Name: Muis Pneumonectomie Model van Compenserende Lung Groei (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 22 s
Description: Leer het muizenpneumonectomiemodel om compensatoire longgroei te bestuderen via chirurgische verwijdering van de linkerlong. Deze methode onthult mechanismen van alveolaire groei en longregeneratie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen de afdeling Dierenartsendienst van het Cincinnati Children's Hospital bedanken voor hun hulp. Dit manuscript werd ondersteund door de National Institutes of Health K12 HD028827. Anna Perl PhD heeft de auteurs deze chirurgische procedure geleerd.

OPMERKING: Animal gebruik statement: Alle procedures in deze studie werden uitgevoerd met toestemming en volgens de richtlijnen van de Institutional Animal Gebruik en onderhoud Comité (IACUC) in Cincinnati Children&#39;s Hospital. Acht weken oude C57BL / 6J mannelijke muizen werden verkregen van Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME) en men acclimatiseren gedurende één week vóór gebruik. Tot de operatie werden de dieren gehuisvest in een pathogeenvrije barrière-faciliteit en voorzien geautoclaveerd chow en gefilterd water ad libdium. Elke muis kooi werd geleverd met een toegewijde lucht en water, en de kamers werden op een 12 uur per dag-nacht cyclus gehandhaafd. Na herstel van een operatie, werden muizen gehouden in kooien met gefilterd tops, mits geautoclaveerd chow advertentie libidum, en gefilterd water uit een fles water. 1. Voorbereiding van de instrumenten <ol><li> Maak 6 huid retractors behulp van paperclips en pennen. Twist rechtgetrokken paperclips op de schachten van papier pennen, leave een 5 cm rechte staaldraad aan één uiteinde en een eenmalige 0,5 cm &quot;U&quot; vormige haak aan het einde van de draad. </li><li> Maak ongeveer 15 x 15 cm in het vierkant operatielakens gebruik van plastic wrap. Bereid een dressing per muis. Plaats een papieren toren in tussen elke wrap. </li><li> Steriliseer alle chirurgische instrumenten met een stapel van 12 x 12 inch kurk tegels, gaas en wattenstaafje swabs. </li></ol> 2. Muis Voorbereiding <ol><li> Induceren anesthesie met 2% isofluraan. Wegen dier. </li><li> In een speciale chirurgische preparaat scheren linker thorax-halsgebied met elektrische scheerapparaat. </li><li> Breng een druppel van de kunstmatige traan zalf ogen van de muis. </li><li> Ontsmet nek en linker thorax met chloorhexidine en isopropylalcohol. Herhaal tweemaal. </li></ol> 3. Mouse Oro-tracheale intubatie en mechanische ventilatie <ol><li> Hebben een niet-steriele chirurgische technicus plaats de muis rugligging in de voorverwarmde chirurgisch gebied.</li><li> Bevestigen diepte van de anesthesie door het documenteren van het ontbreken van een antwoord op de poot knijpen. </li><li> Na het wassen van de handen en het aantrekken van chirurgische kleding, masker en hoed, don steriele chirurgische handschoenen. </li><li> Na draperen en met behulp van aseptische techniek, maak een 1 cm verticale incisie over het voorafgaande midden-hals aan het strottenhoofd bloot. Licht inschuiven band spieren gebogen gekartelde 10 cm pincet en het strottenhoofd en luchtpijp bloot door het verspreiden van de band spieren met de punt van een rechte schaar. </li><li> Mondeling plaats een 22 G met stompe tip angiocatheter in het midden van de luchtpijp (Figuur 1A) en visueel te bevestigen plaatsing (Figuur 1B). Onderhouden anesthesie en ventileren met behulp van 1-3% isofluraan door knaagdieren ventilator (225 ul per slag; 200 stookt per min). Gebruik een druk limiet van 15 cm H 2 O. </li></ol> 4. Muis Pneumonectomie <ol><li> Leg de muis in de rechter laterale decubitus positie rug van de muis gerichtde operator (links boven). Gebruik een zelfdichtende plastic folie als een steriel laken. Snijden door het laken, gebruiken stompe getipt gebogen schaar om een 2 cm lange snede evenwijdig met de ribben bij het ​​4 e en 5 e intercostale ruimte. Steek de stompe punt gebogen schaar en ontleden de huid weg van de onderliggende ribben en