Name: Fenotypering Mouse Longfunctie In Vivo Met de Lung diffusiecapaciteit (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-06T10:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Leer een eenvoudige methode om longdiffusiecapaciteit bij muizen te meten met een gekalibreerde gaschromatograaf. Deze techniek is gevoelig voor fenotypische veranderingen in diverse longpathologieën en ondersteunt translationeel onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door NIH HL-10342

OPMERKING: Alle dieren protocollen werden goedgekeurd door de Johns Hopkins University Animal Care en gebruik Comite. 1. Dierlijke Voorbereiding <ol><li> Bereid 6 C57BL / 6 controlemuizen voor DFCO meting, door verdoven ze met ketamine en xylazine zoals beschreven in stap 2.3. </li><li> Bereid alle andere muizen met verschillende long pathologieën getoond in Tabel 1 door dezelfde procedure als bij de controles. Bijzonderheden moest elk van deze modellen vastgesteld worden in de relevante referenties. Controlemuizen en die in de andere pathologische cohorten zijn 6-12 weken. </li></ol> 2. Meting van Diffusion Factor voor koolmonoxide (DFCO) <ol><li> Het opzetten van de bij de machine geleverd om pieken voor stikstof, zuurstof, neon, en koolmonoxide te meten gaschromatograaf module. Voor deze toepassing gebruik alleen de neon en CO gegevens. OPMERKING: Dit instrument maakt gebruik van een moleculaire sieve kolom met helium als draaggas, met een 12,00 um film, 320.00 um ID en 10 m lengte. De kolomchromatografie heeft een volume van 0,8 ml, maar we gebruikten 2 ml voldoende clearing van de verbindende buis met het monster te verzekeren. </li><li> Aan het begin van elke experimentele dag, alvorens metingen van de monsters van de muizen, rechtstreeks een 2 ml monster van een gasmengsel zak met ongeveer 0,5% Ne, 0,5% CO en balans lucht en gebruik dit monster te kalibreren de gaschromatograaf. </li><li> Verdoven muizen met ketamine (90 mg / kg) en xylazine (15 mg / kg), en bevestig verdoofd door de afwezigheid van reflex beweging. Breng veterinaire zalf op de ogen tot droog voorkomen. Tracheostomize de muizen met een stomp naaldcanule (18 G bij volwassenen of 20 G bij zeer jonge muizen). OPMERKING: De DFCO is in minder dan 10 minuten na anesthesie voltooid en voorafgaand aan mechanische ventilatie of andere procedures. </li><li> Bij muizen meer dan 6 weken oud, gebruikt een 3 ml spuit to trekken 0,8 ml van gas uit het gasmengsel zak. Sluit de spuit aan de tracheacanule en snel op te blazen de long. Met behulp van een metronoom, tel 9 sec, en dan snel terug te trekken van de 0,8 ml (uitgeademde lucht). </li><li> Verdun deze ingetrokken 0,8 ml uitgeademde lucht tot 2 ml met lucht in de ruimte, laat het rusten voor ten minste 15 sec. Injecteren dan is het hele monster in de gaschromatograaf voor analyse. </li><li> Tijdens het analyseren deze eerste DFCO monster opblazen van de muis long met een tweede 0,8 ml van het gasmengsel zak, en verwerk dit voorbeeld identiek aan de eerste monster. Het gemiddelde van de twee DFCO metingen. OPMERKING: Voor metingen bij muizen zo jong als 2 weken oud gebruikt een volume van 0,4 ml, 0,8 ml aangezien te grote hoeveelheid metingen maken longen van jonge muizen. Het is beter om het volume 0,8 ml muizen ouder dan 6 weken gebruikt, en dat als de 0,4 ml volume nodig voor sommige muizen is consistent moet worden gebruikt voor alle muizen in het cohort bestudeerd. </li><li> Bereken DFCOals 1 - (CO 9 / CO c) / (Ne 9 / Ne c), waarbij c en 9 indices hebben betrekking op concentraties van de kalibratie gassen geïnjecteerd en de gassen verwijderd na een 9 sec adem wachttijd, respectievelijk. </li><li> Analyseren en vergelijken verschillen met een eenzijdige ANOVA en het significantieniveau van Tukey correctie voor meervoudige vergelijkingen in de cohort muizen te beoordelen. Overweeg p &lt;0,05 als significant waarde. OPMERKING: Alle van de muizen die hier gebruikt maakten deel uit van experimentele studies met meerdere opeenvolgende metingen van longventilatie, mechanica, longlavage of histologie, die hier niet worden vermeld. Bovendien, omdat de werkwijze is hetzelfde in alle experimentele modellen zoals hierboven uitgevoerd in de controle muizen, alleen de resultaten van de verschillende pathologische modellen gepresenteerd. Nadere informatie over deze modellen wordt gepresenteerd in de aanvullende tabel. </li><li> Euthanaseren van de dieren door de diepe anesthetic overdosis gevolgd door cervicale dislocatie of onthoofding. Waar nodig, verwijderen van de long cellen en / of weefsels van de dode muizen verdere biologische of histologische verwerking en analyse. </li></ol>

