Name: Een vis van borstvoeding Laboratory Bioassay de Antipredatory activiteit van secundaire metabolieten te beoordelen vanuit de weefsels van mariene organismen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 3 s
Description: Leer een visvoedingsbioassay om de antipredatoractiviteit van secundaire metabolieten uit weefsels van mariene organismen te beoordelen. Deze methode biedt experimenteel bewijs voor ecologische rollen in de mariene chemische ecologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We danken James Maeda en Aaron Cooke voor hun hulp bij het filmen en bewerken van deze video. Financiering werd verstrekt door de National Science Foundation (OCE-0550468, 1029515).

OPMERKING: Stap 3 van dit protocol gaat gewervelde dier onderwerpen. De procedure is zo ontworpen dat de dieren krijgen de meest humane behandeling mogelijk en is goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) aan de Universiteit van North Carolina Wilmington goedgekeurd. 1) Tissue Extraction <ol><li> Gebruik weefsel dat is in zijn natuurlijke staat van hydratatie en niet geperst, uitgedroogde of overdreven nat als dit de volumetrische concentratie van secundaire metabolieten zal veranderen. Snijden of hakken weefsel stukken of plakken die in een 50 ml centrifugebuis kan worden gestoken. Opmerking: Vers weefsel kan in bepaalde gevallen, maar het is vaak beter te snijden of hakken bevroren weefsel, dat niet onderworpen is aan knijpen bij het snijden. </li><li> Voeg stukken weefsel 30 ml van een 1: 1 mengsel van dichloormethaan (DCM) en methanol (MeOH) in een gegradueerde centrifugebuis tot een eindvolume van 40 ml wordt bereikt. Zorg ervoor dat u alle stappen van de overdracht van de uit te voerenoplosmiddel in een zuurkast met voldoende ventilatie. </li><li> Sluit het buisje en keer het meerdere keren, vervolgens herhaaldelijk schudden tijdens een 4 uur extractie periode. Opmerking: Tijdens deze periode, water combineert met de MeOH en de daaruit voortvloeiende MeOH: water fase scheidt van de DCM-fase. Het weefsel wordt afwisselend blootgesteld aan DCM en MeOH: water als een emulsie als de buizen worden geschud. </li><li> Breng de DCM extract een rondbodemkolf en verdamper drooggedampt in een roterende verdamper met lage temperatuur (&lt;40 ° C). Met minimale oplosmiddel Breng het gedroogde extract met een 20 ml scintillatieflesje. Breng de flacon met een roterende verdamper adapter weer verdamper drooggedampt in een roterende verdamper met lage temperatuur (&lt;40 ° C). Opmerking: De volgende stap vereist het gebruik van een zelfgemaakte compressie instrument dat kan worden samengesteld door schroeven de volgende opeenvolgend op het einde van een draadstang: (1) moer (2) ring, en (3) eikelnoot. De wasmachine moet ofwel worden geperforeerd ofzo is aangebracht dat het minder dan de inwendige diameter van een 50 ml centrifugebuis. </li><li> Terugkerend naar de afgestudeerde centrifugebuis dat weefsel en de MeOH bevat: water extract, knijp de winning medium uit het weefsel door middel van compressie. Breng het MeOH: water extract dezelfde rondbodemkolf en opslaan gekoeld (&lt;10 ° C). </li><li> Voeg MeOH aan het getrapt centrifugebuis tot de nu gedroogde weefsel ondergedompeld voor een tweede extractie van 2 tot 6 uur duur, breng de nieuwe MeOH onttrekken aan de gekoelde rondbodemkolf bevattende MeOH: water extract. Als er enige bezorgdheid dat het weefsel niet volledig is uitgepakt, herhaal dan de 2 tot 6 uur MeOH extractie. </li><li> Droog het MeOH op een roterende verdamper met lage temperatuur (&lt;40 ° C). Breng de resterende waterige extract uit de rondbodemkolf de scintillatieflesje met de gedroogde polaire extract, met een minimaal volume MeOH om de rondbodemkolf te spoelen. </li><li> Evaporate het waterige eluaat met lage temperatuur (&lt;40 ° C) op een vacuümconcentrator. De scintillatieflesje bevat nu de totale droge ruwe organische extract van 10 ml van het weefsel. Evacueren het hoofd ruimte van de flacon met N2 gas om oxidatie te voorkomen, sluit strak, en op te slaan ingevroren (-20 ° C). </li></ol> 2) Voorbereiding van het Voedsel <ol><li> Bereid gevriesdroogde inktvis mantel poeder. Opmerking: Squid mantel een bron van voeding die vergelijkbaar is met die van andere benthische ongewervelden, en worden gebruikt als een ingrediënt in de substappen van 2,2. <ol><li> Ontdooi bevroren ringen van inktvis mantel in warm gedeïoniseerd (DI) water, dan pureer ze in een high-speed blender. </li><li> Giet een dun laagje gepureerde inktvis mantel op een ondiepe bakplaat en bevriezen (-20 ° C), dan breekt de plaat bevroren pijlinktvis puree in kleine stukjes worden gevriesdroogd. </li><li> Lyofiliseren de bevroren pijlinktvis mantel puree na de operationele procedures van de frEEZE-droger. </li><li> Verpulveren de gevriesdroogde stukjes inktvis mantel puree in een high-speed blender tot een poeder. </li><li> In een zuurkast, giet het in poedervorm inktvis mantel in een roterende bloem zeef en zeef om grote brokken van het weefsel te scheiden van het fijne poeder. </li><li> Breng de fijne poedervorm inktvis mantel aan een afsluitbare container. Evacueren de container kopruimte met N2 gas om oxidatie tegen te gaan en ingevroren (-20 ° C). </li></ol></li><li> Bereiden het eten mengsel. Opmerking: wanneer meerdere opeenvolgende assays, is het praktisch bereiden ~ 100 ml voedsel mengsel, maar dit recept kan worden geschaald naar kleinere volumes indien nodig. <ol><li> Combineer een mengsel van 3 g alginezuur en 5 g gevriesdroogde inktvis mantel poeder met 100 ml DI water in een bekerglas van 150 ml. Roer krachtig met een microspatula enkele minuten totdat het poeder volledig gehydrateerd en het mengsel homogeen is. Opmerking: Indien gewenst, kleurstof kan worden toegevoegd op deze step: het is gemakkelijker om kleurstof toevoegen voedselmengsel die zowel behandelde als controlemengsels genereert (maskeren van de natuurlijke pigment van het extract in het extract behandelde mengsel) dan proberen om de kleur van het extract behandelde mengsel passen door het toevoegen kleurstof met de controle mengsel. Een groen of bruin kleurstof is vaak wenselijk om eventuele pigmenten maskeren in het ruwe extract. </li><li> Laad precies 10 ml van voedsel mengsel in een afgestudeerd spuit. Zorg ervoor dat de opname van luchtbellen tijdens dit proces te voorkomen. </li><li> Verwijder de 20 ml scintillatieflesje met droge ruwe organische extract uit de vriezer. Voeg een druppel of twee van MeOH, roer er dan het extract tot een homogeen mengsel met een microspatula. </li><li> Verwijder de geplaatste 10 ml spuit van voedsel matrix in de 20 ml scintillatieflesje en roer met een microspatula de-extract behandelde voedsel mengsel te homogeniseren. Opmerking: Het kan helpen om de spuit in kleinere stappen (dat wil zeggen uit te werpen, uit te werpen 2 ml en homogeniseren, dan r.EPEAT totdat alle 10 ml zijn gehomogeniseerd). </li></ol></li><li> Bereid de test pellets. <ol><li> Laad een zeer klein volume van het extract mengsel (~ 1 ml) in een spuit, en dompel de spuit in een oplossing van 0,25 M CaCl2. Verwijder de inhoud van de injectiespuit een lange spaghetti-achtige streng vormen. </li><li> Na een paar minuten, verwijder de verharde streng, hak het in 4 mm lang pellets op een glazen snijplank met een scheermesje, spoel dan in zeewater. </li><li> Herhaal de stappen 2.3.1 en 2.3.2, zonder inbegrip van tissue-extract om de controle pellets te maken. Zorg ervoor dat u controle pellets te behandelen met een gelijkwaardige hoeveelheid oplosmiddel (zie toevoeging van MeOH om behandelde mengsel in stap 2.2.3) om te controleren voor oplosmiddeladditievormen. Als een negatieve controle wordt gewenst te bevestigen dat assay vis kunnen worden afgeschrikt voeden, voeg denatoniumbenzoaat bij een concentratie van 2 mg ml-1 tot het raw food mengsel 27. </li></ol></li></ol> 3) SmakelijkheidBioassays <ol><li> Voeren voeden assays met wild gevangen geel-fase bluehead lipvis, Thalassoma bifasciatum, gehouden in groepen van drie in ondoorzichtige eenzijdige compartimenten van het laboratorium aquaria. </li><li> Leveren voedsel pellets uit een beker van zeewater met behulp van een glazen pipet met een rubberen bol. Opmerking: Het kan een paar dagen duren om vis te trainen om voedsel te krijgen op deze manier. Een conditioning stimulus (bijvoorbeeld een paar tikken van de pipet op het aquarium glas) dat de levering van voedsel voorafgaat kan nuttig zijn om de vis te trainen om de toevoeging van voedsel pellets verwachten. </li><li> Scoren pellets. Beschouw een pellet aanvaard indien gemakkelijk verteerd door de vis. Beschouw een pellet verworpen als niet na minimaal drie pogingen van één of meer vissen te nemen in hun mondholte gegeten of als de pellet wordt benaderd en genegeerd na zo&#39;n poging. </li><li> Scoren monsters. Opmerking: De testprocedure wordt afgebeeld als een stroomdiagram in figuur 1 Groepen vis die willen eten.controle pellets bij elke stap in het protocol worden verder buiten beschouwing gelaten. Er zijn twee mogelijke uitkomsten van een enkele run van de test: het monster wordt ofwel geaccepteerd of afgewezen. <ol><li> Beginnen met een controle pellet te bevestigen dat de groep vissen is coöperatief. Bieden een behandelde pellet. Als de vis te aanvaarden de behandelde pellet, de score van de steekproef als geaccepteerd. Als de vissen verwerpen de behandelde pellet, bieden een volgende controle pellet om te bepalen of de vissen voeren, hebben opgehouden. Als de vissen accepteren de daaropvolgende controle pellet, de score van de steekproef als verworpen. </li></ol></li><li> Replicatie. Herhaal de test procedure met tien onafhankelijke groepen van vis voor elk uittreksel. </li></ol> 4) Het evalueren van Betekenis <ol><li> Evalueer de significantie van verschillen in het controle versus behandelde korrels met een aangepaste versie van Fisher&#39;s exact test 26. Wijzigen van de test, zodat de marginale totalen voor controle en behandeld pellets zijn vast, Ze te behandelen zowel als steekproeven. Opmerking: Dit geeft p = 0,057 bij 7 pellets worden gegeten; vandaar, wordt elke extract beschouwd afschrikmiddel als 6 of minder pellets worden gegeten, en smakelijk als 7 of meer pellets worden gegeten. </li><li> Het vergelijken van de relatieve smakelijkheid tussen groepen extracten berekenen gemiddelde aantal pellets gegeten binnen elke groep. Houd de drempel om 6 pellets dus een groep van repliceren extracten worden beschouwd als afschrikmiddel, als het gemiddelde aantal pellets gegeten + standaardfout (SE) ≤6. Opmerking: In de representatieve resultaten, de groepsopdracht is species, dus repliceren uittreksels komen uit verschillende individuen en de relatieve smakelijkheid kan worden vergeleken tussen de soorten. </li></ol>

