Name: Methode voor de evaluatie van de effecten van een golflengtebereik en intensiteiten van Rood / nabij-infrarood Lichttherapie op oxidatieve stress In Vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Leer een methode voor lichttherapie met xenonbron en filters om golflengte en intensiteit nauwkeurig te regelen. Dit helpt onderzoekers oxidatieve stress in gekweekte cellen te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door het Neurotrauma Research Program (West-Australië). Dit project wordt gefinancierd via de Road Trauma Trust Account, maar weerspiegelt niet de standpunten of aanbevelingen van de Road Safety Council.

1. Optische Calibration: Meten Light Output <ol><li> Aan het licht leveringapparaat bereiden, sluit een lichtbron breedband (bv Xenon of wolfraam lamp) op een geschikte voeding. Plaats een collimatorlens voor de lichtbron een gecollimeerde lichtbundel te produceren. Leid de licht door een vloeistof warmtefilter de meeste warmte uit de lichtbundel te verwijderen. Afhankelijk van de toepassing, de focus van de gerichte lichtstraal op naar de ingang opening van een vloeistof lichtgeleider, die voorziet in meer flexibele levering van het licht (bijv., In een incubator). </li><li> Aan het andere uiteinde van het vloeibare lichtgeleider achtereenvolgens een tweede collimatorlens en een houder voor interferentie en grijsfilters. Controleer dat deze regeling levert een gelijkmatig verlichte plek van het licht van de gewenste golfgebied en intensiteit. Opmerking: De afstand tussen het uiteinde van de lichtgeleider en het monstervlak wellicht afhankelijkhet gebied dat moet worden verlicht, maar vergeet dat naarmate de afstand tot het einde van de lichtgeleider toeneemt, zal de lichtintensiteit afnemen. In de onderhavige studie, deze afstand is 14 cm en vormt een balk dwarsdoorsnede die gelijkmatig verlicht een 3x3 putruimte op een 96-well plaat. </li><li> Zorg ervoor dat strooilicht van de lamp en de bijbehorende optische componenten niet in staat is om het monster te bereiken. </li><li> Zet de waterkoeler voor de vloeibare hitte filter en zorgen voor uitwisseling van water door het filter jas. Zet de lamp voedingsbron en wacht minstens 5 minuten voor de breedband-lichtbron te stabiliseren. Opmerking: Het gebruik van de waterkoeler moet oververhitting van het apparaat te voorkomen. </li><li> Selecteer een smalbandinterferentie filter (gewoonlijk beschreven door de centrale golflengte, piek transmittantie en breedte op halve hoogte (FWHM) bandbreedte) om het gewenste golfgebied van verlichting genereren. Opmerking: de smalbandige interferentiefilters gebruikt in de huidige studie werden 442 nm, 550 nm, 671 nm en 810 nm. </li><li> Meet de door de lamp op het gebied waar het monster tijdens de behandeling te worden gepositioneerd licht. Meet licht met behulp van een gekalibreerde bestralingssterkte probe (cosinus collector) aangesloten aan een spectroradiometer behulp correctheid software volgens de instructies van de fabrikant. </li><li> Gebruik grijsfilters om de lichtintensiteit te passen totdat het gewenste resultaat wordt verkregen. Opmerking: In de huidige studie, wordt de intensiteit van het licht dat door elke interferentie filter ingesteld tot een gelijke quantale uitgang te geven aan elk van de vier behandeling golfgebied. Het is belangrijk om de kalibratie regelmatig, zoals het lampvermogen wordt gewijzigd. Opmerking: Na de set-up van het apparaat, de cellen zijn klaar om te worden verlicht Figuur 1 is een weergave van het licht levering apparaat gebruikt in de huidige studie.. </li></ol><img alt="Figuur 1"src = &quot;/ files / ftp_upload / 52221 / 52221fig1.jpg&quot; /&gt; Figuur 1. Beeld van het licht leveringapparaat. Illustrated zijn het licht energiebron, xenon lamp met behuizing, collimatielens, waterfilter, entree diafragma, vloeibare lichtgeleider, tweede collimatielens, filterhouder, behandeling frame en mat zwarte kaart. Merk op dat de smalbandige golflengte en intensiteit filters niet worden getoond. 2. Celbereiding <ol><li> De beschreven R / NIR-LT levering methode kan worden toegepast op elk type cel of in vitro modelsysteem; als zodanig de volgende beschrijvingen van celcultuur zijn algemeen, met behulp van gevestigde technieken om cultuur feochromocytoom (PC12), Müller (RMC1) en primaire gemengde retinale cellen. </li><li> Voorafgaand aan de cel zaaien voor lichte behandeling en oxidatieve stress test, cultuur vereeuwigd cellen in hun respectieve groeimedia die geschikte supplementen (bijv., FBS, antibiotica) in T75 flasks tot 70-80% samenvloeiing. </li><li> Maak geïmmortaliseerde cellen van T75 kolven, volgens de methode geschikt is voor het celtype te testen bv., Trypsine. Indien nodig, alvorens het zaaien van cellen in 96-well testplaten, laag putjes met 10 ug / ml poly-L-lysine gedurende 1 (bijv., Voor PC12 cellen) of 10 ug / ml poly-L-lysine voor 1u gevolgd door een O / N incubatie met 10 ug / ml laminine (bijv., voor gemengd retinale cellen). </li><li> Centrifugeer cellen eventueel verzamelen (bijv., 3 min bij 405 xg gedurende PC12 cellen of 10 minuten bij 218 xg gedurende RMC1 cellen), verwijder het supernatant en resuspendeer in 8 ml passende celkweekmedium. </li><li> Als gemengd retinale cellen worden gebruikt, te bereiden van P0-5 neonatale rat pups door enzymatische vertering (papaïne) volgens de vastgestelde procedures 19 </li><li> Tel het aantal levensvatbare cellen exclusief 0,4% (w / v) trypan blauw kleurstof met behulp van een hemocytometer. </li><li> Pas celdichtheid such dat cellen ongeveer 70-80% samenvloeiing zal zijn na 24 of 48 uur in de cultuur. (Voor PC12 cellen het zaaien dichtheid 4,0 x 10 5 levensvatbare cellen / ml voor RMC1 cellen is 2,5 x 10 5 levensvatbare cellen / ml en gemengd retinale cellen is 8 x 10 5 levensvatbare cellen / ml). Na toevoeging cellen ofwel helder of zwarte 96-well platen (gebruikt voor de H 2 O 2 respectievelijk DCFH-DA-test) in 100 pl geschikte groeimedia, laat de plaat zitten op een vlakke ondergrond bij 37 ° C, 5 % CO2 (of alle omstandigheden geschikt zijn voor het specifieke celtype) gedurende ten minste 24 uur om celhechting mogelijk. </li><li> Kweekcellen in groeimedia in de juiste 96 putjes schalen tot ze 70-80% confluent (24 voor PC12 en RMC1 cellen 48 voor gemengd retinale cellen). </li></ol> 3. Het toevoegen van glutamaat Stressor naar Cells <ol><li> Bereid L-glutaminezuur mononatrium zouthydraat stressor concentraties van 0-10mm in de juiste volledige kweekruimteste cultuur media. </li><li> Verwijder het afdrukmateriaal uit de cellen en voorzichtig te wassen cellen 3 keer met PBS (PC12) of HBSS (RMC1 en gemengde retinale cellen). Na wassen, add-glutamaat bevattende media tot een totaal volume van 100 ul / putje. </li></ol> 4. Eerste Doseringen van Light Treatment <ol><li> Onmiddellijk na toevoeging van glutamaat of de stressor van keuze, cellen aan het licht behandeling in de gewenste golflengtes en intensiteiten bloot door het plaatsen van onder de voorbereide licht levering apparaat. Zorg ervoor dat u de quantale uitgang van de lichtbundel met behulp van de gevestigde combinaties van grijsfilters, afhankelijk van de golflengte wordt toegediend veranderen. Opmerking: In de huidige experimenten cellen bloot aan lichtbehandeling gedurende 3 min werd de temperatuur te handhaven door te rusten met 96 putjes op een 37 ° C warmte pad. Behandeltijd kan naar behoefte worden gevarieerd. <ol><li> Plaats een matte zwarte kaart onder de cellen aan het licht te voorkomen als gevolg van in de aangrenzende putten in de 96-well tray toegewezen aan andere behandelingsparameters. </li></ol></li><li> Als de behandeling wordt gewenst voor langere tijdsperioden, voeg 25 mM Hepes buffer pH van de celkweek media handhaven of idealiter plaats de inrichting en behandeling platen in een incubator met CO2-concentratie geregeld tot 5% CO2, of omstandigheden die optimaal zijn voor het specifieke celtype. </li><li> Na voltooiing van de lichtbehandeling, plaatst de cellen op een vlakke ondergrond en incubeer bij 37 ° C en 5% CO2 (of alle omstandigheden optimaal zijn voor het celtype) gedurende 24 uur. Opmerking: Extra doseringen van R / NIR-LT kan worden toegediend zoals hierboven beschreven, zoals gewenst. </li></ol> 5. Definitieve Dosering van Licht Behandeling en Detectie van ROS <ol><li> Voordat de laatste ronde van lichtbehandeling, bereid de reagentia te gebruiken voor ROS detectie. Bereid 50 mM citraatbuffer (pH 6,0), Triton X100 en H 2 O 2 detectiereagens werkenoplossing (1: 2: 97 verhouding van 10 mM H 2 O 2 detectiereagens voorraadoplossing, 10 U / ml mierikswortelperoxidase, 50 mM natriumcitraat (pH 6,0)). Bereid DCFH-DA in een eindconcentratie van 100 uM in geschikte media. Opmerking: DCFH-DA reagens voor PC12 cellen in RPMI media, DCFH-DA reagens voor RMC1 cellen in DMEM media. Merk op dat commercieel verkrijgbaar detectie reagentia differentiële gevoeligheid voor bepaalde ROS en reagentia moeten zorgvuldig worden gekozen om de gewenste voor individuele toepassing informatie. </li><li> Dien lichtbehandeling aan de cellen, zoals beschreven in stap 4.1-4.1.2. Zorg ervoor dat de cellen worden behandeld met de gewenste invloeden / golflengten van het licht. </li><li> Onmiddellijk na lichtbehandeling, verwijder de glutamaat-bevattende media en tweemaal wassen met geschikte buffer-oplossing (voor PC12 cellen, PBS wordt gebruikt en voor RMC1 cellen, wordt HBSS gebruikt). Voer de ROS assays op de cellen als volgt: <ol><li> H 2 O 2 </sub&gt; assay: voeg 45 ul van 50 mM citraatbuffer (pH 6,0) en 5 pl Triton X100 aan elk van de putjes. Schud de cellen op een orbitale schudder gedurende 30 seconden en geïncubeerd bij 37 ° C en 5% CO2 gedurende 15 min. Voeg 50 ui H2O 2 detectie werkende oplossing en incubeer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur. Meet fluorescentie met een plaatlezer bij een excitatiegolflengte van 530 nm en een emissiegolflengte van 480 nm. </li><li> DCF test: voeg 100 ul van 100 uM oplossing van DCFH-DA aan elk van de putjes en incubeer gedurende 30 minuten bij 37 ° C en 5% CO2. Verwijder het medium dat 100 uM DCFH-DA en wassen met geschikte bufferoplossing (zoals hierboven beschreven) tweemaal. Voeg 90 pl bufferoplossing en 10 pl Triton X100 aan elk van de putten en schud op een orbitale schudder gedurende 30 seconden voor 15 min incubatie bij 37 ° C. Meet DCF afgeleid fluorescentie met behulp van een plaat reader met een excitatie golflengte van 480 nm en een emissie wavelength van 530nm. </li><li> Express ROS waarden ten opzichte van de eiwitconcentratie van cellen die overblijven in de putjes met behulp van een colorimetrische kit om eiwitconcentratie kwantificeren volgens de instructies van de fabrikant met betrekking tot een standaardcurve mg proteïne berekenen. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Gutterman, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+and+reactive+oxygen+species+an+evolution+in+function%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+research%22%5BJournal%5D)">Mitochondria and reactive oxygen species an evolution in function.</a> Circulation research. 97, 302-304 (2005).</li>
<li>Camello-Almaraz, C., Gomez-Pinilla, P. J., Pozo, M. J., Camello, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+reactive+oxygen+species+and+Ca2%2B+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial reactive oxygen species and Ca2+ signaling.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 291, C1082-C1088 (2006).</li>
<li>Kowaltowski, A. J., de Souza-Pinto, N. C., Castilho, R. F., Vercesi, A. E. Mitochondria and reactive oxygen species. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKowaltowski%2C+AJ+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22">Free Radical Biology and Medicine</a>. 47, 333-343 (2009).</li>
<li>Coyle, J. T., Puttfarcken, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress%2C+glutamate%2C+and+neurodegenerative+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress, glutamate, and neurodegenerative disorders.</a> Science. 262, 689-695 (1993).</li>
<li>Doble, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+excitotoxicity+in+neurodegenerative+disease%3A+implications+for+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+%26+therapeutics%22%5BJournal%5D)">The role of excitotoxicity in neurodegenerative disease: implications for therapy.</a> Pharmacology & therapeutics. 81, 163-221 (1999).</li>
<li>Hall, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidant+therapies+for+acute+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Antioxidant therapies for acute spinal cord injury.</a> Neurotherapeutics. 8, 152-167 (2011).</li>
