Name: Nutrient verordening door continue toevoer voor grootschalige uitbreiding van zoogdiercellen in sferoïden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: Leer continue groei-gereguleerde voeding voor grootschalige zoogdiercelcultuur in sferoïden. Deze methode verbetert groeisnelheden en zorgt voor uniforme verdeling van voedingsstoffen en gassen in geroerde suspensiebioreactoren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs bedanken Michael Garwood en Sam Stein voor hun nuttige opmerkingen, en Kristen M. Maynard voor de hulp bij de voorbereiding van het manuscript.

De auteurs hebben niets te onthullen.

Genereren van zoogdiercellen voor de productie van biologische agentia en celtherapie vereist cultuur en bewaking van zoogdiercellen in grote 55-58. Verder zijn deze toepassingen vereisen gedefinieerd en gevalideerd kweekomstandigheden. Gewoon verhoging van cellen met behulp onderzoekstechnologieën niet al deze eisen voldoen. Handmatige medium veranderingen veroorzaken schommelingen in voedingsstoffen en ophoping van afvalstoffen te verminderen cel kwaliteit, leefbaarheid en de opbrengst...

Om grote aantallen levensvatbare en functionele humane cellen voor transplantatie genereren regeling van de kweekomstandigheden is noodzakelijk. Uitputting van voedingsstoffen, samen met de opbouw van metabole afval zijn belangrijke bijdrage aan de veroudering en metabole veranderingen die de kwaliteit van de cel product 1 te verminderen - 3. Deze procedure wordt een methode om niercellenkweek zoogdieren in sferoïden met een geroerde bioreactor gecombineerd met een aangepaste snelheid perfusie toevoersysteem om glucose in een fysiologisch bereik 4 regelt de duur van de kweek. Ten behoeve van deze onderzoeken, werd het fysiologische bereik gedefinieerd tussen 100 en 200 mg / dl. Dezelfde werkwijzen kunnen worden gebruikt om andere voedingsstoffen en metabole afvalstoffen zoals lactaat reguleren. Statische kweken in kleine hoeveelheden (1-30 ml) worden gewoonlijk gebruikt in de laboratorium omgeving te onderhouden en te differentiëren cellijnen experimental doeleinden. Cel passage wordt uitgevoerd met volledig medium gewenste wijzigingen regelmatig. Meest &quot;klassieke&quot; kweekmedium heeft een hoge glucoseconcentratie (450 mg / dl voor DMEM die in deze studies) om minder frequent mediumveranderingen zonder het risico van nutriënten beperkingen. Echter, deze batch-feeding werkwijze vereist nog steeds frequent manipulatie introduceert variabiliteit in de celomgeving, en verhoogt het risico van besmetting 5-9. Geroerde suspensie bioreactoren (SSB) zorgen voor een betere menging en verminderde de behandeling van 3,10 - 20, maar net als statische culturen, vereisen handmatige medium veranderingen die bijdragen aan potentieel schadelijke schommelingen in de voedings- en afvalproduct niveaus. Perfusie voederen van SSB culturen vermindert deze problemen door continue infusie en verwijdering van medium, maar grote veranderingen in nutriënten als gevolg van de celgroei een probleem blijven. Het gebruik van een aangepaste voeding rate uit berekeningen van nutriënten gebruik op basis van geschatte cel eisen kan de stabiele cel milieu nodig is om levensvatbaarheid van de cellen te optimaliseren te bieden en te functioneren 21-24. Er is een grote hoeveelheid literatuur beschrijft werkwijzen voor schaalbare SSB kweken van zoogdiercellen specifiek voor kweek en groei van pluripotente cellen 25 - 32, met andere gericht op islet (beta) cellen 17,33,34 of productie van biologische producten 24, 35-38. Veel van deze onderzochte celtypen kunnen worden gekweekt in bolvormige culturen en specifieke procedures voor het celtype wordt gebruikt, moet voorafgaand aan de uitvoering van een continue toevoer systeem worden geoptimaliseerd. In deze demonstratie, werd een perfusie voederen methode die wordt gebruikt om een beta cellijn gegroeid als bolletjes in een geroerde bioreactor 39 uit te breiden - 43. De werkwijze hierin beschreven is, eeneenvoudige uitvoering van het voeden van tariefaanpassingen gebaseerd op off-line glucose metingen om gerichte cultuur omstandigheden te bereiken. Aanpassen van de voeding met deze methode om handhaven van een fysiologische glucose-niveau wordt aangetoond dat het verhoogt cel opbrengsten. Zoogdiercellen afhankelijk van een belangrijke voedingsstof, glucose, energieproductie, zodat het gebruik van deze cellijn is een voorbeeld voor veel gekweekte zoogdiercellen 44. Bovendien is deze lijn een voorbeeld van de verdere complexiteit van beta-cellen, die gevoelig zijn voor chronische hoge glucose 45 zijn. Voor deze studie werden β-TC6 cellen mogen sferoïden in de cultuur te vormen om de gemiddelde grootte van de eilandjes van Langerhans in vivo benaderen. De perfusie bioreactorsysteem 17 - 19,21,46 met een voeding aangepast aan het verbruik glucose, resulteerde in het handhaven van fysiologische omstandigheden en hogere opbrengsten cel zonder veranderingen in de levensvatbaarheid.

