1: 250 verdunning. </li><li> Tweemaal Spoel de cochleae gedurende 10 min met PBS en vervolgens geïncubeerd gedurende 2 uur bij geiten anti-konijn IgG geconjugeerd met Cy2 verdund 1: 4000 in PBS. </li><li> Spoel de cochleae met PBS tweemaal gedurende 10 minuten en incubeer ze met DAPI gedurende 15 min. </li><li> Monteer de cochleae op glasplaatjes en observeren under een microscoop met confocale immunofluorescentie. </li></ol>

<ol><li>Jero, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cochlear+gene+delivery+through+an+intact+round+window+membrane+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Cochlear gene delivery through an intact round window membrane in mouse.</a> Hum. Gene Ther. 12 (5), 539-548 (2001).</li>
<li>Nam, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+adeno-associated+virus+serotype+8%2C+a+gene+therapy+vector%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Structure of adeno-associated virus serotype 8, a gene therapy vector.</a> J. Virol. 81 (22), 12260-12271 (2007).</li>
<li>Ryan, A. F., Mullen, L. M., Doherty, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+targeting+for+cochlear+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Otorhinolaryngol%22%5BJournal%5D)">Cellular targeting for cochlear gene therapy.</a> Adv Otorhinolaryngol. 66, 99-115 (2009).</li>
<li>Xia, L., Yin, S., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inner+ear+gene+trasfection+in+neonatal+mice+using+adeno-associate+viral+vwctor%3A+a+comparison+of+two+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Inner ear gene trasfection in neonatal mice using adeno-associate viral vwctor: a comparison of two approaches.</a> PLoS One. 7 (8), e43218(2012).</li>
<li>Husseman, J., Raphael, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+in+the+inner+ear+using+adenovirus+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22AdvOtorhinolaryngol%22%5BJournal%5D)">Gene therapy in the inner ear using adenovirus vectors.</a> AdvOtorhinolaryngol. 66, 37-51 (2009).</li>
<li>Ballana, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+and+specific+transduction+of+cochlear+supporting+cells+by+adeno-associated+virus+serotype+5%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Efficient and specific transduction of cochlear supporting cells by adeno-associated virus serotype 5.</a> Neurosci. Lett. 442 (2), 134-139 (2008).</li>
<li>Praetorius, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoviral+vectors+for+improved+gene+delivery+to+the+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Hear.+Re%22%5BJournal%5D)">Adenoviral vectors for improved gene delivery to the inner ear.</a> Hear. Re. 248 (1-2), 31-38 (2009).</li>
<li>Kay, M. A., Glorioso, C. G., Naldini, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+vectors+for+gene+therapy%3A+the+art+of+turning+infectious+agents+into+vehicles+of+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Viral vectors for gene therapy: the art of turning infectious agents into vehicles of therapeutics.</a> Nature Medicine. 7 (1), 33-40 (2001).</li>
<li>Ryan, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+Therapy+and+Stem+Cell+Transplantation%3A+Strategies+for+Hearing+Restoration%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Otorhinolaryngol%22%5BJournal%5D)">Gene Therapy and Stem Cell Transplantation: Strategies for Hearing Restoration.</a> Adv Otorhinolaryngol. 66, Karger. Basel. 64-86 (2009).</li>
<li>Cooper, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV-mediated+delivery+of+the+caspase+inhibitor+XIAP+protects+against+cisplatin+ototoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Otol.+Neurotol%22%5BJournal%5D)">AAV-mediated delivery of the caspase inhibitor XIAP protects against cisplatin ototoxicity.</a> Otol. Neurotol. 27 (4), 484-490 (2006).</li>
<li>Gratton, M. A., Salvi, R. J., Kamen, B. A., Saunders, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+cisplatin+and+noise+on+the+peripheral+auditory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Hear.+Res%22%5BJournal%5D)">Interaction of cisplatin and noise on the peripheral auditory system.</a> Hear. Res. 50 (1-2), 211-223 (1990).</li>
<li>Lalwani, A. K., Walsh, B. J., Reilly, P. G., Muzyczka, N., Mhatre, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+in+vivo+gene+therapy+for+hearing+disorders%3A+introduction+of+adeno-associated+virus+into+the+cochlea+of+the+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Development of in vivo gene therapy for hearing disorders: introduction of adeno-associated virus into the cochlea of the guinea pig.</a> Gene Ther. 3 (7), 588-592 (1996).</li>
<li>Kesser, B. W., Hashisaki, G. T., Holt, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+Transfer+in+Human+Vestibular+Epithelia+and+the+Prospects+for+Inner+Ear+Gene+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Gene Transfer in Human Vestibular Epithelia and the Prospects for Inner Ear Gene Therapy.</a> Laryngoscope. 118 (5), 821-831 (2008).</li>
<li>Izumikawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auditory+hair+cell+replacement+and+hearing+improvement+by+Atoh1+gene+therapy+in+deaf+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Auditory hair cell replacement and hearing improvement by Atoh1 gene therapy in deaf mammals.</a> Nat. Med. 11 (3), 271-276 (2005).</li>
