Name: Instrumentatie van Near-termijn Foetale Schapen voor Multivariate chronische niet-verdoofde Recordings (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 40 s
Description: Leer de instrumentatie van het foetale schapenmodel voor langdurige fysiologische monitoring zonder verdoving. Deze methode biedt inzicht in foetale ontwikkeling en reacties op fysiologische verstoringen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

auteurs danken de Molly Towell Perinatal Research Foundation, Canadian Institutes of Health Research (CIHR) en Fonds de Recherche du Québec – Santé (FRQS) (aan MGF) en CIHR-Quebec Training Network in Perinatal Research (QTNPR) (aan LDD) voor hun financiële steun.
De auteurs willen Esther Simard, Marco Bosa, Carl Bernard en Carmen Movila bedanken voor hun technische hulp.

Dierverzorging volgde de richtlijnen van de Canadese Raad van Animal Care en de goedkeuring door de Universiteit van Montreal Raad over Animal Care (protocol # 10-Rech-1560). Gedetailleerde informatie inzake materialen en methoden is te vinden in tabel 1. 1. Anesthesie <ol><li> Plaats een single-lumen katheter in een halsader. </li><li> Sedate de ooi behulp acepromazine (Atravet 10 mg / ml) 2 mg intraveneus ongeveer 30 minuten voor de inductie van anesthesie om stress in verband met de procedure die op zijn beurt vermindert cortisol verminderen. </li><li> Dien diazepam (diazepam 5 mg / ml) 20 mg, ketamine (Ketalar 100 mg / ml) 4-5 mg / kg propofol (Propofol 10 mg / ml) 0,5 tot 1 mg / kg intraveneus algemene anesthesie. </li><li> Plaats een luchtweg uitwisseling katheter in de luchtpijp met behulp van een laryngoscoop met een Wisconsin lameltype (Extra-lange 350 mm linkshandige Blade) om te helpen met de intubatie. Schuif het silicium endotracheale buis (9 tot 12 mm binnendiameter) van de luchtwegen uitwisseling katheter en in de luchtpijp. Deze techniek vergemakkelijkt het proces intubatie. Opblazen van de manchet van de endotracheale tube zorgvuldig te druk geïnduceerde ulcera van de luchtpijp te vermijden en fixeren de buis om de kop van de ooi. </li><li> Sluit de endotracheale buis naar de luchtwegen circuit van de verdoving machine en beginnen mechanische ventilatie onmiddellijk. Pas ventilator instellingen naar een P een CO 2 binnen de normale grenzen van 35 tot 45 mm Hg te handhaven. </li><li> Plaats een katheter in de auriculaire slagader (22-20 G; 1 in [0,9 x 25 mm] om 1.16 in [1,1 x 30 mm]) en sluit aan niet-conforme slang aan directe arteriële bloeddruk te controleren. </li><li> Gebruik maken van een multi-parameter fysiologische monitor op het elektrocardiogram, directe arteriële bloeddruk, zuurstofverzadiging (SpO 2), capnografie opnemen (P ET CO 2), en de temperatuur om de 5 min. Breng alle physiologic gegevens via een seriële kabel aan op een centrale fysiologische data-verzamelen computer. Onderhouden normale lichaamstemperatuur met behulp van een circulerende water deken. </li><li> Dien een gebalanceerde poly-ionische oplossing bij 10 mL / kg voor de eerste uur van algemene anesthesie en vervolgens reduceren tot 5 ml / kg / h. </li><li> Dien trimethoprim-sulfadoxine 5 mg / kg IV van het ooi vlak voor de huid snede antibiotische profylaxe. </li><li> Gebruik standaard aseptische technieken met alle chirurgische manipulaties van de ooi en de foetus. </li><li> Barrière verpleegkundige de ooien te allen tijde. Dit omvat ook de niet-chirurgische personeel. Hierdoor wordt de kans op enzoötische bijvoorbeeld Coxiella burnetii minimaliseren. Gebruik handschoenen en maskers (N-95 type) te allen tijde. </li></ol> 2. Overzicht van de chirurgische procedure <ol><li> Maak een 20 cm middellijn incisie door de onderste buikwand direct craniaal van de uier door de linea alba om buikspier schade te minimaliseren. <ol><li> Retract de grotere omentum craniaal en de baarmoeder hoorns worden handmatig gepalpeerd. Palperen elke hoorn uit het lichaam van de baarmoeder naar de punt van de hoorn opmerken het aantal foetus en hun grootte. Als er meerdere foetus, kies dan de grootste foetus door het evalueren handmatig hoofdomvang en de breedte tussen de banen. </li><li> Houd het hoofd van de gekozen foetus stevig door de baarmoeder gedeeltelijk exteriorized. Voer een 10 cm hysterotomie op het grote kromming met Metzenbaum schaar. Leg