<table><tbody><tr><td>&#946; TC-6 Cellen</td><td>ATCC, Manassas, VA</td><td>CRL-11506</td><td>Muis Insulinoom cellijn (adhesief celtype)</td></tr><tr><td>DPBS Zonder Ca, Zonder Mg</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>14190-144</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/14190144?ICID=search-14190144">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/14190144?ICID=search-14190144</a></td></tr><tr><td>Dulbecco's Aangepast Eagles Medium</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td></td><td>Zie hieronder voor productnummers&nbsp;</td></tr><tr><td>DMEM Hoog Glucose (500 mM)</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>11965-092</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11965092">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11965092</a></td></tr><tr><td>DMEM Laag Glucose (100 mM)</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>11885-084</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11885084%20(note%20that%20this%20medium%20already%20contains%20pyruvate)">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11885084 (let op dat dit medium al pyruvaat bevat)</a></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>25030081</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25030081?ICID=search-product">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25030081?ICID=search-product</a></td></tr><tr><td>Natrium Pyruvaat</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>11360070</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11360070?ICID=search-product">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11360070?ICID=search-product</a></td></tr><tr><td>Hitte Geïnactiveerd Porcine Serum</td><td>Gibco - Life Technologies</td><td>10082147</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/10082147">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/10082147</a></td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>25200056</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25200056?ICID=search-product">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25200056?ICID=search-product</a></td></tr><tr><td>T-150 Weefselcultuur Behandelde Flessen</td><td>Corning, Corning, NY</td><td>430825</td><td>http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=430825(Lifesciences) &amp;categoryname=</td></tr><tr><td>NuAire Celcultuur incubator</td><td>Princeton, MN</td><td></td><td>US Autoflow. Elke watermantel CO2 regulerende celcultuur incubator kan worden gebruikt.</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td></td><td></td><td>Sorvall RT 7 (Elke vergelijkbare tafelcentrifuge mag worden gebruikt)</td></tr><tr><td>Koelkast</td><td></td><td></td><td>Elke laboratoriumkoelkast kan worden gebruikt (een kleine tafelversie werd gebruikt voor deze studies)</td></tr><tr><td>1 L Glazen Fles</td><td>Corning, Corning, NY</td><td>1395-1L</td><td>Elke leverancier kan worden gebruikt. http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=1395-1L(Lifesciences) &amp;categoryname=</td></tr><tr><td>2 L Glazen Fles</td><td>Corning, Corning, NY</td><td>1395-2L</td><td>Elke leverancier kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>250 ml geroerde bioreactoren&nbsp;</td><td>Corning, Corning, NY</td><td>4500-250</td><td>http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=4500-250(Lifesciences) &amp;categoryname=</td></tr><tr><td>Rolplaat</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-496-104A</td><td>Elke incubatorveilige roerplaat kan worden gebruikt, elke leverancier</td></tr><tr><td>Weefselcultuur Schotels 100 mm Diameter</td><td>Nunc, Rochester, NY (Fisher Scientific)</td><td>1256598&nbsp;</td><td>Elke leverancier kan worden gebruikt (besteld via Fisher Sci)</td></tr><tr><td>FALCON 50 ml Conische Buizen</td><td>Falcon, San Jose, CA</td><td>1256598</td><td>Elke leverancier kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>Delran Plastic Gebruikt voor Aangepaste Onderdelen</td><td>McMaster Carr</td><td>Various</td><td>Elk materiaal naar keuze kan worden gebruikt, maar Deran is gekozen omdat het autoclaafveilig, niet-reactief en gemakkelijk te bewerken is. http://www.mcmaster.com/#acetal-homopolymer-sheets/=rjrcac</td></tr><tr><td>Roestvrijstalen Pijp voor aangepaste deksels</td><td>McMaster Carr</td><td>Various</td><td>Elke leverancier kan worden gebruikt. http://www.mcmaster.com/#standard-stainless-steel-tubing/=rjrd91</td></tr><tr><td>Aangepaste Gemodificeerde Delran Bioreactor Deksels voor Continue Voeding</td><td>Op maat gemaakt</td><td></td><td>Niet op de hoogte van leveranciers die een soortgelijk product produceren</td></tr><tr><td>Aangepaste Gemodificeerde Glazen Fles Deksels voor Continue Voeding</td><td>Op maat gemaakt</td><td></td><td>Sommige leveranciers (bijv., Fischer Sci, Corning) maken vergelijkbare producten in de onderstaande links.</td></tr><tr><td>Masterflex Digitale Peristaltische Pomp</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>EW-77919-25</td><td>Elke nauwkeurige peristaltische pomp kan worden gebruikt. http://www.coleparmer.com/Product/L_S_Eight_Channel_Four_Roller_ Cartridge_Pump_System_115_230 _VAC/EW-77919-25</td></tr><tr><td>PVDF Slangverbinders (diverse)</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>zie link</td><td>Elke leverancier kan worden gebruikt. http://www.coleparmer.com/Category/Cole_Parmer_PVDF_Premium _Luer_Fittings/55889</td></tr><tr><td>Pharmed BPT Slang L/S 16</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>WU-06508-16</td><td>Elke leverancier kan worden gebruikt. http://www.coleparmer.com/Product/Masterflex_PharMed_BPT_Tubing _L_S_13_25/WU-06508-16</td></tr><tr><td>Pharmed B