<li>Praetorius, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovector-mediated+hair+cell+regeneration+is+affected%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Otolaryngol%22%5BJournal%5D)">Adenovector-mediated hair cell regeneration is affected.</a> Acta Otolaryngol. 130 (2), 215-222 (2009).</li>
<li>Friedman, L. M., Dror, A. A., Avraham, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+to+study+inner+ear+development+and+hereditary+hearing+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse models to study inner ear development and hereditary hearing loss.</a> Int. J. Dev. Biol. 51 (6-7), 609-631 (2007).</li>
<li>Chang, E. H., Van Camp, G., Smith, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+connexins+in+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ear+Hear%22%5BJournal%5D)">The role of connexins in human disease.</a> Ear Hear. 24 (4), 314-323 (2003).</li>
<li>Cohen-Salmon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+ablation+of+connexin26+in+the+inner+ear+epithelial+gap+junction+network+causes+hearing+impairment+and+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Targeted ablation of connexin26 in the inner ear epithelial gap junction network causes hearing impairment and cell death.</a> Curr. Biol. 12 (13), 1106-1111 (2002).</li>
<li>Nickel, R., Forge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gap+junctions+and+connexins+in+the+inner+ear%3A+their+roles+in+homeostasis+and+deafness%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Otolaryngol.+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">Gap junctions and connexins in the inner ear: their roles in homeostasis and deafness.</a> Curr. Opin. Otolaryngol. Head Neck Surg. 16 (5), 452-457 (2008).</li>
<li>Lv, P., Wei, D., Yamoah, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kv7-type+channel+currents+in+spiral+ganglion+neurons%3A+involvement+in+sensorineural+hearing+loss%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Kv7-type channel currents in spiral ganglion neurons: involvement in sensorineural hearing loss.</a> J. Biol. Chem. 285 (45), 34699-34707 (2010).</li>
<li>Leibovici, M., Safieddine, S., Petit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+human+hereditary+deafness%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Top.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse models for human hereditary deafness.</a> Curr. Top. Dev. Biol. 84, 385-429 (2008).</li>
<li>Dror, A. A., Avraham, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hearing+loss%3A+mechanisms+revealed+by+genetics+and+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Hearing loss: mechanisms revealed by genetics and cell biology.</a> Annu. Rev. Genet. 43, 411-437 (2009).</li>
<li>Richardson, G. P., de Monvel, J. B., Petit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+the+genetics+of+deafness+illuminates+auditory+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Physiol%22%5BJournal%5D)">How the genetics of deafness illuminates auditory physiology.</a> Annu. Rev. Physiol. 73, 311-334 (2011).</li>
<li>Jero, J., Tseng, C. J., Mhatre, A. N., Lalwani, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+surgical+approach+appropriate+for+targeted+cochlear+gene+therapy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">A surgical approach appropriate for targeted cochlear gene therapy in the mouse.</a> Hearing Research. 151 (1-2), 106-114 (2001).</li>
<li>Seal, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensorineural+deafness+and+seizures+in+mice+lacking+vesicular+glutamate+transporter+3%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Sensorineural deafness and seizures in mice lacking vesicular glutamate transporter 3.</a> Neuron. 57 (2), 263-275 (2008).</li>
<li>Akil, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+hearing+in+the+VGLUT3+knockout+mouse+using+virally+mediated+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Restoration of hearing in the VGLUT3 knockout mouse using virally mediated gene therapy.</a> Neuron. 75 (2), 283-293 (2012).</li>
<li>Akil, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+deafness+and+altered+cochlear+innervation+in+knock-out+mice+lacking+prosaposin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Progressive deafness and altered cochlear innervation in knock-out mice lacking prosaposin.</a> J. Neurosci. 26 (5), 13076-13088 (2006).</li>
<li>Fremeau, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vesicular+glutamate+transporters+1+and+2+target+to+functionally+distinct+synaptic+release+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Vesicular glutamate transporters 1 and 2 target to functionally distinct synaptic release sites.</a> Science. 304 (5678), 1815-1819 (2004).</li>
<li>Akil, O., Lustig, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Cochlear+Whole+Mount+Immunofluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Mouse Cochlear Whole Mount Immunofluorescence.</a> Bio-protocol. , Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.bio-protocol.org/wenzhang.aspx?id=332">http://www.bio-protocol.org/wenzhang.aspx?id=332</a> (2013).</li>
<li>Kho, S. T., Pettis, R. M., Mhatre, A. N., Lalwani, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cochlea+microinjection+and+its+effects+upon+auditory+function+in+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Arch+Otorhinolaryngol%22%5BJournal%5D)">Cochlea microinjection and its effects upon auditory function in guinea pig.</a> Eur Arch Otorhinolaryngol. 257 (9), 469-472 (2000).</li>