<ol><li>Paul, V. J., ed, <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaul%2C+VJ+%22Ecological+roles+of+marine+natural+products%22">Ecological roles of marine natural products</a>. , Comstock Publishing. Associates: Ithaca, N.Y. (1992).</li>
<li>Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marine+invertebrate+chemical+defenses%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Marine invertebrate chemical defenses.</a> Chemical Reviews. 93 (5), 1911(1993).</li>
<li>Hay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marine+chemical+ecology%3A+what%27s+known+and+what%27s+next%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Marine+Biology+and+Ecology%22%5BJournal%5D)">Marine chemical ecology: what's known and what's next.</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 44 (5), 476-476 (1996).</li>
<li>McClintock, J. B., Baker, B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcClintock%2C+JB+%22Marine+Chemical+Ecology%22">Marine Chemical Ecology</a>. , CRC Press. Boca Raton, Fla. (2001).</li>
<li>Amsler, C. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAmsler%2C+CD+%22Algal+Chemical+Ecology%22">Algal Chemical Ecology</a>. , Springer. New York. (2008).</li>
<li>Hay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marine+chemical+ecology%3A+Chemical+signals+and+cues+structure+marine+populations%2C+communities%2C+and+ecosystems%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Marine+Science%22%5BJournal%5D)">Marine chemical ecology: Chemical signals and cues structure marine populations, communities, and ecosystems.</a> Annual Review of Marine Science. 1, 193-212 (2009).</li>
<li>Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemical+ecology+of+sponges+on+Caribbean+reefs%3A+Natural+products+shape+natural+systems%5BTitle%5D)+AND+%22BioScience%22%5BJournal%5D)">The chemical ecology of sponges on Caribbean reefs: Natural products shape natural systems.</a> BioScience. 61 (11), 888(2011).</li>
<li>Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antipredatory+Defensive+Roles+of+Natural+Products+from+Marine+Invertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Handbook+of+Marine+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Antipredatory Defensive Roles of Natural Products from Marine Invertebrates.</a> Handbook of Marine Natural Products. , 677-710 (2012).</li>
<li>Pawlik, J. R., Amsler, C. D., Ritson-Williams, R., McClintock, J. B., Baker, B. J., Paul, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marine+Chemical+Ecology%3A+A+Science+Born+of+Scuba.+%5BTitle%5D)+AND+%22Research+and+Discoveries%3A+The+Revolution+of+Science+through+Scuba%22%5BJournal%5D)">Marine Chemical Ecology: A Science Born of Scuba. </a> Research and Discoveries: The Revolution of Science through Scuba. 39, 53-69 (2013).</li>
<li>Randall, J. E., Hartman, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sponge-feeding+fishes+of+the+West+Indies%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Biology%22%5BJournal%5D)">Sponge-feeding fishes of the West Indies.</a> Marine Biology. 1, 216-225 (1968).</li>
<li>Bakus, G. J., Green, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+in+sponges+and+holothurians+%E2%80%94+geographic+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Toxicity in sponges and holothurians — geographic pattern.</a> Science. 185, 951-953 (1974).</li>
<li>Pawlik, J. R., Chanas, B., Toonen, R. J., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defenses+of+Caribbean+sponges+against+predatory+reef+fish.+1.+Chemical+deterrency%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Defenses of Caribbean sponges against predatory reef fish. 1. Chemical deterrency.</a> Marine Ecology Progress Series. 127, 183-194 (1995).</li>
<li>Schulte, B. A., Bakus, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predation+deterrence+in+marine+sponges+%E2%80%94+laboratory+versus+field+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Marine+Science%22%5BJournal%5D)">Predation deterrence in marine sponges — laboratory versus field studies.</a> Bulletin of Marine Science. 50, 205-211 (1992).</li>
<li>Jackson, J. B. C., Buss, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allelopathy+and+spatial+competition+among+coral+reef+invertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Allelopathy and spatial competition among coral reef invertebrates.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 72, 5160-5163 (1975).</li>
<li>Bakus, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+defense+mechanisms+on+the+great+barrier+reef%5BTitle%5D)+AND+%22Australia.+Science%22%5BJournal%5D)">Chemical defense mechanisms on the great barrier reef.</a> Australia. Science. 211, 497-499 (1981).</li>
<li>Gemballa, S., Schermutzki, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+haplosclerid+sponges+preferred%3A+a+field+study+on+the+diet+of+the+dotted+sea+slug+Peltodoris+atromaculata+%28doridoidea%3A+nudibranchia%29%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Biology%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic haplosclerid sponges preferred: a field study on the diet of the dotted sea slug Peltodoris atromaculata (doridoidea: nudibranchia).</a> Marine Biology. 144, 1213-1222 (2004).</li>
<li>Voogd, N. J., Cleary, D. F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relating+species+traits+to+environmental+variables+in+Indonesian+coral+reef+sponge+assemblages%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+and+Freshwater+Research%22%5BJournal%5D)">Relating species traits to environmental variables in Indonesian coral reef sponge assemblages.</a> Marine and Freshwater Research. 58, 240-249 (2007).</li>
<li>Mollo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+promoting+marine+invasions%3A+a+chemolecological+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Factors promoting marine invasions: a chemolecological approach.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 4582-4586 (2008).</li>
<li>Randall, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Food+habits+of+reef+fishes+of+the+West+Indies%5BTitle%5D)+AND+%22Studies+in+Tropical+Oceanography%22%5BJournal%5D)">Food habits of reef fishes of the West Indies.</a> Studies in Tropical Oceanography. 5, 665-847 (1967).</li>
<li>O'Neal, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reappraisal+of+the+chemical+and+physical+defenses+of+Caribbean+gorgonian+corals+against+predatory+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">A reappraisal of the chemical and physical defenses of Caribbean gorgonian corals against predatory fishes.</a> Marine Ecology Progress Series. 240, 117-126 (2002).</li>
<li>Hines, D. E., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+antipredatory+defensive+strategies+of+Caribbean+non-scleractinian+zoantharians+%28Cnidaria%29%3A+is+the+sting+the+only+thing%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Biology%22%5BJournal%5D)">Assessing the antipredatory defensive strategies of Caribbean non-scleractinian zoantharians (Cnidaria): is the sting the only thing.</a> Marine Biology. 159 (2), 389-398 (2012).</li>
<li>Walters, K. D., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+there+a+trade-off+between+wound-healing+and+chemical+defenses+among+Caribbean+reef+sponges%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+and+Comparative+Biology%22%5BJournal%5D)">Is there a trade-off between wound-healing and chemical defenses among Caribbean reef sponges.</a> Integrative and Comparative Biology. 45 (2), 352-358 (2005).</li>