<li>Jia, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+in+spinal+cord+injury+and+antioxidant-based+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress in spinal cord injury and antioxidant-based intervention.</a> Spinal Cord. 50, 264-274 (2012).</li>
<li>Fitzgerald, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Red%2Fnear-infrared+irradiation+therapy+for+treatment+of+central+nervous+system+injuries+and+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Reviews+in+the+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">Red/near-infrared irradiation therapy for treatment of central nervous system injuries and disorders.</a> Reviews in the Neurosciences. 24, 205-226 (2013).</li>
<li>Rutar, M., Natoli, R., Albarracin, R., Valter, K., Provis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((670-nm+light+treatment+reduces+complement+propagation+following+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">670-nm light treatment reduces complement propagation following retinal degeneration.</a> J Neuroinflammation. 9, 257(2012).</li>
<li>Eells, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+photobiomodulation+for+methanol-induced+retinal+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Therapeutic photobiomodulation for methanol-induced retinal toxicity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 100, 3439-3444 (2003).</li>
<li>Begum, R., Powner, M. B., Hudson, N., Hogg, C., Jeffery, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+with+670+nm+light+up+regulates+cytochrome+C+oxidase+expression+and+reduces+inflammation+in+an+age-related+macular+degeneration+model%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Treatment with 670 nm light up regulates cytochrome C oxidase expression and reduces inflammation in an age-related macular degeneration model.</a> PloS one. 8, e57828(2013).</li>
<li>Byrnes, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light+promotes+regeneration+and+functional+recovery+and+alters+the+immune+response+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+surgery+and+medicine%22%5BJournal%5D)">Light promotes regeneration and functional recovery and alters the immune response after spinal cord injury.</a> Lasers in surgery and medicine. 36, 171-185 (2005).</li>
<li>Liang, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photobiomodulation+partially+rescues+visual+cortical+neurons+from+cyanide-induced+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Photobiomodulation partially rescues visual cortical neurons from cyanide-induced apoptosis.</a> Neuroscience. 139, 639-649 (2006).</li>
<li>Zivin, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effectiveness+and+safety+of+transcranial+laser+therapy+for+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Effectiveness and safety of transcranial laser therapy for acute ischemic stroke.</a> Stroke. 40, 1359-1364 (2009).</li>
<li>Lapchak, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcranial+near-infrared+laser+therapy+applied+to+promote+clinical+recovery+in+acute+and+chronic+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+review+of+medical+devices%22%5BJournal%5D)">Transcranial near-infrared laser therapy applied to promote clinical recovery in acute and chronic neurodegenerative diseases.</a> Expert review of medical devices. 9, 71-83 (2012).</li>
<li>Chung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nuts+and+bolts+of+low-level+laser+%28light%29+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+biomedical+engineering%22%5BJournal%5D)">The nuts and bolts of low-level laser (light) therapy.</a> Annals of biomedical engineering. 40, 516-533 (2012).</li>
<li>Wu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-Level+Laser+Therapy+for+Closed-Head+Traumatic+Brain+Injury+in+Mice%3A+Effect+of+Different+Wavelengths%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+surgery+and+medicine%22%5BJournal%5D)">Low-Level Laser Therapy for Closed-Head Traumatic Brain Injury in Mice: Effect of Different Wavelengths.</a> Lasers in surgery and medicine. 44, 218-226 (2012).</li>
<li>Hashmi, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+low-level+laser+therapy+in+neurorehabilitation%5BTitle%5D)+AND+%22PM%26R%22%5BJournal%5D)">Role of low-level laser therapy in neurorehabilitation.</a> PM&R. 2, S292-S305 (2010).</li>
<li>Fitzgerald, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metallothionein-IIA+promotes+neurite+growth+via+the+megalin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Metallothionein-IIA promotes neurite growth via the megalin receptor.</a> Experimental Brain Research. 183, 171-180 (2007).</li>
<li>Fitzgerald, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+light+reduces+oxidative+stress+and+preserves+function+in+CNS+tissue+vulnerable+to+secondary+degeneration+following+partial+transection+of+the+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Near infrared light reduces oxidative stress and preserves function in CNS tissue vulnerable to secondary degeneration following partial transection of the optic nerve.</a> Journal of neurotrauma. 27, 2107-2119 (2010).</li>
<li>Ando, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-level+laser+therapy+for+spinal+cord+injury+in+rats%3A+effects+of+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+biomedical%22%5BJournal%5D)">Low-level laser therapy for spinal cord injury in rats: effects of polarization.</a> Journal of biomedical. 18, 098002(2013).</li>
<li>Lanzafame, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocity+of+exposure+time+and+irradiance+on+energy+density+during+photoradiation+on+wound+healing+in+a+murine+pressure+ulcer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+surgery+and+medicine%22%5BJournal%5D)">Reciprocity of exposure time and irradiance on energy density during photoradiation on wound healing in a murine pressure ulcer model.</a> Lasers in surgery and medicine. 39, 534-542 (2007).</li>
<li>Castano, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-level+laser+therapy+for+zymosan+induced+arthritis+in+rats%3A+Importance+of+illumination+time%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+surgery+and+medicine%22%5BJournal%5D)">Low-level laser therapy for zymosan induced arthritis in rats: Importance of illumination time.</a> Lasers in surgery and medicine. 39, 543-550 (2007).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