intercostale spieren. </li><li> Trek de huid met vier retractors om een vierkant bloot 1,5 x 1,5 cm chirurgische venster (Figuur 2A). Bevestig de oprolmechanismen aan de kurk boord. </li><li> Ontleden tot op ribben met behulp van gebogen pincet, en gebruik een tip van de gebogen tang om de borstholte te voeren. </li><li> Met behulp van de stompe punt van micro-schaar, gebruikt u de onderste mes om de borstholte te voeren. Maak een 0,5 cm incisie tussen de ribben en herhaal in tegengestelde richting. </li><li> Met behulp van de twee resterende retractors, open de thorax in de anterior-posterior-as en de veilige de oprolmechanismen aan de kurk boord (Figuur 2B). </li> &lt;li&gt; Het gebruik van gebogen stompe getipt tang in de linker hand de linker long en verdringen het bovenste gedeelte van de linker long lateraal en inferiorly door de thoracotomie totdat de linker longslagader en bronchus worden blootgesteld (figuur 3A, B). </li><li> Houdt de belaste titanium vasculaire microclip applicator in de rechterhand met het lichaam van de applicator in de palm en gebogen tip weg richt vanuit de palm (Figuur 3C), schuif de applicator tip in de thorax langs de kromming van het achterste deel van de linker long en clip de linker bronchus en de longslagader (Figuur 3D). </li><li> Verwijder de applicator maar houd de linker long ingetrokken. Pak de stompe punt van micro-schaar met de rechterhand en snijd de bronchus en longslagader distaal van de clip en verwijder de linker long (figuur 3E). </li><li> Verwijder de rib retractors. </li><li> Gebruik de gebogen stompe pincet te knijpen tot 1 cm van de huid inferieur aan de incisiop maar boven het niveau van het membraan en plaats een 24 G angiocatheter door de huid en in de linker borstholte (Figuur 4A, B). </li><li> Gebruik 5-0 Prolene hechtdraad twee onderbroken hechtingen rond de 4de en 5de ribben plaatsen naar de borstholte gesloten. </li><li> Verwijder de huid retractors. Gebruik twee sets pincetten om de huid langs de lengte van de incisie benaderen en lijm de huid gesloten. </li><li> Sluit een 3 ml luerlockspuit de angiocatheter en verwijder resterende lucht door het toepassen van zachte zuigkracht en het intrekken van de angiocatheter. </li><li> Lijm de nek incisie gesloten met twee pincetten als voorheen. </li></ol> 5. Mouse Sham Pneumonectomie <ol><li> Expose de linker long zoals vermeld in &quot;Muis Pneumonectomie&quot; protocol. Til de ribbenkast met gebogen stompe tang om lucht in de linker borstholte (figuur 5A, B). </li><li> Plaats een 24 G angiocatheter in de linker thoRacic holte zoals hierboven zorg dat u de linker long niet te verwonden. </li><li> Met behulp van een 5-0 prolene hechtdraad en zorg dat u de long (figuur 5C) niet te doorboren, plaatst u twee lengtes van hechtmateriaal in de 3 e / 4 e en 5 e / 6 e rib tussenruimtes (Figuur 5D). Plaats beide lengten hechtmateriaal alvorens binden aan het risico van linker long hernia verminderen. Bind het hechtmateriaal tot twee onderbroken steken (figuur 5E) te maken. </li><li> Lijm de huid over de thoracale incisie, verwijder resterende lucht met de angiocatheter, en lijm de nek incisie als hierboven. </li></ol> 6. Reanimatie, analgesie, en Recovery <ol><li> Schakel de isofluraan en toedienen van 0,1 mg / kg buprenorfine en 0,5 ml normale zoutoplossing subcutaan. </li><li> Wanneer spontane ademhaling hervat, verwijder de endotracheale tube. </li><li> Observeren muis totdat het weer ambulant. Wandelen meestal Resumes enkele minuten nadat de endotracheale tube. </li><li> Plaats de muis in een 27 ° C incubator (bevochtigde, 25% zuurstof) om O herstellen / N. LET OP: Wij plaatsen verschillende pellets van chow bevochtigd met water op de vloer van de kooi voor de eerste 24 uur na de operatie. </li><li> Dien 0.1 mg / kg buprenorfine door intraperitoneale injectie tweemaal daags gedurende drie dagen na de operatie. Zorg ervoor dat u de operatiewond te openen bij de omgang met dieren. </li></ol> 7. Mouse Monitoring <ol><li> Weeg muizen 1, 3, 5 en 7 dagen na de operatie. </li></ol>