<li>Iizuka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+in+vivo+delivery+of+transgene+via+adeno-associated+virus+into+supporting+cells+of+the+neonatal+mouse+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Noninvasive in vivo delivery of transgene via adeno-associated virus into supporting cells of the neonatal mouse cochlea.</a> Hum. Gene Ther. 19 (4), 384-390 (2008).</li>
<li>Kilpatrick, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+virus-mediated+gene+delivery+into+the+scala+media+of+the+normal+and+deafened+adult+mouse+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated virus-mediated gene delivery into the scala media of the normal and deafened adult mouse ear.</a> Gene Ther. 18 (6), 569-578 (2011).</li>
<li>Yamasoba, T., Yagi, M., Roessler, B. J., Miller, J. M., Raphael, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inner+Ear+Transgene+Expressionafter+Adenoviral+Vector+Inoculation+in+the+Endolymphatic+Sac+Hum%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Inner Ear Transgene Expressionafter Adenoviral Vector Inoculation in the Endolymphatic Sac Hum.</a> Gene Ther. 10 (5), 769-774 (1999).</li>
<li>Praetorius, M., Baker, K., Weich, C. M., Plinkert, P. K., Staecker, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hearing+preservation+after+inner+ear+gene+therapy%3A+the+effect+of+vector+and+surgical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22ORL+J.+Otorhinolaryngol.+Relat.+Spec%22%5BJournal%5D)">Hearing preservation after inner ear gene therapy: the effect of vector and surgical approach.</a> ORL J. Otorhinolaryngol. Relat. Spec. 65 (4), 211-214 (2003).</li>
<li>Carvalho, G. J., Lalwani, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+cochleaostomy+and+intracochlear+infusion+on+auditory+brain+stem+response+threshold+in+the+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Otol%22%5BJournal%5D)">The effect of cochleaostomy and intracochlear infusion on auditory brain stem response threshold in the guinea pig.</a> Am. J. Otol. 20 (1), 87-90 (1999).</li>
<li>Kawamoto, K., Oh, S. H., Kanzaki, S., Brown, N., Raphael, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Functional+and+Structural+Outcome+of+Inner+Ear+Gene+Transfer+via+the+Vestibular+and+Cochlear+Fluids+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">The Functional and Structural Outcome of Inner Ear Gene Transfer via the Vestibular and Cochlear Fluids in Mice.</a> Mol. Ther. 4 (6), 575-585 (2001).</li>
<li>Lalwani, A. K., Han, J. J., Walsh, B. J., Zolotukhin, S., Muzyczka, N., Mhatre, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Green+fluorescent+protein+as+a+reporter+for+gene+transfer+studies+in+the+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Green fluorescent protein as a reporter for gene transfer studies in the cochlea.</a> Hear Res. 114 (1-2), 139-147 (1997).</li>
<li>Lalwani, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+in+vivo+cochlear+transgene+expression+mediated+by+recombinant+adeno-associated+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Long-term in vivo cochlear transgene expression mediated by recombinant adeno-associated virus.</a> Gene Ther. 5 (2), 277-281 (1998).</li>
<li>Raphael, Y., Frisancho, J. C., Roessler, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoviral-mediated+gene+transfer+into+guinea+pig+cochlear+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Adenoviral-mediated gene transfer into guinea pig cochlear cells in vivo.</a> Neurosci. Lett. 207 (2), 137-141 (1996).</li>
<li>Weiss, M. A., Frisancho, J. C., Roessler, B. J., Raphael, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+mediated+gene+transfer+in+the+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Viral mediated gene transfer in the cochlea.</a> Int. J. Dev. Neurosci. 15 (4=5), 577-583 (1997).</li>
<li>Pettis, R. M., Han, J. J., Mhatre, A. N., Lalwani, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracochlear+infusion+of+recombinant+adeno+associated+virus%3A+Analysis+of+its+dissemination+to+near+and+distant+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Assoc.+Res.+Otolaryngol.+Abstr%22%5BJournal%5D)">Intracochlear infusion of recombinant adeno associated virus: Analysis of its dissemination to near and distant tissues.</a> Assoc. Res. Otolaryngol. Abstr. 21, 673(1998).</li>
<li>Konish, iM., Kawamoto, K., Izumikawa, M., Kuriyama, H., Yamashita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+into+guinea+pig+cochlea+using+adeno-associated+virus+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gene+Med%22%5BJournal%5D)">Gene transfer into guinea pig cochlea using adeno-associated virus vectors.</a> J. Gene Med. 10 (6), 610-618 (2008).</li>
<li>Kaplitt, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+gene+expression+and+phenotypic+correction+using+adeno-associated+virus+vectors+in+the+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Long-term gene expression and phenotypic correction using adeno-associated virus vectors in the mammalian brain.</a> Nature Genetics. 8 (2), 148-154 (1994).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten zijn verklaard.