We hebben met succes aangepast nauwkeurig en gekalibreerd licht afgiftesysteem een mechanisme voor onderzoek optimalisering van R / NIR-LT in vitro. Golflengte en intensiteitswaarden van R / NIR-LT kunnen nauwkeurig en efficiënt worden gemanipuleerd met dit systeem. We stelden vast dat de lichtbehandeling van de cellen niet tot celdood, alhoewel ROS niet golflengten en doseringen geleverd verlaagd, in de celtypen getest. De maximale bereikt door het huidige systeem op 670nm (20.11W / m 2) intensiteit...

Reactieve zuurstof species (ROS) zijn vereist voor verschillende signaaltransductieroutes en normale reacties van cellulair metabolisme, waaronder neuroprotectie 1. Wanneer echter endogene antioxidant mechanisme in staat zijn de productie van ROS controleren kunnen cellen bezwijken oxidatieve stress 2,3. Na letsel aan het CZS, zijn de stijgingen van de aanwezigheid van ROS en oxidatieve stress gedacht een belangrijke rol in de progressie van schade 4,5 spelen. Ondanks het grote aantal strategieën voor het verzwakken van oxidatieve stress die ervan zijn er nog geen volledig effectief klinisch relevante anti-oxidant strategieën voor het verzwakken ROS productie en geassocieerde oxidatieve stress in klinisch gebruik na neurotrauma 6. Daarom is de demping van oxidatieve stress blijft een belangrijk doel voor therapeutische interventie 7. Verbeteringen volgening R / NIR-LT gemeld bij diverse verwondingen en ziekten waaronder vermindering cardiale infarctgrootte, nier- en hepatische complicaties bij diabetes, retinale degeneratie, CNS letsel en beroerte 8, bijvoorbeeld door het verminderen van oxidatieve stress. Met bijzondere aandacht voor CNS letsel, hebben preklinische studies van werkzaamheid van 670nm licht goede effecten in modellen van retinale degeneratie 9-11, dwarslaesie 12, neuronale dood 13 getoond. Klinische studies zijn uitgevoerd voor de droge leeftijdsgebonden maculaire degeneratie en zijn momenteel aan de gang voor een beroerte 14, maar de uitkomsten van deze onderzoeken niet lijken veelbelovend, misschien te wijten aan een gebrek aan effectieve behandeling in dienst parameters 15. Als zodanig R / NIR-LT niet wijd goedgekeurd als onderdeel van de normale klinische praktijk in neurotrauma, ondanks een gemakkelijk toe te dienen, niet-invasieve en relatief goedkope behandeling. Belemmeringen voor de klinische vertaling verschillende ontbreken van een clvroeg begreep werkingsmechanisme en het ontbreken van een gestandaardiseerd effectieve behandeling protocol 16,17. Huidige literatuur over lichttherapie blijkt dat er een overvloed aan variatie in de behandeling parameters met betrekking tot de bestraling bronnen (LED of laser), golflengte (bijvoorbeeld 630, 670, 780, 810, 830, 880, 904nm), totale dosis (joules van bestraling / oppervlakte-eenheid), de duur (belichtingstijd), timing (pre- of post- belediging), behandeling frequentie en wijze van levering (puls of continue) 8. De variabiliteit in behandeling parameters tussen studies maakt vergelijking moeilijk en heeft bijgedragen aan de scepsis ten aanzien van de werkzaamheid 16. Daarom wordt de optimalisatie van R / NIR-LT duidelijk vereist, met celkweek systemen in staat om de high-throughput screening mechanisme nodig om de meerdere variabelen te vergelijken bieden. Er zijn echter weinig in de handel verkrijgbaar verlichting systemen die voldoende flexibiliteit en controle over wa kan biedenvelength en intensiteit van dergelijke optimalisatie experimenten. Commercieel verkrijgbare LED inrichtingen algemeen niet in staat om meerdere golflengten of intensiteiten, waardoor onderzoekers gebruik meerdere LED-inrichtingen van verschillende fabrikanten, die kunnen variëren niet alleen de intensiteit leveren, maar ook het spectrum van de golflengte van het uitgestraalde licht. We hebben dit probleem aangepakt door het gebruik van een breedband Xenon lichtbron gefilterd door smalbandinterferentie filters, waardoor een gebied van golflengten en invloeden van licht genereren, waardoor afsluiten, nauwkeurige regeling van de parameters van R / NIR-LT. Het is belangrijk op te merken dat de therapeutische dosis van de behandeling wordt bepaald door het aantal fotonen interactie met de photoacceptor (chromofoor), die, in het geval van R / NIR-LT is gepostuleerd om cytochroom c oxidase (COX) 18. Foton energie geleverd varieert met de golflengte; betekent gelijke doses van energie bij verschillende golflengten zal comgewaardeerde verschillende aantallen fotonen. Daarom is het licht uitgezonden door de inrichting werd geijkt met een gelijk aantal fotonen uitzenden voor elk van de gekozen golflengten te testen. We hebben een systeem dat kan worden gebruikt om R / NIR-LT leveren tegen een gebied van golflengten en intensiteiten cellen in vitro ontwikkelde en de mogelijkheid aangetoond om de effecten van de geleverde R / NIR-LT op ROS productie in cellen blootgesteld meten glutamaat stress.

