Name: Beoordeling van bacteriële invasie van hartcellen in cultuur en hartkolonisatie bij geïnfecteerde muizen met listeria monocytogenes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 18 s
Description: Leer hoe je bacteriële invasie van hartcellen evalueert met Listeria monocytogenes in vitro en in muizen. Dit protocol toont methoden voor infectie, monitoring en kwantificatie van pathogenen in cardiaal weefsel.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door subsidies van de Public Health Service AI41816 en AI099339 (N.E.F.) en door F31AI094886-01 (P.D.M.) van NIAID. De inhoud valt uitsluitend onder de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigt niet noodzakelijkerwijs de officiële standpunten van de financieringsbronnen.

<ol><li>Freitag, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+hot+dogs+to+host+cells%3A+how+the+bacterial+pathogen+Listeria+monocytogenes+regulates+virulence+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Microbiol%22%5BJournal%5D)">From hot dogs to host cells: how the bacterial pathogen Listeria monocytogenes regulates virulence gene expression.</a> Future Microbiol. 1, 89-101 (2006).</li>
<li>Drevets, D. A., Bronze, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Listeria+monocytogenes%3A+epidemiology%2C+human+disease%2C+and+mechanisms+of+brain+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Immunol+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Listeria monocytogenes: epidemiology, human disease, and mechanisms of brain invasion.</a> FEMS Immunol Med Microbiol. 53, 151-165 (2008).</li>
<li>Farber, J. M., Peterkin, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Listeria+monocytogenes.+a+food-borne+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Listeria monocytogenes. a food-borne pathogen.</a> Microbiol. Rev. 55, 476-511 (1991).</li>
<li>Lecuit, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+how+Listeria+monocytogenes+targets+and+crosses+host+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Infect%22%5BJournal%5D)">Understanding how Listeria monocytogenes targets and crosses host barriers.</a> Clin Microbiol Infect. 11, 430-436 (2005).</li>
<li>Lecuit, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+listeriosis+and+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Human listeriosis and animal models.</a> Microbes Infect. 9, 1216-1225 (2007).</li>
<li>Bou Ghanem, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((InlA+promotes+dissemination+of+Listeria+monocytogenes+to+the+mesenteric+lymph+nodes+during+food+borne+infection+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">InlA promotes dissemination of Listeria monocytogenes to the mesenteric lymph nodes during food borne infection of mice.</a> PLoS Pathog. 8, e1003015(2012).</li>
<li>Melton-Witt, J. A., Rafelski, S. M., Portnoy, D. A., Bakardjiev, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+infection+with+signature-tagged+Listeria+monocytogenes+reveals+organ-specific+growth+and+dissemination+routes+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Oral infection with signature-tagged Listeria monocytogenes reveals organ-specific growth and dissemination routes in guinea pigs.</a> Infect Immun. 80, 720-732 (2012).</li>
<li>Alonzo, F. 3rd, Bobo, L. D., Skiest, D. J., Freitag, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+subpopulations+of+Listeria+monocytogenes+with+enhanced+invasion+of+cardiac+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evidence for subpopulations of Listeria monocytogenes with enhanced invasion of cardiac cells.</a> J Med Microbiol. , (2011).</li>
<li>Adler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+pseudotumor+of+the+heart+caused+by+Listeria+monocytogenes+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect%22%5BJournal%5D)">Inflammatory pseudotumor of the heart caused by Listeria monocytogenes infection.</a> J Infect. 58, 161-163 (2009).</li>
