Efficiënte generatie van iPSC Neural Lineage Specifieke Knockin Reporters Met de CRISPR / Cas9 en Cas9 Double Nickase System

10.5K weergaven

Geciteerd door 5

14:46 min.

28 mei 2015

10.3791/52539-v

28 mei 2015

10.5K weergaven

* These authors contributed equally

Genoombewerkingstools zoals het CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)/Cas (CRISPR-associated) systeem hebben de efficiëntie van gentargeting in humane geïnduceerde pluripotente stamcellen (hiPSC's) aanzienlijk verbeterd. Dit manuscript beschrijft een protocol voor het genereren van een lijnspecifiek hiPSC-reporter met behulp van CRISPR/Cas systeem-ondersteunde homologe recombinatie.

Meer video's verkennen

Generatie van knock-in reporters

Chapters in this video

0:05

Titel

1:54

Ontwerp van targeting-vectoren

2:41

Ontwerp en vectorconstructie van sgRNA's voor het CRISPR/Cas9-systeem

5:20

Ontwerp en constructie van Cas9n dubbele nickase sgRNA

8:06

Evaluatie van sgRNA's met T7-endonuclease 1

11:03

In silico voorspelling van potentiële off-target sites

12:32

Resultaten: De T7E1-assay wordt gebruikt om sgRNA's te evalueren voorafgaand aan de transfectie van hiPSC's

13:56

Conclusie

Related Videos