In dit werk hebben we in detail een techniek die kan worden gebruikt voor cochleaire gentherapie met als doel het herstellen of reddings- normale gehoorfunctie die gecompromitteerd door een genetisch defect. Aangezien het typisch atraumatische, deze benadering is veilig voor cochleaire gentransfer of andere potentiële moleculaire therapieën 30. Andere benaderingen voor cochleaire therapie zijn beschreven, waaronder een ventrale benadering 24, cochleostomie 31,32 en endolymfatische zak af...

Gentherapie is al lang voorgesteld als een potentiële behandeling voor genetische gehoorverlies, maar het succes op dit gebied is ongrijpbaar 1 gebleven. Tot op heden zijn viraal gemedieerde methoden overheerst vanwege de theoretische mogelijkheid om specifieke celtypen te richten binnen de betrekkelijk ontoegankelijke cochlea. Beide adenovirus (AV) en adeno-geassocieerde virus (AAV) zijn gebruikt voor cochleaire genafgifte. AAV&#39;s zijn voordelig in het slakkenhuis voor een aantal redenen. Ze zijn replicatie-deficiënte virussen en efficiënt overbrengen transgene moleculen aan verschillende celtypen waaronder neuronen, een belangrijk doelwit voor een aantal oorzaken van gehoorverlies. AAV binnenkomst in de cel wordt gemedieerd door specifieke receptoren 2; Zo mag de keuze van een bepaald serotype verenigbaar met de celtypen worden getransduceerd. AAVs effectief transfecteren haarcellen 3 en integreren in het gastheergenoom, resulteert in stabiele, lange-termijn expressie van het transgenic eiwit en fenotypische verandering in de cel 4. Hoewel niet noodzakelijk voordelig voor korte termijn toepassingen zoals haar-celregeneratie lange termijn expressie is erg belangrijk voor bergingschoot van genetische defecten. Omdat AAVs niet worden geassocieerd met een menselijke ziekte of infectie en tonen geen ototoxiciteit 5,6,7, zijn ze een ideale kandidaat voor gebruik in gentherapie voor erfelijke vormen van gehoorverlies 8. Overdracht van exogeen genetisch materiaal in de zoogdierbinnenoorsteuncellen behulp van virale vectoren is onderzocht de afgelopen tien jaar en is in opkomst als een veelbelovende techniek voor de behandeling van zowel genetische en verworven vormen van gehoorverlies 9. De cochlea is potentieel een ideaal doelwit voor gentherapie voor verschillende redenen: 1) het kleine volume vereist een beperkte hoeveelheid van het virus nodig is; 2) het relatieve isolement van andere orgaansystemen grenzen bijwerkingen; en 3) de met vloeistof gevulde kamers vergemakkelijken viraleverzending binnen heel het labyrint 10, 11,12,13,14, 15. Muismodellen van aangeboren doofheid zorgen voor het gebruik van vele methoden van onderzoek te bewaken ontwikkeling van het binnenoor op een systematische, herhaalbare manier. Terwijl de kleine omvang van muis cochleae inhoudt sommige chirurgische moeilijkheid, de muis fungeert als een zeer belangrijk model voor de studie van genetische gehoorverlies, met verschillende experimentele voordelen boven andere soorten 16. Muismodellen voor evaluatie van een reeks kenmerken door middel van genetische linkage analyse, verzamelen van gedetailleerde morfologische waarnemingen, en pathogene&#39;s simuleren; als zodanig zijn ze goede kandidaten voor viraal gemedieerde gentherapie. Uitgebreide genetische studies bij muizen combinatie met technologische ontwikkelingen hebben het mogelijk genetisch gemodificeerde muizen gegenereerd op een reproduceerbare wijze in laboratoria 17,18, 19, 20,21. VOORTSe, bestaan ​​er tal van modellen voor zowel verworven en erfelijke gehoorverlies fenotypes bij muizen, waardoor strenge testen in dit diermodel 22, 23,24. Zo, het corrigeren gehoor behulp van viraal gemedieerde gentherapie in een muismodel is een geschikte eerste stap in de zoektocht naar genezing van ziekten bij de mens. We hebben eerder aangetoond dat transgene muizen die vesiculaire glutamaat transporter 3 (VGLUT3) geboren doof door gebrek aan glutamaat afgifte aan de IHC lint synaps 25. Omdat deze mutatie niet leidt tot een primaire degeneratie van sensorische haarcellen, deze mutante muizen potentieel een uitstekend model waarin cochleaire gentherapie voor aangeboren gehoorverlies testen. Tot op heden zijn een aantal virale toedieningstechnieken voor cochleaire gentherapie beschreven, waaronder ronde venster membraan diffusie, ronde venster membraan injectie en levering via cochleostomie. Er zijn krachtigeial en nadelen van elk van deze benaderingen 9. Hier beschrijven we een chirurgische methode voor het viraal gemedieerde gen levering aan de VGLUT3 KO muis binnenoor door het ronde venster membraan (RWM). De post-auriculaire RWM injectie methode is minimaal invasieve met een uitstekend gehoor behoud, en is relatief snel. Zoals wij eerder hebben gepubliceerd, in een poging te herstellen horen in dit muismodel, een AAV1 vector die het gen VGLUT3 (AAV1-VGLUT3) werd in de cochlea van deze dove muizen bij postnatale dag 12 (P! @), Waardoor het herstel van het gehoor 26. Hoorzitting in de VGLUT3 KO muizen werd geverifieerd door auditieve hersenstam respons (ABR), terwijl transgene eiwitexpressie werd gecontroleerd met behulp van immunofluorescentie (IF). Deze methode toont hiermee aan dat viraal-gemedieerde gentherapie een genetisch defect dat anders zou resulteert in doofheid kan corrigeren.