<ol><li>Ogilvie, C. M., Forster, R. E., Blakemore, W. S., Morton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standardized+breath+holding+technique+for+the+clinical+measurement+of+the+diffusing+capacity+of+the+lung+for+carbon+monoxide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">A standardized breath holding technique for the clinical measurement of the diffusing capacity of the lung for carbon monoxide.</a> J Clin Invest. 36 (1 Pt 1), 1-17 (1957).</li>
<li>Miller, A., Warshaw, R., Nezamis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusing+capacity+and+forced+vital+capacity+in+5%2C003+asbestos-exposed+workers%3A+Relationships+to+interstitial+fibrosis+%28ILO+profusion+score%29+and+pleural+thickening%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ind+Med%22%5BJournal%5D)">Diffusing capacity and forced vital capacity in 5,003 asbestos-exposed workers: Relationships to interstitial fibrosis (ILO profusion score) and pleural thickening.</a> Am J Ind Med. 56 (12), 1383-1393 (2013).</li>
<li>Enelow, R. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+consequences+of+alveolar+cell+recognition+by+CD8%28%2B%29+T+lymphocytes+in+experimental+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Structural and functional consequences of alveolar cell recognition by CD8(+) T lymphocytes in experimental lung disease.</a> J Clin Invest. 102 (9), 1653-1661 (1998).</li>
<li>Hartsfield, C. L., Lipke, D., Lai, Y. L., Cohen, D. A., Gillespie, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+mechanical+and+immunologic+dysfunction+in+a+murine+model+of+AIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Pulmonary mechanical and immunologic dysfunction in a murine model of AIDS.</a> Am J Physiol. 272 (4 Pt 1), 699-706 (1997).</li>
<li>Wegner, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+adhesion+molecule-1+contributes+to+pulmonary+oxygen+toxicity+in+mice%3A+role+of+leukocytes+revised%5BTitle%5D)+AND+%22Lung%22%5BJournal%5D)">Intercellular adhesion molecule-1 contributes to pulmonary oxygen toxicity in mice: role of leukocytes revised.</a> Lung. 170 (5), 267-279 (1992).</li>
<li>Reinhard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inbred+strain+variation+in+lung+function%5BTitle%5D)+AND+%22Mamm+Genome%22%5BJournal%5D)">Inbred strain variation in lung function.</a> Mamm Genome. 13 (8), 429-437 (2002).</li>
<li>Sabo, J. P., Kimmel, E. C., Diamond, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+Clara+cell+toxin%2C+4-ipomeanol%2C+on+pulmonary+function+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of the Clara cell toxin, 4-ipomeanol, on pulmonary function in rats.</a> J Appl Physiol. 54 (2), 337-344 (1983).</li>
<li>Depledge, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiration+and+lung+function+in+the+mouse%2C+Mus+musculus+%28with+a+note+on+mass+exponents+and+respiratory+variables%29%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Physiol%22%5BJournal%5D)">Respiration and lung function in the mouse, Mus musculus (with a note on mass exponents and respiratory variables).</a> Respir Physiol. 60 (1), 83-94 (1985).</li>
<li>Depledge, M. H., Collis, C. H., Barrett, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+measuring+carbon+monoxide+uptake+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Radiat+Oncol+Biol+Phys%22%5BJournal%5D)">A technique for measuring carbon monoxide uptake in mice.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 7 (4), 485-489 (1981).</li>
<li>Fallica, J., Das, S., Horton, M. R., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+Carbon+Monoxide+Diffusing+Capacity+in+the+Mouse+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Application of Carbon Monoxide Diffusing Capacity in the Mouse Lung.</a> J Appl Physiol. 110 (5), 1455-1459 (2011).</li>
<li>Chaudhary, N., Datta, K., Askin, F. B., Staab, J. F., Marr, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+regulates+epithelial+cell+response+to+Aspergillus+and+resultant+pulmonary+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator regulates epithelial cell response to Aspergillus and resultant pulmonary inflammation.</a> Am J Respir Crit Care Med. 185 (3), 301-310 (2012).</li>
<li>Foster, W. M., Walters, D. M., Longphre, M., Macri, K., Miller, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methodology+for+the+measurement+of+mucociliary+function+in+the+mouse+by+scintigraphy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Methodology for the measurement of mucociliary function in the mouse by scintigraphy.</a> J Appl Physiol. 90 (3), 1111-1117 (2001).</li>
<li>Yildirim, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palifermin+induces+alveolar+maintenance+programs+in+emphysematous+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Palifermin induces alveolar maintenance programs in emphysematous mice.</a> Am J Respir Crit Care Med. 181 (7), 705-717 (2010).</li>
<li>Collins, S. L., Chan-Li, Y., Hallowell, R. W., Powell, J. D., Horton, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vaccination+as+a+novel+treatment+for+lung+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vaccination as a novel treatment for lung fibrosis.</a> PLoS One. 7 (2), e31299(2012).</li>
<li>Alessio, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+Tregs+resolve+experimental+lung+injury+in+mice+and+are+present+in+humans+with+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">CD4+CD25+Foxp3+ Tregs resolve experimental lung injury in mice and are present in humans with acute lung injury.</a> J Clin Invest. 119 (10), 2898-2913 (2009).</li>
<li>Martinez, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+course+of+patients+with+idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">The clinical course of patients with idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Ann Intern Med. 142 (12 Pt 1), 963-967 (2005).</li>
<li>Zhou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction+of+lethal+intestinal+defect+in+a+mouse+model+of+cystic+fibrosis+by+human+CFTR%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Correction of lethal intestinal defect in a mouse model of cystic fibrosis by human CFTR.</a> Science. 266 (5191), 1705-1708 (1994).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten, en niets te onthullen.