direct via head een niet-steriele latex chirurgische handschoenen gevuld met een steriele zoutoplossing alsof het een hand. U kunt ook gebruik maken van vochtige 4x4&#39;s om de foetale hoofd vochtig te houden. Bevestig de uterus naar de buikwand. <ol><li> Exterioriseren de rechter en linker thoracale ledematen en trek de foetus voorzichtig uit de baarmoeder tot aan de xyphoid proces. </li></ol></li><li> Plaats polyvinyl katheters in de rechter en linker arm ader en slagaders met een standaard cut-down-techniek. Plaats another polyvinyl katheter in de amnionholte door fixeren zijn uiteinde aan het borstbeen van de foetus. <ol><li> Gebruik alleen steriele catheters. We raden gassterilisatie in uw standaard installatie. Hechten elke katheter naar een naald en de naald van een dubbele kraan om voor later bloedafname of druk monitoring. </li></ol></li><li> Hechten RVS elektroden op de manubrium, zwaardvormig proces en voor elk punt van de schouder naar het elektrocardiogram monitor (ECG). </li><li> De terugkeer van de foetus in de baarmoeder. Alle katheters en elektroden verlaten via een kleine incisie in de linker flank. </li><li> Sluit de laparotomie incisie met een drie lagen gesloten. Hecht de buikwand met een synthetisch absorbeerbaar monofilament hechtmateriaal USP 2 in een eenvoudige continue wijze. Sluit de subcutane ruimte met een synthetische absorbeerbare gevlochten hechtmateriaal USP 0 op een eenvoudige continue wijze. Gebruik chirurgisch roestvrij staal nietjes de incisie te sluiten. </li></ol></li><li&gt; Gedetailleerde beschrijving van de chirurgische procedure <ol><li> Verwijder wol scheren xyphoid het proces om de borstklier en langs de vouw van de flank aan weerszijden met een mes # 40. Reinig de ventrale abdomen vervolgens grondig met 4% chloorhexidinegluconaat en een zachte borstel voor 3 min. <ol><li> Voer een standaard steriele scrub met chloorhexidinegluconaat 4% vanaf het midden van de buik en vordert in een centrifugale mode gedurende 3 min. Pour steriele zoutoplossing op de buik om de desinfecterende zeep te verwijderen. Voor de laatste stap van de chirurgische voorbereiding voeren drie afwisselende passages van chloorhexidine gluconaat oplossing 2% isopropanol en 70%. </li></ol></li><li> Zorg ervoor dat de diepte van de anesthesie is voldoende voorafgaand aan de incisie. Maak een standaard laparotomie insnijding van de navel tot net craniaal van de uier door de linea alba om buikspier schade te minimaliseren. </li><li> Plaats een lange spons tang in de buik langs de linker buikwand omhoogde geplande uitgangsplaats voor katheters in de paracostal regio. <ol><li> Duw de uiteinden van de tang tegen de wand tot een assistent kan lokaliseren en bevestigen juiste plaats. Open licht (1 cm) de kaken van de tang en laat de assistent maakt een 2 cm volledige dikte steek incisie. </li><li> Exterioriseren de uiteinden van de tang door de incisie, weer openen en voorzichtig grijpen de katheters van de tang die uiteindelijk uit de buik wordt getrokken door de ventrale abdominale incisie. Van de nota, sommige groepen implanteren de katheters en exterioriseren hen. Dit heeft het nadeel dat intrasurgical foetale ECG bewaking niet mogelijk. </li></ol></li><li> Palperen de baarmoeder foetale positie en getallen bepalen. Bepaal de grootste foetus met behulp van de inter-auditieve afstand. Incise de baarmoederwand op het grote kromming in het dorsale gedeelte van de kop, het vermijden van de zaadlobben. <ol><li> Plaats een stompe canule via de placenta membranen om een ​​uur te verkrijgenniotic vloeistofmonster vrij van bloeding. Incise de placentale membranen met een schaar. </li></ol></li><li> Exterioriseren de craniale helft van de foetus via deze incisie. Plaats een steriele niet-latex chirurgische handschoen gevuld met steriele zoutoplossing bij 37 ° C via foetus head om normothermia handhaven. <ol><li> Tijdens het verwijderen van de foetale bovenlichaam van de uterus, de assistent houd de Babcock tot het verlies van vruchtwater voorkomen. Vervolgens opnieuw met Babcock tang, klem de foetale membranen en baarmoederwand de huid abdominale verontreiniging met vruchtwater voorkomen. </li><li> Bloot alleen de delen van de foetale lichaam die moeten worden geïnstrumenteerd en houden de overige delen in de baarmoeder of onder