<table><tbody><tr><td>Ketamine</td><td>Butler Schein</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>AnaSed</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acepromazine</td><td>Provided by UCSF LARC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofen analgesia</td><td>Provided by UCSF LARC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Betadine Puredue Pharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>dexamethasone ophthalmic ointment (TobraDex)</td><td>Alcon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heating pad</td><td>Braintree scientific, inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>25G needle</td><td>BD</td><td>305127</td><td></td></tr><tr><td>Borosilicate capillary pipette</td><td>World precision instruments, inc.</td><td>1B100F-4</td><td></td></tr><tr><td>Suture PDS*plus Antibacterial</td><td>Ethicon</td><td>PDP149</td><td></td></tr><tr><td>Tissue glue (Vetcode)</td><td>Butler Schein</td><td>31477</td><td></td></tr><tr><td>Rabbit Anti-GFP antibody</td><td>Invitrogen</td><td>A11122</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting microscope&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>Leica</td><td></td><td>MZ95</td></tr><tr><td>Flaming/ Brown Micropipette&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>Sutter Instrument Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Puller Model P-97&nbsp;&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TDT BioSig III System&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>&nbsp;Tucker-Davis Technologies</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

chirurgische methode voor viraal gemedieerde gene levering aan de mouse inner ear door het ronde venster membraan

