Name: Methoden voor het vergelijken Voedingsstoffen in beebread Gemaakt door Africanized en Europese honingbijen en de Effecten op Hemolymfe Protein Titers (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: Leer hoe je voedingsstoffen in bijenbrood kwantificeert voor bijenteeltonderzoek met Europese en Afrikaanse honingbijen. Deze methode meet eiwitconcentraties en consumptiepatronen om bijengezondheid te verbeteren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs danken Mona Chambers, Geoffrey Hidalgo en Maurissa Two Two voor hun technische assistentie. We danken ook Dr. Earl White voor aminozuuranalyse, Dr. Roger Simonds voor analyse van pollen op pesticiden, en Drs. Stanley S. Schneider, Vanessa Corby-Harris en Kirk Anderson voor hun beoordelingen en discussies over eerdere versies van het manuscript en vele nuttige suggesties.

1. Het verkrijgen beebread van AHB en EHB Koloniën <ol><li> Plaats stuifmeelvallen op bijenkolonies en het verzamelen van stuifmeel. Maal de pollen tot een fijn poeder (vergelijkbaar met stuifmeel vergoten is van helmknoppen) met behulp van een koffiemolen. </li><li> Vestigen 5 kolonies elk van AHB en EHB in een afgesloten vlieggebied (EFA), zodat de bijen foerageren alleen op de pollen verstrekt. Om werknemers te voorkomen afglijden tussen EHB en AHB kolonies, verdeel de EFA in afzonderlijke secties, zodat de bijen niet kunnen oversteken tussen hen. Plaats individuele EHB of AHB kolonies met 3,500-4,000 werkbijen, wax kam met nectar, honing, onvolwassen broed en lege kam in elke sectie van de EFA. OPMERKING: De kolonies niet hebt opgeslagen stuifmeel toen opgericht. De snelheid die stuifmeel opgeslagen kan worden vergroot door het weglaten tot koningin in de kolonies. </li><li> Voeden grond pollen om kolonies door het plaatsen van een dienblad met het stuifmeel in elke sectie van de EFA. Het verspreiden van ongeveer 60 g van stuifmeel op elke lade zodat foraging bijen kan het verzamelen als corbicular belastingen en slaan de pollen in hun kolonies als beebread. Verder verschaffen vers stuifmeel op elke bak dag gedurende 3 weken. </li><li> Raadpleeg beebread van de Europese koloniën als Europese beebread (EBB), en uit Africanized koloniën als Africanized beebread (ABB). </li></ol> 2. Voeden Bijen in Cages <ol><li> Plaats frames van verzegelde werksterbroed van AHB en EHB kolonies in aparte opkomst kooien in een milieu-kamer ingesteld op 32-34 ° C en 40% relatieve vochtigheid .. </li><li> Wanneer de werknemers ontstaan ​​en zijn ongeveer 24 uur oud, vast 12 Plexiglas bioassay kooien (afmetingen = 11,5 x 7,5 x 16,5 cm 3) en voeg ofwel 100 nieuw opgedoken EHB of 100 nieuw opgedoken AHB werkbijen om elke kooi. Leg een deel van kam met een bekend aantal ofwel EBB of ABB-cellen (24-30 cellen per kooi) in elke kooi om de volgende behandeling combinaties genereren: AHB gevoed ABB, EHB gevoed ABB, AHB gevoed EBB en EHB gevoed EBB. (4 behandelingen; 6kooien per behandeling; 24 kooien in totaal). </li><li> Flesjes water en een 50% honing en water oplossing in volume aan elke kooi geformuleerd voegen. Vul de honing en water flesjes per dag gedurende de 11 dagen studieperiode. </li></ol> 3. Sampling Bijen van de arbeider en beebread en raming van het verbruik <ol><li> Monster 10 nieuw opgedoken EHB en AHB werknemers voorafgaand aan het plaatsen ze in de kooien. Verwijzen naar deze als dag 0 bijen en hebben ze dienen als basis voor hemolymph eiwit concentraties. </li><li> Verwijder 10 bijen uit elke kooi nadat ze gevoed EBB of ABB voor 4, 7 en 11 dagen. </li><li> Plaats de levende bijen in individuele microcentrifugebuisjes en ingesteld op ijs packs. Selecteer een subgroep van vier bijen voor de analyse van hemolymph eiwitconcentratie. </li><li> Na bemonstering bijen op Dag-11, tel het aantal kam cellen die nog beebread bevatten. Dit is een relatieve maatstaf van beebread consumptie. </li><li> Resterend beebread van de cellen in elke kooi en opslaan in SEPARat microcentrifuge buizen volgens kooi. Houd de beebread monsters bij -80 ° C tot geanalyseerd op pH oplosbaar eiwitconcentratie en aminozuurgehalte. </li></ol> 4. Het schatten van de pH van Pollen en beebread <ol><li> Neem zes willekeurige 0,3 g aan het stuifmeel toegevoerd aan bijen in de EFA en oplossen in 300 pl gedestilleerd water. Meet de pH met een waterdichte dubbel diafragma pH spies met een nauwkeurigheid van 0,01. </li><li> Neem 0,3 g monster van beebread die overbleven na de 11-daagse voeden periode in iedere kooi. Los het beebread in 300 pl gedestilleerd water en meet pH zoals beschreven voor pollen (4.1). </li></ol> 5. Eiwitanalyse <ol><li> Neem zes monsters van het stuifmeel en een monster van EBB en ABB uit elke kooi. WINKEL monsters bij -20 ° C tot geanalyseerd op oplosbare proteïne concentratie. </li><li> Meng 20 mg ofwel pollen of beebread met 1000 pi 0,1 M fosfaatbuffer (PBS). </li><li> Vortex het mengsel gedurende 10 seconden en centrifugeer bij 571,2 xg gedurende 1 min. </li><li> Verwijderen van een 10 ul monster van de bovenstaande en plaats in wells van een 96 well platte bodem EIA / RIA polystyreen plaat. Repliceren elk monster in drie putten. </li><li> Trek hemolymfe van bijen vanuit elke kooi door het met een 20 pl capillaire buisje (die was verwarmd en getrokken tot een vlijmscherpe point) in het rechter zijgedeelte van de thorax nabij het bevestigingspunt van de vleugels. Verzamel extra hemolymph, indien nodig, door het invoegen van dezelfde buis in het membraan tussen de abdominale tergieten. </li><li> Voeg 1 ul van hemolymfe 9 pl 0,1 M PBS. Bewaar de hemolymfe oplossing bij -20 ° C tot analyse van oplosbaar eiwit. </li><li> Bepaal totale oplosbare eiwit concentraties in pollen, beebread en hemolymph monsters met behulp van een commercieel Bradford eiwit testkit. Volg de instructies van de fabrikant. </li><li> Opzetten van een standaard curve te schatten oplosbare proteïne Concentration in de monsters door het meten eiwit absorptie met bekende eiwitconcentraties in runderserumalbumine (BSA). Meet eiwit absorptie bij 595 nm met een spectrofotometer. </li></ol> 6. Aminozuuranalyse <ol><li> Pool individuele monsters van kam cellen van elke kolonie aan een representatieve steekproef van EBB en ABB voor analyse te maken. </li><li> Neem 50 mg pollen of beebread monster in autosampler flesjes gewogen en voeg 1 ml gedestilleerd water aan de flacon, samen met 100 ul van een 50 ng / ul interne standaardoplossing bestaat uit d4 alanine, D23 -lauric zuur, 13 C 6-glucose en d 39 -arachidiac zuur. </li><li> Cap het monster en ultrasone trillingen gedurende 5 minuten. </li><li> Conditie een HLB cartridge door toevoeging van 1 ml methanol geëquilibreerd door toevoeging van 1 ml gedestilleerd water gevolgd door de toevoeging van 1 ml van de beebread of pollen monster. Spoel de patroon met 1 ml van 5,0% MeOH / H2O en elute met 1 ml 80% MeOH / H2O </li><li> Damp het monster tot droog onder een stikstofstroom. Los het monster met 50 pl pyridine en 100 pl N, O-bis (trimethylsilyl) trifluoraceetamide + trimethylchloorsilaan (BSTFA + TMCS). </li><li> Cap en incubeer het monster bij 70 ° C gedurende 30 min. </li><li> Laat het monster afgekoeld en overgebracht naar een schone autosampler flesje. </li><li> Cap en plaats het monster in een Mass Selective Detector gekoppeld aan een gaschromatograaf om de monsters zowel vluchtige stoffen en organische zuren analyseren. Scheid de suiker en organische zuren volgende TMS derivaatvorming met BSTFA + TMCS met behulp van een kolom (30 mx 0,25 mm id) met een 1,0 micrometer laagdikte. </li><li> Stel de kolom oven bij 50 C gedurende 2 min, verhoog de temperatuur lineair tot 290 ° C bij 5 C / min. Houd gedurende 7 min. Stel de GC injector en GC / MS-interface tot 250 ° C en 290 ° C. <ol><li> Gebruik Helium als drager in een flow van 1,0 ml / min. Stel de MS bron temperaturen tot 230 ° C. </li></ol></li><li> Tune en kalibreren van de massaspectrometer dagelijks met perfluortributylamine (PFTBA). Een 1 pl injectie van PFTBA in de volledige scan (35-700 amu) positieve ion modus om gegevens over de aanwezigheid en concentratie van aminozuren te verkrijgen. </li></ol>