<table><tbody><tr><td>OxiSelect Intracellular ROS Assay Kit (Green Fluorescence)</td><td>Cell Biolabs</td><td>STA-342</td><td></td></tr><tr><td>Amplex UltraRed Reagent</td><td>Molecular Probes</td><td>A36006</td><td></td></tr><tr><td>300 Watt Xenon Arc Lamp</td><td>Newport Corporation</td><td>6258</td><td>Zeer intense lichtbron, kijk niet direct in de lamp. Zorg voor voldoende koeling van de lamp terwijl deze aan staat</td></tr><tr><td>USB4000-FL Fluorescence Spectrometer</td><td>Ocean Optics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CC-3-UV Cosine Corrector for Emission Collection</td><td>Ocean Optics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>200&mu;m diameter quartz fibre optic</td><td>Ocean Optics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SpectraSuite Spectroscopy Platform</td><td>Ocean Optics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2300 EnSpire Multimode Plate Reader</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pierce BCA Protein Assay Kit</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9002-93-1</td><td>Acute toxiciteit, draag handschoenen bij het hanteren.</td></tr><tr><td>L-Glutamic acid monosodium salt hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>142-47-2 (anhydrous)</td><td></td></tr><tr><td>Pheochromocytoma rat adrenal medulla (PC12) cells</td><td>American Type Culture Collection</td><td>CRL-2522</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI1640) Media</td><td>Gibco</td><td>11875-119</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum, certified, heat inactivated, US origin</td><td>Gibco</td><td>10082-147</td><td>Opwarmen tot 37 &deg;C in waterbad voor gebruik</td></tr><tr><td>Horse Serum, New Zealand origin</td><td>Gibco</td><td>16050-122</td><td>Opwarmen tot 37 &deg;C in waterbad voor gebruik</td></tr><tr><td>GlutaMAX Supplement</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td>Opwarmen tot 37 &deg;C in waterbad voor gebruik</td></tr><tr><td>100 mM Sodium Pyruvate</td><td>Gibco</td><td>11360-070</td><td>Opwarmen tot 37 &deg;C in waterbad voor gebruik</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Opwarmen tot 37 &deg;C in waterbad voor gebruik</td></tr><tr><td>100X MEM Non-Essential Amino Acids Solution</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td>Opwarmen tot 37 &deg;C in waterbad voor gebruik</td></tr><tr><td>Retinal Muller (rMC1) cells</td><td>University of California, San Diego</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965-118</td><td>Opwarmen tot 37 &deg;C in waterbad voor gebruik</td></tr><tr><td>75 cm2 Flasks</td><td>BD Biosciences</td><td>B4-BE-353136</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-lysine hydrobromide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>25988-63-0</td><td>Aliquot en bewaar bij -20 &deg;C</td></tr><tr><td>Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)</td><td>Gibco</td><td>14025-134</td><td>Opwarmen tot 37 &deg;C in waterbad voor gebruik</td></tr><tr><td>Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td><td>Gibco</td><td>10010-049</td><td>Opwarmen tot 37 &deg;C in waterbad voor gebruik</td></tr><tr><td>Laminin Mouse Protein, Natural</td><td>Gibco</td><td>23017-015</td><td>Aliquot en bewaar bij -20 &deg;C</td></tr><tr><td>1X Neurobasal Medium</td><td>Gibco</td><td>21103-049</td><td>Opwarmen tot 37 &deg;C in waterbad voor gebruik</td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>165U Papain</td><td>Worthington</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-Cysteine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W326305</td><td></td></tr><tr><td>Corning 96 well plates, clear bottom, black</td><td>Corning</td><td>CLS3603-48EA</td><td></td></tr><tr><td>Costar Clear Polystyrene 96-Well Plates Untreated; Well shape: Round; Sterile.</td><td>Costar</td><td>07-200-103</td><td></td></tr><tr><td>Seesaw Rocker</td><td>Standard lab apparatuur</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Standard lab apparatuur</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neutral Density Filter Paper (0.3)</td><td>THORLABS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>442 nm Bandpass Filter</td><td>THORLABS</td><td>FL441.6-10</td><td></td></tr><tr><td>550 nm Bandpass Filter</td><td>THORLABS</td><td>FB550-10</td><td></td></tr><tr><td>670 nm Bandpass Filter</td><td>THORLABS</td><td>FB670-10</td><td></td></tr><tr><td>810 nm Bandpass Filter</td><td>THORLABS</td><td>FB810-10e</td><td></td></tr><tr><td>Unmounted &Oslash;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.1)</td><td>THORLABS</td><td>NE01B</td><td></td></tr><tr><td>Unmounted &Oslash;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.2)</td><td>THORLABS</td><td>NE02B</td><td></td></tr><tr><td>Unmounted &Oslash;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.3)</td><td>THORLABS</td><td>NE03B</td><td></td></tr><tr><td>Unmounted &Oslash;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.5)</td><td>THORLABS</td><td>NE05B</td><td></td></tr><tr><td>Unmounted &Oslash;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.6)</td><td>THORLABS</td><td>NE06B</td><td></td></tr><tr><td>Unmounted &Oslash;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (1.0)</td><td>THORLABS</td><td>NE10B</td><td></td></tr></tbody></table>