Surgical Method for Virally Mediated Gene Delivery to the Mouse Inner Ear through the Round Window Membrane

Gentherapie, gebruikt om functioneel herstel van sensorineurale doofheid te bereiken, belooft beter begrip van de onderliggende moleculaire en genetische mechanismen die bijdragen aan gehoorverlies verlenen. Introductie van vectoren in het binnenoor moet gebeuren op een wijze die algemeen verdeelt middel door de cochlea met minimale schade aan de bestaande structuren. Dit manuscript beschrijft een post-auriculaire chirurgische benadering die kan worden gebruikt voor muizen cochleaire therapie met moleculaire, farmacologische en virale levering aan muizen postnatale dag 10 en ouder via het ronde venster membraan (RWM). Deze chirurgische benadering maakt een snelle en directe levering in de scala tympani terwijl het minimaliseren van bloedverlies en sterfte van dieren te voorkomen. Deze techniek houdt verwaarloosbaar of geen schade aan essentiële structuren van de binnenste en middenoor evenals nekspieren terwijl volledig behoud gehoor. Om de effectiviteit van deze chirurgische techniek, vesiculaire glutam tonenat transporter 3 knockout (VGLUT3 KO) muizen zullen worden gebruikt als een voorbeeld van een muismodel van doofheid die herstelt horen na aflevering van VGLUT3 het binnenoor via een adeno-geassocieerd virus (AAV-1).

Om de technische kenmerken en het nut van de post-auriculaire benadering voor cochleaire moleculaire therapie te controleren werden AAV1-VGLUT3, AAV1-GFP en AAV2-GFP in P10-12 muizen binnenoor geleverd via de RWM. Deze benadering houdt echter succesvol transgenexpressie binnen binnenste haarcellen (IHC) (VGLUT3 Figuur 1 en Figuur 2 GFP en GFP figuur 3A), buitenste haarcellen (OHC) (GFP figuur 2) en steuncellen (GFP Figuur 2 en F...

De beschreven postauriculaire chirurgische benadering maakt een snelle en directe toediening mogelijk in de scala tympani van de muizencochlea, terwijl bloedverlies en sterfte bij dieren wordt geminimaliseerd. Deze methode kan worden gebruikt voor cochleaire therapie met behulp van moleculaire, farmacologische en virale toediening aan postnatale muizen via het ronde venmembraan.

Chirurgische methode voor viraal gemedieerde Gene Levering aan de Mouse Inner Ear door het ronde venster membraan

Gene therapy, used to achieve functional recovery from sensorineural deafness, promises to grant better understanding of the underlying molecular and ...