<ol><li>Brodschneider, R., Crailsheim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutrition+and+health+in+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Nutrition and health in honey bees.</a> Apidologie. 41 (3), 278-294 (2010).</li>
<li>Spivak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relative+success+of+Africanized+and+European+honey-bees+over+a+range+of+life-zones+in+Costa+Rica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Ecol%22%5BJournal%5D)">The relative success of Africanized and European honey-bees over a range of life-zones in Costa Rica.</a> J. Appl. Ecol. 29 (1), 150-162 (1992).</li>
<li>Schneider, S. S., McNally, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+foraging+patterns+and+colony+energy+status+in+the+African+honey+bee+Apis+mellifera+scutellata%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Behav%22%5BJournal%5D)">Spatial foraging patterns and colony energy status in the African honey bee Apis mellifera scutellata.</a> J. Insect Behav. 6 (2), 195-210 (1993).</li>
<li>Becerra-Guzman, F., Guzman-Novoa, E., Correa-Benitez, A., Zozaya-Rubio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Length+of+life%2C+age+at+first+foraging+and+foraging+life+of+Africanized+and+European+honey+bee+%28Apis+mellifera%29+workers%2C+during+conditions+of+resource+abundance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Api.+Res%22%5BJournal%5D)">Length of life, age at first foraging and foraging life of Africanized and European honey bee (Apis mellifera) workers, during conditions of resource abundance.</a> J. Api. Res. 44 (4), 151-156 (2005).</li>
<li>Saltykova, E. S., Lvov, A. V., Ben’kovskaya, G. V., Poskryakov, A. V., Nikolenko, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interracial+differences+in+expression+of+genes+of+antibacterial+peptides%2C+Abaecin%2C+Hymenoptaecin%2C+and+Defensin%2C+in+bees+Apis+mellifera+mellifera+and+Apis+mellifera+caucasica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Evol.+Biochem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Interracial differences in expression of genes of antibacterial peptides, Abaecin, Hymenoptaecin, and Defensin, in bees Apis mellifera mellifera and Apis mellifera caucasica.</a> J. Evol. Biochem. Phys. 41 (5), 506-510 (2005).</li>
<li>Decanini, L. I., Collins, A. M., Evans, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variation+and+heritability+in+immune+gene+expression+by+diseased+honeybees%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hered%22%5BJournal%5D)">Variation and heritability in immune gene expression by diseased honeybees.</a> J. Hered. 98 (3), 195-201 (2007).</li>
<li>Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiology+of+pollen+and+beebread%3A+the+genus+Bacillus%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Microbiology of pollen and beebread: the genus Bacillus.</a> Apidologie. 10 (3), 269-274 (1979).</li>
<li>Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiology+of+pollen+and+beebread%3A+the+yeasts%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Microbiology of pollen and beebread: the yeasts.</a> Apidologie. 10 (3), 43-53 (1979).</li>
<li>Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+roles+of+non-pathogenic+microflora+associated+with+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiology+Letters%22%5BJournal%5D)">Identification and roles of non-pathogenic microflora associated with honey bees.</a> FEMS Microbiology Letters. 155 (1), 1-10 (1997).</li>
<li>Loper, G. M., Standifer, L. N., Thompson, M. J., Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemistry+and+microbiology+of+bee-collected+almond+%28Prunus+dulcis%29+pollen+and+beebread.+I.+Fatty+acids%2C+sterols%2C+vitamins%2C+and+minerals%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Biochemistry and microbiology of bee-collected almond (Prunus dulcis) pollen and beebread. I. Fatty acids, sterols, vitamins, and minerals.</a> Apidologie. 11 (1), 63-73 (1980).</li>
<li>Khachatryan, Z. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predominant+role+of+host+genetics+in+controlling+the+composition+of+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Predominant role of host genetics in controlling the composition of gut microbiota.</a> PLoS ONE. 3 (8), e3064(2008).</li>
<li>Turnbaugh, P. J., Ley, R. E., Mahowald, M. A., Magrini, V., Mardis, E. R., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+obesity+associated+gut+microbiome+with+increased+capacity+for+energy+harvest%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An obesity associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest.</a> Nature. 444 (7122), 1027-1031 (2006).</li>
<li>Ley, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity+alters+gut+microbial+ecology%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Obesity alters gut microbial ecology.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 102 (31), 11070-11075 (2005).</li>
<li>Ley, R. E., Peterson, D. A., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecological+and+evolutionary+forces+shaping+microbial+diversity+in+the+human+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Ecological and evolutionary forces shaping microbial diversity in the human intestine.</a> Cell. 124 (4), 837-848 (2006).</li>
<li>Standifer, L. N., McCaughey, W. F., Dixon, S. E., Gilliam, M., Loper, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemistry+and+microbiology+of+pollen+collected+by+honey+bees+%28Apis+mellifera+L.%29+from+almond%2C+Prunisdulcis.+II.+Protein%2C+amino+acids+and+enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Biochemistry and microbiology of pollen collected by honey bees (Apis mellifera L.) from almond, Prunisdulcis. II. Protein, amino acids and enzymes.</a> Apidologie. 11 (2), 163-171 (1980).</li>
<li>Human, H., Nicolson, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutritional+content+of+fresh%2C+bee-collected+and+stored+pollen+of+Aloe+greatheadii+var+davyana+%28Asphodelaceae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochem%22%5BJournal%5D)">Nutritional content of fresh, bee-collected and stored pollen of Aloe greatheadii var davyana (Asphodelaceae).</a> Phytochem. 67 (14), 1486-1492 (2006).</li>
<li>Schneider, S. S., DeGrandi-Hoffman, G., Smith, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+African+honeybee%3A+Factors+contributing+to+a+successful+biological+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">The African honeybee: Factors contributing to a successful biological invasion.</a> Ann. Rev. Entomol. 49, 351-376 (2004).</li>
<li>Winston, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+and+management+of+Africanized+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">The biology and management of Africanized honey bees.</a> Annu. Rev. Entomol. 37, 173-193 (1992).</li>
<li>Woyke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brood-rearing+ef%EF%AC%81ciency+and+absconding+in+Indian+honeybees%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Apic.+Res%22%5BJournal%5D)">Brood-rearing efﬁciency and absconding in Indian honeybees.</a> J. Apic. Res. 15 (3/4), 133-143 (1976).</li>
<li>Fletcher, D. J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brood+rearing+and+absconding+of+tropical+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22African+Bees%22%5BJournal%5D)">Brood rearing and absconding of tropical honey bees.</a> African Bees. , Apimondia. Pretoria, South Africa. 96-102 (1977).</li>
<li>Winston, M. L., Otis, G. W., Taylor, O. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absconding+behavior+of+the+Africanized+honey+bee+in%5BTitle%5D)+AND+%22South+America.+J.+Api.+Res%22%5BJournal%5D)">Absconding behavior of the Africanized honey bee in.</a> South America. J. Api. Res. 18 (2), 85-94 (1979).</li>
<li>Schneider, S. S., McNally, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+in%EF%AC%82uencing+seasonal+absconding+in+colonies+of+the+African+honey+bee%2C+Apis+mellifera+scutellata%5BTitle%5D)+AND+%22Insectes+Soc%22%5BJournal%5D)">Factors inﬂuencing seasonal absconding in colonies of the African honey bee, Apis mellifera scutellata.</a> Insectes Soc. 39 (4), 402-423 (1992).</li>
<li>Hepburn, H. R., Reece, S. L., Neumann, P., Moritz, R. F. A., Radloff, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absconding+in+honeybees+%28Apis+mellifera%29+in+relation+to+queen+status+and+mode+of+worker+reproduction%5BTitle%5D)+AND+%22Insectes+Soc%22%5BJournal%5D)">Absconding in honeybees (Apis mellifera) in relation to queen status and mode of worker reproduction.</a> Insectes Soc. 46 (4), 323-326 (1999).</li>