vochtige en warme (37 ° C) steriele doeken, respectievelijk. </li></ol></li><li> Ontvoeren zowel thoracale ledematen blootstelling aan de slagader en ader bilateraal vergemakkelijken. Incise langs de mediale aspect van zowel antebrachium en zorgvolledig ontleden rond de slagader en ader. </li><li> Plaats polyvinyl katheters in de linker en rechter brachialis slagaders en de linker arm ader met een standaard cut-down-techniek. <ol><li> Bevrijd het vaartuig kan worden gecatheteriseerd van aangrenzend weefsel meer dan 1 cm. Afbinden het distale gedeelte van het schip met een gevlochten synthetische absorbeerbare USP 2-0 hechtdraad. Preplace een ligatuur aan het proximale aspect van het schip, maar houd het ongebonden. <ol><li> Met behulp van Castroviejo schaar, knip het schip dwars op ongeveer 30% van de diameter. Stop de bloedstroom gedeeltelijk door aan de proximale hechtdraad. Een katheter in een proximale richting. </li></ol></li><li> Steek de polyvinyl katheter tot 8 cm proximaal of totdat weerstand wordt gedetecteerd en trek iets terug. Tijdelijk veilig de proximale aspect van de katheter met behulp van een vasculaire klem. Plaats een hechting rond zowel de proximale en distale aspect van de katheter. Een assistent is continu aspirating en doorspoelen van de katheter doorgankelijkheid van de catheter te verzekeren. </li><li> Sluit de foetale huid met behulp van een USP 2-0 gevlochten synthetische absorbeerbare hechtdraad, met een doorlopende hechting patroon. </li></ol></li><li> Aan de rechter en linker schouder, manubrium en xyphoid proces, fixeren een geïsoleerde roestvrij staal elektrode naar de monitoring van het foetale ECG te vergemakkelijken. </li><li> Hecht de amniotische druk en bemonstering katheter het borstbeen. Deze katheter wordt gefenestreerd aan zijn uiteinde. </li><li> Beveilig alle katheters op het dorsale gedeelte van de foetus met behulp van een USP 2-0 gevlochten synthetische absorbeerbare hechtmateriaal. </li><li> Voor de vervanging van de foetus in de baarmoeder weer toedienen clenbuterol 30 ug IV langzaam 15 min hypotensie vermijden en uterus verschaffen. </li><li> Hechten de foetale membranen met behulp van USP 4-0 gevlochten synthetische absorbeerbare hechtmateriaal met een doorlopend patroon. Nemen slechts een katheter of elektrode op een moment in de closure om een ​​strakke sluiting te garanderen. Gebruik een dubbele laag Cushing patroon respect Halsted principes om de baarmoeder spierlaag te sluiten met behulp van een USP 0 gevlochten synthetische absorbeerbare hechtmateriaal. Begraaf de chirurgische knopen zorgvuldig. </li><li> Met behulp van een portemonnee-string hechtdraad patroon, zet alle katheters en ECG-kabels als ze links paracostal incisie te verlaten. </li><li> Met behulp van een USP 2 monofilament synthetische absorbeerbare hechtmateriaal zet de linea alba met een doorlopend patroon. Sluit de onderhuidse weefsels met behulp van USP 2-0 gevlochten synthetische absorbeerbare hechtmateriaal met een doorlopend patroon. Zet de huidlaag met chirurgische nietjes. </li><li> Dien 250 mg ampicilline intraveneus en weer via de katheter in het vruchtwater amnionholte. Vervang verloren vruchtwater met warme zoutoplossing. </li><li> Plaats alle exteriorized katheters en ECG-elektroden in een plaats zak om de steriliteit te behouden. Plaats een stockinette rond de romp van de ooi aan alle katheters een veiligd elektroden op het lichaam van de ooi. </li><li> Stoppen met algemene anesthesie, en extuberen de ooi ooit laryngeale reflexen zijn teruggekeerd naar normaal. </li><li> Breng de ooi een metabole kooi zodra ze stabiel is volgende algemene anesthesie. De ooi wordt de metabole kooi gedurende de duur van het experiment bevinden. De ooi moet in staat zijn om op te staan, liggen en eten ad libitum, terwijl het toezicht op de niet-verdoofde foetus zonder sederende de moeder. </li><li> Voor de volgende drie dagen toedienen antibiotica profylactisch de ooi (trimethoprim sulfadoxine 5 mg / kg) en foetus (250 mg ampicilline intraveneus en weer via de amniotische catheter). </li><li> Evalueer de metabole status van zowel de ooi en de foetus met behulp van bloed gas analyse. </li><li> Spoel alle katheters met minimaal volume van gehepariniseerde zoutoplossing mogelijk. Voorzichtig - niet de dagelijkse