<li>Antolin, J., Gutierrez, A., Segoviano, R., Lopez, R., Ciguenza, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocarditis+due+to+Listeria%3A+description+of+two+cases+and+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Endocarditis due to Listeria: description of two cases and review of the literature.</a> Eur J Intern Med. 19, 295-296 (2008).</li>
<li>Brouqui, P., Raoult, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocarditis+due+to+rare+and+fastidious+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Endocarditis due to rare and fastidious bacteria.</a> Clin Microbiol Rev. 14, 177-207 (2001).</li>
<li>Brusch, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+infections+in+the+immunosuppressed+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Dis+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Cardiac infections in the immunosuppressed patient.</a> Infect Dis Clin North Am. 15, 613-638 (2001).</li>
<li>McCue, M. J., Moore, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocarditis+with+microabscess+formation+caused+by+Listeria+monocytogenes+associated+with+myocardial+infarct%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Pathol%22%5BJournal%5D)">Myocarditis with microabscess formation caused by Listeria monocytogenes associated with myocardial infarct.</a> Hum Pathol. 10, 469-472 (1979).</li>
<li>Menard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+L-type+calcium+channel+expression+during+retinoic+acid-induced+differentiation+of+H9C2+cardiac+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Modulation of L-type calcium channel expression during retinoic acid-induced differentiation of H9C2 cardiac cells.</a> J Biol Chem. 274, 29063-29070 (1999).</li>
<li>Czuprynski, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Listeria+monocytogenes%3A+silage%2C+sandwiches+and+science%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Health+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Listeria monocytogenes: silage, sandwiches and science.</a> Anim Health Res Rev. 6, 211-217 (2005).</li>
<li>Grundler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+surface+proteins+InlA+and+InlB+are+interdependently+required+for+polar+basolateral+invasion+by+Listeria+monocytogenes+in+a+human+model+of+the+blood-cerebrospinal+fluid+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">The surface proteins InlA and InlB are interdependently required for polar basolateral invasion by Listeria monocytogenes in a human model of the blood-cerebrospinal fluid barrier.</a> Microbes Infect. 15, 291-301 (2013).</li>
<li>Zeldovich, V. B., Robbins, J. R., Kapidzic, M., Lauer, P., Bakardjiev, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasive+extravillous+trophoblasts+restrict+intracellular+growth+and+spread+of+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Invasive extravillous trophoblasts restrict intracellular growth and spread of Listeria monocytogenes.</a> PLoS Pathog. 7, e1002005(2011).</li>
<li>Kimes, B. W., Brandt, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+of+a+clonal+muscle+cell+line+from+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+cell+research%22%5BJournal%5D)">Properties of a clonal muscle cell line from rat heart.</a> Experimental cell research. 98, 367-381 (1976).</li>
<li>McMullen, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+sequence+of+Listeria+monocytogenes+07PF0776%2C+a+cardiotropic+serovar+4b+strain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Genome sequence of Listeria monocytogenes 07PF0776, a cardiotropic serovar 4b strain.</a> J Bacteriol. 194, 3552(2012).</li>
</ol>