<li>Harrison, J. F., Fewell, J. H., Anderson, K. E., Loper, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+physiology+of+the+invasion+of+the+Americas+by+Africanized+honeybees%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Comp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Environmental physiology of the invasion of the Americas by Africanized honeybees.</a> Integr. Comp. Biol. 46 (6), 1110-1122 (2006).</li>
<li>DeGrandi-Hoffman, G., Eckholm, B. J., Huang, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+bee+bread+made+by+Africaized+and+European+honey+bees+%28Apis+mellifera%29+and+its+effects+on+hemolymph+protein+titers%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">A comparison of bee bread made by Africaized and European honey bees (Apis mellifera) and its effects on hemolymph protein titers.</a> Apidologie. 44 (1), 52-63 (2013).</li>
<li>Cappelari, F. A., Turcatto, A. P., Morais, M. M., DeJong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Africanized+honey+bees+more+efficiently+convert+protein+diets+into+hemolymph+protein+than+do+Carniolan+bee+%28Apis+melliferacarnica%29%5BTitle%5D)+AND+%22Genet.+Mol.+Res%22%5BJournal%5D)">Africanized honey bees more efficiently convert protein diets into hemolymph protein than do Carniolan bee (Apis melliferacarnica).</a> Genet. Mol. Res. 8 (4), 1245-1249 (2009).</li>
<li>Human, H., Nicolson, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutritional+content+of+fresh%2C+bee-collected+and+stored+pollen+of+Aloe+greatheadii+var+davyana+%28Asphodelaceae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochem%22%5BJournal%5D)">Nutritional content of fresh, bee-collected and stored pollen of Aloe greatheadii var davyana (Asphodelaceae).</a> Phytochem. 67, 1486-1492 (2006).</li>
<li>Bonvehi, J. S., Jorda, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutrient+composition+and+microbiological+quality+of+honeybee-collected+pollen+in+Spain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Agric.+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Nutrient composition and microbiological quality of honeybee-collected pollen in Spain.</a> J. Agric. Food Chem. 45 (3), 725-732 (1997).</li>
<li>Anderson, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+ecology+of+the+hive+and+pollination+landscape%3A+Bacterial+associates+from+floral+nectar%2C+the+alimentary+tract+and+stored+food+of+honey+bees+%28Apismellifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Microbial ecology of the hive and pollination landscape: Bacterial associates from floral nectar, the alimentary tract and stored food of honey bees (Apismellifera).</a> PLoS ONE. 8 (12), e83125(2013).</li>
<li>Southwick, E. E., Roubik, D. W., Williams, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+energy+balance+in+groups+of+Africanized+and+European+honey+bees%3A+ecological+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Comparative energy balance in groups of Africanized and European honey bees: ecological implications.</a> Comp. Biochem. Physiol. A. 97 (1), 1-7 (1990).</li>
<li>Spivak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relative+success+of+Africanized+and+European+honey-bees+over+a+range+of+life-zones+in+Costa+Rica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Ecol%22%5BJournal%5D)">The relative success of Africanized and European honey-bees over a range of life-zones in Costa Rica.</a> J. Appl. Ecol. 29 (1), 150-162 (1992).</li>
<li>Francoy, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+and+genetic+changes+in+a+population+of+Apis+mellifera+after+34+years+of+Africanization%5BTitle%5D)+AND+%22Genet.+Mol.+Res%22%5BJournal%5D)">Morphometric and genetic changes in a population of Apis mellifera after 34 years of Africanization.</a> Genet. Mol. Res. 8 (2), 709-717 (2009).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Met behulp van de hierboven beschreven methoden, vonden we dat de beebread gemaakt door AHB werd geconsumeerd in grotere hoeveelheden door zowel AHB en EHB. Hoewel EHB en AHB verbruikt vergelijkbare hoeveelheden van elk type beebread, AHB hadden hogere hemolymph eiwit titers. Bevindingen op basis van onze methoden waren vergelijkbaar met eerdere verslagen waar hemolymph eiwitgehalten in AHB hoger dan in EHB hoewel beide werden gevoed dezelfde diëten 26 waren. Door het meten van het verbruik van EBB en ABB die werden verbruikt verschillende snelheden door zowel EHB en AHB werd vastgesteld dat hemolymfe eiwitconcentratie in elk ondersoorten niet door verhoging voedselconsumptie kan worden verhoogd. Er lijkt een plateau voor hemolymph eiwitconcentratie bij werknemers van de verpleegkundige bij de leeftijd en dat het setpoint voor het plateau is hoger in AHB dan EHB zijn. Er zijn een aantal belangrijke voorwaarden voor de oprichting van kolonies voor beebread productie die het tempo van de pollen opslag zal optimaliseren. Ten eerste, de colonies moet frames met open broed. Zonder geopend kroost te voeden, zullen werknemers niet verzamelen veel stuifmeel. Ten tweede moet de kolonie queenless dus geen extra broed is geproduceerd. Broedaanzet vereist grote hoeveelheden pollen, en alleen overtollige stuifmeel wordt opgeslagen. In de kleine kolonies in EFA opgericht, zou er weinig pollen worden opgeslagen als beebread als broed gebieden werden uitbreiden zodat kolonies moeten queenless zijn. Tenslotte, voor beebread worden gemaakt, pollen worden als corbicular ladingen verzameld en opgeslagen kam cellen. Als het stuifmeel wordt verzameld in stuifmeelvallen, moet deze worden vermalen tot een fijn poeder alvorens het naar de bijen, zodat ze kunnen verzamelen als corbicular belastingen. De methoden voor het meten van het verbruik van beebread gegenereerd kwalitatieve dan absolute schattingen. De enige verbruik dat werd geteld was wanneer de cellen volledig werden ontdaan van bijen brood. Een meer nauwkeurige schatting van de totale bijenbrood verbruik kan worden verkregen door het bij bread uit de cellen en maakt het een pasteitje dat kan worden gewogen vóór en na de studieperiode. Echter, we wilden de honingbij brood in de cellen behouden zodat de bijen kan voeden als ze zouden in een kolonie en misschien verder verwerken tijdens de onderzoeksperiode. Het verschil in gewicht van de kam secties voor en na de studie niet werd gebruikt als een schatting van het verbruik omdat het gewicht kunnen verhogen omdat bijen zet het verdunde honing toegevoerd ze in sommige cellen. De arbeiders misschien ook een deel van de verdunde honing aan de bijen brood hebt toegevoegd. Daarom werden cellen die ongeveer gelijke hoeveelheden van bij brood voor en na de voertijd geteld en genereerde een kwalitatieve meting. Toch was er een opvallend verschil tussen de twee soorten beebread het aantal lege ABB cellen geteld opzichte EBB na 11 dagen. Bepalen wanneer opgeslagen stuifmeel wordt beebread kan difficult omdat bijen voegen voortdurend pollen aan cellen. De volken die gebruikt zijn voor de productie van beebread werden opgericht met frames open broed zo bijen stuifmeel zou verzamelen. De kolonies waren queenless dus er larven te voeden slechts ongeveer 9 dagen na de kolonie werd vastgesteld. Voor de rest van de periode van 3 weken bij kolonies waren in de EFA, het stuifmeel dat de verzamelde bijen is opgeslagen en wordt omgezet in beebread. Het bijhouden van de opgeslagen stuifmeel in de kam cellen voor een extra 11 dagen wanneer dit naar bijen in kooien ook kan de verwerking van de pollen zijn blijven beebread. De omzetting van pollen tot bijenbrood duurt ongeveer 7 dagen 8. De beebread gevoerd aan EHB en AHB hadden lagere pH en verminderde concentraties eiwit in vergelijking met het stuifmeel gevoed. Soortgelijke bevindingen van veranderingen in de pollen na conversie beebread zijn gemeld door anderen 7,10,27. Onze resultaten verschilden van eerdere rapporten echter in dat waren er verschillen in concentraties of bepaalde aminozuren tussen beebread en stuifmeel. De veranderingen in zowel eiwit en aminozuurconcentraties kan te wijten zijn aan de activiteit van proteolytische enzymen, kan de bron met als bijen zelf of microbiële populaties in het beebread 7,8,28,29 vastgesteld. De methoden voor de eiwitconcentratie te meten waren vergelijkbaar met die eerder beschreven om de effecten van eiwitten op Africanized en Europese bijen 26 bepalen. Als een verlengstuk van de methoden, waren we in staat in te schatten oplosbaar eiwit in de pollen en beebread. Die methoden gegenereerde vergelijkbare bevindingen aan eerdere verslagen 7,10,27. Onze bevindingen bieden aanvullend bewijs dat AHB efficiënter te assimileren eiwitbehoefte dan EHB, en dat dit een belangrijke factor in de ecologische dominantie van AHB in de meeste regio&#39;s waar het is geëmigreerd en ingeburgerd 30-32 zou kunnen zijn.