<li>Leong, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+a+resource+trade-off+between+growth+and+chemical+defenses+among+Caribbean+coral+reef+sponges%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Evidence of a resource trade-off between growth and chemical defenses among Caribbean coral reef sponges.</a> Marine Ecology Progress Series. 406, 71-78 (2010).</li>
<li>Leong, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+reproductive+patterns+among+7+Caribbean+sponge+species+does+not+reveal+a+resource+trade-off+with+chemical+defenses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Marine+Biology+and+Ecology%22%5BJournal%5D)">Comparison of reproductive patterns among 7 Caribbean sponge species does not reveal a resource trade-off with chemical defenses.</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 401 (1-2), 80-84 (2011).</li>
<li>Pawlik, J. R., Loh, T. -L., McMurray, S. E., Finelli, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sponge+Communities+on+Caribbean+Coral+Reefs+Are+Structured+by+Factors+That+Are+Top-Down%2C+Not+Bottom-Up%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Sponge Communities on Caribbean Coral Reefs Are Structured by Factors That Are Top-Down, Not Bottom-Up.</a> PLoS ONE. 8 (5), e62573(2013).</li>
<li>Loh, T. -L., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+defenses+and+resource+trade-offs+structure+sponge+communities+on+Caribbean+coral+reefs%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Science%22%5BJournal%5D)">Chemical defenses and resource trade-offs structure sponge communities on Caribbean coral reefs.</a> Proceedings of the National Academy of Science. 111, 4151-4156 (2014).</li>
<li>Miller, A. M., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+coral+reef+fish+learn+to+avoid+unpalatable+prey+using+visual+cues%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Do coral reef fish learn to avoid unpalatable prey using visual cues.</a> Animal Behaviour. 85, 339-347 (2013).</li>
<li>Pawlik, J. R., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+re-evaluation+of+the+ichthyodeterrent+role+of+prostaglandins+in+the+Caribbean+gorgonian+coral%2C+Plexaura+homomalla%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">A re-evaluation of the ichthyodeterrent role of prostaglandins in the Caribbean gorgonian coral, Plexaura homomalla.</a> Marine Ecology Progress Series. 52, 95-98 (1989).</li>
<li>Fenical, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defensive+properties+of+secondary+metabolites+from+the+Caribbean+gorgonian+coral+Erythropodium+caribaeorum%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Defensive properties of secondary metabolites from the Caribbean gorgonian coral Erythropodium caribaeorum.</a> Marine Ecology Progress Series. 75, 1-8 (1991).</li>
<li>Pawlik, J. R., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+defense+of+Pterogorgia+anceps%2C+a+Caribbean+gorgonian+coral%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Chemical defense of Pterogorgia anceps, a Caribbean gorgonian coral.</a> Marine Ecology Progress Series. 87, 183-188 (1992).</li>
<li>Chanas, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+skeleton+of+a+sponge+provide+a+defense+against+predatory+reef+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">Does the skeleton of a sponge provide a defense against predatory reef fish.</a> Oecologia. 107 (2), 225-231 (1996).</li>
<li>Chanas, B., Pawlik, J. R., Lindel, T., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+defense+of+the+Caribbean+sponge+Agelas+clathrodes+%28Schmidt%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Marine+Biology+and+Ecology%22%5BJournal%5D)">Chemical defense of the Caribbean sponge Agelas clathrodes (Schmidt).</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 208 (1-2), 185-196 (1997).</li>
<li>Wilson, D. M., Puyana, M., Fenical, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+defense+of+the+Caribbean+reef+sponge+Axinella+corrugata+against+predatory+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Ecology%22%5BJournal%5D)">Chemical defense of the Caribbean reef sponge Axinella corrugata against predatory fishes.</a> Journal of Chemical Ecology. 25 (12), 2811-2823 (1999).</li>
<li>Chanas, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defenses+of+Caribbean+sponges+against+predatory+reef+fish+II.+Spicules%2C+tissue+toughness%2C+and+nutritional+quality%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Defenses of Caribbean sponges against predatory reef fish II. Spicules, tissue toughness, and nutritional quality.</a> Marine Ecology Progress Series. 127 (1), 195-211 (1995).</li>
<li>Albrizio, S., Ciminiello, P., Fattorusso, E., Magno, S., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphitoxin%2C+a+new+high+molecular+weight+antifeedant+pyridinium+salt+from+the+Caribbean+sponge+Amphimedon+compressa%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Amphitoxin, a new high molecular weight antifeedant pyridinium salt from the Caribbean sponge Amphimedon compressa.</a> Journal of Natural Products. 58 (5), 647-652 (1995).</li>
<li>Assmann, M., Lichte, E., Pawlik, J. R., Köck, M. Chemical defenses of the Caribbean sponges Agelas wiedenmayeri and Agelas conifera. Marine Ecology Progress Series. 207, 255-262 (2000).</li>
<li>Kubanek, J., Fenical, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+antifeedant+triterpene+glycosides+from+the+Caribbean+sponge+Erylus+Formosus%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Letters%22%5BJournal%5D)">New antifeedant triterpene glycosides from the Caribbean sponge Erylus Formosus.</a> Natural Product Letters. 15 (4), 275-285 (2001).</li>
<li>Pawlik, J. R., McFall, G., Zea, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+odor+from+sponges+of+the+genus+Ircinia+protect+them+from+fish+predators%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Ecology%22%5BJournal%5D)">Does the odor from sponges of the genus Ircinia protect them from fish predators.</a> Journal of Chemical Ecology. 28 (6), 1103-1115 (2002).</li>
<li>Waddell, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defenses+of+Caribbean+sponges+against+invertebrate+predators.+I.+Assays+with+hermit+crabs%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Defenses of Caribbean sponges against invertebrate predators. I. Assays with hermit crabs.</a> Marine Ecology Progress Series. 195, 125-132 (2000).</li>
<li>Waddell, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defense+of+Caribbean+sponges+against+invertebrate+predators.+II.+Assays+with+sea+stars%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Defense of Caribbean sponges against invertebrate predators. II. Assays with sea stars.</a> Marine Ecology Progress Series. 195, 133-144 (2000).</li>
<li>Burns, E., Ifrach, I., Carmeli, S., Pawlik, J. R., Ilan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+anti-predatory+defenses+of+Red+Sea+and+Caribbean+sponges.+I.+Chemical+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Comparison of anti-predatory defenses of Red Sea and Caribbean sponges. I. Chemical defense.</a> Marine Ecology Progress Series. 252, 105-114 (2003).</li>
<li>Jones, A. C., Blum, J. E., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+for+defensive+synergy+in+Caribbean+sponges%3A+Bad+taste+or+glass+spicules%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Marine+Biology+and+Ecology%22%5BJournal%5D)">Testing for defensive synergy in Caribbean sponges: Bad taste or glass spicules.</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 322 (1), 67(2005).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