In het huidige werk, hebben we een nieuwe metriek om het gas te wisselen vermogen van de muis long kwantificeren gedefinieerd. Deze statistiek is analoog aan de diffusiecapaciteit, gemeenschappelijke klinische meting dat de primaire functie van de longen gemeten, dat wil zeggen het vermogen om gasuitwisseling. De diffusiecapaciteit Alleen long functionele metingen die gemakkelijk en snel kan worden gedaan in zowel muizen als mensen. Voor de detectie van longziekte bij muizen, een belangrijke doelstelling veranderingen i...

De muis is nu de primaire dierlijke gemodelleerd om verschillende longziekten. Om de mechanismen die ten grondslag liggen aan een dergelijke pathologieën te bestuderen, zijn fenotypische methoden nodig die kunnen kwantificeren is de pathologische veranderingen. Hoewel er veel muizenstudies geventileerde mechanica gemeten, deze metingen algemeen los van de standaardbeoordelingen longfunctie normaal gedaan bij de mens. Dit is jammer, aangezien de mogelijkheid om equivalente metingen in muizen en menselijke proefpersonen voeren kan de omzetting van de resultaten in muismodellen voor humane ziekten vergemakkelijken. Een van de meest voorkomende en gemakkelijk gemaakt metingen bij mensen is het diffusiecapaciteit voor koolmonoxide (DLCO) 1,2, maar deze meting slechts zelden gedaan in muismodellen. In die onderzoeken waar het is gemeld 3-7, zijn er geen follow-up studies geweest, deels omdat de procedures zijn vaak omslachtig of kan aanvruire complexe apparatuur. Een andere benadering is om een ​​CO rebreathing methode in een stabiele toestand, dat het voordeel dat CO diffusie meten bewuste muizen. Deze methode is echter zeer omslachtig en resultaten kunnen variëren met het niveau van de ventilatie van de muis en O2 en CO2 concentraties 8,9. Deze problemen lijken te zijn uitgesloten routinematig gebruik van diffusiecapaciteit long pathologieën bij muizen te detecteren, ondanks de verschillende voordelen. Om de problemen met bepaling van diffusiecapaciteit bij muizen omzeilen, details van een eenvoudige middelen te meten bij muizen zijn recent gerapporteerd 10. De procedure elimineert het moeilijke probleem van het bemonsteren van niet-verontreinigd alveolaire gas door snel het bemonsteren van een hoeveelheid die gelijk is aan het gehele geïnspireerde gas. Deze procedure resulteert in een zeer reproduceerbare meting zogenaamde diffusie factor voor koolmonoxide (DFCO), dat gevoelig is voor een groot aantal pathologic veranderingen in de longen fenotype. De DFCO wordt dus berekend als 1 - (CO 9 / CO c) / (Ne 9 / Ne c), waarbij het ​​c en 9 subscripts betrekking op concentraties van de kalibratie gassen geïnjecteerd en de afgevoerde gassen na 9 seconden adem wachttijd, respectievelijk. DFCO is een dimensieloze variabele, die varieert tussen 0 en 1, met 1 als gevolg van volledige opname van alle CO, en 0 geeft het geen opname van CO. In deze presentatie laten we zien hoe deze diffunderende capaciteitsmeting maken en hoe het kan worden gebruikt om veranderingen in bijna alle bestaande muizenlong ziektemodellen, zoals emfyseem, fibrose, acute longbeschadiging en virale en schimmelinfecties documenteren.