Voeding speelt een fundamentele rol in de gezondheid en kracht van honingbij kolonies en in hun inrichting als populaties. Voedingsstoffen uit voedsel te voorzien van energie en de biochemische componenten die nodig zijn voor broedaanzet, thermoregulatie, foerageren en immuunrespons. Voor bijenkolonies, de voedingsstoffen die nodig zijn om kolonie populatie groeien en behouden van hun gezondheid komen van nectar en stuifmeel. Nectar levert koolhydraten en pollen levert de resterende voedingsbehoeften zoals eiwitten, lipiden, vitaminen en mineralen 1. Ondersoorten van honingbijen kunnen verschillen in wat de voeding gebaseerd kolonie-niveau parameters zoals werknemer levensduur, broedaanzet, en mechanismen van sociale immuniteit 2-6. Deze verschillen kunnen worden gekoppeld aan hoe voedsel, met name stuifmeel wordt verwerkt door de kolonie en verteerd in individuen. Stuifmeel wordt opgeslagen in kam cellen en door microbieel gemedieerde melkzuur fermentatie wordt chemisch veranderd <sup&gt; 7-10. De gefermenteerde pollen heet beebread. Er kunnen genotypische verschillen tussen ondersoorten in hun vermogen om voedingsstoffen te nemen van het stuifmeel die ze verzamelen en op te slaan en dit zou de groei kolonie en overleving beïnvloeden. Genotypische effecten op de verwerking van levensmiddelen en de overname van voedingsstoffen zijn gedocumenteerd in andere organismen waardoor sommige individuen om meer voedingsstoffen en calorieën dan anderen te verkrijgen terwijl het verbruiken van hetzelfde voedsel 11-14. Hier beschrijven we methoden die worden gebruikt om te vergelijken de samenstelling en de consumptie van beebread gemaakt door verschillende ondersoorten van de honingbijen. Methoden om de resulterende hemolymph eiwit titers in werkbijen ook worden beschreven meten. Eerdere studies over de voedingskundige samenstelling van beebread werden gedaan met Europese honingbijen (EHB) 10,15,16. Er kunnen echter verschillen in beebread door bijen verschillende ondersoorten, zelfs wanneer zij zich voeden met dezelfde pollen. EHB en AHB werden vergeleken omdat deze subspecies hebben verschillende gedrags- en fysiologische verschillen die verband kunnen houden met de verwerking van levensmiddelen en voedingsstoffen overname 17. Enkele van de meest opvallende verschillen zijn dat AHB verzamelen en verbruiken meer pollen dan EHB en lijken het gemakkelijker om te zetten in broed 18. AHB kolonies hebben hogere zwermende tarieven dan EHB en onderduiken wanneer voedsel middelen steeds beperkt 19-23. Aantoonbaar vertrek is zeldzaam in EHB. AHB hebben ook een snellere stofwisseling dan EHB 24. De voedingswaarde basis van de kolonie-niveauverschillen tussen EHB en AHB kan worden gerelateerd aan de snelheid van pollen verzamelen en om de voedingswaarde (bijvoorbeeld aminozuren en eiwitten) nadat deze is geconverteerd naar beebread. Beebread consumptie en het resulterende eiwit overname ook mogelijk een rol spelen in de kolonie-niveau verschillen tussen EHB en AHB spelen. Met behulp van de ontwikkelde methoden, EHB en AHB gemaakt beebread uit dezelfde pollen bron. De beebread werd vervolgens teruggekoppeld naar de bijen van each ondersoorten en kan bepalen of bijen verwerven eiwit uit beebread op een wijze die kenmerkend is voor hun ondersoorten of de bron van de beebread.