De auteurs melden geen concurrerende financiële belangen.

L. monocytogenes is een wijdverspreide en goed gekarakteriseerde menselijke ziekteverwekker, die in staat is om een aantal verschillende ziektemanifestaties te veroorzaken15. De bacterie is eerder beschreven voor zijn vermogen om over barrières, zoals de bloed -hersenbarrière en placenta-foetale barrières, om respectievelijk het centrale zenuwstelsel te bereiken en te koloniseren en foetus te ontwikkelen. Het in vivo vermogen van het organisme om deze weefsels te koloniseren wordt vaak aangev...

Listeria monocytogenes is een grampositieve intracellulaire ziekteverwekker die ernstige ziekten kan veroorzaken bij gevoelige populaties, waaronder ouderen, zwangere vrouwen, mensen met HIV/AIDS en personen die chemotherapiekrijgen 1. Infectie in deze populaties is vaak het gevolg van het innemen van besmette voedingsmiddelen, en de meeste infecties worden geassocieerd met grootschalige door voedsel overgedragen uitbraken2,3. Bij mensen en andere zoogdieren is L. monocytogenes in staat om zich over de epitheelrand van de dunne darm te verplaatsen en vervolgens naar de lever te worden getransporteerd4,5. Diermodellen suggereren dat ingeslikte bacteriën zich repliceren in de intestinale villi en via de poortader naar de lever gaan of zich via de mesenterische lymfeklieren in de bloedstroom verspreiden, wat leidt tot hematogene verspreiding naar de lever en milt6,7. In de lever en milt is de bacterie in staat om de opname in zowel professionele fagocyten als inwonende parenchymale cellen te bemiddelen en stelt snel infecties in deze organen vast. Naarmate de bacteriële belasting toeneemt, worden tal van bacteriën teruggespreid in het bloed, waar ze in staat zijn om gevoelige weefsels verder te koloniseren, waaronder het centrale zenuwstelsel en de placenta (indien aanwezig). Kolonisatie van deze sites sluit de meest voorkomende manifestaties van listeriose bij mensen uit, waaronder meningitis, encefalitis en foetale abortus2.
Van geselecteerde subpopulaties van L. monocytogenes is onlangs aangetoond dat ze een verbeterd vermogen hebben om binnen te dringen en zich te repliceren in hartweefsel8. Manifestaties van hartbetrokkenheid zijn gevarieerd en variëren van endocarditis en pericarditis tot fulminante myocarditis compleet met geleidingsafwijkingen9-13. Het totale aantal L. monocytogenes cardiale gevallen per jaar is laag, maar kan onder schatting zijn omdat dit facet van infectie niet algemeen goed wordt herkend. Kolonisatie van het hart door ziekteverwekkers vereist vaak gastheerpredisposities zoals reeds bestaande valvulaire schade of kunstmatige hartkleppen. Er zijn echter isolaten van L. monocytogenes geïdentificeerd die opmerkelijk zijn vanwege hun vermogen om de harten van geïnfecteerde dieren te koloniseren bij afwezigheid van hartschade en/of afwijkingen8.
Hierin worden in vitro en in vivo methoden beschreven voor het beoordelen van bacteriële kolonisatie van hartweefsel bij geïnfecteerde dieren met behulp van invasietesten in weefselkweek en levende dierinfecties. Deze methoden zijn niet alleen nuttig gebleken voor het identificeren van stammen met het potentieel om hartweefsel bij geïnfecteerde dieren te koloniseren, maar moeten ook nuttig zijn voor de identificatie van bacteriële genproducten die dienen om hartcelinvasie te verbeteren en / of te resulteren in veranderingen in hartpathologie. Deze methoden vergemakkelijken de vergelijking van cardiotropisme tussen meerdere stammen. Voor de hier beschreven methoden wordt L. monocytogenes 10403S gebruikt als een goed bestudeerde vertegenwoordiger van een niet-cardiotrope stam en wordt het klinische isolaat 07PF0776 gebruikt als een representatief voorbeeld van een cardiotrope stam. Deze twee stammen werden gekozen om een vergelijking te bieden voor bacteriële invasie van hartcellen in vitro en kolonisatie van harten van geïnfecteerde muizen in vivo. Het isolaat 07PF0776 is een klinisch isolaat dat is hersteld van een interventratriculair abces dat een fatale aritmie veroorzaakte bij een HIV+ patiënt8. L. monocytogenes isolaten kunnen variëren in hun virulentiepotentieel, en gezien de neiging voor Listeria om personen met immunosuppressie en zwangere vrouwen te infecteren, moeten personen binnen deze populaties voorzichtig zijn bij het beoordelen van verschillende klinische isolaten.