De hier beschreven procedure voorziet in een relatief eenvoudige, ecologisch relevante laboratorium protocol voor de beoordeling van antipredatory chemische afweer in mariene organismen. Hier bespreken we de belangrijkste criteria die worden voldaan door deze set van methoden: (1) Passende roofdier. Deze voeden test maakt het bluehead lipvis, Thalassoma bifasciatum, een van de meest voorkomende vissen op de koraalriffen in het hele Caribische gebied. De bluehead is een gene...

Chemische ecologie ontwikkeld door de samenwerking van chemici en ecologen. Terwijl de subdiscipline van terrestrische chemische ecologie is al enige tijd, dat van mariene chemische ecologie is slechts een paar decennia oud, maar heeft belangrijke inzichten opgeleverd in de evolutionaire ecologie en de gemeenschap structuur van mariene organismen 1-8. Te profiteren van de opkomende technologieën van duiken en NMR-spectroscopie, organisch chemici snel geleid tot een groot aantal publicaties beschrijven roman metabolieten van bentische ongewervelde zeedieren en algen in de jaren 1970 en 1980 9. Aannemende dat secundaire metabolieten bepaald doel, veel van deze publicaties toegeschreven ecologisch belangrijke eigenschappen om nieuwe verbindingen zonder empirisch bewijs moet dienen. Rond dezelfde tijd werden ecologen ook te profiteren van de komst van het duiken en het beschrijven van de uitkeringen en abundanties van bodemdieren en planten eerder weer bekendben relatief ineffectief bemonsteringsmethoden zoals baggeren. De aanname van deze onderzoekers was dat alles sessiele en zacht lichaam chemisch moet worden verdedigd om het verbruik door roofdieren 10 te vermijden. In een poging om de empirie te introduceren aan wat anders beschrijvende werk aan soorten op, sommige ecologen begon extrapoleren chemische afweer van toxiciteit assays 11. De meeste toxiciteit testen betrokken de blootstelling van hele vis of andere organismen op waterige suspensies van ruwe organische extracten van ongewervelde weefsels, met daaropvolgend de bepaling van het drooggewicht concentraties van extracten die verantwoordelijk zijn voor het doden van de helft van de test organismen. Echter, toxiciteitstests niet emuleren de wijze waarop potentiële roofdieren waarnemen prooien onder natuurlijke omstandigheden en latere studies hebben geen relatie tussen toxiciteit en smakelijkheid 12-13 gevonden. Het is verrassend dat publicaties in prestigieuze tijdschriften gebruikte technieken die weinig of geen ecological relevantie 14-15 en dat deze studies worden nog steeds veel geciteerd vandaag. Het is zelfs nog alarmerender om op te merken dat de studies op basis van gegevens over de toxiciteit blijven 16-18 worden gepubliceerd. De biologische analysemethode hierin beschreven werd ontwikkeld in de late jaren 1980 tot een ecologisch relevante benadering voor mariene chemische ecologen verstrekken aan antipredatory chemische afweer te beoordelen. De methode vereist een model roofdier om een ​​ruwe organische extract uit het doelorganisme proeven op een natuurlijke concentratie in een qua voedingswaarde vergelijkbaar voedsel matrix, het verstrekken van smakelijkheid gegevens die meer ecologisch zinvolle dan toxiciteitsgegevens. De algemene benadering van de beoordeling van de antipredatory activiteit van de weefsels van mariene organismen omvat vier belangrijke criteria: (1) een passende generalist roofdier moet worden gebruikt voor het voederen assays, (2) organische metabolieten van alle polariteiten moet uitputtend worden gewonnen uit het weefsel van de doelorganisme, (3) de metabolieten moet be gemengd in een voedingsoogpunt geschikte experimentele eten op dezelfde volumetrische concentratie in het organisme waaruit ze werden geëxtraheerd, en (4) het experimenteel ontwerp en statistische benadering moet zorgen voor een betekenisvolle uitdrukking relatieve distastefulness geven. De hieronder beschreven procedure is speciaal ontworpen om antipredatory chemische afweer in Caribisch ongewervelde zeedieren te beoordelen. We maken gebruik van de bluehead lipvis, Thalassoma bifasciatum, als model roofvissen, omdat deze soort komt veel voor op Caribische koraalriffen en staat bekend om een breed assortiment van benthische ongewervelden 19 proeven. Weefsel van het doelorganisme wordt eerst geëxtraheerd, vervolgens met een mengsel van voedsel, en uiteindelijk aangeboden aan groepen T. bifasciatum om te zien of ze verwerpen de-extract behandelde voedingsmiddelen. Assay gegevens met behulp van deze methode hebben belangrijke inzichten opgeleverd in het defensief chemie van mariene organismen 12,20-21, life geschiedenis trade-offs 22-24, en de gemeenschap ecologie 25-26.

```html
<table><tbody><tr><td>Dichloormethaan</td><td>Fisher Scientific</td><td>D37-20</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A41220</td><td></td></tr><tr><td>Watervrij Calcium Chloride</td><td>Fisher Scientific</td><td>C614-500</td><td></td></tr><tr><td>Cryocool Warmteoverdrachtsvloeistof</td><td>Fisher Scientific</td><td>20-548-146</td><td>Voor vacuümconcentrator</td></tr><tr><td>Alginezuur natriumzout hoge viscositeit</td><td>MP Biomedicals</td><td>154723</td><td></td></tr><tr><td>Pijlinktviskapvinnen</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Kan worden gekocht in de supermarkt</td></tr><tr><td>Denatonbenzoaat</td><td>Aldrich</td><td>D5765</td><td></td></tr><tr><td>50 ml graduleerde centrifugeerbuis</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>20 ml scintillatieflesje</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-337-7</td><td></td></tr><tr><td>Weggeef Pasteur pipetten</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20D</td><td></td></tr><tr><td>Rubberen ballonnen voor Pasteur pipetten</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-448-24</td><td></td></tr><tr><td>Rode ballonnen voor pellet levering</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-448-27</td><td></td></tr><tr><td>250 ml rondbodemkolf</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-067E</td><td></td></tr><tr><td>Scintillatieflesje adapter voor rotavapor</td><td>Fisher Scientific</td><td>K747130-1324</td><td></td></tr><tr><td>Weegschaaltjes</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-202B</td><td></td></tr><tr><td>Microspatule</td><td>Fisher Scientific</td><td>21-401-10</td><td></td></tr><tr><td>5 ml graduleerde spuit</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-53</td><td></td></tr><tr><td>10 ml graduleerde spuit</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-54</td><td></td></tr><tr><td>Schermes</td><td>Fisher Scientific</td><td>S17302</td><td></td></tr></tbody></table>
```