<table><tbody><tr><td>waterproof double junction pH spear </td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Koffiemolen</td><td>Mr. Coffee </td><td>model 1DS77</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's fosfaat bufferoplossing</td><td>Emd-millipore</td><td>BSS-1005-B</td><td></td></tr><tr><td>EIA/RIA polystyreen plaat</td><td>Sigma-Aldrich-Corning</td><td>CLS3590-100EA</td><td></td></tr><tr><td>microcapillaire pipetten</td><td>Kimble Glass Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Quick Start Bradford Eiwit Assay Kit 2 </td><td>Bio-Rad</td><td>#500-0202</td><td></td></tr><tr><td>Spectrofotometer</td><td>Biotek Synergy HT </td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mass Selectieve Detector </td><td>Agilent</td><td>5973N</td><td></td></tr><tr><td>HLB cartridge</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>gas chromatograaf </td><td>Agilent</td><td>6930</td><td></td></tr><tr><td> gas chromatografie kolom </td><td>A J&amp;W Scientific </td><td>DB-1701</td><td></td></tr><tr><td>d4-alanine </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>488917</td><td></td></tr><tr><td>d23-laurinezuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>451401</td><td></td></tr><tr><td>13C6-glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>389374</td><td></td></tr><tr><td>Pyridine </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>270970</td><td></td></tr><tr><td>N,O-Bis (trimethylsilyl)trifluoracetamid + &nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trimethylchlorosilaan (BSTFA + TMCS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>33148</td><td></td></tr><tr><td>Perfluorotributylamine (PFTBA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>442747-U</td><td></td></tr><tr><td>d39-arachidinzuur</td><td>Cambridge Isotope </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