dosis heparine en vloeistoffen mag de foetus overschrijden. Het is mogelijk om overvulling van de foetus. Flush langzaam een ​​keereen dag ~ 5 ml NaCl per lijn na antibiotische profylaxe. </li></ol></li><li> Opnemen van gegevens en analyse <ol><li> Tijdens de operatie, eventueel registreren de maternale en foetale ECG en hartslag en maternale arteriële bloeddruk en luchtwegdruk (Paw) continu (figuur 1). Gebruik de Life Window Monitor om alle moeders data te verwerven, behalve ECG. Feed dit gegevens in analoog-digitaal omzetter met foetale en maternale ECG-signalen; passeren maternale en foetale ECG eerst in 1901 voorversterker. Opnemen en weergeven van alle gegevens in de software van de fabrikant. </li><li> Neem een ​​1 mL arterieel monster tegelijk uit het ooi en foetus voor arteriële bloedgasanalyse, lactaat, glucose en base-overmaat bepaling (in plasma) aan het begin van de foetale chirurgie (direct na het inbrengen van de eerste arteriële katheter) en na het sluiten van de uterus . </li><li> Tijdens postoperatief herstel, raadpleeg 3 mL foetaal bloedmonster aan de IL-6 en TNF-α Inflamm metenAtory profielen. Centrifugeer het plasma bij 4 ° C (4 min, 4000 x g), decanteren en bewaar het plasma bij -80 ° C voor daaropvolgende ELISA testen. Opmerking: Ten behoeve van de gerapporteerde representatieve resultaten, zes dagen na de operatie werden de dieren opgeofferd via intraveneuze injectie van 20 ml natriumpentobarbital. Foetale groei werd beoordeeld door het lichaam, hersenen, lever en maternale gewicht. De duur van de experimentele periode zal uiteraard variëren afhankelijk van de gekozen voor de specifieke vraagstelling ontwerp en kan oplopen tot ~ 6 weken. </li></ol></li><li> Cytokine analyses (optionele stap) <ol><li> Bepaal concentraties cytokine (IL-6, TNF-α) in plasma onder toepassing van een schaap-specifieke sandwich ELISA. Pre-coat muis-anti-schaap monoklonale antilichamen (invangantilichaam IL-6) of muizen anti-runder monoclonaal antilichaam (TNF-α) in een concentratie 4 pg / ml op ELISA-plaat bij 4 ° C O / N na 3 keer wassen met wasbuffer (0,05% Tween 20 in PBS, PBST). </li><li>Blokkeer de platen gedurende 1 uur met 1% BSA in PBST. Was de platen met wasbuffer 3 keer. </li><li> Gebruik schapen recombinante eiwitten (IL-6, TNF-α) ELISA standaard stelt een seriële verdunningen variëren van standaard 1 van 2000 ng / ml standaard 7 van 31,25 pg / ml. </li><li> Belasting 50 pl seriële verdunde standaarden eiwitten en samples per putje en incubeer gedurende 2 uur bij KT, was de platen 3 keer. Lopen alle normen en monsters in tweevoud. </li><li> Breng 50 gl van konijnen anti-schaap polyklonale antilichamen (detectieantilichaam IL-6) of konijn anti-runder polyklonaal antilichaam (TNF-α) bij een verdunning van 1: 250 in putjes en incubeer gedurende 30 min bij kamertemperatuur. Was de platen met wasbuffer 5 keer. </li><li> Voeg 50 ul van de geit anti-konijn IgG-HRP geconjugeerd (verdunning 1: 5000) gedurende 30 min. </li><li> Incubeer bij 50 pl TMB-substraatoplossing per putje. </li><li> Stop kleurontwikkeling reactie bij gewenste tijdstip met 25 pl 2 N zwavelzuur. </li><li> Lees de plAtes op ELISA-plaat lezer bij 450 nm, met een 570 nm golflengte correctie. Noot: In onze testen van de gevoeligheid van IL-6 ELISA was 16 pg / ml, de gevoeligheid van TNF-a ELISA was 13,9 pg / ml, respectievelijk. Voor alle assays, de intra-assay en inter-assay-coëfficiënten van variatie was &lt;5% en &lt;10%, respectievelijk. </li></ol></li><li> Statistische analyses Opmerking: De exacte technieken zullen afhangen van de vraagstelling. Hier rapporteren we de gebruikte testen significante verschillen in de bloedgassen in tabel 2 methoden. <ol><li> Test normale gegevens verspreiden via Kolmogorov-Smirnov-test, gevolgd door parametrische of niet-parametrische testen met correctie voor meerdere vergelijkingen, naargelang het geval. </li><li> Met K-means cluster analyse om de foetussen in het cohort die spontaan hypoxische waren de respectieve pO 2 en O 2 za waarden te identificeren en te bepalen (denk pO 2 &lt;20 mmHg of O 2 Sat &lt;55% als fetal hypoxie). 44-48 </li><li> Gebruik statistische software zoals SPSS voor de analyses. </li><li> Heden data als gemiddelde ± SD statistische verschillen bij p &lt;0,05 als significant. </li></ol></li></ol>