methode voor de evaluatie van de effecten van een golflengtebereik en intensiteiten van rood / nabij-infrarood lichttherapie op oxidatieve stress in vitro

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Rood / nabij-infrarood licht therapie (R / NIR-LT), laser of licht emitterende diode (LED) afgeleverd, verbetert de functionele en morfologische resultaten bij verschillende centraal zenuwstelsel letsels in vivo, waarschijnlijk door het verminderen van oxidatieve stress. Echter, zijn effecten van R / NIR-LT op oxidatieve stress is aangetoond variëren naargelang de golflengte of sterkte van de straling. Studies behandeling parameters te vergelijken ontbreken, door het ontbreken van commercieel beschikbare apparaten die meerdere golflengtes of intensiteiten, geschikt voor high-throughput in vitro optimalisatie studies leveren. Dit protocol beschrijft een techniek voor de levering van licht bij verschillende golflengten en intensiteiten therapeutische doses die voor een bepaalde traumamodel optimaliseren. Onze hypothese was dat een werkwijze voor het afgeven licht, waarbij golflengte en intensiteit parameters eenvoudig kunnen worden veranderd, kan bepaling van een optimale dosis van R / NIR-LT voor het verminderen reactieve zuurstof species bevorderen(ROS) in vitro. Niet-coherente Xenon licht werd gefilterd door smalband interferentie filters aan variërende golflengten (centrum golflengtes van 440, 550, 670 en 810nm) en invloeden te leveren (8,5 x 10 -3 tot 3,8 x 10 -1 J / cm2) van het licht gekweekte cellen. Lichtopbrengst van het apparaat werd gekalibreerd om therapeutisch relevante, gelijk quantale doses van licht uitzenden bij elke golflengte. Reactieve soorten werden gedetecteerd in glutamaat gewezen cellen behandeld met het licht, met DCFH-DA en H 2 O 2 fluorescente kleurstoffen. We succesvol afgeleverd licht bij diverse fysiologisch en therapeutisch relevante golflengten en intensiteiten gekweekte cellen blootgesteld aan glutamaat als een model van CNS letsel. Hoewel de invloeden van R / NIR-LT gebruikt in de onderhavige studie geen effect op ROS geproduceerd door de gekweekte cellen te oefenen, de wijze van licht levering voor andere systEMS waaronder geïsoleerde mitochondria of meer fysiologisch relevante organotypische slice cultuur modellen, en kan worden gebruikt om effecten op verschillende uitkomstmaten van oxidatief metabolisme te beoordelen.

De lichtopbrengst afgegeven bij een golflengte van 670 nm werd gekalibreerd met grijsfilters om cellen te bestralen met verschillende invloeden omvat een dosis van 670 nm licht eerder gebleken bij vivo (0,3 J / cm2) 20 zijn. Aangezien het aantal grijsfilters voor de lichtbron vergroot, de intensiteit (W / m2) verlaagd, waardoor minder licht door te geven aan het doelgebied. Tabel 1 presenteert de kalibratiegegevens van 670 nm licht gegenereerd door de lichtbron voorzien van een golflengtef...

Niet-coherent xenonlicht werd door smalbandige interferentie en neutrale dichtheidsfilters geleid om licht met verschillende golflengten en intensiteit aan gekweekte cellen te leveren. Dit protocol werd gebruikt om de effecten van rood/nabij-infrarood lichttherapie op de productie van reactieve soorten in vitro te beoordelen: er werden geen effecten waargenomen met de geteste parameters.

Methode voor de evaluatie van de effecten van een golflengtebereik en intensiteiten van Rood / nabij-infrarood Lichttherapie op oxidatieve stress In Vitro