<table><tbody><tr><td>Gas Chromatograph</td><td>Inficon</td><td>Micro GC Model 3000A</td><td>Agilent maakt een vergelijkbaar model</td></tr><tr><td>18 G Luer stub needle</td><td>Becton Dickenson</td><td></td><td>Meerdere andere mogelijke leveranciers</td></tr><tr><td>3 ml plastic spuit</td><td>Becton Dickenson</td><td></td><td>Meerdere andere mogelijke leveranciers</td></tr><tr><td>Polypropyleen gasmonsterzakken</td><td>SKC</td><td>1 of 2 L capaciteit werkt goed</td><td>Andere gasdichte zakken zullen goed werken</td></tr><tr><td>Gastank, 0,3% Ne, 0,3% CO, balans lucht; (maat ME)</td><td>Airgas, Inc</td><td>Z04 NI785ME3012</td><td>Dit is het standaard mengsel dat wordt gebruikt voor DLCO bij mensen</td></tr><tr><td>25 TCID50/muis van influenzavirus A/PR8 verdund in fosfaatgebufferd zoutoplossing.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Porcine pancreaselastase</td><td>Elastin Products, Owensville, MO</td><td></td><td>5,4 U</td></tr><tr><td>Bleomycine</td><td>APP Pharmaceuticals, Schaumburg, IL</td><td></td><td>0,25 U</td></tr><tr><td>Escherichia coli LPS</td><td>Sigma L2880</td><td></td><td>3 &mu;g/g lichaamsgewicht; O55:B5</td></tr><tr><td>Aspergillus fumigatus (isolaat Af293) conidiën werden verzameld uit volwassen kolonies gekweekt op aardappeldextrose-agar.</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fenotypering mouse longfunctie in vivo met de lung diffusiecapaciteit

Phenotyping Mouse Pulmonary Function In Vivo with the Lung Diffusing Capacity

De muis is nu de primaire dierlijke gemodelleerd om verschillende longziekten. Om de mechanismen die ten grondslag liggen aan een dergelijke pathologieën te bestuderen, zijn fenotypische methoden nodig dat de pathologische veranderingen kunnen kwantificeren. Bovendien translationeel relevantie voor de muismodellen, mag dergelijke metingen tests die gemakkelijk kan worden gedaan in zowel mensen en muizen. Helaas, in de huidige literatuur enkele fenotypische metingen van longfunctie rechtstreeks op mens. Een uitzondering is de diffusiecapaciteit voor koolmonoxide, een meting die routinematig wordt gedaan bij de mens. In dit rapport beschrijven we een middel om dit diffusiecapaciteit bij muizen snel en eenvoudig te meten. Deze procedure houdt korte longinflatie met tracer gassen in een verdoofde muis, gevolgd door 1 min gas analysetijd. We hebben het vermogen van deze methode om verschillende long ziekten, met inbegrip van emfyseem, fibrose, acute longbeschadiging, en influenza en detecteren getestschimmel longinfecties, evenals bewaking longrijping bij jonge pups. De resultaten tonen significante dalingen in de longen pathologieën, evenals een verhoging van de verstrooiende capaciteit longrijping. Deze meting long diffusiecapaciteit verschaft aldus een longfunctie test die brede toepassing van haar vermogen om fenotypische structurele veranderingen met de meeste bestaande pathologische longmodellen detecteren haalt.