een vis van borstvoeding laboratory bioassay de antipredatory activiteit van secundaire metabolieten te beoordelen vanuit de weefsels van mariene organismen

A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

Marine chemische ecologie is een jonge discipline, ontstaan uit de samenwerking van natuurlijke productchemici en mariene ecologen in de jaren 1980 met als doel de ecologische functies van secundaire metabolieten uit de weefsels van mariene organismen te onderzoeken. Het resultaat is een progressie van protocollen die de ecologische relevantie van de experimentele aanpak steeds verder hebben verfijnd. Hier presenteren we de meest actuele versie van een laboratoriumbioassay voor visvoeding die onderzoekers in staat stelt de antipredatorische activiteit van secundaire metabolieten uit de weefsels van mariene organismen te beoordelen. Organische metabolieten van alle polariteiten worden volledig geëxtraheerd uit het weefsel van het doelorganisme en gereconstrueerd in natuurlijke concentraties in een voedingsmatig geschikte voedselmatrix. Experimentele voedselpellets worden aan een generalistische predator in laboratoriumvoedingsassays gepresenteerd om de antipredatorische activiteit van het extract te beoordelen. De hier beschreven procedure gebruikt de bluehead, Thalassoma bifasciatum, om de smakelijkheid van Caribische mariene ongewervelde dieren te testen; echter, het ontwerp kan gemakkelijk worden aangepast aan andere systemen. Resultaten verkregen met behulp van deze laboratoriumassay zijn een belangrijke voorbode voor veldexperimenten die afhankelijk zijn van de voedingsreacties van een volledige reeks potentiële predatoren. Bovendien kan deze bioassay worden gebruikt om de isolatie van voedingswerende metabolieten te richten door bioassay-gestuurde fractievorming. Deze voedingsbioassay heeft ons begrip van de factoren die de verdeling en abundantie van mariene ongewervelde dieren op Caribische koraalriffen beheersen, vergroot en kan onderzoek op diverse onderzoeksgebieden, waaronder farmacologie, biotechnologie en evolutionaire ecologie, informeren.

Hier rapporteren we de resultaten van de bioassay zes soorten van gemeenschappelijk Caribbean sponsen (figuur 2). Deze gegevens werden in eerste instantie gepubliceerd in 1995 door Pawlik et al. 12 en tonen de kracht van deze benadering van verschillen in chemische verdediging strategieën tussen co-voorkomende taxa overzien. De resultaten werden gerapporteerd als een gemiddeld aantal van voedsel pellets gegeten + standaardfout (SE) voor elke soort. Bijna geen pellets werden gegeten i...

Dit bioassay maakt gebruik van een model roofvissen aan de aanwezigheid van het voeden-afschrikmiddel metabolieten van organische extracten van de weefsels van mariene organismen in de natuurlijke concentraties met behulp van een qua voedingswaarde vergelijkbaar voedsel matrix beoordelen.

Een vis van borstvoeding Laboratory Bioassay de Antipredatory activiteit van secundaire metabolieten te beoordelen vanuit de weefsels van mariene organismen

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with ...