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

Het algemene doel van de volgende procedure is om de effecten van een reeks golflengten en intensiteiten van rood nabij infrarood lichttherapie op oxidatieve stress in vitro te beoordelen. Om dit te doen, hebben we een nieuwe methode ontwikkeld om het licht te leveren waarbij we de golflengte en geleverde intensiteit kunnen manipuleren. We monteren een xenon- of breedbandlichtbron in een behuizing op een metalen basis en plaatsen vervolgens een coatinglens, waterfilter en toegangsopening voor de lichtbron.De volgende stap van de procedure is om het licht dat wordt gegenereerd door de breedbandlichtbron door de toegang, opening en vloeibare lichtgeleider te leiden en door een tweede coatinglens. Vervolgens worden bandbreedte- en neutrale dichtheidsfilters geplaatst om de gewenste golflengte en intensiteit van het licht te verkrijgen. Merk op dat de filters doorgang toestaan van een smal bereik van golflengten, ook wel een golfband genoemd.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden voor de levering van rood nabij infrarood lichttherapie, zoals LED's of lasers, is dat het nauwkeurige en gekalibreerde manipulatie van golflengte- en intensiteitsparameters mogelijk maakt. Dit stelt ons in staat om de levering van het licht te optimaliseren voor de beste biologische resultaten. De huidige studie past dit toe op gedissocieerde cellen. Bovendien kan het ook worden toegepast op andere systemen zoals organotypische modellen van neurotrauma.Wanneer u met een Bright breedbandlichtbron werkt, zorg er dan voor dat u niet direct in de lichtbron kijkt, omdat dit permanente visuele schade kan veroorzaken. Om het lichtleveringsapparaat voor te bereiden, sluit u een breedbandlichtbron zoals een xenon- of gloeilamp aan op een geschikte voeding. Plaats een collimatorlens voor de lichtbron om een gecollimeerde lichtbundel te produceren.Laat het licht door een vloeibare hittefilter gaan om het grootste deel van de hitte uit de lichtbundel te verwijderen. Plaats een collimatorlens voor de lichtbron om een gecollimeerde lichtbundel te produceren. Laat het licht door een vloeibare hittefilter gaan om het grootste deel van de hitte uit de lichtbundel te verwijderen.Afhankelijk van de toepassing, focus de gecollimeerde straal op de toegangsopening van een vloeibare lichtgeleider om een meer flexibele levering van het licht mogelijk te maken. Aan de andere kant van de vloeibare lichtgeleider plaatst u een tweede coatinglens en vervolgens een houder voor de interferentie- en neutrale dichtheidsfilters. Deze opstelling moet een gelijkmatig verlichte lichtvlek van de gewenste golfband en intensiteit produceren.De afstand tussen het uiteinde van de lichtgeleider en het vlak van het monster kan variëren, afhankelijk van het gebied dat moet worden verlicht. Het is belangrijk om te onthouden dat volgens de inverse kwadratenwet, naarmate de afstand van het uiteinde van de lichtgeleider toeneemt, de lichtintensiteit in de huidige studie zal afnemen. Deze afstand is 14 centimeter, wat resulteert in de productie van een straaldoorsnede die een oppervlakte van drie bij drie putjes op een 96-putjes weefselkweekplaat gelijkmatig verlicht.Zorg ervoor dat strooilicht van de lamp en bijbehorende optische componenten niet andere monsters kan bereiken, bijvoorbeeld door zwart karton te gebruiken. Zodra het apparaat is geconstrueerd, zet u de waterkoeler voor het vloeibare hittefilter aan en zorg ervoor dat er een wateruitwisseling plaatsvindt door de filtermantel. Zet de lampvoeding aan en wacht minimaal vijf minuten voor de breedbandlichtbron.Om te stabiliseren, selecteert u een smalbandinterferentiefilter om de gewenste golfband van verlichting te genereren. Meet het licht geproduceerd door de lamp op het vlak waar het monster moet worden geplaatst. Tijdens de behandeling.Licht wordt gemeten met behulp van een gekalibreerd stralingsintensiteitssonde verbonden met een geschikte spectra.Radiometer. Gebruik neutrale dichtheidsfilters om de lichtintensiteit aan te passen totdat de gewenste output is verkregen. In de huidige studie wordt de intensiteit van het licht dat door elke interferentiefilter wordt doorgelaten aangepast om een gelijke kwaliteit output te geven bij elk van de vier behandelingsgolfbanden.De beschreven methode voor de levering van rood nabij infrarood lichttherapie kan worden toegepast op elk celtype of in vitro modelsysteem. Hier tonen we onze techniek voor de levering van licht aan cellen met behulp van feochromocytoma of PC 12 cellen. Als voorbeeld, kweek cellen in groeimedium.In 96 putjes met trays gecoat met polyol lysine tot ze 70 tot 80%confluent zijn. Bereid de gewenste concentratie glutamaat of alternatieve stressor in volledige groeicultuurmedia. Hier gebruiken we 10 millimolair glutamaat.Verwijder media uit de cellen en was ze voorzichtig drie keer met fosfaatbufferoplossing. Na het wassen, voeg glutamaatbevattend media toe tot een totaal volume van honderd microliter per putje. Onmiddellijk na toevoeging van glutamaat of de gekozen stressor, stelt u cellen bloot aan lichtbehandeling op de gewenste golflengten en intensiteiten door de kweekplaat onder het voorbereide lichtleveringsapparaat te plaatsen.Zorg ervoor dat u de kwaliteit van de lichtstraal aanpast met behulp van de vastgestelde combinaties van neutrale dichtheidsfilters. Afhankelijk van de golflengte die wordt toegediend. Na voltooiing van de lichtbehandeling, plaats de cellen op een vlak oppervlak en incubeer ze gedurende 24 uur bij 37 graden Celsius in door koolstofdioxide gereguleerde omstandigheden.Aanvullende doses rood nabij infrarood lichttherapie kunnen ook worden toegediend. Voordat u de laatste ronde van lichtbehandeling uitvoert, bereidt u de reagentia voor die zullen worden gebruikt voor de detectie van reactieve zuurstofsoorten als indicator van oxidatieve stress. Hier gebruiken we aangegeven diëten die fluoresceren wanneer ze reageren met een reeks reactieve soorten, inclusief dilu, fluoresceïne D acetaat, breng lichtbehandeling toe aan de cellen zoals beschreven in stap vier, zorg ervoor dat de cellen worden behandeld met de gewenste flus en golflengten van licht.Onmiddellijk na lichtbehandeling, verwijder het glutamaat bevattende media en was twee keer met PBS. Ga verder met de assays met behulp van indicatorkleur

method-for-assessment-effects-range-wavelengths-intensities-rednear

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This video describes the technique of visualizing oxidative stress in cultured organoids. This work helps in understanding the level of oxidative stress due to ROS accumulation in the various cell types present in an organoid after treatment with different ROS modulators.