<ol><li>Strueby, L., Thebaud, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+review+of+respiratory+medicine%22%5BJournal%5D)">Advances in bronchopulmonary dysplasia.</a> Expert review of respiratory medicine. , (2014).</li>
<li>Donn, S. M., Sinha, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+understanding+and+management+of+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+fetal+%26+neonatal+medicine%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the understanding and management of bronchopulmonary dysplasia.</a> Seminars in fetal & neonatal medicine. 14, 332(2009).</li>
<li>Molen, T., Miravitlles, M., Kocks, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((COPD+management%3A+role+of+symptom+assessment+in+routine+clinical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22International+journal+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease%22%5BJournal%5D)">COPD management: role of symptom assessment in routine clinical practice.</a> International journal of chronic obstructive pulmonary disease. 8, 461-471 (2013).</li>
<li>Seifert, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+shedding+and+tissue+regeneration+in+African+spiny+mice+%28Acomys%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Skin shedding and tissue regeneration in African spiny mice (Acomys).</a> Nature. 489, 561-565 (2012).</li>
<li>Vidal, P., Dickson, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+the+distal+phalanx.+A+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+hand+surgery%22%5BJournal%5D)">Regeneration of the distal phalanx. A case report.</a> Journal of hand surgery. 18, 230-233 (1993).</li>
<li>Potter, P. C., Levine, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+Regeneration+Following+Chronic+Suppurative+Osteitis+of+the+Distal+Phalanx%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+surgery%22%5BJournal%5D)">Bone Regeneration Following Chronic Suppurative Osteitis of the Distal Phalanx.</a> Annals of surgery. 80, 728-729 (1924).</li>
<li>McKim, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+the+Distal+Phalanx%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Medical+Association+journal%22%5BJournal%5D)">Regeneration of the Distal Phalanx.</a> Canadian Medical Association journal. 26, 549-550 (1932).</li>
<li>Brown, L. M., Rannels, S. R., Rannels, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implications+of+post-pneumonectomy+compensatory+lung+growth+in+pulmonary+physiology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Res%22%5BJournal%5D)">Implications of post-pneumonectomy compensatory lung growth in pulmonary physiology and disease.</a> Respir Res. 2, 340-347 (2001).</li>
<li>Holder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+and+compensatory+growth%5BTitle%5D)+AND+%22British+medical+bulletin%22%5BJournal%5D)">Regeneration and compensatory growth.</a> British medical bulletin. 37, 227-232 (1981).</li>
<li>Hsia, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+from+a+canine+model+of+compensatory+lung+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Lessons from a canine model of compensatory lung growth.</a> Curr Top Dev Biol. 64, 17-32 (2004).</li>
<li>Butler, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+adult+lung+growth+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Evidence for adult lung growth in humans.</a> N Engl J Med. 367, 244-247 (2012).</li>
<li>Konerding, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+dependence+of+alveolar+angiogenesis+in+post-pneumonectomy+lung+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Spatial dependence of alveolar angiogenesis in post-pneumonectomy lung growth.</a> Angiogenesis. 15, 23-32 (2012).</li>
<li>Kho, A. T., Liu, K., Visner, G., Martin, T., Boudreault, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+dedifferentiation+and+redevelopment+phases+during+postpneumonectomy+lung+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Identification of dedifferentiation and redevelopment phases during postpneumonectomy lung growth.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305, 542-554 (2013).</li>
<li>Wang, W., Nguyen, N. M., Guo, J., Longitudinal Woods, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+Monitoring+of+Compensatory+Lung+Growth+in+Mice+after+Pneumonectomy+via+%283%29He+and+%281%29H+Magnetic+Resonance+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Noninvasive Monitoring of Compensatory Lung Growth in Mice after Pneumonectomy via (3)He and (1)H Magnetic Resonance Imaging.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 49, 697-703 (2013).</li>
<li>Gibney, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+murine+post-pneumonectomy+lung+regeneration+by+18FDG+PET+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22EJNMMI+research%22%5BJournal%5D)">Detection of murine post-pneumonectomy lung regeneration by 18FDG PET imaging.</a> EJNMMI research. 2, 48(2012).</li>
<li>Rawlins, E. L., Perl, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+a%27MAZE%27ing+world+of+lung-specific+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The a'MAZE'ing world of lung-specific transgenic mice.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 46, 269-282 (2012).</li>
<li>Ochs, M., Muhlfeld, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+microscopy+of+the+lung%3A+a+problem-based+approach.+Part+1%3A+basic+principles+of+lung+stereology%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Quantitative microscopy of the lung: a problem-based approach. Part 1: basic principles of lung stereology.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305, L15-22 (2013).</li>
<li>Ysasi, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+unilateral+diaphragmatic+paralysis+on+postpneumonectomy+lung+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effect of unilateral diaphragmatic paralysis on postpneumonectomy lung growth.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305, L439-445 (2013).</li>
<li>Dane, D. M., Yilmaz, C., Estrera, A. S., Hsia, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separating+in+vivo+mechanical+stimuli+for+postpneumonectomy+compensation%3A+physiological+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+applied+physiology%22%5BJournal%5D)">Separating in vivo mechanical stimuli for postpneumonectomy compensation: physiological assessment.</a> Journal of applied physiology. 114, 99-106 (2013).</li>
<li>Mortola, J. P., Magnante, D., Saetta, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expiratory+pattern+of+newborn+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+applied+physiology%22%5BJournal%5D)">Expiratory pattern of newborn mammals.</a> Journal of applied physiology. 58, 528-533 (1985).</li>
<li>MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+simple+method+of+mouse+lung+intubation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+applied+physiology%22%5BJournal%5D)">An improved simple method of mouse lung intubation.</a> Journal of applied physiology. 106, 984-987 (2009).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