Het algemene doel van deze procedure is om een postauriculaire chirurgische aanpak te beschrijven die snelle en directe toediening van een virus in de Cochlear S-schaal van de muis mogelijk maakt via het membraan van het ronde venster. Dit wordt bereikt door eerst het trommelvlies bloot te leggen. In de tweede stap wordt het weefsel geperforeerd en worden de edia-arterie en het membraan van het ronde venster zichtbaar gemaakt.Het membraan van het ronde venster wordt vervolgens gepuncteerd en het virus wordt in de spon geïnjecteerd. In de laatste stap wordt het gat afgesloten. Uiteindelijk kan de expressie van het transgeen eiwit en het herstel van het gehoor van het dier worden beoordeeld door middel van immunofluorescente microscopie en meting van de auditieve stamhersenreactie.De belangrijkste voordelen van deze techniek ten opzichte van de bestaande methoden zoals coch,ostomie en ventrale benadering is dat de post auriculaire injectie in het membraan van het ronde venster minimaal invasief is, relatief snel verloopt, hogere volume injecties mogelijk maakt en wijdverbreide transfectie van een verscheidenheid aan cellen in het hele cochlea mogelijk maakt. Over het algemeen zullen individuen die nieuw zijn in deze techniek worstelen omdat de procedure sterk afhankelijk is van een grondig begrip van de anatomie van het cochlea. Na bevestiging van anesthesie door teenprik, scheer de linker postauriculaire regio en desinfecteer de huid van een postnataal dag, 10 tot 12 muis met 70% ethanol en povidon-jodium.Bedek vervolgens de ogen met een beschermend oftalmisch zalfje en plaats het dier met de nek uitgestrekt op een verwarmingskussentje. Wanneer de chirurgische voorbereiding voltooid is, snij het onderhuidse weefsel met kleine schaar om de postauriculaire spier bloot te leggen. Na het terugtrekken van het vetweefsel naar de achterzijde van de incisie, scheid de spieren naar de rechter- en linkerzijde loodrecht op de incisie.Om het slaapbeen bloot te leggen, gebruik een naald van 25 gauge om de trommelholte te doorboren en het bot met behulp van een pincet terug te pellen naarmate nodig is om het gat te vergroten en toegang te geven tot de basale bocht van de cochlea. Vervolgens het gat voldoende verbreden om de staed-slagader en het membraan van het ronde venster zichtbaar te maken. Steek het membraan van het ronde venster voorzichtig in het midden met een borasilicaat, capillaire pipet.Droog het membraan van het ronde venster met een steriele filterpapier. Wacht vervolgens vijf tot 10 minuten totdat de vloeistofstroom is gestabiliseerd. Wees voorzichtig bij het vasthouden en vooruitbewegen van de pipet, zodat de perforatie van het membraan van het ronde venster zo klein mogelijk is.Afhankelijk van het gebruikte microscoop, kan de pipet met de hand of door een microm manipulator worden vastgehouden. Zoals u hier kunt zien, houden we de pipet met de hand vast omdat de microscoop te dicht bij de muis staat om een micro manipulator toe te laten. Trek nu een tot twee microliter van het virus in een getrokken glazen pipet met een tip van 15 micrometer diameter en injecteer het virus microscopisch in de schaal van timoni door hetzelfde gat dat eerder in het membraan van het ronde venster is gemaakt.Trek vervolgens de pipet eruit en sluit snel de niche van het ronde venster met een kleine plug van spierweefsel, zet deze vast met een kleine druppel weefselkleefstof. Bedek het gat in de auditieve trommelholte met vetweefsel en breng de postauriculaire spieren en het vetweefsel terug in hun normale positie. Sluit vervolgens de wond met een 6.0 of kleinere absorberbare chroomdraad en desinfecteer het incisiegebied met povidon-jodium.Plaats vervolgens de muis in een warme kooi en breng de pop terug naar de moeder na volledig herstel met dagelijks toezicht. Om de cochleaire functie zo vroeg mogelijk na virale toediening te beoordelen, plaats een gesedateerde getransfecteerde muis op een verwarmend kussen en plaats vervolgens subdermale naaldelelektroden op het vertex onder de oorschelp van de linkeroor en onder het contralaterale oor. Begin tenslotte met het opnemen van de auditieve stamhersenreacties of een BR in een geluiddichte kamer zoals eerder beschreven, en meet golf een om de activiteit van de cochleaire zenuw te analyseren zoals te zien in de cochleaire hole mount.Deze benadering toont succesvolle expressie van transgenen binnen innerlijke haarcellen, buitenste haarcellen en ondersteunende cellen zonder significante schade aan het orgaan van COR T. Er kunnen verschillende celtypen die GFP uitdrukken worden waargenomen in de cochleaire hole. De keuze van adeno-geassocieerde virusserotype moet compatibel zijn met de celtypen die getransduceerd moeten worden. Het aantal getransfecteerde cellen varieert afhankelijk van de concentratie en het volume van het geïnjecteerde virus.In dit geval resulteerde de toename van 0,6 tot één microliter in een toename van het aantal getransfecteerde cellen tot een niveau vergelijkbaar met wild type V glute. De expressie van drie transgenen werd hersteld in geïnjecteerde KO-muizen zoals te zien is in deze afbeeldingen hier. Het effect van postauriculaire levering van V GL drie virus in het binnenoor van V gl drie knockout muizen op gehoorherstel wordt gedemonstreerd zoals te zien is in de grafiek. De ABR-sporen werden hersteld in de VLU drie geredde knockout muis en bereikten drempels vergelijkbaar met die gezien bij wild type muizen. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden om voor elke stap de tijd te nemen om schade aan de structuren van het binnen- en middenoor en de nekspieren te voorkomen.Na het bekijken van deze video, zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u een post-chirurgische aanpak kunt uitvoeren voor de toediening van moleculaire farmacologische virale experimentele behandelingen in het MAs re skeletpan door het ronde windmembraan.

surgical-method-for-virally-mediated-gene-delivery-to-mouse-inner-ear

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

De muis binnenoor is een placode-afgeleide zintuig waarvan het ontwikkelings-programma wordt uitgewerkt tijdens de dracht. We definiëren...