Het algemene doel van deze procedure is om de antipredatoire activiteit van secundaire metabolieten uit weefsels van mariene organismen te beoordelen. Hallo, ik ben Dr. Joseph Pollock van de University of North Carolina Wilmington, en ik word vergezeld door promovendus Michael Marty, die de teamleider was bij het samenstellen van deze video over het uitvoeren van bioassays om chemische afweermechanismen in de weefsels van mariene organismen te testen. We zijn aan het eind van de jaren 80 begonnen met het ontwikkelen van de methoden die u nu gaat zien.In die tijd wezen chemici van natuurproducten ecologische rollen toe aan secundaire metabolieten zonder enig experimenteel bewijs. Ondertussen extrapoleerden ecologen defensieve rollen vanuit toxiciteitsassays die geen ecologische relevantie hadden. Hier presenteren wij een aanpak die is ontworpen om de antipredatoire activiteit van secundaire metabolieten uit weefsels van mariene organismen te beoordelen.Deze aanpak voldoet aan vier belangrijke criteria voor voedingsbioassays. Ten eerste gebruiken we een passende generalistische predator. Ten tweede extraheren we uitputtend organische metabolieten van alle polariteiten uit de weefsels.Ten derde voegden we deze metabolieten toe aan een experimenteel voeder in dezelfde volumetrische concentratie als gevonden in het organisme. En ten vierde biedt ons experimentele ontwerp en onze statistische benadering een betekenisvolle maatstaf om de relatieve onsmaakelijkheid aan te geven. In deze voederexperimenten maken we gebruik van de blue head thoma by fossum, een modelroofvis die geschikt is voor assays met weefsels van Caribische mariene ongewervelden, omdat deze vissoort algemeen voorkomt op Caribische koraalriffen en bekend staat om het consumeren van een breed assortiment benthische ongewervelden.Nu zal Michael het protocol in detail beschrijven. Eerst moet het weefsel worden geëxtraheerd. Voeg een mengsel van dichloormethaan en methanol in een verhouding van één-op-één toe aan een maatbuisje voor centrifugering tot een eindvolume van 30 milliliters.Snijd vervolgens stukjes weefsel uit het doelorganisme. Dit kan worden gedaan met vers of bevroren weefsel. Wij werken met spongiën, dus deze filmdemonstratie zal de oranje olifantenoorspons, alus, plet roadies, tonen.Het kan nodig zijn om zeer kleine stukjes weefsel te snijden om het juiste volume te verkrijgen. Met behulp van volumetrische verdringing kunt u precies 10 milliliters weefsel extraheren, de buis afsluiten en deze omkeren; schud vervolgens gedurende vier uur. Tijdens deze periode combineert water met de methanol, waarna de resulterende methanol-waterfase scheidt van de dichloormethaanfase. Het weefsel wordt afwisselend blootgesteld aan elk extractiemedium terwijl de buizen worden geschud.Na deze extractieperiode zullen twee afzonderlijke fasen zichtbaar zijn. De polaire fase van methanol en water zal bovenop de niet-polaire fase van dichloormethaan liggen. Verplaats het dichloormethaan-extract met een pasteurpipet van de maatcentrifugebuis naar een rondbodelfles; de maatcentrifugebuis dient in de koelkast te worden bewaard.Bevestig voor de volgende stappen de rondbodemkolf aan een rotatieverdamper voor alle handelingen op de rotatieverdamper. Zorg ervoor dat de temperatuur van het waterbad onder de 40 °C blijft. Droog het dichloormethaan in de rondbodemkolf volgens de standaardgebruiksinstructies voor de rotatieverdamper en resuspendeer het gedroogde apolaire extract met een zeer kleine hoeveelheid dichloormethaan.Enig schudden of draaien kan nuttig zijn om gedroogd materiaal van de wanden van de rondbodemkolf te verwijderen. Draag vervolgens het chloroformmethaan-extract over van de rondbodemkolf naar een scintillatiebuisje van 20 milliliter. In plaats van de dop op het scintillatiebuisje te plaatsen, bevestigt u een adapter voor een rotatieverdamper aan het scintillatiebuisje en verdampt u het opnieuw tot droogte op een rotatieverdamper. Het scintillatiebuisje met het gedroogde apolaire extract kan tijdens de volgende stappen in de koelkast worden bewaard.Terugkeer naar de gegradueerde centrifugebuis die het weefsel en het methanol-waterextract bevat; we gebruiken een zelfgemaakt instrument dat het extractiemedium door compressie uit het weefsel perst, waardoor het weefsel wordt samengedrukt. Breng vervolgens het methanol-waterextract over naar de rondbodemkolf en bewaar dit gekoeld in de koelkast. Voeg methanol toe aan de gegradueerde centrifugebuis totdat het weefsel is ondergedompeld voor een tweede extractie met een duur van twee tot zes uur.Zodra de tweede methanolextractie is voltooid, haalt u de gekoelde rondbodemkolf uit de koelkast, centrifugeert u de inhoud van de gegradueerde centrifugebuis en brengt u dit nieuwe methanolextract over naar de oorspronkelijke rondbodemkolf, waarin het eerdere methanol-waterextract zich bevindt. Als er op dit punt twijfels bestaan over het feit of het weefsel volledig is geëxtraheerd, kan de methanolextractiestap van twee tot zes uur worden herhaald. Bevestig de rondbodemkolf aan een rotatieverdamper en verdampt het methanol zoals eerder beschreven.Zorg ervoor dat de temperatuur van het waterbad onder de 40 °C blijft. De rondbodemkolf bevat een waterig extract dat gecombineerd moet worden met het gedroogde apolaire extract in het scintillatiebuisje van 20 milliliter. Draag daarom de inhoud van de rondbodemkolf over naar het scintillatiebuisje van 20 milliliter.Spoel indien nodig de rondbodige kolf uit met een kleine hoeveelheid methanol om al het resterende extract te verzamelen. Het scintillatieflacon bevat nu het gedroogde apolaire extract en het polaire extract. Het polaire extract is echter gesuspendeerd in een klein volume vloeistof.Verdampe het waterige extract tot droogte met een vacuümconcentrator op lage temperatuur. Het scintillatieflesje bevat nu een droog, ruw organisch extract van 10 milliliters weefsel; spoel het flesje door met droge stikstofgas en bewaar het in de vriezer bij -20 °C. Om de palatabiliteit van deze weefselextracten te testen, moeten ze eerst worden gereconstitueerd in een voedingsmatrix die nutritioneel vergelijkbaar is met die van het doelorganisme.Ringen van de mantel van inktvis zijn een geschikte eiwitbron voor bioassays van invertebraatweefsels en kunnen eenvoudig worden bereid tot een gelyofiliseerd poeder. Om deze bioassay te starten, plaatst u bevroren ringen van de inktvismantel in warm gedeïoniseerd water. Zodra ze ontdooid zijn, giet u een deel van het water af en doet u de ringen in een blender.Meng grondig op hoge snelheid totdat de inktvismantel een viskeuze vloeistof wordt. Voeg water toe als het materiaal te dik is om te mengen. Giet een dunne laag van de vloeibare inktvismantel op een ondiepe bakplaat en verspreid dit gelijkmatig.Plaats de bakplaat in een vriezer op -20 °C. De plaat met bevroren inktvis moet in kleinere stukken worden gebroken om het proces van lyofilisatie te vergemakkelijken. Kleinere stukken zijn gunstiger omdat ze sneller uitdrogen.In de vriesdroger. Plaats de gebroken stukken bevroren inktvis in de kamer en volg de bedieningsprocedures van de vriesdroger. Zodra ze gelyofiliseerd zijn, moeten de stukken inktvis worden verpulverd.Dit kan met een blender worden gedaan. Plaats de gedroogde stukjes inktvis in de blender en laat deze op de hoogste stand draaien tot het materiaal eruitziet als een uniform poeder. De volgende stap moet in een zuurkast worden uitgevoerd om het inademen van fijn inktvisstof te verminderen.Giet het gevriesdroogde inktvispoeder in een draaiende bloemzeef. Houd een houder onder de zeef om het poeder op te vangen dat door de zeef valt. Draai aan de zwengel om het gevriesdroogde inktvismateriaal