<table><tbody><tr><td>Difco</td><td>BHI Broth Base</td><td>237200</td><td>2 kg Brain Heart Infusion poeder (zonder agar)</td></tr><tr><td>Difco</td><td>Agar</td><td>214510</td><td>2 kg gegranuleerde Agar</td></tr><tr><td>Difco</td><td>BHI Agar</td><td>241810</td><td>2 kg Brain Heart Infusion poeder met 7,5% Agar</td></tr><tr><td>in vitrogen</td><td>LB Broth Base</td><td>12975-084</td><td>2 kg Luria Broth Base poeder (zonder agar)</td></tr><tr><td>Fisher</td><td>Glazen dekglasjes</td><td>12-545-80</td><td>12 mm glazen dekglasjes</td></tr><tr><td>Falcon</td><td>24-well weefselkweekplaat</td><td>35-3047</td><td>24 wel, plasma-behandelde weefselkweekplaat</td></tr><tr><td>Falcon</td><td>14mL Polystyreenbuis</td><td>352051</td><td>14 ml Polystyreenbuizen</td></tr><tr><td>Falcon</td><td>96-well U-bottom plaat</td><td>35-3077</td><td>Niet-behandelde 96-well plaat voor weefselkweek</td></tr><tr><td>Corning</td><td>0,05% Trypsine, 0,53 mM EDTA (1X)</td><td>25-052-CI</td><td>Voorraadoplossing van Trypsine EDTA voor weefselkweek</td></tr><tr><td>Corning</td><td>DMEM (Hoge glucose, hoge pyruvaat)</td><td>15-013-CU</td><td>DMEM media zonder FBS, glutamine of antibiotica</td></tr><tr><td>Corning</td><td>Pen/Strep/Glut-oplossing</td><td>30-009-CI</td><td>Voorraadoplossing van penicilline, streptomycine en L-glutamine voor weefselkweek</td></tr><tr><td>Corning</td><td>Gentamicine</td><td>30-005-CR</td><td>50 mg/ml voorraadoplossing van Gentamicine voor weefselkweek</td></tr><tr><td>Cellgro (Corning)</td><td>L-Glutamine</td><td>25005197</td><td>Voorraadoplossing van L-glutamine zonder antibiotica</td></tr><tr><td>Denville</td><td>75cm^2 Flessen</td><td>T1225</td><td>75 cm2 weefselkweek behandelde fles</td></tr><tr><td>Denville</td><td>1,5mL microcentrifugebuisjes</td><td>2013004</td><td>1,5 ml microcentrifugebuisjes</td></tr><tr><td>ATCC</td><td>H9c2 Hart Myoblasten</td><td>CRL-1446</td><td>Ratten hart myoblasten</td></tr><tr><td>Hyclone</td><td>Fetaal Rundserum</td><td>SH30070.63</td><td>Fetaal Rundserum</td></tr></tbody></table>

beoordeling van bacteriële invasie van hartcellen in cultuur en hartkolonisatie bij geïnfecteerde muizen met listeria monocytogenes

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes is een grampositieve facultatieve intracellulaire ziekteverwekker die ernstige invasieve infecties kan veroorzaken bij immuungecompromitteerde patiënten, ouderen en zwangere vrouwen. De meest voorkomende manifestaties van listeriose bij mensen zijn meningitis, encefalitis en foetale abortus. Een significant maar veel minder gedocumenteerd vervolg op invasieve L. monocytogenes infectie betreft het hart. Het sterftecijfer door hartaandoeningen kan oplopen tot 35% ondanks de behandeling, maar er is zeer weinig bekend over L. monocytogenes kolonisatie van hartweefsel en de daaruit voortvloeiende pathologieën. Bovendien is onlangs duidelijk geworden dat subpopulaties van L. monocytogenes een verbeterd vermogen hebben om binnen te dringen en te groeien in hartweefsel. Dit protocol beschrijft in detail in vitro en in vivo methoden die kunnen worden gebruikt voor het beoordelen van cardiotropisme van L. monocytogenes isolaten. Methoden worden gepresenteerd voor de infectie van H9c2-hartstilstandstheoblasten bij ratten in weefselkweek en voor de bepaling van bacteriële kolonisatie van de harten van geïnfecteerde muizen. Deze methoden zijn niet alleen nuttig voor het identificeren van stammen met het potentieel om hartweefsel bij geïnfecteerde dieren te koloniseren, maar kunnen ook de identificatie van bacteriële genproducten vergemakkelijken die dienen om hartcelinvasie te verbeteren en / of veranderingen in hartpathologie te stimuleren. Deze methoden voorzien ook in de directe vergelijking van cardiotropisme tussen meerdere L. monocytogenes stammen.