Gene Transfer naar de ontwikkelingslanden Mouse binnenoor door<em&gt; In Vivo</em&gt; Elektroporatie

Source: Kozin, E. D., et.al. Direct Visualization of the Murine Dorsal Cochlear Nucleus for Optogenetic Stimulation of the Auditory Pathway. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates virus-mediated gene transfer into the mouse dorsal cochlear nucleus (DCN) to enable light-induced auditory stimulation. A viral vector encoding opsin, a light-sensitive ion channel, is injected into the DCN following a craniotomy and cerebellar aspiration for direct access. The expressed opsins allow neurons to be...

Virus-Mediated Gene Transfer Into the Mouse Dorsal Cochlear Nucleus for Light-Induced Auditory Stimulation

This video showcases canalostomy, a procedure that allows local drug delivery into the inner ear of a mouse through the semicircular canal with minimal damage to hearing and vestibular function. This method enables the inoculation of viral vectors, pharmaceuticals, and small molecules into the mouse's inner ear.

Canalostomy for Local Drug Delivery into the Inner Ear of an Adult Mouse

Source: Akil, O., et al., Surgical Method for Virally Mediated Gene Delivery to the Mouse Inner Ear through the Round Window Membrane. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the procedure of delivering a therapeutic gene into the inner ear of a mouse pup with genetically induced hearing loss. Using an adeno-associated viral (AAV) vector, the gene is injected through the round window membrane, allowing viral particles to enter hair cells, restore glutamate transporter production, and...

Viral Vector-Based Gene Therapy for Hearing Restoration in a Mouse Model

Er bestaan verschillende methoden voor het introduceren van ototoxische middelen in de slakken van diermodellen. Hier wordt een chirurgisch protocol gepresenteerd voor het toedienen van ototoxische middelen in de ronde venster nis. De procedure is betrouwbaar, creëert gerichte intra-cochleaire laesies en voorkomt mechanische schade aan de microarchitectuur. Onderzoek naar zelfherstel/regeneratie van de cochlea is mogelijk.

De muis Round-window aanpak voor Ototoxische Agent Levering: een snelle en betrouwbare techniek voor het induceren van Cochlear celdegeneratie

Twee microchirurgiebenaderingen voor lokale medicijntoediening aan het binnenoor worden hier beschreven en vergeleken in termen van impact op gehoorparameters, cochleaire cytoarchitectuur en expressie van inflammatoire markers.

Een vergelijkende studie van Drug Delivery Methoden Gericht op de Mouse Inner Ear: Bullostomy Versus Transtympanic Injection

Een chirurgische methode te beheren van drugs aan het binnenoor van een niet-menselijke primaten, de gemeenschappelijke Hapalomys (Callithrix jacchus), rapporteren we via het membraan van het ronde venster.

Een chirurgische ingreep voor de administratie van Drugs aan het binnenoor in een niet-menselijke primaten gemeenschappelijk Hapalomys (Callithrix jacchus)

In deze studie beschrijven we de achterste semicircular canal-benadering als een betrouwbare methode voor binnenoor gene levering in neonatale muizen. We laten zien dat gene levering door het posterieure semicircular-kanaal vermag perfuse het gehele binnenoor.

Achterste Semicircular Canal aanpak voor binnenoor Gene levering in neonatale muis

Hier beschrijven we canalostomy procedure waarmee lokale drug levering tot de inner oren van volwassen en neonatale muizen door het semicircular kanaal met minimale schade aan gehoorbescherming en vestibulaire functie. Deze methode kan worden gebruikt om te enten virale vectoren, farmaceutische producten en kleine moleculen in het binnenoor muis.

Canalostomy als een chirurgische benadering van lokale Drug Delivery tot de Inner oren van volwassen en neonatale muizen

Intravitale microscopie om temporele en ruimtelijke hemodynamische en inflammatoire gebeurtenissen in de pial microcirculatie te volgen.

Intravitale Microscopie van de hersenen van muizen microcirculatie met behulp van een gesloten Cranial Window

Leer een post-auriculaire chirurgische methode voor virale gentherapie in het muisachtige binnenoor via het ronde venster membraan. Deze techniek minimaliseert bloedverlies en mortaliteit.

Chirurgische methode voor viraal gemedieerde Gene Levering aan de Mouse Inner Ear door het ronde venster membraan

Meer video's verkennen