Fluorescent Probe Imaging Assay: A Technique to Visualize Oxidative Stress in the Reactive Oxygen Species Inducer-Treated Cultured Intestinal Organoid Cells

This video demonstrates the thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) assay to assess oxidative stress in biological samples.

Thiobarbituric Acid-Reactive Substances Assay to Assess Oxidative Stress in Human Serum

This video demonstrates a spot plate assay tailored to assess the oxidative stress responses of bacterial strains. Some strains produce pyomelanin, an antioxidant pigment. Conversely, strains treated with a test agent, leading to reduced pyomelanin production, exhibit increased susceptibility to oxidative stress, resulting in decreased cell viability compared to pyomelanin-producing strains.

A Spot Plate Assay for Evaluating Oxidative Stress Responses in Bacterial Strains

We presenteren een diffuse optische spectroscopische (DOS) aanpak die kwantitatieve optische biomarkers levert van de huidrespons op straling. We beschrijven het ontwerp van DOS-instrumentatie, algoritmen voor het extraheren van optische parameters en de procedure voor het hanteren van dieren die nodig zijn om representatieve gegevens op te leveren vanuit een preklinisch muismodel van door straling veroorzaakt erythema.

Diffuse optische spectroscopie voor de kwantitatieve beoordeling van Acute ioniserende straling veroorzaakte Huidtoxiciteit Met behulp van een muismodel

Dit manuscript beschrijft het gebruik van genetisch-gecodeerde fluorogenic verslaggevers in een toepassing voor live-cel imaging voor de behandeling van xenobioticum-geïnduceerde oxidatieve stress. Deze experimentele aanpak biedt ongeëvenaarde Spatio resolutie, gevoeligheid en specificiteit terwijl het vermijden van veel van de tekortkomingen van conventionele methoden voor de detectie van toxicologische oxidatieve stress.

Imaging benaderingen van evaluaties van toxicologische oxidatieve Stress met behulp van genetisch-gecodeerde Fluorogenic sensoren

Een niet-invasieve in vivo imaging protocol dat is gestroomlijnd en kosteneffectieve, beschrijven we met behulp van L-012, een chemiluminescentie luminol-analoog, om te visualiseren en te kwantificeren van reactieve zuurstof soorten (ROS) gegenereerd in een excisional wond muismodel.

In Vivo Beeldvorming van reactieve zuurstof soorten in een RattenUitrustingen wond Model

Hier presenteren we een protocol om de totale cellulaire reactieve zuurstofsoorten (ROS) te detecteren met behulp van 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetaat (DCFH-DA). Deze methode kan cellulaire ROS lokalisatie visualiseren in aanhangende cellen met een fluorescentiemicroscoop en ros intensiteit kwantificeren met een fluorescentieplaatlezer. Dit protocol is eenvoudig, efficiënt en kosteneffectief.

Detectie van totale reactieve zuurstofsoorten in aanhangende cellen door 2',7'-Dichloododihydrofluorescein Diacetate Kleuring

Dit protocol beschrijft de beoordeling van de subcellulaire compartimentspecifieke redox-status in de cel. Een redoxgevoelige fluorescerende sonde maakt een handige ratiometrische analyse in intacte cellen mogelijk.

Beoordeling van cellulaire oxidatie met behulp van een subcellulair compartiment-specifieke Redox-gevoelige groene fluorescerende eiwitten

Dit protocol beschrijft een nieuwe methode om intracellulaire reactieve zuurstofsoorten (ROS) te kwantificeren met behulp van dihydroethidium (DHE) als fluorescentiekleurstofsonde met behulp van een high-throughput screeningbenadering. Het protocol beschrijft de methoden voor kwantitatieve beoordeling van intracellulaire reactieve zuurstofsoorten (ROS) in de drie verschillende hepatocellulaire carcinoomcellijnen.

High Throughput Screening Assessment van het genereren van reactieve zuurstofsoorten (ROS) met behulp van dihydroethidium (DHE) fluorescentiekleurstof

Kwantificering van zowel geoxideerde als gereduceerde vormen van glutathion (respectievelijk GSSG en GSH) is bereikt door het gebruik van orthoftalaldehyde (OPA). OPA wordt sterk fluorescerend zodra het is geconjugeerd met GSH, maar kan GSSG niet conjugeren totdat het is verminderd. Hier beschrijven we een multiparametrische test om beide te kwantificeren met behulp van eiwitkwantificering voor normalisatie.

Snelle kwantificering van geoxideerde en gereduceerde vormen van glutathion met behulp van orthoftalaldehyde in gekweekte zoogdiercellen in vitro

Leer een methode voor lichttherapie met xenonbron en filters om golflengte en intensiteit nauwkeurig te regelen. Dit helpt onderzoekers oxidatieve stress in gekweekte cellen te bestuderen.

Methode voor de evaluatie van de effecten van een golflengtebereik en intensiteiten van Rood / nabij-infrarood Lichttherapie op oxidatieve stress In Vitro (Video) | JoVE Journal

Methode voor de evaluatie van de effecten van een golflengtebereik en intensiteiten van Rood / nabij-infrarood Lichttherapie op oxidatieve stress In Vitro

Meer video's verkennen