We hebben de meest gedetailleerde beschrijving van de muis PNX en muis schijnvertoning PNX procedures gemeld to-date. We hebben de lezer op de hoogte van een aantal van de gemeenschappelijke valkuilen die de onderzoekers leren van de procedure doorgaans tegenkomen gemaakt, en we hebben een aantal technieken ontwikkeld door ons laboratorium te verzachten tegen deze valkuilen geschetst. Andere laboratoria met behulp van dit model kunnen andere techniek aanpassingen hebben ontwikkeld of maken gebruik van verschillende inst...

De hoofdfunctie van de long te voorzien van zuurstof en kooldioxide uitwisseling tussen een organisme en de atmosfeer. Bij de mens, een gastheer van aangeboren en verworven voorwaarden leiden tot een verminderde oppervlakte long gebied, wat resulteert in verminderde longfunctie. Dwz long - hoewel een groot aantal therapieën zoals inhalatiecorticosteroïden, bronchodilatoren, extra zuurstof en chronische mechanische ventilatie wordt gebruikt om de gevolgen van verminderde longfunctie 1-3 beperken, zou de ideale therapie voor deze aandoeningen hergroei van functionele longweefsel bevorderen regeneratie. Zoogdieren weefselregeneratie is goed gedocumenteerd. De Afrikaanse Stekelmuizen kunnen grote delen van de huid te regenereren zonder littekenvorming 4. De distale falanx in de mens kan regenereren na letsel of amputatie 5-7. Na pneumonectomie (PNX), compenserende long groei optreedt bij muizen 8, ratten 9, doengs 10 en 11 mens. Per definitie, compenserende long groei gaat het niet alleen uitbreiding van bestaande luchtruim, maar opnieuw septatie van deze vergroot luchtruim met de uitbreiding van de bijbehorende microcirculatie 12. Genexpressie analyse heeft aangetoond dat dit model recapituleert veel van de signalering evenementen van longontwikkeling 13. Vier weken na muis PNX, alveolaire oppervlakte gelijk is aan die van schijn geopereerde dieren 14. In dit manuscript, beschrijven we de muis PNX en sham PNX procedures.

```html
<table><tbody><tr><td>6 inch Vascular clip applicator</td><td>Teleflex Medical (WECK)</td><td>137062</td><td></td></tr><tr><td>Horizon small titanium red clip</td><td>Teleflex Medical (WECK)</td><td>1201</td><td></td></tr><tr><td>Narrow pattern 12 cm curved forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11003-12</td><td></td></tr><tr><td>Curved serrated 10 cm Graefe forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo needle holder</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>Straight 9 cm Strabismus scissors (blunt tip)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14075-09</td><td></td></tr><tr><td>Straight 8.5 cm hardened fine scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Straight, blunt tip Cohan-Vannas spring scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-12</td><td></td></tr><tr><td>Skin glue</td><td>Gluture</td><td>32046</td><td></td></tr><tr><td>22 G Angiocatheter</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>24 G Angiocatheter</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3 ml Luer lock syringe</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4 Short retractors</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 Long retractors</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5-0 Prolene on curved cutting needle</td><td>Ethicon</td><td>8698G</td><td></td></tr><tr><td>0.5 ml Syringe on 27 G needle</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normal saline</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Press-n-Seal wrap</td><td>Glad Products Company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>12 x 12 inch Cork board stack</td><td>Office Depot</td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mouse ventilator</td><td>Hugo Sachs Elektronnik</td><td>Minivent Type 845</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane vaporizer</td><td>OHMEDA</td><td>Excel 210 SE</td><td></td></tr><tr><td>Artificial tear ointment</td><td>Puralube</td><td>NDC: 17033-211-38</td><td></td></tr></tbody></table>
```