te zeven.Grote strengen bindweefsel die in de vorige stappen niet voldoende zijn vermalen, blijven in de zeef achter, wat resulteert in een fijner poeder. Breng het gevriesdroogde inktvispoeder, indien nodig met behulp van een trechter, over in een afsluitbare container, spoel deze door met droge stikstofgas en bewaar het bevroren bij -20 °C. Nu het gevriesdroogde poeder van de inktvismantel is bereid, kunnen we een batch van het voedingsmengsel voor de assay maken. Bij het uitvoeren van meerdere opeenvolgende assays op dezelfde dag is het praktisch om een grote batch van het voedingsmengsel te maken.Hier demonstreren we het bereidingsproces voor een mengsel met een volume van 100 milliliters; weeg met een schoon weegbootje drie gram alginezuur en vijf gram gevriesdroegd inktvismantelpoeder af. Plaats deze droge ingrediënten in een bekerglas van 150 milliliter voordat er water wordt toegevoegd. Roer de droge ingrediënten voorzichtig met een microspatel om ze goed met elkaar te mengen.Voeg 100 milliliters gedeïoniseerd water toe en roer krachtig. Het kan enkele minuten duren voordat het poeder volledig gehydrateerd is. Zorg ervoor dat u een homogeen mengsel heeft voordat u verdergaat met de volgende stap.Indien u besluit de voedingsmatrix in één consistente kleur te kleuren, voegt u de kleurstof bij deze stap toe. Vul een maatspuit precies met 10 milliliters van het voedingsmengsel. In deze stap is volumetrische precisie van cruciaal belang, dus wees uiterst voorzichtig om te voorkomen dat er luchtbellen worden meegevoerd.Haal het scintillatiebuisje van 20 milliliter met het droge ruwe organische extract uit de vriezer en voeg een druppel of twee methanol toe. Voeg niet te veel methanol toe. Dit voorkomt dat de voedselmatrix stolt.Resuspendeer het extract met een microspatel en een minimale hoeveelheid oplosmiddel tot een homogeen mengsel. Zorg ervoor dat de wanden van het flesje worden afgeschraapt om te garanderen dat het volledige extract is geresuspendeerd. Spuit 10 milliliter voedingsmatrix uit de spuit in het 20 milliliter scintillatieflesje met het geresuspendeerde, gehomogeniseerde extract.Roer dit mengsel met de microspatel tot het homogeen is. Neem een zeer klein volume van het extractmengsel op; één milliliter is voldoende in een spuit.Dompel de punt van de spuit onder in een oplossing van 0,25 molair calciumchloride en druk de inhoud van de spuit uit om een lange, spaghetti-achtige streng te vormen. De streng zal in deze oplossing uitharden. Verwijder na enkele minuten de uitgeharde streng en leg deze op een glazen snijplank.Gebruik een scheermesje om de streng in pellets van vier millimeter lang te snijden. Verzamel de met extract behandelde pellets en spoel deze af met zeewater. Bereid vervolgens controlepellets.Volg dezelfde procedure zonder toevoeging van weefselextract. De toevoeging van kleurstof kan nodig zijn om de kleur van de controle- en behandelingspellets gelijk te maken. Bereid een negatieve controle voor die de vissen zeker zullen weigeren te eten.Voeg deton- en benzoaatpoeder toe aan het ruwe voedingsmengsel in een concentratie van 2 mg/mL, zoals beschreven door Miller en Pollock (2013). Voedingsassays worden uitgevoerd met in het wild gevangen yellow phase blue head RAs thala by fum fish, die in groepen van drie worden gehouden in compartimenten met ondoorzichtige wanden van een laboratoriumaquarium. Een geschikt hulpmiddel voor het toedienen van voedingspellets is een glazen pipet met een rubberen peer.Een pellet wordt als geaccepteerd beschouwd als deze direct door de vissen wordt geconsumeerd. Een pellet wordt als afgewezen beschouwd als deze niet wordt gegeten na minimaal drie pogingen door één of meer vissen om de pellet in de mondholte te nemen, of als de pellet wordt benaderd en genegeerd na één dergelijke poging.Niet-coöperatieve groepen vissen die weigeren controlepellets te eten, mogen niet worden meegenomen in de assays. Dit stroomschema demonstreert de assayprocedure waarbij in alle gevallen wordt begonnen met een controlepellet om te bevestigen dat de groep vissen coöperatief is. Bied vervolgens een behandeld pellet aan.Als de vissenHet behandelde pellet accepteren, wordt dit monster gescoord als geaccepteerd. Als de vissen het behandelde pellet weigeren, moet er vervolgens een controlepellet worden aangeboden om te bevestigen of de vissen zijn gestopt met eten. Als de vissen het daaropvolgende controlepellet accepteren, wordt het monster gescoord als geweigerd.Elk monster moet worden uitgevoerd met 10 onafhankelijke groepen vissen. Hier is een voorbeeldrun van deze voedingsassay. Eerst wordt een controlepellet aangeboden; de vissen accepteren het controlepellet.Ten tweede wordt een behandeld pellet aangeboden. In dit geval weigeren de vissen het behandelde pellet. Daarom moet vervolgens een controlepellet worden aangeboden.De vissen accepteren de daaropvolgende controle en de monster kan als afgewezen worden gescoord. Elk monster moet worden uitgevoerd met 10 onafhankelijke groepen vissen. De significantie van verschillen in de consumptie van controle- versus behandelde pellets moet worden geëvalueerd met een gemodificeerde versie van de exacte test van Fisher, zoals gepresenteerd door Low and Pollock 2014.De test is aangepast zodat de marginale totalen voor de controle- en behandelde pellets zijn vastgesteld, waarbij beide als willekeurige steekproeven worden beschouwd. Dit resulteert in een P-waarde van 0,057 wanneer zeven pellets worden gegeten. Daarom wordt elk extract als afschrikkend beschouwd als zes of minder pellets worden gegeten en smakelijk.Indien zeven of meer pellets zijn gegeten. Bij het vergelijken van de palatabiliteit tussen groepen extracten moet het gemiddelde aantal gegeten pellets worden gebruikt, zoals zal worden getoond in de representatieve resultaten. Hier rapporteren we de resultaten van deze bioassay voor zes soorten veelvoorkomende Caribische sponzen.Deze gegevens werden oorspronkelijk gepubliceerd door Pollock et al 1995 en tonen de kracht van deze aanpak aan om verschillen in chemische verdedigingsstrategieën tussen co-occurerende taxa te verduidelijken. Elke categorie op de Y-as vertegenwoordigt extracten van een enkele sponssoort. Meerdere individuen van elke soort werden bemonsterd, geëxtraheerd en getest, aangeduid door het getal tussen haakjes achter de soortnaam.Resultaten worden gerapporteerd als een gemiddeld aantal gegeten voedselpellets, plus de standaardfout per soort. Er werden bijna geen pellets gegeten in assays met ruw organisch extract van alus, pleth, pheon, compressor en lycine genaamd foris. In tegenstelling hiermee werden pellets gemaakt met extract van Cali spongy van Vais.Geo Osa en Michel lavis werden gemakkelijk geconsumeerd in de assay. Voor de eerste drie soorten werden minder dan zes pellets gegeten, waardoor ze als significant afschrikkend kunnen worden beschouwd. In tegenstelling hiermee vertoonden de tweede drie soorten geen significant verschil met de controles en kunnen zij als smakelijk worden beschouwd.De zojuist gedemonstreerde methoden bieden een krachtige aanpak om anti-predatoire chemische afweermechanismen te bestuderen in combinatie met manipulatieve veldexperimenten en inventarisaties. De resultaten van deze bioassays hebben mijn onderzoeksgroep geholpen om de factoren te begrijpen die de verspreiding en abundantie van mariene ongewervelden op Caribische koraalriffen bepalen. Cruciaal is dat deze methode voldoet aan de behoefte aan ecologische relevantie binnen de chemische ecologie en daarbuiten.De resultaten van deze bioassays kunnen dienen als basis voor onderzoek in diverse vakgebieden, waaronder de farmacologie, biotechnologie en evolutionaire ecologie.