nutrient verordening door continue toevoer voor grootschalige uitbreiding van zoogdiercellen in sferoïden

Nutrient Regulation by Continuous Feeding for Large-scale Expansion of Mammalian Cells in Spheroids

In deze demonstratie werden sfëroïden gevormd uit de β-TC6 insulinoomcellijn gekweekt als een model voor de productie van een zoogdier-eilandcelproduct om aan te tonen hoe het reguleren van nutriëntniveaus de celopbrengsten kan verbeteren. In eerdere studies bevorderden bioreactoren verhoogde kweekvolumes ten opzichte van statische culturen, maar er werd geen toename in celopbrengsten waargenomen. Beperkingen in belangrijke nutriënten zoals glucose, die tussen batchvoedingen werden geconsumeerd, kunnen leiden tot beperkingen in celexpansie. Grote schommelingen in glucoseniveaus werden waargenomen, ondanks de toename van glucoseconcentraties in het medium. Het gebruik van continue voedingssystemen elimineerde schommelingen in glucoseniveaus en verbeterde de celgroeisnelheden in vergelijking met batch-gevoede statische en SSB-kweekmethoden. Extra toenames in groeisnelheden werden waargenomen door de voedingssnelheid aan te passen op basis van berekende nutriëntenconsumptie, wat het mogelijk maakte om fysiologische glucose gedurende drie weken in cultuur te handhaven. Deze methode kan ook worden aangepast voor andere celtypen.

Medium Glucose Levels en schommelingen beperken celexpansie in Standard SSB Cultures Glucose niveaus fluctueren in statische culturen en SSB culturen over de hele kweekperiode 3. Deze fluctuaties intensiveren met toenemend aantal cellen tijdens de 21-daagse kweekperiode en was bijna identiek in zowel statische als SSB culturen. Deze waarnemingen worden gepresenteerd in onze vorige publicatie 3. De glucose kan super-fysiologische voor de duur van de kwee...