Figuur 1 toont de DFCO metingen van de volwassen muizen in groepen A, B, C, D, E en F. Er waren significante daling van zowel de Aspergillus en influenza-infecties, en significante daling van het fibrotische, emfysemateuze en acute longbeschadiging modellen. Figuur 2 toont de groep G ontwikkelingsveranderingen in DFCO tijd als de muizen leeftijd 2-6 weken. Er was een lichte, maar significante stijging met longontwikkeling gedurende deze tijdsduur. Het effect van het gebruik van een klei...

We beschrijven een manier om snel en eenvoudig de long diffusiecapaciteit bij muizen te meten en laten zien dat het voldoende gevoelig is voor fenotypeveranderingen in meerdere veelvoorkomende longpathologieën. Deze metriek brengt dus directe translationele relevantie voor de muismodellen, aangezien diffusiecapaciteit ook gemakkelijk bij mensen kan worden gemeten.

Fenotypering Mouse Longfunctie In Vivo Met de Lung diffusiecapaciteit

The mouse is now the primary animal used to model a variety of lung diseases. To study the mechanisms that underlie such pathologies, phenotypic methods ...

Het algemene doel van het volgende experiment is om te leren hoe de diffusiecapaciteit van de longen van een muis te meten met behulp van een gekalibreerde gaschromatograaf. Dit wordt bereikt door de longen van een verdoofde muis op te blazen met gas dat neon en koolmonoxide bevat, het gas gedurende negen seconden in de longen vast te houden en het gas te verzamelen. Het gas dat uit de longen wordt onttrokken, wordt vervolgens verdund tot twee milliliter en in de gaschromatograaf geïnjecteerd.De differentiële opname van neon en koolmonoxide in de long wordt gebruikt om de diffusiecapaciteit te berekenen. Deze meting kan worden gebruikt om het verlies van longfunctie te beoordelen in een breed spectrum van longziektemodellen. Het grote voordeel van deze techniek boven alle andere bestaande methoden om de longfunctie bij de muis te meten, is dat dit een zeer eenvoudige reproduceerbare meting is die direct kan worden vergeleken met soortgelijke metingen bij mensen.Deze methode kan worden gebruikt om de veranderingen in longstructuur te volgen die optreden bij een verscheidenheid aan longpathologieën. Dit protocol begint met het instellen van de gaschromatograafmodule die bij de machine wordt geleverd om pieken voor stikstof, zuurstof, neon en koolmonoxide te meten. Voor deze toepassing is alleen de neon- en koolmonoxidegegevens nodig.Het instrument gebruikt een moleculaire zeefkolom met helium als dragergas. Deze specifieke gaschromatograaf heeft een kolom van 0,8 milliliter en er wordt een monster van twee milliliter gebruikt om voldoende zuivering van deze kolom te garanderen voordat met het meten wordt begonnen. Een reeks metingen kalibreert altijd de machine met behulp van twee milliliter gas rechtstreeks uit de gasmonsterzak.De eerste piek die verschijnt is de neon, vervolgens zuurstof en stikstof, die we voor deze procedure niet meten. Ten slotte verschijnt de koolmonoxidepiek in de tijd voor de gaschromatograaf. Het meten van al deze pieken duurt iets minder dan een minuut.Om te beginnen, verdooft u de muizen met ketamine en xylazine. Bevestig de verdoving door de afwezigheid van reflexbewegingen als reactie op een teenprik. Om de ogen te beschermen, brengt u vervolgens veterinaire zalf aan en voert u tracheostomie uit bij de muizen met een studencannule.Gebruik een canule van 18 gauge voor volwassenen of een canule van 20 gauge voor zeer jonge muizen. Start vervolgens de metronoom met hoorbare klikjes om de seconde. Voor muizen ouder dan zes weken, gebruikt u een spuit van drie milliliter om 0,8 milliliter gas uit de gasmengselzak te trekken.Als de muis jonger is dan vier weken, gebruikt u 0,4 milliliter gas, verbindt u de spuit vervolgens met de tracheacanule en blaast u snel de longen op. Begin met het mentaal tellen van één