a-fish-feeding-laboratory-bioassay-to-assess-antipredatory-activity

Research

JoVE Journal

Environment

Milieu

AVEXIS een high throughput assay ontwikkeld eiwit interactie systematisch scherm nieuwe extracellulaire receptor-ligand paar betrokken bij cellulaire opname processen. Het is specifiek ontworpen om voorbijgaande eiwit interacties die zijn moeilijk te identificeren met behulp van andere high throughput benaderingen op te sporen.

Aviditeit op basis van extracellulaire Interactie Screening (AVEXIS) voor de Scalable detectie van lage-affiniteit extracellulaire receptor-ligand interacties

Een techniek voor het laboratorium schatting van de netto-trofische overdracht efficiëntie van polychloorbifenylen (PCB) congeneren om visetende vis uit hun prooi wordt gepresenteerd. Om de toepasbaarheid van de laboratorium resultaten te maximaliseren naar het veld, moet de visetende vissen worden gevoed prooi vis die doorgaans worden gegeten in het veld.

Laboratorium Schatting van de netto Trofische Transfer Rendementen van PCB Congeneren naar Lake Trout (<em&gt; Salvelinus namaycush</em&gt;) Uit Zijn Prooi

Dit werk beschrijft een nieuw protocol voor de beoordeling van de ecotoxiciteit van verontreinigende stoffen, waaronder opkomende verontreinigingen zoals nanomaterialen, met behulp van de mariene bacterie Vibrio anguillarum . Deze methode laat de bepaling van de LC 50 of sterfte toe, de concentratie die een kweekbaarheid van 50% van de bacteriën veroorzaakt, na een 6 uur blootstelling.

Ecotoxicologische methode met mariene bacteriën<em&gt; Vibrio anguillarum</em&gt; De acute toxiciteit van milieuverontreinigende stoffen beoordelen

Hier presenteren we een protocol te onderzoeken larvale zebravis en fathead minnow motorische activiteiten en photomotor Reacties (PMR) met behulp van een geautomatiseerd tracking-software. Wanneer opgenomen in algemene toxicologie bioassays, geven analyses van deze gedragingen een diagnostisch instrument om te onderzoeken van chemische topicale. Dit protocol wordt beschreven met behulp van cafeïne, een neurostimulant model.

Experimentele Protocol voor de behandeling van de gedragsmatige reactie profielen in larvale vissen: toepassing op de Neuro-stimulerende cafeïne

De gezondheid van de wilde vissen kan worden gebruikt als een indicator van de gezondheid van aquatische ecosysteem. Documentatie van de zichtbare laesies of afwijkingen, gegevens die worden gebruikt voor de berekening van de voorwaarde-indicatoren, alsmede de mogelijkheid om het verzamelen van weefsels voor microscopische evaluatie, genuitdrukking en andere meer diepgaande necropsie gebaseerde vis medische keuringen te verstrekken analyses.

De beoordeling van de gezondheid van de necropsie gebaseerde wilde vis

Hier presenteren we een protocol om te isoleren en karakteriseren van de structuur, olfactorische potentie en gedragsmatige reactie van vermeende feromoon verbindingen van zee prikvissen.

De identificatie van de Zeeprik feromonen met behulp van de Bioassay-geleide fractionering

Hier beschrijven we een protocol om ruw gifextract uit zeeanemoon te verkrijgen en de hemolytische en fosfolipase-activiteit ervan te detecteren.

Identificatie van hemolytische en fosfolipase-activiteit in ruwe extracten van zeeanemonen door Eenvoudige Bioassays

Dit werk is gericht op het evalueren en herzien van de Artemia salina letaliteit bioassay procedure, ook geïdentificeerd als pekel garnalen letaliteit ashality assay. Deze eenvoudige en goedkope methode geeft informatie over de algemene toxiciteit (beschouwd als een voorlopige toxiciteitsevaluatie) van monsters, namelijk natuurlijke producten.

Letaliteit Bioassay met behulp van Artemia salina L.

Hier presenteren we een uitgebreide gedragstestbatterij, inclusief de nieuwe tank-, Shoaling- en sociale voorkeurstests, om de potentiële neurotoxische effecten van chemicaliën (bijv. methamfetamine en glyfosaat) op volwassen zebravissen effectief te bepalen met behulp van een enkele tank. Deze methode is relevant voor neurotoxiciteit en milieuonderzoek.

Beoordeling van neurotoxiciteit bij volwassen Danio rerio met behulp van een reeks gedragstests in een enkele tank

We beschrijven de workflow en data-analyse van een screeningssysteem voor het evalueren van de toxiciteit van chemische verbindingen op basis van de schrikreactie van zebravisembryo's. Het systeem registreert de bewegingen van zebravisembryo's bij blootstelling aan een trillingsstimulus en maakt een geïntegreerde evaluatie van algemene toxiciteit/letaliteit en neuromusculaire toxiciteit mogelijk.

Evaluatie van de toxiciteit van chemicaliën met behulp van een Zebrafish Vibration Startle Response Screening System

Het artikel stelt een nieuwe in vitro methode voor voor de snelle en gevoelige beoordeling van de toxiciteit en ecotoxiciteit van polluenten, gebaseerd op de beweeglijkheid van Mytilus galloprovincialis hemocyten. De methode heeft tot doel bij te dragen tot de ontwikkeling van meer ethische en sensitieve toxicologische en ecotoxicologische blootstellingsproeven.

Een toxicologische en ecotoxicologische test op basis van de hemocytenmotiliteit van mossel (Mytilus galloprovincialis)

Leer een visvoedingsbioassay om de antipredatoractiviteit van secundaire metabolieten uit weefsels van mariene organismen te beoordelen. Deze methode biedt experimenteel bewijs voor ecologische rollen in de mariene chemische ecologie.

Een vis van borstvoeding Laboratory Bioassay de Antipredatory activiteit van secundaire metabolieten te beoordelen vanuit de weefsels van mariene organismen (Video) | JoVE Journal

Een vis van borstvoeding Laboratory Bioassay de Antipredatory activiteit van secundaire metabolieten te beoordelen vanuit de weefsels van mariene organismen

Meer video's verkennen