methoden voor het vergelijken voedingsstoffen in beebread gemaakt door africanized en europese honingbijen en de effecten op hemolymfe protein titers

Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

Honingbijen verkrijgen voedingsstoffen uit stuifmeel die ze verzamelen en op te slaan in de korf als beebread. We ontwikkelde methoden om het stuifmeel bron die bijen verzamelen en omzetten naar beebread door het plaatsen van kolonies in een speciaal geconstrueerde afgesloten vlucht gebied te controleren. Werkwijzen zijn ontwikkeld om de eiwitten en aminozuursamenstelling van het stuifmeel en beebread analyseren. We beschrijven ook hoe de consumptie van de beebread werd gemeten en methoden gebruikt om volwassen werkbij hemolymph eiwit titers te bepalen na het voeden op beebread voor 4, 7 en 11 dagen na opkomst. Methoden werden toegepast om te bepalen of genotype van invloed op de omzetting van pollen tot beebread en het tarief dat bijen verbruiken en het verwerven van eiwit uit het. Twee ondersoorten (Europese en Africanized honingbijen; respectievelijk EHB en AHB) werden voorzien van dezelfde pollen bron. Op basis van de ontwikkelde methoden, beebread door beide ondersoorten hadden lagere eiwitconcentraties en pH-waarden dan de pollen. In het algemeen, aminozuur concentraties in beebread gemaakt door een van beide EHB of AHB waren vergelijkbaar en traden op hogere niveaus in beebread dan in pollen. Zowel AHB en EHB verbruikt aanzienlijk meer van de beebread gemaakt door AHB dan door EHB. Hoewel EHB en AHB verbruikt vergelijkbare hoeveelheden van elk type beebread, hemolymph eiwit concentraties in AHB waren hoger dan in EHB. Verschillen in eiwit overname tussen AHB en EHB misschien milieu aanpassingen in verband met de geografische regio waar elke ondersoort geëvolueerd weerspiegelen. Deze verschillen kunnen bijdragen aan de succesvolle oprichting van AHB bevolking in de Nieuwe Wereld, omdat de effecten op broedaanzet en kolonie groei.

<html> Beebread werd opgeslagen in -80 ° C gedurende minder dan een maand voordat ze geanalyseerd op pH en eiwitconcentratie, en ongeveer 4 maanden voor aminozuuranalyse. Beebread verschilde van het stuifmeel in pH en eiwitconcentratie (figuur 1). De pH van beebread lager dan de pollen de eiwitconcentratie. Zowel EHB en AHB verbruikt meer ABB dan EBB (figuur 2). Niveaus van oplosbaar eiwit in de hemolymfe van AHB aanzienlijk hoger dan EHB ongeacht het type beebread zij verbruikt (figuur 3). Deze verschillen in hemolymph eiwitgehalten voorgedaan, hoewel EHB en AHB verbruikt vergelijkbare hoeveelheden van elk type beebread. De leeftijd van de bijen de bemonstering significant beïnvloed oplosbaar eiwit concentraties in de hemolymfe. Proteïne concentraties waren significant lager in dag 4 bijen tegen dag 7 of 11 die niet verschilden. _content &quot;&gt; Van de 10 aminozuren die essentieel zijn voor honingbijen zijn bijna histidine werden gedetecteerd in de pollen. Meestal aminozuurconcentraties gemeten beebread hoger dan in het stuifmeel (figuur 4). Bijvoorbeeld concentraties leucine en threonine waren ongeveer 60% hoger in vergelijking met beebread pollen en valine concentraties waren ongeveer 25% hoger. alanine, asparaginezuur, glutamine, methionine en niveaus waren ook hoger in beebread dan in pollen. Aminozuren concentraties niet sterk verschillen tussen ABB en EBB behalve fenylalanine en cysteïne. Fenylalanine niveaus waren ongeveer twee keer zo hoog bij ABB dan beide EBB of pollen. Cysteïne concentraties lager EBB tegenover ABB of pollen waren. Tryptofaan is het enige aminozuur in hogere concentraties in pollen dan in de EBB of ABB. Concentraties van proline in pollen en ABB waren hoger dan in de EBB. Figuur 1: Vergelijking van de pH (A) en oplosbaar eiwit concentraties (B) in pollen en de beebread gemaakt door Europese (EHB) of Africanized (AHB) honingbijen. De pH van stuifmeel was significant hoger dan de beebread zoals bepaald door analyse van variantie (F 2,12 = 3.725, p &lt;0.0001), gevolgd door een Tukeys W- meervoudige vergelijkingstest. De eiwitconcentratie in pollen was significant hoger dan in beebread door EHB (EBB) of AHB (ABB) (F 2,27 = 16,49; p &lt;0,0001). Middel gevolgd door dezelfde letter zijn niet significant verschillend op het 0,05-niveau. <img alt="Figuur 2" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig2highres.jpg" width="600" /> Figuur 2: Het gemiddelde percentage CELls met beebread die volledig werden verbruikt dan een 11 dagen interval door gekooide bijen. De beebread werd gemaakt door een Europese (EHB) of Africanized (AHB) bijen met dezelfde pollen bron. Middelen werden geschat op basis van vijf kooien van elke behandeling; die met dezelfde letter zijn niet significant verschillend op het 0,05-niveau, zoals bepaald door een enkele variantie-analyse (F 3,16 = 7,3, p = 0,003) en Tukey W test. Deze figuur is gewijzigd van 25. <img alt="Figuur 3" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig3highres.jpg" width="600" /> Figuur 3: De gemiddelde concentratie van eiwit in hemolymph uit Europese (EHB) of Africanized (AHB) honingbijen gevoed beebread gemaakt door Europese (EBB) of Africanized (ABB) bijen voor 4, 7 en 11 dagen Een herhaalde metingen analyse van. variantie aangegeven significante verschillen tussen de 4 treatment groepen (F 3,20 = 19.7, p &lt;0.001). Niveaus van oplosbaar eiwit in AHB gevoede ABB aanzienlijk hoger dan EHB gevoed ABB (p = 0,008) of EBB (p = 0.018). De leeftijd van de bijen de bemonstering significant beïnvloed oplosbaar eiwit concentraties in de hemolymfe. De niveaus waren significant lager in day-4 bijen tegen dag 7 (p &lt;0,0001) of 11 (p = 0,001). Dag 7 en dag 11 bijen verschilde niet (p = 0,149). Dit cijfer is gewijzigd van 25. <img alt="Figuur 4" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig4highres.jpg" width="600" /> Figuur 4:. Concentraties van aminozuren (pg per gram pollen of beebread) in pollen of de beebread gemaakt van het EBB wordt beebread gemaakt door Europese bijen en ABB werd gemaakt door Africanized bijen. Tryptofaan, cysteïne, fenylalanine en proline werden afzonderlijk uitgezet ten behoeve van de duidelijkheid in prewoordigd hun hoeveelheden. Dit cijfer is gewijzigd van 25.

Hier zijn methoden om voedingsstoffen in stuifmeel te kwantificeren voor en na de omzetting ervan in bijenbrood door twee ondersoorten van honingbijen. We beschrijven technieken om de consumptie van bijenbrood en de resulterende eiwitgehalten in beide ondersoorten te meten.