tot tien in synchroon met de metronoomklikken. Wanneer het tellen 10 bereikt, trekt u snel het volume van 0,8 milliliter terug.Verdun dit uitgeademde gas tot twee milliliter door ruimte toe te voegen, lucht en minimaal 15 seconden te wegen. Het is erg belangrijk om de longen zo snel mogelijk op te blazen en te laten ontspannen. Een snelle inflatie is heel gemakkelijk, maar het vergt een beetje oefening om de 0,8 ml snel en nauwkeurig terug te trekken. Injecteer vervolgens het hele monster in de gaschromatograaf.Voor analyse is het belangrijk om besmetting van het monster te voorkomen bij het overbrengen naar en van het dier en naar de gaschromatograaf. Dit kan zorgvuldig worden gedaan door het signaal met een vinger af te dekken terwijl de GC het monster meet. Blaas de long van de muis op met nog eens 0,8 milliliter gasmengsel uit de zak en verwerk vervolgens dit monster identiek aan de eerste.Gebruik de gemiddelde waarden van de twee metingen om de DFCO te berekenen. De C-subscript verwijst naar de kalibratiegassen en de negen-subscript verwijst naar de monsters die van het dier zijn verzameld. Na de ademstilstand van negen seconden.Een nominale controle-DFCO-waarde genomen van C 57 zwarte zes muizen is ongeveer 0,77. In een studie met behulp van een PR acht influenzamodel, werd een progressieve functieverlies waargenomen op dag zes en acht in een model van emfyseem 21 dagen na installatie van elastase. De DFCO was matig verminderd, maar er waren veel grotere veranderingen in het model van fibrose geïnduceerd door Blio Mycin installatie.De fibrotische route veroorzaakt door bleomycine resulteerde in de grootste verandering in DFCO die werd waargenomen in elk van de pathologische modellen. Dit is belangrijk omdat de diffusiecapaciteit ook een betrouwbare marker is voor fibrose bij mensen. Het CFTR-gen speelt een cruciale rol bij cystische fibrose en in een studie van muizen zonder dit gen, was er een significante afname in DFCO.De DFCO werd verder verminderd met schimmelinfectie in deze knockout-muizen. Een veel gebruikt model voor longbeschadiging wordt veroorzaakt door LPS. Bij muizen die aan LPS werden blootgesteld, was er progressieve tijdsafhankelijke verlies van longfunctie van dag één tot vier zoals beoordeeld door DFCO-metingen, de meting van DFCO kan met succes worden gemaakt bij muizen zo jong als twee weken oud.De kleinere grootte van de long vereist een kleinere opblaasvolume van 0,4 milliliter. De DFCO gemeten met dit kleinere volume is in staat om de verwachte toename te tonen naarmate de long rijpt. Eenmaal onder de knie. Deze techniek kan in slechts enkele minuten per muis worden uitgevoerd voordat andere longfunctiemetingen of beoordelingen worden gedaan.Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om ervoor te zorgen dat de stap van opblazen en ontblazen snel wordt uitgevoerd en om voorzichtig te zijn bij het overbrengen van het monster om besmetting te voorkomen.

phenotyping-mouse-pulmonary-function-vivo-with-lung-diffusing

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Het huidige protocol bevat een gedetailleerde stap-voor-stap beschrijving van de vereiste om metingen van de ademhalingswegen mechanica, alsmede de beoordeling van de luchtwegen voor geïnhaleerde methacholine in muizen met behulp van de geforceerde oscillatie techniek (flexiVent voeren procedures; SCIREQ Inc, Montreal, Qc , Canada).

Evaluatie van Respiratory System Mechanics in Muizen met behulp van de Gedwongen Oscillatie techniek

Het doel van dit protocol is om geautomatiseerde methoden te bieden om chronische longpathologieën te kwantificeren in een muismodel van COPD. Het protocol omvat het blootstellen van muizen aan sigarettenrook (CS), het meten van longfunctie, het opblazen van de longen en het gebruik van morfometrische methoden om emfyseem en kleine luchtwegremodellering bij muizen te meten.