Er zijn geen openbaarmakingen gedaan.

De anesthetische en chirurgische procedures worden die nodig zijn voor het opzetten van een diermodel voor de studie foetale fysiologie en pathofysiologie: chronisch geïnstrumenteerd niet-verdoofde foetaal schapen. Vier kritische stappen in het protocol moet worden benadrukt. Ten eerste, langs de catheters en elektroden door het moederlijke flank: het is belangrijk dat dit tegelijkertijd gebeurt aan een inwendig orgaan letsel te voorkomen. Ten tweede, het veiligstellen van de uterotomy opera...

Een verscheidenheid van dierlijke modellen bestaan ​​voor de studie van normale en gecompromitteerd zwangerschappen, waaronder knaagdieren, primaten en huishoudelijke herkauwers. 1,2,3,4,5 Chronisch geïnstrumenteerde zwangere schapen is uitgebreid gebruikt voor 50 jaar een model van foetale ontwikkeling en reacties mens op pathofysiologische stimuli zoals lipopolysaccharide (LPS). 10/06 De laesies na blootstelling aan LPS nabootsen wat wordt gezien bij prematuren met periventriculaire leukomalacia, die als gevolg van vergelijkbaar rijpingsprocessen profiel van beide soorten. 11, 12 Andere zwangerschapscomplicaties hebben ook onderzocht in detail, zoals de ontdekking dat prenatale glucocorticoïden bevorderen longontwikkeling 13-15 en inzicht in de impact van Dysmaturiteit (IUGR) op de foetus 16,17. Het uitgebreide gebruik van foetaal schapen model vanwege de uniqUE ontvankelijkheid van de niet-verdoofde foetaal schapen om de chirurgische plaatsing en onderhoud van catheters en elektroden, waardoor herhaalde bloedafname opnemen van bio-elektrische activiteit, de toepassing van elektrische stimulatie en in vivo beeldvorming van de hersenen. 18 Telemetrie is ook mogelijk, hoewel minder gebruikte maar vanwege de hogere verfijning te zetten als de aanvankelijke en onderhoudskosten. 19 Bovendien is de foetale schapen model is zeer veelzijdig vele variaties van instrumentatie zijn mogelijk afhankelijk van de maten van belang. Zo is het mogelijk voor opnemen dagen tot weken multivariate signalen in real time als foetale ademhalingsbewegingen elektrische hersenactiviteit, cardiovasculaire reacties, elektrocardiogram, doorbloeding een reeks organen gebruik stroming probes of microbolletjes, etc. Dankzij Deze veelzijdigheid, hebben een breed scala van studies uitgevoerd met inbegrip van de ontwikkeling van de Cardiovascular systeem 20,21, hypothalamus-hypofyse-bijnier (HPA) as 22, ontwikkeling van de hersenen ontwikkeling van 23 en slaap staten in het bijzonder 24, de effecten van hypoxie / asfyxie 25, therapeutische hypothermie 26, ontsteking 6-11, een combinatie van beide 27, glucocorticoïden 28,29, anti-depressiva 30, bronchopulmonale dysplasie (BPD) 31,32, foetale programmering 33,34,35,36,37,38,39 of de ontwikkeling van nieuwe foetale bewaking modaliteiten voor en tijdens de bevalling om maar een paar gebieden van onderzoek. 40,41,42,43 Het algemene doel van de gepresenteerde methode is om basisimplementatie dit veelzijdige model tonen. Het maakt vaststelling diverse acute en chronische experimentele protocollen bestuderen foetale fysiologie en pathofysiologie op de integratieve, orgaan, cellulair en moleculair niveau.