Geselecteerde isolaten van L. monocytogenes vertonen een verbeterde invasie van hartcellen in celkweek en in muismodellen van infectie. Figuur 1 toont een voorbeeld van hoe bacteriële kolonies kunnen verschijnen na het spotten van suspensies op agarmedia. Deze methode maakt een nauwkeurige beoordeling van CFUs in een monster mogelijk zonder grote aantallen agar-mediaplaten te gebruiken. Figuur 2 toont een voorbeeld van een weefselkweek-gebaseerde test waarbij het vermogen van st...

Listeria monocytogenes veroorzaakt foetale infecties bij zwangere vrouwen en meningitis bij gevoelige populaties. Subpopulaties van bacteriën kunnen hartweefsel koloniseren, waardoor myocarditis ontstaat bij patiënten en proefdieren. Hier presenteren we een protocol dat beschrijft hoe L. monocytogenes cardiale celinvasie in vitro en cardiale kolonisatie bij geïnfecteerde dieren te beoordelen.

Beoordeling van bacteriële invasie van hartcellen in cultuur en hartkolonisatie bij geïnfecteerde muizen met listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes is a Gram-positive facultative intracellular pathogen that is capable of causing serious invasive infections in immunocompromised ...

Het algemene doel van deze procedure is om efficiënte methoden te bieden voor het beoordelen van microbiële infectie van hartcellen met behulp van in vivo en in vitro modellen van hartkolonisatie en invasie van hartcellen. Dit wordt bereikt door eerst bacteriële culturen te kweken en de bacteriële cellen te oogsten, te wassen en te resuspenderen in fosfaatgebufferde saline. Vervolgens worden monolagen van hartcellen, gekweekt op glazen dekglasjes, geïnfecteerd met een bacteriële suspensie, of wordt de bacteriële suspensie in muizen geïnoculeerd via injecties in de staartvene.Vervolgens worden de hartcellen geïncubeerd in aanwezigheid van Gentamicine om extracellulaire bacteriën te doden, gevolgd door cellysis voor terugwinning. Bacteriën of geïnfecteerde dieren worden twee tot drie dagen na infectie gemonitord op hun welzijn en vervolgens geofferd voor isolatie van de doelorganen. Tot slot worden cel- en organsuspensies verdund en uitgeplaat met een spot plating-methode om het aantal levensvatbare bacteriën geassocieerd met cellen of doelorganen te bepalen.Uiteindelijk worden bacteriële kolonies geteld op agarmedium om de efficiëntie van de invasie van hartcellen te bepalen voor ce

assessing-bacterial-invasion-cardiac-cells-culture-heart-colonization

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Listeria monocytogenes is een modelorganisme voor het bestuderen van immuunreacties en de genetische gevoeligheid voor bacteriën intracellulaire bij muizen. Deze methode stelt je in staat om bacteriële lading te meten en single-cell suspensies van de lever en de milt van de muizen voor het genereren van FACS-analyse van veranderingen in het immuunsysteem van cellen als gevolg van Listeria-infectie te bepalen.

Het meten van bacteriën en immuunresponsen bij muizen geïnfecteerd met Listeria monocytogenes</em

Source: McMullen, P. D., Freitag, N. E. Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the injection of Listeria monocytogenes into the tail vein of a mouse to establish systemic infection. It shows bacterial circulation, organ colonization, and the quantification of bacterial load in the heart by homogenizing tissue, performing serial dilutions, and plating.

Quantifying Bacterial Load in the Mouse Heart Following Tail Vein Injection of Listeria monocytogenes

This video demonstrates a method to establish an infection model in placental tissues to study infection propagation. An ex vivo placental organ culture is infected with Listeria monocytogenes, a facultative intracellular parasite. The bacteria invade extravillous trophoblasts (EVTs) to enter the placental tissue and then propagate to other cells via cell-to-cell spread.