muis pneumonectomie model van compenserende lung groei

Mouse Pneumonectomy Model of Compensatory Lung Growth

Bij mensen draagt verstoord herstel en remodellering van een beschadigde long bij aan een reeks acute en chronische longaandoeningen die uiteindelijk kunnen leiden tot invaliditeit of de dood. Diermodellen voor longherstel en regeneratie op basis van letsel worden beperkt door letselspecifieke reacties, waardoor het moeilijk wordt om veranderingen die verband houden met de letselreactie en letselresolutie te onderscheiden van veranderingen die verband houden met longherstel en longregeneratie. Het gebruik van diermodellen om deze signaalroutes voor herstel en regeneratie te identificeren, is echter van cruciaal belang voor de ontwikkeling van nieuwe therapieën gericht op het verbeteren van de longfunctie na longletsel. Het muis pneumonectomiemodel maakt gebruik van compenserende longgroei om die herstel- en regeneratiesignaalroutes te isoleren om de mechanismen van alveolaire herseptatie duidelijker te definiëren. Hier beschrijven we onze techniek voor het uitvoeren van muis pneumonectomie en sham pneumonectomie. Deze techniek kan worden gebruikt in combinatie met lijnage tracering of andere transgene muismodellen om de moleculaire en cellulaire mechanismen van longherstel en regeneratie te definiëren.

. Een perceel van PNX en schijngeopereerde muis gewichten wordt gegeven in Figuur 6 In onze handen, overleving is consequent 95-100% voor zowel PNX en sham pneumonectomie. Voor een beschrijving van de wijze waarop de rechter long opnieuw groeit in dit model en het verwachte tijdsverloop, verwijzen we de lezer naar manuscripten van Gibney et al. 15 en Wang et al. 14 Een aantal gemeenschappelijke valkuilen moet vermeden worden om de muis...

Muizen pneumonectomie is een veel gebruikt model van compenserende longgroei. Deze procedure kan worden gebruikt in combinatie met lijn tracing of transgene muismodellen om de onderliggende mechanismen te verduidelijken.

Muis Pneumonectomie Model van Compenserende Lung Groei

In humans, disrupted repair and remodeling of injured lung contributes to a host of acute and chronic lung disorders which may ultimately lead to ...