<table><tbody><tr><td>ACE Light source</td><td>Schott-Fostec</td><td>A20500</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060 - 11</td><td></td></tr><tr><td>Angled dissecting scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15006 - 09</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel handle</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003 - 12</td><td>wisselend dissectie-instrument</td></tr><tr><td>Curved scalpel blades #12</td><td>Fine Science Tools</td><td>10012 - 00</td><td>wisselend dissectie-instrument</td></tr><tr><td>Bone scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>16044 - 10</td><td></td></tr><tr><td>S &amp; T suture tying forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>00272 - 13</td><td></td></tr><tr><td>Dumont SS forceps - angled</td><td>Fine Science Tools</td><td>11203 - 25&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Braided silk suture size 6-0</td><td>Teleflex Medical</td><td>07 - 30&nbsp; - 10</td><td></td></tr><tr><td>Medical Tape</td><td>transpore</td><td>3M</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine hydrochloride 100 mg/ml</td><td>Hospira</td><td>NDC 0409 - 2051 - 05</td><td>Einddose is 80 mg/kg</td></tr><tr><td>Tranqui Ved Injection (xylazine 100 mg/ml)</td><td>Vecdo</td><td>NDC 50989 - 234 - 11</td><td>Einddose is 10 mg/kg</td></tr><tr><td>Reactive orange 14</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>R - 8254</td><td></td></tr><tr><td>Ringers Solution Components</td><td></td><td></td><td>Oplossing is gas geëquilibreerd met 95% O2 en 5% Co2, eind pH 7.4</td></tr><tr><td>Sodium chloride</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>S7653</td><td>Eindconcentratie: 118 mM</td></tr><tr><td>Potassium chloride</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217 - 3</td><td>Eindconcentratie: 4.7 mM</td></tr><tr><td>Calcium chloride dihydrate</td><td>Fisher Scientific</td><td>C79 - 500</td><td>Eindconcentratie: 2.5 mM</td></tr><tr><td>Potassium phosphate monobasic</td><td>Fisher Scientific</td><td>P -285</td><td>Eindconcentratie: 1.2 mM</td></tr><tr><td>Magnesium sulfate</td><td>J.T. Baker</td><td>Jan-00</td><td>Eindconcentratie: 0.57 mM</td></tr><tr><td>4-(2-Hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulfonic acid (HEPES)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP 310 - 500</td><td>Eindconcentratie: 5.95 g/L</td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>G8270</td><td>Eindconcentratie: 5.5 mM</td></tr><tr><td>LifeWindow</td><td>Digicare Biomedical Technology</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CED bioamplifier and ADC units</td><td>Cambridge Electronic Design Limited, Unit 4, Science Park, Milton Road, Cambridge CB4 0FE ENGLAND.</td><td>Bioamp: 1902; ADC: micro1401; Data acquisition software: Spike 2, V7.13</td><td></td></tr><tr><td>Neurolog analog signal bioamplifier</td><td>Digitimer Ltd 37 Hydeway Welwyn Garden City Hertfordshire, AL7 3BE, England</td><td>NL108A</td><td></td></tr><tr><td>ABL800Flex</td><td>Radiometer Canada; 200 Aberdeen Dr, London, ON N5V 4N2</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 5804R</td><td>Eppendorf Canada; 2810 Argentia Road, #2 Mississauga, Ontario, L5N 8L2</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Arrow Jugular Catheterization Set</td><td>Arrow International, Inc., 2400 Bernville Road, Reading, PA 19605 USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Atravet</td><td></td><td></td><td>10 mg/ml</td></tr><tr><td>Diazepam</td><td></td><td></td><td>5 mg/ml</td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Ketalar</td><td></td><td>100 mg/ml</td></tr><tr><td>Propofol</td><td></td><td></td><td>10 mg/ml</td></tr><tr><td>SurgiVeT</td><td>Endotracheal Tubes; Smiths Medical ASD, Inc. St. Paul, MN 55112, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cook Airway Exchange Catheter with RAPI-FIT Adapters</td><td>Cook Critical Care 750, Bloomington IN 47402-0489 USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dispomed Ventilator</td><td>Dispomed Ltd., 745 Nazaire-Laurin, Joliette, Quebec J6E 0L6</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte-W</td><td>Becton Dickinson, Infusion Therapy Systems Inc., 9450 S State St, Sandy Utah 84070 USA</td><td></td><td>22 to 20 G; 1 in [0.9 x 25 mm] tot 1.16 in [1.1 x 30 mm]</td></tr><tr><td>Edwards Lifesciences Ref: PX272 Pressure monitoring kit with TruWave Disposable Pressure</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LifeWindow LW6000</td><td>Digicare Biomedical Technology 107 Commerce Road, Boynton Beach, FL 33426-9365 USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gaymar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Babcock</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polyvinyl catheters</td><td>SCI (Scientific Commodities Inc.)</td><td></td><td>2 meters</td></tr><tr><td>2-0 Vicryl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo scissors</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>electrocardiogram (ECG)</td><td>LIFYY, Metrofunk Kabel-Union, Berlin, Germany</td><td></td><td>four copper electrodes in single sheath, 2 meters</td></tr><tr><td>2-O Vicryl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3-0 Vicryl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDS II USP</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trimethoprim sulfadoxine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stopcock</td><td>Argon Medical, Cat&nbsp;041220001A</td><td></td><td>Double 4-way Stopcock with male luer lock</td></tr><tr><td>Needles</td><td>Tyco Healthcare 8881202389</td><td></td><td>Monoject aluminium hub blunt needles, 22Gx, 0.7mmx 38.1mm: voor foetale arteriële en veneuze katheters</td></tr><tr><td>Needles</td><td>Tyco Healthcare 8881202322</td><td></td><td>Monoject aluminium hub blunt needles, 16Gx, 1.6mmx38.1mm: voor vruchtwaterkatheters</td></tr></tbody></table>