A Technique to Establish a Bacterial Infection Model in an Ex Vivo Organ Culture

This video demonstrates the quantification of the infective bacterial load from the perfused mouse brain infected with Listeria monocytogenes.

Assessing Bacterial Colonization in a Mouse Brain following Listeria monocytogenes Infection

Dit document beschrijft een nieuwe werkwijze voor orale infectie van muizen...

Mondelinge transmissie van<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; In Muizen via inname van besmet voedsel

Listeria monocytogenes is een Gram-positieve bacteriële pathogenen vaak gebruikt als een belangrijk model voor de studie van intracellulaire parasieten. Beeldvorming laat L. monocytogenes infectie fasen in het kader van kleine interfererende RNA schermen maakt de globale studie van cellulaire mechanismen vereist voor bacteriële infectie van target gastheercellen.

Beeldvorming InlC Afscheiding to Cellular Infectie Onderzoek door de bacteriële pathogenen<em&gt; Listeria monocytogenes</em

Streptococcus pneumoniae vormt discrete niet-purulente microscopische laesies in het hart. Beschreven wordt het protocol voor een muismodel van hartmicrolaesievorming. Er wordt instructie gegeven over microlaesievisualisatie met behulp van microscopie, onderscheid tussen vroege en late microlaesies en methoden om cardiale remodellering in harten van herstellende dieren te detecteren.

Visualisatie van<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Binnen Cardiac microverwondingen en Latere Cardiac Remodeling

Dit protocol beschrijft het enten van C57BL / 6J muizen met de EGD stam van Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) en interferon-γ (IFN-γ) responsen door natuurlijke killer (NK) cellen, natuurlijke killercellen (NKT) cellen te meten, en adaptieve T-lymfocyten na de infectie. Dit protocol beschrijft ook hoe om te overleven onderzoek bij muizen na infectie met een aangepaste LD 50 dosis van de ziekteverwekker.

Experimentele infectie met<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Als een model voor de studie Host Interferon-γ Responses

Een gedetailleerd protocol voor een muismodel voor enterohemorrhagic E. coli (EHEC) kolonisatie met behulp van bacteriën bioluminescentie-label wordt gepresenteerd. Het opsporen van deze bioluminescente bacterie door een niet-invasieve in vivo imaging systeem in levende dieren kan verder ons huidige begrip van EHEC kolonisatie.

Detectie van de Enterohemorrhagic Escherichia Coli kolonisatie in lymfkliertest Host door niet-invasieve In Vivo bioluminescentie systeem

Tijdens de infectie is Listeria monocytogenes geschikt voor het oversteken van de bloed - hersen barrière om te koloniseren van de hersenen. In dit protocol, laten we zien hoe te beoordelen van bacteriële kolonisatie van organen na infectie van muizen. Is voorzien in een procedure voor het uitvoeren van hele orgel perfusie voor specifieke bepaling van bacteriële aantallen in de hersenen parenchym.

Listeria monocytogenes Infectie van de hersenen

We beschrijven beide tests in vitro en in vivo infectie die kunnen worden gebruikt voor het analyseren van de activiteiten van host-encoding factoren.

Met behulp van een bacteriële ziekteverwekker sonde voor Cellulair en Organismic niveau Host Reacties

Leer hoe je bacteriële invasie van hartcellen evalueert met Listeria monocytogenes in vitro en in muizen. Dit protocol toont methoden voor infectie, monitoring en kwantificatie van pathogenen in cardiaal weefsel.

Beoordeling van bacteriële invasie van hartcellen in cultuur en hartkolonisatie bij geïnfecteerde muizen met listeria monocytogenes (Video) | JoVE Journal

Beoordeling van bacteriële invasie van hartcellen in cultuur en hartkolonisatie bij geïnfecteerde muizen met listeria monocytogenes

Meer video's verkennen