Methoden voor het vergelijken Voedingsstoffen in beebread Gemaakt door Africanized en Europese honingbijen en de Effecten op Hemolymfe Protein Titers

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees ...

Het algemene doel van het volgende experiment is om de voedingsstoffen in pollen en bijenbrood, geproduceerd door twee honingbij-ondersoorten, te kwantificeren en het verbruik van proteinetiters te meten. Dit wordt bereikt door Europese en Afrikaanse bijen in een afgebakend gebied toegang te geven tot dezelfde pollenbron en de bijen de pollen in hun kolonies als bijenbrood te laten opslaan. Vervolgens wordt het bijenbrood gevoed aan onlangs gearriveerde Europese en Afrikaanse bijen in kooien.Vervolgens worden de bijen in de kooien bemonsterd na vier, zeven en 11 dagen voeren, en wordt de hoeveelheid overgebleven bijenbrood in elke kooi gemeten om de consumptie te schatten. Ten slotte worden de concentraties van voedingsstoffen, waaronder eiwitten en aminozuren in het pollen en het bijenbrood geproduceerd door Europese en geafricaniseerde bijen, gemeten en vergeleken tussen de bijenrassen. De resultaten tonen aan dat bijenbrood verschilt van pollen wat betreft de eiwit- en bepaalde aminozuurconcentraties, evenals de eiwittiters in de hemolymfe.Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in studies naar de voeding van honingbijen, zoals de rol van de pollenbron voor de voedingsstoffen in bijenbrood en hoe deze voedingsstoffen worden opgenomen door bijen van verschillende ondersoorten en genotypen. Emily Watkins de Young, een student-technicus in mijn laboratorium, demonstreert de technieken. Om te beginnen: plaats pollenvallen bij honingbijenkolonies, verzamel het pollen en gebruik een koffiemolen om het pollen te vermalen tot een fijn poeder. Richt vijf kolonies op, elk bestaande uit Afrikaanse honingbijen (AHB) of Europese honingbijen (EHB), in een afgesloten vlieggebied (EFA), zodat de bijen alleen foerageren op het aangeboden pollen om te voorkomen dat werksters tussen EHB- en AHB-kolonies dwalen. Verdeel de EFA in afzonderlijke secties zodat bijen niet tussen deze secties kunnen oversteken. Plaats in elke sectie van de EFA individuele EHB- of AHB-kolonies met 3.500 tot 4.000 werksters, wasraten met nectar-honing, onrijp brood en lege raten. Voer het vermalen pollen aan de kolonies door in elke sectie van de EFA een dienblad te plaatsen en ongeveer 60 gram pollen op de dienbladen te verspreiden.Op deze manier kunnen verzamelbijen het stuifmeel als ballast verzamelen en het in hun kolonies opslaan als bijenbrood om de bijen in de kooien te voeden. Plaats raampjes met verzegeld werkstersbroed van HB- en EHB-kolonies in afzonderlijke uitkomstkooien in een klimaatkamer die is ingesteld op 32 tot 24 graden Celsius en 40% relatieve vochtigheid. Wanneer de werksters na ongeveer 24 uur uitkomen, worden er 12 plexiglas bioassay-kooien klaargezet en wordt er in elke kooi ofwel 100 pas uitgekomen EHB- of HB-werksters geplaatst; voeg in elke kooi een sectie raat toe met een bekend aantal cellen met Europees bbr- of EBB-bijenbrood, of Africanized B-brood of A B, B-cellen om de volgende behandelingscondities te creëren.Een HB-gevoede A-B-B-E-H-B-gevoede A B, BAHB-gevoede EBB en EHB-gevoede. Voeg aan EBB vials met water en een op volume geformuleerde 30% sucrose-oplossing toe aan elke kooi. Vervang de suikersiroop- en watervials dagelijks gedurende de studieperiode van 11 dagen.Neem 10 vers uitgekomen EHB-bijen en 10 A HB-werksters voordat ze in de kooien worden geplaatst. Verwijs naar deze bijen als dag nul B's en laat deze dienen als basislijn voor de hemolymfe-eiwitconcentraties. Verwijder 10 bijen uit elke kooi nadat ze vier, zeven en 11 dagen lang gevoed zijn met EBB of een B, B.Plaats de levende bijen in individuele falcon-buisjes en zet deze op koelelementen. Selecteer een substeekproef van vier bijen voor de analyse van de eiwitconcentratie in de hemolymfe nadat de bijen op dag 11 zijn bemonsterd en het aantal raatcellen dat nog bijenbrood bevatten is geteld. Verwijder het resterende bijenbrood uit de cellen in elke kooi en bewaar dit per kooi in afzonderlijke microcentrifugebuisjes.Bewaar de BBR-monsters bij -80 °C tot ze worden geanalyseerd op pH, oplosbare eiwitconcentratie en aminozuurgehalte. Neem voor de eiwitanalyse zes monsters van het pollen en een monster van EBB en A BB uit elke kooi. Meng 20 mg van het pollen of BBR met 1 mL 0,1 M PBS, vortex het mengsel gedurende 10 seconden en centrifugeer dit bij 571,2 ×g gedurende één minuut.Verwijder een monster van 25 µL van het S-supernatans en breng dit over naar een well van een 96-wells platbodem polystyrene ELISA-plaat. Voer elk monster in drievoud uit over drie wells. Verhit het uiteinde van een capillaire buis van 20 µL en trek het verhitte gedeelte uit tot er een naaldvormige punt is ontstaan.Neem vervolgens hemolymfe af van de bijen die uit elke kooi zijn verzameld door de capillaire buis in het rechter laterale deel van het thorax in te brengen, nabij het aanhechtingspunt van de vleugel. Verzamel indien nodig extra lymfe door dezelfde buis in het membraan tussen de abdomensegmenten in te brengen. Voeg 1 µL hemolymfe toe aan 9 µL 0,1 M PBS.Gebruik een Bradford protein assay kit en volg de instructies van de fabrikant om het totale oplosbare eiwit te bepalen. Voor de concentraties wordt de aminozuuranalyse uitgevoerd volgens het tekstprotocol; zoals in deze grafieken wordt getoond, waren zowel de pH-waarde als de eiwitconcentratie in bbr lager dan in pollen. Zowel de EHB als de A HB verbruikten meer A BB dan EBB, zoals hier wordt aangetoond.De spiegels van oplosbaar eiwit in de hemolymfe van A HB waren significant hoger dan die van EHB, ongeacht het type bbr dat zij consumeerden. Deze verschillen in de eiwitspiegels van de hemolymfe traden op, hoewel EHB en A HB vergelijkbare hoeveelheden van elk type bbr consumeerden. Van de 10 aminozuren die essentieel waren voor honingbijen, werden alle aminozuren behalve histamine in het pollen aangetroffen.In de meeste gevallen waren de aminozuurconcentraties gemeten in bijenbrood hoger dan in het pollen. Zo waren de concentraties leucine en thionine ongeveer 60% hoger in bbr vergeleken met pollen, en waren de valineconcentraties ongeveer 25% hoger. De niveaus van alanine, aspartzuur en glutamine waren eveneens hoger in bbr dan in pollen.De aminozuurconcentraties verschilden niet sterk tussen A B, B en EBB, met uitzondering van fenylalanine en cystine. De fenylalanineniveaus waren in A BB ongeveer twee keer zo hoog als in EBB of pollen. De cystineconcentraties waren lager in EBB vergeleken met A, B, B of pollen.Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht hebben in hoe u eiwitconcentraties in bijenbrood, pollen en honingbijenhemolymfe kunt evalueren. Met deze technieken kunt u bepalen of de opslag en consumptie van voedsel en de eiwitconcentraties in de hemolymfe worden beïnvloed door genetische of omgevingsfactoren.

