Remote Limb Ischemische preconditionering: Een Neurobeschermende Technique in Knaagdieren

Het algemene doel van deze procedure is om ischemie in de achterpoot te veroorzaken die afgelegen weefsels voorbereidt op latere stress. Bijvoorbeeld, het netvlies tegen lichtbeschadiging. Dit wordt bereikt door eerst de handmatige Ingle mom manometer te kalibreren.

Vervolgens wordt het dier geanesthetiseerd en op een verwarmingskussen geplaatst. Daarna wordt de achterpoot van het dier gestrekt en wordt de manchet op de juiste plaats gelegd. Ten slotte wordt afgelegen ischemie uitgevoerd door de manchet op te blazen met de pomp, de manchet te ontluchten en het proces een tweede keer te herhalen.

Uiteindelijk, wanneer toegepast vóór lichtbeschadiging, wordt afgelegen ischemie gebruikt om een verbetering in de retinale functie en het aantal fotoreceptoren die apoptose ondergaan te laten zien. Deze methode kan belangrijke vragen in het neurologische veld beantwoorden, zoals hoe zelfbescherming wordt geïnduceerd met afgelegen ischemische preconditie. Voor het uitvoeren van real-time huidtemperatuurtracking. Open de temperatuurregistratiesoftware, pas de temperatuurinstelling aan tot tussen de 30 en 35 graden Celsius en de frequentie van bemonstering aan tot elke 100 milliseconden met behulp van een neonatale armmanchet van maat twee voor een rat van 250 tot 550 gram, verbind de manchet met de fome manometer met behulp van een adapter indien nodig.

Ontlucht vervolgens de manchet door de luchtaflaatklep los te maken of de manchetslang los te koppelen van de adapter. Zorg ervoor dat er geen druk in de slang achterblijft en dat de naald van de manometer op nul rust binnen het ovale rechthoek. Controleer vervolgens de druk tussen de slang, de manometer en de hoest.

Gebruik zachte pompjes van de opblaasbalg om de manchet op te blazen totdat de manometer 100 milligram kwik aangeeft. Nadat u zich ervan hebt verzekerd dat de druk constant blijft, ontlucht u de manchet door de luchtaflaatklep langzaam te openen na het donker worden, waarbij het dier wordt aangepast volgens het tekstprotocol. Bevestig dat het een goede spierspanning heeft door in de bovenste achterpoot te knijpen om te bevestigen dat er voldoende spieraanwezig is.

Nadat het dier is gesedateerd volgens het tekstprotocol, controleert u de diepte van de anesthesie door de poot uit te strekken en de huid op de onderkant van de voet te knijpen. Breng vervolgens kunsttranen aan. Plaats de rat op een verwarmingskussen of op een circulair waterverwarmingsbuis in een buikligging met de voetzolen van de onderste ledematen omhoog gericht.

Om de huidtemperatuursonde toe te passen, strekt u de poot van de rat die ischemie zal ondergaan en plaatst u de huidsonde stevig op de voetzool, waarbij u deze positioneert om het contact tussen de temperatuursensor en de huid te maximaliseren. Bevestig vervolgens de sonde met plakband. Controleer de plaatsing van de huidsonde door de temperatuur gedurende één tot twee minuten op te volgen in de temperatuurregistratiesoftware.

Zorg ervoor dat de huidtemperatuur tussen de 30 en 34 graden Celsius ligt en stabiel blijft. Anders, pas de sonde aan om afgelegen ischemie uit te voeren. Begin met een ontluchte manchet en zorg ervoor dat de luchtdrukklep gesloten is.

Strek de poot uit en omcirkel de manchet losjes om de bovenste achterpoot. Gebruik de wijs- en middelvinger om de poot uit te strekken en de onderste vingers om de losgemaakte manchet op zijn plaats te houden. Verhoog nu de manchetdruk tot 160 millimeter kwik.

Zodra de juiste druk is bereikt, start u de timer en de temperatuuropnamen van de voet. De voettemperatuur zou na vijf minuten constante druk met twee graden Celsius moeten dalen, pomp de opblaasbalg in korte stoten herhaaldelijk om de gewenste manchetdruk te behouden en houd de manchet boven de knie van het dier gedurende de gehele ischemie. Lever continu afgelegen ischemie gedurende vijf minuten.

Laat vervolgens de luchtdrukklep openen voor een vijf minuten durende reperfusion voordat u de afgelegen ischemie herhaalt. Wanneer de procedure voltooid is, ontlucht u de manchetdruk door de luchtdrukklep los te maken. Controleer de temperatuurverandering gedurende het verloop van het ischemieprotocol.

Ontlast vervolgens de manchet. Plaats het dier op een verwarmingskussen en blijf monitoren tot het weer loopt. Wanneer het dier loopt, brengt u het terug naar zijn huisvesting.

Voer tenslotte lichtbeschadiging uit en voer de tunneltest uit. Volgens het tekstprotocol zoals hier duidelijk te zien is, houdt een bloeddrukmanchet die boven de knie is geplaatst en verhoogd is tot boven 160 millimeter kwik de bloedstroom naar de achterpoot tegen. Het gebrek aan bloedstroom resulteerde in een verlaging van de voettemperatuur die lager was dan de kerntemperatuur van het dier en die steeg nadat de manchet werd ontlucht, consistent met de voorwaarde die nodig is voor RIP.

In deze figuur toonde het donker aangepaste elektroretinogram of ERG van een normale, zwak verlichte rat een grote fotoreceptor- en innerlijke retinale respons op een felle flits een week na lichtbeschadiging. De ERG-opnamen vertoonden een ernstige vermindering van de amplitude ten opzichte van de controles, wat de vermindering van fotoreceptoren weerspiegelt. Echter, het voorbereiden van de achterpoot met ischemie met behulp van een reperfusionprotocol van twee bij vijf minuten onmiddellijk vóór ischemie beschermde de fotoreceptoren tegen lichtbeschadiging. Dit paneel toont dat de R-I-P-E-R-G amplituden groter waren dan lichtbeschadiging alleen met een lichte vermindering van de A-golf.

Ten slotte beschermt een manchet die onder de knie wordt geplaatst de fotoreceptoren niet tegen lichtbeschadiging, zoals blijkt uit de verminderde ERG-amplituden die hier worden gezien. Methoden zoals afgelegen ischemische preconditie kunnen worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden, zoals wat zijn de mechanismen van endogene neuroprotectie en hoe kan afgelegen ischemie worden toegepast om de functie na CZS-letsel en -degeneratie te verbeteren.