Voedingsregulatie met behulp van continu aangepaste groeivoeding verbetert de groeisnelheid van zoogdiercelsferoïden in vergelijking met intermitterende batchvoeding voor culturen in geroerde suspensiebioreactoren. Deze studie toont de methoden die nodig zijn voor het vestigen van eenvoudige aangepaste voedingsculturen.

Nutrient verordening door continue toevoer voor grootschalige uitbreiding van zoogdiercellen in sferoïden

In this demonstration, spheroids formed from the &#946;-TC6 insulinoma cell line were cultured as a model of manufacturing a mammalian islet cell product ...

Het algemene doel van dit proces is om een groot aantal cellen onder gecontroleerde voedingsomstandigheden te kweken. Gebruik conventioneel apparatuur die in een celkweeklaboratorium te vinden is. De bijbehorende algoritmen maken het mogelijk om voedingsstoffen binnen experimentele bereiken te beheersen en te manipuleren.Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen voor grootschalige celkweektoepassingen. Zoals humane cellulaire therapieën. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het de kweek van cellen op grote schaal met een uniforme verdeling van voedingsstoffen en gassen mogelijk maakt.Dit maakt hogere celdichtheden mogelijk dan statische of bulk gevoede celculturen, verhoogt de opbrengst en vermindert celverlies. Dit kan worden gedaan met apparatuur die gebruikelijk is in de meeste celkweeklaboratoria. Visuele demonstratie van deze methode kan nuttig zijn voor nieuwe onderzoekers, aangezien deze technieken moeilijk te beheersen zijn, vanwege het grote aantal stappen dat in een specifieke volgorde onder steriele omstandigheden moet worden uitgevoerd.Verzamel de vijf primaire componenten die nodig zijn voor het voedingssysteem. Een mediumreservoir, peristaltische pomp, geroerde bioreactor, afvalreservoir en op maat ontworpen slangenmonsterset. Maak het mediumreservoir aan met behulp van een glazen fles van één liter.Het afvalreservoir met een glazen fles van twee liter. De geroerde bioreactor met een glazen reactor van 250 ml volume. Gebruik een digitale peristaltische pomp, of een vergelijkbare pomp met een achtkanaals pompkop om de mediumuitwisseling te regelen.Monteer de reservoirs en gemodificeerde bioreactordeksels van hard en autoclaveerbaar plastic. Met doorlaatpoorten van roestvrij staal om ventilatie te bieden door steriele filters en om mediumoverdracht tussen reservoirs en bioreactoren mogelijk te maken. Bevestig een uitlaatbuis gemaakt van poreuze glazen beluchtingsbuizen aan het gemodificeerde geroerde suspensiebioreactordeksel.Monteer autoclaveerbare perfusieslangensets uit polyvinylideenfluoride slangverbindingen en duurzame peristaltische pompslangen. De lengte van het sectie is afhankelijk van de afstand tussen de verschillende componenten. Monteer de voedingslijn met behulp van twee slangdiameters.Gebruik L/S 14 voor de primaire slang die de afstand van de bioreactor tot het mediumreservoir zal overbruggen. Voeg een korte lengte L/S 13 slang in het midden van de slanglengte toe voor de pompsectie, met behulp van de juiste PVDF-adapters. Gebruik standaard PVDF slangklemadapters om twee stukken L/S 14 slang aan beide zijden van de kortere pompsectieslang te verbinden.Monteer de sectieslangsectie voor afvalverwijdering met behulp van een grotere diameter L/S 16 slang, en voeg een korte sectie L/S 14 slang in het