Protocol voor het bestuderen van Uitsterven van geconditioneerde angst in Naturally Fietsen vrouwelijke ratten

Het algemene doel van deze procedure is om de effecten van gonadale hormonen op het gedrag van angstuitdoving bij vrouwtjes te onderzoeken tijdens lage en hoge hormonale toestanden van de Esra-cyclus en de rol van estradiol wanneer het exogene wordt toegediend. Dit wordt bereikt door eerst de esra-cyclus van volwassen vrouwelijke ratten te monitoren en te identificeren in welke fase ze zich bevinden vóór de experimenten. Vervolgens worden de dieren die zich in de oestrusfase bevinden in hun toegewezen kamers geplaatst voor huisvesting en angstconditionering.

De volgende dag, wanneer de dieren in oestrus zijn, worden de vrouwtjes geïnjecteerd met estradiol of voertuig en ondergaan ze angstuitdovingstraining. Ten slotte worden de dieren op de derde dag teruggeplaatst in dezelfde kamer om het herinneren van de uitdovingssessie van de dag ervoor te testen. Uiteindelijk maakt vaginale swabbing voor EST-strase-identificatie het mogelijk voor onderzoekers om de natuurlijke fluctuaties in gonadale hormonen te manipuleren om hun invloed op angstuitdovingsgeheugen te bestuderen.

Dit protocol kan worden gebruikt om belangrijke vragen op het gebied van sekseverschillen te beantwoorden, zoals zijn angstuitdovingsprocessen anders bij mannen en vrouwen? En zo ja, wat zijn de hormonale en neurobiologische mechanismen die deze verschillen veroorzaken? Het belangrijkste voordeel van dit protocol is dat het de studie van vrouwelijkheid bij angstuitdoving kan bevorderen door methoden te delen om dit te doen.

Onderzoekers die nieuw zijn in deze methoden worstelen vaak om de eser-cyclus betrouwbaar te monitoren omdat de procedure tijdrovend kan zijn en sterk afhankelijk is van de juiste techniek. De implicaties van deze studies kunnen bijdragen aan geslachtsspecifieke behandelingsopties voor angst- en angstgerelateerde stoornissen. Dit kan belangrijk zijn gezien het feit dat vrouwen twee keer zo vaak als mannen deze psychopathologieën ontwikkelen.

Lisa man, een postdoc in het lab evenals care covert. Een onderzoeksassistent in het lab zal de procedure laten zien Om monsters te verzamelen om de oestruscyclus te monitoren. Na het bereiden van een 0,9% saline-oplossing, dompelt u een wattenstaafje met een katoenen punt in de vloeistof en gebruikt u een papieren handdoek om het uiteinde van overtollig oplossing af te deppen terwijl u de staart van een rat omhoog houdt en zorgt u ervoor dat u geen stress veroorzaakt.

Breng voorzichtig het wattenstaafje in de vaginale kanaal niet te diep in en rol het rond de wanden om losse vaginale cellen te vangen voordat u het snel verwijdert. Terwijl u niet te veel vloeistof overbrengt, rolt u het applicatortip voorzichtig op een vooraf gelabeld microscoopglaasje en zorg ervoor dat het monster op het glasje wordt overgebracht. Verzamel monsters gedurende ten minste twee volledige cycli en breng meerdere opeenvolgende dagen op één glasje over om de dagelijkse EST-extra's beter te kunnen volgen en identificeren.

Nadat de glijbanen droog zijn, dompel ze deze tien keer in fixeermiddel en vervolgens tien keer in kleuroplossing. En tenslotte vijf keer in tegenkleuroplossing. Spoel voorzichtig af met water.

Laat de glijbanen volledig drogen voordat u ze onder de microscoop bekijkt vóór het begin van het conditioneringsexperiment, stel de vrouwtjes vooraf bloot aan de conditioneringskamers met de huisverlichting aan gedurende 20 tot 30 minuten per dag gedurende drie dagen om ze te laten wennen aan de omgeving. Wijs de doos waaraan ze vooraf zijn blootgesteld toe als hun kamer voor de studie. Maak de dozen grondig schoon tussen sessies en dieren om geuren te verwijderen, aangezien deze het gedrag en de EST-stresscyclus kunnen beïnvloeden.

Zodra is vastgesteld dat de dieren zich in de oestrusfase van de EST-extra cyclus bevinden, begint u met de conditioneringsfase van de habituatie. Neem pret ton-basislijnmetingen van bevriezing voorafgaand aan de eerste toonconditiestimulus door te meten hoeveel seconden het dier mobiel doorbrengt tijdens de stimulus. Als er geen tijdsinterval aanwezig is, bereken dan het percentage bevriezingscore door de seconden stil te delen door de duur van de proef.

Voer extintietraining uit tijdens de ME oestrusfase door de ratten te conditioneren op hun laatste dag van ESTRO, zoals bepaald door swabbing. Plaats de dieren in de conditioneringskamer en voer een CS-alleen-proef uit voor habituatie. Induceer een CS-toon gedurende 30 seconden.

Na het wachten van gemiddeld drie minuten voor de volgende proef, herhaalt u de CS-alleen-proef nog vier keer voor een totaal van vijf proeven vóór de conditionering. Verbind de voetschok-gridvloer met een elektrische stimulatiegenerator. Gebruik een stimulatieniveau van 0,5 tot 0,6 milliampère als de ongeconditioneerde stimulus of US en een vier kilohertz 80 decibel toon als de CS onmiddellijk na de habituatiesessie.

Begin gepaarde CS US-proeven van angstconditionering door een 32e CS-toon te presenteren, gevolgd door een 0,5 seconden US-schok gescheiden door een interproefinterval van ongeveer drie minuten. Herhaal de gepaarde proef nog zes keer aan het einde van de conditioneringssessie. Breng de dieren terug naar hun thuiscassen en naar de dierfaciliteit tot de volgende dag op dag twee.

Na het swabben en identificeren van de ME oestrusfase voor alle dieren die dag één van het protocol hebben ondergaan, bereidt u voldoende estradiol in sesamzaadolie of 0,9% saline voor elke dier om een dosis van 15 microgram per kilogram te ontvangen om de hormoon subcutaan toe te dienen. Til de losse huid tussen de schouderbladen bij de nek in een zachte knijp en steek de spuit in het driehoekje dat wordt gevormd door de huipvouwen. 30 minuten nadat de dieren hun injecties hebben gekregen, plaatst u ze in de conditioneringskamers en begint u met extintietraining door 20 CS alleen uit te voeren.

Elke proef bestaande uit een 32e vier kilohertz, 80 decibel toon met ongeveer drie minuten tussen de proeven 24 uur later op dag drie. Swab de dieren die de sessies op dag één en twee hebben voltooid na het plaatsen van de dieren in hun to