Het doel van deze procedure is het uitvoeren van een linker pneumonectomie om compensatoire groei van de rechterlong te induceren. Dit wordt bereikt door eerst een linker thoracotomie uit te voeren en het linker hilum bloot te leggen. De tweede stap van de procedure is het ligeren van het linker hilum en de linker longslagader.De derde stap is het verwijderen van de linkerlong. De laatste stap is het sluiten van de thoracotomie. Het muismodel voor pneumonectomie bij compensatoire longgroei kan in combinatie met andere biometrische of biochemische technieken worden gebruikt om de mechanismen van alveolaire groei en regeneratie te verduidelijken.Deze methode kan enkele kernvragen in het veld van longontwikkeling en -regeneratie beantwoorden, zoals wat de belangrijkste cellulaire processen zijn die betrokken zijn bij septatie en welke kritieke cellulaire moleculaire processen noodzakelijk zijn om septatie opnieuw te initiëren? Over het algemeen zullen onderzoekers die nieuw zijn met deze techniek moeite hebben met een van de verschillende cruciale stappen. Zij kunnen problemen ervaren bij de tracheale canulatie.Er kan onvoldoende ruimte zijn om een adequaat chirurgisch venster te creëren. Het kan lastig zijn om het hilum te identificeren en af te klemmen, en er kan moeite worden ondervonden om letsel aan de linkerlong te voorkomen tijdens de sham-thoracotomie. Deze procedure wordt gedemonstreerd door Shang Lu, een senior laboratoriumassistent in mijn laboratorium. Begin met het induceren van anesthesie bij de muis met 2% isofluorine, scheer de linkerthorax en het nekgebied met een elektrische scheermachine, breng kunsttranenzalf aan op de ogen van de muis en desinfecteer het gebied door drie keer te wrijven met chlorhexidine, gevolgd door drie keer isopropylalcohol en vervolgens opnieuw met chlorhexidine.Drie keer. Bevestig de diepte van de anesthesie door het uitblijven van een reactie op een stevige knijpbeurt te documenteren nadat er een verticale incisie van één centimeter over het midden van de voorzijde van de nek is gemaakt om de larynx bloot te leggen; gebruik gekartelde pincetten van 10 centimeter om de musculi strap muscles lichtjes terug te trekken. Gebruik vervolgens de punten van een rechte schaar om de strap muscles te spreiden.Voer vervolgens oraal een 22 gauge stompe angiocatheter in de midden-trachea in en bevestig de plaatsing visueel via de incisie. Plaats de muis op een knaagdierventilator en handhaaf de anesthesie met 2% isofluraan en een druklimiet van 15 cmH₂O. Positioneer de nog onder narcose zijnde muis in rechterzijdige zijligging, waarbij de linkerzijde van de rug naar de operator is gericht.Plaats zelfsluitende plasticfolie over het lichaam van de muis als steriel afdeklaken. Gebruik een gebogen schaar met stompe punten om een inkeping van twee centimeter lang te maken, parallel aan de ribben ter hoogte van de vierde en vijfde intercostale ruimte. Steek vervolgens de punten van de schaar in en dissekeer de huid weg van de onderliggende ribben en intercostale spieren.Plaats vier retractoren op de huid om een chirurgisch venster van 1,5 bij 1,5 centimeter te vormen. Bevestig elke retractor aan het kurkbord. Gebruik gebogen pincetten om door te dissekeren tot aan de ribben en dissekeer vervolgens bot het intercostale weefsel.Om de vierde en vijfde ribben bloot te leggen, gebruikt u één punt van een gebogen pincet om een gat te maken om de borstholte te betreden. Gebruik vervolgens het onderste blad van een microschaar met stompe punten om langs de incisie te drukken tot het onderste blad de borstholte binnendringt. Maak een incisie van 0,5 centimeter tussen de ribben en herhaal dit vervolgens in de tegenovergestelde richting.Open vervolgens de thorax langs de anteroposterieure as door twee retractoren in te brengen en deze aan het kurkbord te bevestigen. Laad nu de applicator voor microclips. Pak daarna met gebogen botte pincetten in de