midden in voor de pompsectie. Dit gebeurt op dezelfde manier als de montage van de voedingslijn met behulp van PVDF slangklemadapters. Monteer het laatste onderdeel van de slangenset door de set te construeren uit drie korte L/S 14 slanglengten.Verbind deze met een T-type HVDF-connector en twee kleine slangklemmen op twee van de slanglengten. Verbind de monsterassemblage met de roestvrijstalen monsterstekker die op het deksel van de bioreactor is bevestigd. Na sterilisatie wordt een steriele gasfilter aan een van de geklemde lengten bevestigd voor gasafvoer.De andere wordt gebruikt voor aansluiting op een steriele monsterspuit. Autoclaveer de monstersassemblage terwijl deze is aangesloten op de bioreactor, voorafgaand aan het begin van het experiment zoals beschreven in het tekstprotocol. Gebruik deze assemblage om steriele monsters uit de bioreactor te verzamelen zoals nodig is, zonder het continue voedingsproces te verstoren.Bevestig steriele ventilatie aan de juiste locaties op de deksels van de spinnerfles, het mediumvat, afvalvaten en monstersteekpunten. Kweek en oogst de cellen zoals beschreven in het tekstprotocol. Laat de cellen twee tot drie minuten in trypsine bij kamertemperatuur incuberen in een bioveiligheidskast en verzamel ze vervolgens in een conische buis.Een kleine celmonster wordt vervolgens verzameld en gekleurd met trypanblauw. Tel de celdichtheid met behulp van een microscoop en standaard hemocytometer met trypanblauwkleuring zoals beschreven in het tekstprotocol. Voeg het gewenste aantal totale cellen toe aan steriele geroerde suspensiebioreactoren voor elke conditie.Voeg het medium toe aan de geroerde suspensiebioreactor met behulp van een pipet om het gewenste totale kweekvolume te bereiken. Verplaats de geroerde suspensiebioreactor met cellen naar een roerplaat in een celkweekincubator. Kweek cellen in de bioreactoren zonder voeding gedurende drie dagen bij 37 graden Celsius, met 5% koolstofdioxide, 100% relatieve vochtigheid en een roersnelheid van 70 rpm om sferoïden te laten vormen.Na de vorming van sferoïden verwijdert u de geroerde suspensiebioreactor uit de incubator. Monteer de componenten voor het continue voedingssysteem in een biologische veiligheidskast. Vul eerst een vers mediumreservoir met het gewenste kweekmedium en verbind dit vervolgens aan een zijde van de voedingslijn.Zorg er ook voor dat het verse mediumreservoir goed is geventileerd met een steriele filter. Een steriele filter moet worden vervangen op de inlaatpoort van de bioreactor om het medium te filteren voordat het de bioreactor binnenkomt. Verbind de afvoerlijn met het mediumafvalreservoir en zorg ervoor dat het afvalreservoir goed is geventileerd met een steriele filter.Plaats de geroerde suspensiebioreactor op de roerplaat in de incubator met behulp van dezelfde kweekparameters als voor sferoïdevorming. Plaats het verse mediumreservoir in een nabijgelegen mini-koelkast. Zorg ervoor dat de voedingslijnen de koelkast kunnen verlaten zonder dat de deuren niet kunnen worden gesloten.Het is ook van cruciaal belang dat de voedingslijnen niet worden dichtgeklemd door de deuren van de koelkast of de incubator. Het afvalmediumreservoir kan buiten de incubator op het laboratoriumblad worden geplaatst op een geschikte locatie. Leidt de resterende slanguiteinden naar de incubator en verbind de voedingslijn met de filter op de inlaatpoor