instrumentatie van near-termijn foetale schapen voor multivariate chronische niet-verdoofde recordings

Instrumentation of Near-term Fetal Sheep for Multivariate Chronic Non-anesthetized Recordings

De chronisch geïnstrumenteerde zwangere schaap wordt gebruikt als een model voor menselijke foetale ontwikkeling en reacties op pathofysiologische stimuli zoals endotoxinen, bacteriën, occlusies van de navelstreng, hypoxie en verschillende farmacologische behandelingen. De levensreddende klinische praktijken van glucocorticoïdenbehandeling bij foetussen met risico op vroeggeboorte en de therapeutische hypothermie zijn in dit model ontwikkeld. Dit komt door de unieke geschiktheid van de niet-geanesthetiseerde foetale schaap voor chirurgische plaatsing en onderhoud van katheters en elektroden, waardoor herhaalde bloedmonsters, injectie van stoffen, registratie van bio-elektrische activiteit, toepassing van elektrische stimulatie en in vivo orgaanbeeldvorming mogelijk is. Hier beschrijven we de chirurgische instrumentatieprocedure die nodig is om een stabiel chronisch geïnstrumenteerd, niet-geanesthetiseerd foetaal schaapmodel te realiseren, inclusief karakterisering van de postoperatieve herstel vanuit het oogpunt van bloedgas, metabolisme en ontsteking.

38 zwangere-time gedateerde ooien werden geïnstrumenteerd bij 128 ± 2 dagen van de dracht (dGA, ~ 0,88 zwangerschap, term 145 dGA) met arteriële, veneuze en vruchtwater katheters en het elektrocardiogram (ECG) elektroden met steriele techniek onder algemene verdoving (zowel ooi en foetus ). In geval van een tweelingzwangerschap is de grotere foetus gekozen op basis van palpatie en het schatten van de intertemporele diameter; alternatief kan de foetus worden geïnstrumenteerd willekeurig gekozen om mogelijke vertekening t...