niet-dominante hand de linkerlong vast en verplaats het bovenste gedeelte lateraal en inferieur door de thoracotomie totdat de linker longslagader en bronchus zijn blootgelegd.Houd vervolgens de geladen titanium vasculaire microclip-replicator in de dominante hand, met het lichaam van de applicator in de palm en de gebogen punt van de palm afgewend. Schuif de applicatortip de thorax in langs de kromming van het posterieure aspect van de linkerlong, en clip de linkerbronchus en de arteria pulmonalis. Verwijder de applicator, maar houd de linkerlong geretracteerd.Pak de micro-schaar met stompe punten met de rechterhand en knip de bronchus en de arteria pulmonalis distaal van de clip door en verwijder de linkerlong. Verwijder na het wegnemen van de long de ribspreiders. Gebruik vervolgens de gebogen stompe pincet om één centimeter huid boven het niveau van het diafragma, maar onder de incisie, op te tillen en voer een 24 gauge angio-catheter door de huid in de linker thoraxholte in.Plaats vervolgens twee onderbroken 5-0 proliensuturen rond de vierde en vijfde rib. Verwijder om de thoraxholte te sluiten de huidretractoren en gebruik twee sets pincetten om de huid over de gehele lengte van de incisie bij elkaar te brengen, en gebruik weefsellijm om de huid te sluiten. Sluit tot slot een spuit van 3 mL met Luer-lock aan op de angiocatheter en verwijder resterende lucht door voorzichtig te zuigen en de angiocatheter terug te trekken.Afgerond door de nek te dichtlijmen; de incisie werd gesloten met twee sets pincetten, zoals bij de sluiting van de thoracische incisie. Nadat de linkerlong van de geanestheseerde muis is blootgelegd zoals eerder getoond, worden gebogen stompe pincetten gebruikt om de ribbenkast op te tillen en lucht in de linker borstholte te laten. Plaats een 24 gauge angiokatheter in de linker borstholte zoals eerder getoond, waarbij voorzichtig wordt voorkomen dat de linkerlong wordt beschadigd. Gebruik hiervoor 5-0 proleennaden en zorg ervoor dat de long niet wordt doorprikt.Plaats twee lengtes hechtmateriaal in de ruimten tussen de derde en vierde rib en tussen de vijfde en zesde rib. Plaats beide lengtes hechtmateriaal voordat u knoopt om de risico's op een hernia van de linkerlong te verminderen. Knoop het hechtmateriaal om twee onderbroken hechtingen te maken.Lijm de huid over de thoraxincisie dicht. Verwijder resterende lucht met de angiokatheter en lijm de halsincisie dicht zoals eerder getoond. Schakel het isofluraan uit en dien 0,1 mg/kg buprenorfine en 0,5 mL normale zoutoplossing subcutaan toe.Wanneer de spontane ademhaling hervat, wordt de endotracheale tube verwijderd. Observeer de muis totdat deze weer kan lopen. Het lopen hervat gewoonlijk enkele minuten na het verwijderen van de endotracheale tube.Dien tweemaal daags gedurende drie dagen na de operatie 0,1 milligram per kilogram buprenorfine toe via een intraperitoneale injectie. Monitor het dier zorgvuldig tijdens deze drie dagen en zorg ervoor dat de operatiewond niet opengaat bij het hanteren van de dieren. Deze afbeelding toont het gewichtsverlies na de operatie.24 uur na de operatie zullen pneumotomie-muizen gemiddeld 1,5 gram verliezen en sham-muizen gemiddeld 1,1 gram. Beide groepen hebben hun preoperatieve gewicht op de derde postoperatieve dag weer bereikt. Deze fluorescentieafbeelding toont tropoelastine-immunofluorescentiekleuring van de accessorische lob onder controlecondities.Hier wordt de immunofluorescentie van tropoelastine in de accessorische lob getoond 72 uur na pneumotomie, waarbij de bestaande luchtruimten zijn vergroot. Deze laatste afbeelding van de tropoelastine-immunofluorescentie toont de accessorische lob vier weken na pneumotomie. Let op de lobgroei en regeneratie.Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u het muispneumonectomiermodel voor compensatoire longgroei uitvoert en hoe u de sham-thoracotomie uitvoert, die als controle voor deze procedure dient.