Geautomatiseerde Meting van longemfyseem en Kleine luchtweg remodeling in sigarettenrook blootgesteld Muizen

Hier presenteren we een protocol om eenvoudig en betrouwbaar de longdruk-volumecurve bij muizen te meten, waaruit blijkt dat het voldoende gevoelig is om fenotyische parenchymveranderingen in twee veelvoorkomende longaandoeningen, pulmonaire fibrose en emfyseem, te detecteren. Deze metrische biedt een middel om de structurele veranderingen in de long te kwantificeren met de zich ontwikkelende pathologie.

Meting van de druk-volume curve in muizenlongen

Deze studie beschrijft de succesvolle generatie voor een nieuwe diermodel van chronische obstructieve longziekte (COPD) door muizen aan hoge concentraties van ozon herhaaldelijk bloot te leggen.

Generatie van het Model van een chronische obstructieve longziekte in muizen door herhaalde ozon blootstelling

De incidentie van obesitas stijgt en verhoogt het risico van chronische longziekten. De onderliggende mechanismen en preventieve strategieën, welomschreven dier vast te stellen modellen nodig zijn. Hier bieden wij drie methoden (glucose-tolerantie-test, lichaam plethysmography en fixatie van de Long) te bestuderen van het effect van obesitas op pulmonaire resultaten in muizen.

Intraperitoneaal Glucose tolerantie Test, meting van de longfunctie, en fixatie van de longen om te bestuderen van de gevolgen van obesitas en verminderde stofwisseling op pulmonaire resultaten

Het doel van dit artikel is bedoeld als een gedetailleerde beschrijving van de aanbevolen procedures voor het evalueren van de ademhalingsfunctie in bewuste muizen door dubbele-kamer plethysmography.

Beoordeling van de ademhalingsfunctie in bewuste muizen door Double-kamer Plethysmography

Hier gepresenteerd is een nuttig protocol voor Long fixatie die een stabiele aandoening creëert voor histologische evaluatie van Long specimens uit een muismodel van emfyseem. Het belangrijkste voordeel van dit model is dat het veel longen met dezelfde constante druk kan oplossen zonder longcollaps of deflatie.

Long fixatie onder constante druk voor de evaluatie van emfyseem bij muizen

Hier presenteren we een protocol om pulmonale fibrose bij muizen te modelleren met gebruik van geaerosoliseerde bleomycine toegediend via de luchtpijp. Deze geoptimaliseerde methode maakt uniforme, kwantitatieve en precieze toediening mogelijk zonder chirurgische incisie, wat de reproduceerbaarheid en betrouwbaarheid van door bleomycine geïnduceerde fibrose verbetert.

Een verfijnde aerosolgebaseerde intratracheale bleomycine toedieningsmethode voor reproduceerbare en minimaal invasieve muismodellen van pulmonale fibrose

Orthotope diermodellen van kanker van de eierstokken te repliceren beter mens-en vaatziekten en daardoor meer inzicht in de progressie van kanker en tumor respons op therapie. Een muis model krijgt een intrabursale injectie van luciferase-expressie ovarium tumorcellen. De behandeling wordt toegediend via orale sondevoeding. Tumorgroei wordt bewaakt...

In vivo beeldvorming en therapeutische behandelingen in een orthotope Muis Model van eierstokkanker

Het volgende protocol schetst het proces van isoleren, ventileren en instrumenteren muis longen stabiel of pulsatiele pulmonale vasculaire druk-flow relaties maatregel om de effecten van de bloedstroom, luchtstroom, luchtweg veranderingen en vasculaire veranderingen op rechter ventrikel afterload kwantificeren.

Karakterisering van de geïsoleerde, geventileerde en Instrumented Mouse Lung geperfuseerd met pulsatiele flow

Leer een eenvoudige methode om longdiffusiecapaciteit bij muizen te meten met een gekalibreerde gaschromatograaf. Deze techniek is gevoelig voor fenotypische veranderingen in diverse longpathologieën en ondersteunt translationeel onderzoek.

Fenotypering Mouse Longfunctie In Vivo Met de Lung diffusiecapaciteit

Meer video's verkennen