nutrient-regulation-continuous-feeding-for-large-scale-expansion

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Spheroids are a type of 3D cell culture model used to more accurately represent a cell’s environment compared to 2D cell culture monolayer models. In the example protocol, we will see scientists generate spheroids from a colorectal cancer cell line and apply live-cell imaging to track the spheroids’ growth.

Spheroid Generation from Cell Lines: A Three-Dimensional (3D) Cell Culture Method

We introduceren een protocol voor het aanleggen van grote aantallen (duizenden tot honderdduizenden) van gelijke grootte-en-samenstelling gecontroleerde bolvormige tumoren, met behulp van in de handel verkrijgbare microputjesplaten.

De productie van grote aantallen grote gecontroleerde bolvormige tumoren met behulp microputjesplaten

Hier beschrijven we een snel en flexibel protocol voor de vorming van 3D-celsferoïden door celaggregatie. Dit is gemakkelijk aanpasbaar voor meerdere celtypen en is geschikt voor gebruik in een verscheidenheid aan toepassingen, waaronder celmigratie, invasie of anoikis-assays, en voor het visualiseren en kwantificeren van cel-matrix interacties.

Een efficiënt en flexibel Cel aggregatie voor 3D Sferoïde Production

Hier beschrijven we een methode voor het genereren van driedimensionale sferoïde culturen van menselijke nasale epitheliale cellen. Spheroïden worden dan gestimuleerd naar station Cystic Fibrosis Transmembrane huidgeleiding Regulator (CFTR)-afhankelijk van de ion en vloeistof secretie, kwantificeren van de verandering in de sferoïde luminal grootte als een proxy voor CFTR-functie.

Generatie van menselijke nasale epitheliale cel spheroïden voor geïndividualiseerde Cystic Fibrosis Transmembrane huidgeleiding Regulator studie

We presenteren hier een methode die het gebruik van chemische epigenetische wissing combineert met mechanosensing-gerelateerde signalen om efficiënt pluripotente cellen van zoogdieren te genereren, zonder de noodzaak van gentransfectie of retrovirale vectoren. Deze strategie is daarom veelbelovend voor translationele geneeskunde en vertegenwoordigt een opmerkelijke vooruitgang in stamcelorganoïde technologie.

Een strategie in twee stappen die epigenetische modificatie en biomechanische signalen combineert om pluripotente cellen van zoogdieren te genereren

Dit protocol presenteert een nieuw, robuust en reproduceerbaar kweeksysteem om driedimensionale sferoïden uit Caco2 colon adenocarcinoomcellen te genereren en te laten groeien. De resultaten vormen de eerste proof-of-concept voor de geschiktheid van deze aanpak om kankerstamcelbiologie te bestuderen, inclusief de respons op chemotherapie.

Een driedimensionaal model van sferoïden om stamcellen van darmkanker te bestuderen

Deze protocollen zullen gebruikers helpen bij het onderzoeken van mitochondriaal energiemetabolisme in 3D-kankercellijn-afgeleide sferoïden met behulp van Seahorse extracellulaire fluxanalyse.

Onderzoek naar mitochondriaal energiemetabolisme van enkelvoudige 3D-microtissue-sferoïden met behulp van extracellulaire fluxanalyse

Dit protocol beschrijft een methode voor de productie van drie verschillende soorten sferoïden op een manier die ze geschikt maakt voor grootschalige screening en analyse met een hoog gehalte. Daarnaast worden voorbeelden gepresenteerd die laten zien hoe ze kunnen worden geanalyseerd op sferoïde en individuele celniveaus.

Een robuuste methode voor de grootschalige productie van sferoïden voor screening- en analysetoepassingen met een hoog gehalte

We presenteren een protocol voor het kweken van hoogreproduceerbare sferoïden en hun fenotypische karakterisering met behulp van beeldopname en proteomics.

Semi-geautomatiseerde fenotypische analyse van functionele 3D-sferoïde celculturen

Organoïden revolutioneren gepersonaliseerde weefselmodellering voor orgaanontwikkeling, medicijnontdekking en ziekteonderzoek. De voortgang in organoïdengineering leidt tot het creëren van ingewikkelde synthetische weefsels. Het doel is om morfogenese, assembloïdtechnologie en biomatrices te integreren om weefselengineering te bevorderen. Dit protocol helpt bij het modelleren van leverorganogenese en het vaststellen van richtlijnen voor de constructie van synthetisch weefsel.

In Vitro Cultuurtechnieken voor het Modelleren van Lever Organogenese, het Bouwen van Assembloids en het Ontwerpen van Synthetisch Weefsel met behulp van Menselijk Cellijnen

Hier beschrijven we verschillende methoden voor de vorming van meercellige sferoïden om follow-up multi-parameter live celmicroscopie uit te voeren. Met behulp van fluorescentie lifetime imaging microscopie (FLIM), cellulaire autofluorescentie, kleuringskleurstoffen en nanodeeltjes wordt de benadering voor analyse van celmetabolisme, hypoxie en celdood in levende driedimensionale (3D) kanker en van stamcellen afgeleide sferoïden gedemonstreerd.

Productie en multi-parameter live cell fluorescentie lifetime imaging microscopie (FLIM) van meercellige sferoïden

Leer continue groei-gereguleerde voeding voor grootschalige zoogdiercelcultuur in sferoïden. Deze methode verbetert groeisnelheden en zorgt voor uniforme verdeling van voedingsstoffen en gassen in geroerde suspensiebioreactoren.

Nutrient verordening door continue toevoer voor grootschalige uitbreiding van zoogdiercellen in sferoïden

Meer video's verkennen