methods-for-comparing-nutrients-beebread-made-africanized-european

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

In dit protocol beschrijven we twee strategieën die tegelijkertijd in honingbijen te onderdrukken twee genen (dubbel gen knockdown). Dan presenteren we hoe de proboscis extensie respons (PER) test om het effect van de dubbele gen knockdown op honingbij smaak perceptie bestuderen gebruiken.

RNAi-gemedieerde Dubbele Gene Knockdown en Smaak Perception Meting in Honingbijen (<em&gt; Apis mellifera</em&gt;)

Eiwitten worden vaak gebruikt om geleedpotigen te markeren voor verspreidingsonderzoek. Methoden voor het toedienen van interne en externe eiwitmarkeringen op geleedpotigen worden gedemonstreerd. Technieken voor het detecteren van eiwitmarkeringen, hetzij via indirecte of sandwich enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA's), worden ook geïllustreerd.

Toedienen en het detecteren van eiwit Marks op Insecten voor Verspreiding Onderzoek

Een nieuwe gedragstest wordt beschreven voor het onderzoeken van de kortetermijn smaakgevoelens van de monddelen van vrij bewegende hommels (Bombus terrestris) ten opzichte van voedingsstoffen en gifstoffen in oplossing.

A Novel Behavioral Assay om Smaak reacties van individuele, vrij bewegende Bumble Bees Onderzoek (<em&gt; Bombus terrestris</em&gt;)

Hier beschrijven wij onze gedetailleerde protocol voor de voorbereiding van de single-cohort bijenvolken - een nuttig instrument voor het analyseren van de role-geassocieerde werknemer fysiologie. We beschrijven ook gedetailleerde protocollen voor de behandeling van werknemers met juveniele hormoon en ecdyson de betrokkenheid van deze hormonen in de regulatie van de werknemer gedrag en / of fysiologie te evalueren.

Voorbereiding van de Single-cohort Colonies and Hormoon Behandeling van werkbijen Analyseer Physiology geassocieerd met Rol en / of endocriene systeem

Microbiële consortia binnen bumble bee-hives verrijken en behouden van pollen voor larven van de honingbij. Met behulp van de volgende generatie sequencing, samen met laboratorium en veld gebaseerde experimenten, dit manuscript wordt beschreven protocollen gebruikt om te testen van de hypothese dat fungicide residuen veranderen de stuifmeel microbiome, en de kolonie demografie, uiteindelijk leidde tot de kolonie verlies.

Empirische, Metagenomic en computationele technieken verlichten de mechanismen door welke fungiciden compromis Bee gezondheid

Hier presenteren we een methode om zowel een individuele honingbij als een bijenkolonie voedsel te geven dat besmet is met pesticiden. De procedure evalueert het effect van pesticiden op individuele honingbijen door in vivo voeding van een basislarvenvoeding en ook op de natuurlijke toestand van de bijenkolonie.

Het evalueren van het effect van Environmental Chemicals over Honey Bee ontwikkeling van het individu naar Colony Level

Om te testen de remmende effecten van farmacologische agenten op phospholipase C (PLC) in verschillende gebieden van de hersenen van de honingbij, presenteren we een biochemische assay voor het meten van de PLC activiteit in die regio's. Deze bepaling zou kunnen zijn handig voor het vergelijken van PLC activiteit onder weefsels, alsook tussen de bijen verschillende gedragingen vertonen.

Detectie van Phospholipase C activiteit in de hersenen homogenaat van de honingbij

Hypopharyngeal klier acinus grootte is een robuuste maatregel van verpleegkundige honing honingbij voeding. Hier, bieden wij een gedetailleerd protocol voor ontleden, kleuring, imaging en verpleegkundige bee hypopharyngeal klier acini meten.

Meten van de Hypopharyngeal de grootte van de Acinus van de klier in de honingbij (Apis mellifera) werknemers

Dit protocol is ontwikkeld om het begrip te vergroten van hoe agrochemicaliën de reproductie van honingbijen(Apis mellifera)beïnvloeden door methoden vast te stellen om honingbijenkoninginnen en hun werkverzorgers bloot te stellen aan agrochemicaliën in een gecontroleerde, laboratoriumomgeving en zorgvuldig hun relevante reacties te volgen.

Beoordeling van agrochemisch risico voor gepaarde honingbijenkoninginnen

We beschrijven een methode om kwantificeerbare hemolymfe efficiënt te verzamelen uit kleine geleedpotigen voor latere analyse.

Een nauwkeurige en kwantificeerbare methode voor het verzamelen van hemolymfe van kleine geleedpotigen

Leer hoe je voedingsstoffen in bijenbrood kwantificeert voor bijenteeltonderzoek met Europese en Afrikaanse honingbijen. Deze methode meet eiwitconcentraties en consumptiepatronen om bijengezondheid te verbeteren.

Methoden voor het vergelijken Voedingsstoffen in beebread Gemaakt door Africanized en Europese honingbijen en de Effecten op Hemolymfe Protein Titers (Video) | JoVE Journal

Methoden voor het vergelijken Voedingsstoffen in beebread Gemaakt door Africanized en Europese honingbijen en de Effecten op Hemolymfe Protein Titers

Meer video's verkennen