mouse-pneumonectomy-model-of-compensatory-lung-growth

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Bronchiolitis obliterans is de sleutel belemmering voor de lange termijn overleving van patiënten na longtransplantatie en het ontbreken van een robuuste preklinisch model sluit de behandeling van bronchiolitis obliterans immunopathogenese. In tegenstelling tot andere vaste orgaantransplantaties, gevasculariseerd muis longtransplantatie heeft pas recent ontwikkeld. Hier laten we ons onafhankelijk van elkaar ontwikkeld Bronchiolitis obliterans model na murine orthotoop single-longtransplantatie.

Ontwikkeling van Bronchiolitis obliterans in een muizenmodel van orthotope longtransplantatie

Hier presenteren we een protocol om eenvoudig en betrouwbaar de longdruk-volumecurve bij muizen te meten, waaruit blijkt dat het voldoende gevoelig is om fenotyische parenchymveranderingen in twee veelvoorkomende longaandoeningen, pulmonaire fibrose en emfyseem, te detecteren. Deze metrische biedt een middel om de structurele veranderingen in de long te kwantificeren met de zich ontwikkelende pathologie.

Meting van de druk-volume curve in muizenlongen

Deze studie beschrijft de succesvolle generatie voor een nieuwe diermodel van chronische obstructieve longziekte (COPD) door muizen aan hoge concentraties van ozon herhaaldelijk bloot te leggen.

Generatie van het Model van een chronische obstructieve longziekte in muizen door herhaalde ozon blootstelling

Interne longoppervlakte (ISA) is een kritisch criterium voor de beoordeling van longmorfologie en fysiologie bij longziekten en schade-geïnduceerde alveolaire regeneratie. We beschrijven hier een gestandaardiseerde methode die de metafora voor ISA kan minimaliseren in zowel longpneumonectomy als protes implantatie muis modellen.

Een gestandaardiseerde methode voor het meten van het interne longoppervlak door middel van muizenpneumonectomy en prothese implantatie

De knaagdieren links Pneumectomie is een waardevolle techniek in pulmonale hypertensie onderzoek. Hier presenteren we een protocol om te beschrijven de rat Pneumectomie procedure en postoperatieve zorg aan minimale morbiditeit en mortaliteit.

De linker Pneumectomie in combinatie met Monocrotaline of Sugen als een Model van pulmonale hypertensie bij ratten

Hier presenteren we optimalisaties voor een longtransplantatiemodel bij ratten die dienen om de resultaten te verbeteren. We bieden een maattabel voor manchetten op basis van lichaamsgewicht, een meetstrategie om de 4eintercostale ruimte te bepalen en methoden voor wondsluiting en BAL (bronchoalveolaire lavage) vloeistof- en weefselverzameling.

Een rattenlongtransplantatiemodel van warme ischemie / reperfusieletsel: optimalisaties om de resultaten te verbeteren

We presenteren een ex vivo varkenslongmodel voor de demonstratie van longmechanica en alveolaire rekruteringsmanoeuvres voor onderwijsdoeleinden. De longen kunnen langer dan één dag (tot vijf dagen) worden gebruikt met minimale veranderingen in de variabelen van de longmechanica.

Ex Vivo Experimenteel model voor varkens voor het bestuderen en onderwijzen van longmechanica

Dit protocol beschrijft de ontwikkeling van een neonataal biggenmodel van acuut longletsel dat vroege pathogene gebeurtenissen modelleert die optreden in de premature long, waaronder een subadequate hoeveelheid oppervlakteactieve stoffen, hyperoxie, hogedrukventilatie en ontsteking, om het begrip van moleculaire triggers van bronchopulmonale dysplasie te vergemakkelijken en de therapeutische vertaling te verbeteren.

Ontwikkeling van een model voor acuut longletsel bij neonatale biggen dat de vroege omgeving van te vroeg geboren longen nabootst

Dit artikel beschrijft een striaghforward en efficiënte methode van intubatie muizen voor longfunctie metingen of pulmonale instillatie, die het mogelijk maakt de muizen om te herstellen en studeerde worden op latere tijdstippen. Deze procedure houdt een goedkope optische vezel lichtbron die direct verlicht de luchtpijp.

Een eenvoudige methode van de Muis van Lung intubatie

Echografie heeft bewezen effectief te diagnosticeren verschillende ademhalingsziekten bij menselijke en dierlijke patiënten zijn. We tonen een uitgebreide echo protocol gebruikt door Dr Zuo het lab tot middenrif kinetiek analyseren specifiek in muismodellen. Dit is een niet-invasieve onderzoekstechniek kwantitatieve gegevens over muis respiratoire spierfunctie kan bieden.

Echografie van Muis diafragmafunctie

Leer het muizenpneumonectomiemodel om compensatoire longgroei te bestuderen via chirurgische verwijdering van de linkerlong. Deze methode onthult mechanismen van alveolaire groei en longregeneratie.

Muis Pneumonectomie Model van Compenserende Lung Groei

Meer video's verkennen