Chronisch geïnstrumenteerd niet-verdoofde foetale schapen model wordt toegepast om menselijke foetale ontwikkeling in gezondheid en ziekte te bestuderen, omdat het toestaat chirurgische plaatsing en onderhoud van catheters en elektroden herhaalde bloedafname, stof injectie, opname van bio-elektrische activiteit en in vivo imaging. We beschrijven de vereiste om dit model vast te stellen procedures.

Instrumentatie van Near-termijn Foetale Schapen voor Multivariate chronische niet-verdoofde Recordings

The chronically instrumented pregnant sheep has been used as a model of human fetal development and responses to pathophysiologic stimuli such as ...

Het algemene doel van deze procedure is het beschrijven van de instrumentatie van de OV-foetus voor langdurige fysiologische monitoring als reactie op elke fysiologische verstoring; dit onderzoekmodel maakt vasculaire toegang en elektrocardiografische en andere bio-elektrische monitoring van de niet-genarkeerde foetus in utero mogelijk. Dit geeft ons inzicht in de veranderingen die optreden tijdens een fysiologische verstoring, zoals vasculaire occlusie of een injectie van een pro-inflammatoire mediator. Dit model is klinisch relevant voor het begrijpen van de foetale ontwikkeling in gezonde en pathologische toestanden.Alle hier gepresenteerde dierprocedures zijn goedgekeurd door de ethische commissie voor het gebruik van dieren aan de Universiteit van Montreal en volgden de richtlijnen die zijn vastgesteld door de Canadian Council for Animal Care. Dit is een experiment zonder overleving. Het hier beschreven anesthesieprotocol heeft minimale effecten op de ontstekingsreactie.De toevoeging van een kleine dosis propofol vermindert de larynxreflexen, waardoor intubatie wordt vergemakkelijkt. Gedurende de gehele anesthesieperiode wordt een multiparameter fysiologische monitor gebruikt.

instrumentation-near-term-fetal-sheep-for-multivariate-chronic-non

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

Ultra-hoge frequentie echografie is een krachtige live-imaging tool om cardiale afwijkingen in kleine proefdieren. Zijn noninvasiveness maakt het handhaven van de fysiologische toestand van de embryo's. Hierin tonen we het gebruik van M-mode echo om de hartslag van embryo meten E18.5 in de baarmoeder.

In utero Meting van de hartslag in de Muis door invasieve M-mode echocardiografie

Hier introduceren we een nieuwe techniek die is ontworpen om elektroencefalografie (EEG) op te nemen bij vrij bewegende neonatale epileptische pups en omschrijft haar procedures, eigenschappen en toepassingen. Met deze methode kan men gedurende meer dan 1 week EEG opnemen.

EEG opnemen bij vrij bewegende neonatale ratten met behulp van een nieuwe methode

Nauwkeurig en efficiënt visualisatie van invasieve medische hulpmiddelen is uiterst belangrijk in vele echografie-geleide minimaal invasieve procedures. Hier wordt een methode voor het lokaliseren van de ruimtelijke positie van een naald tip ten opzichte van de echografie imaging sonde gepresenteerd.

Driedimensionale ultrasone naald Tip Tracking met een glasvezel echografie-ontvanger

Hoge-frequentie echografie beeldvorming van de foetale muis kan imaging resolutie is verbeterd en nauwkeurige niet-invasieve karakterisering van cardiale ontwikkeling en structurele gebreken. Het protocol hierin geschetst is ontworpen om uit te voeren real-time foetale muizen echocardiografie in vivo.

Foetale muis cardiovasculaire Imaging met behulp van een systeem van hoge-frequentie echografie (30 / 45MHZ)

Invasieve instrumentatie van het foetale lam biedt nauwkeurige fysiologische metingen van de kopstoot circulatie in een model dat nauw samen van de Nabootsers van het pasgeboren kind.

De perinatale ontwikkelingsniveau lam Model: Een Model voor pasgeboren reanimatie

Hier presenteren we een niet-invasief elektrocardiografie (ECG) protocol, geoptimaliseerd voor vroege postnatale muizen, dat niet het gebruik van verdoving vereist.

Niet-invasieve elektrocardiografie in de perinatale muis

Het huidige protocol beschrijft een methode om geneesmiddelen en genexpressiemodificerende middelen perivasculair toe te dienen in een in utero ontwikkelende foetus. Belangrijk is dat het effect van medicijnen/middelen op de bloedstroom kan worden gemeten met de progressie van de zwangerschap.

In vivo Real-time studie van geneesmiddeleffecten op de bloedstroom van de halsslagader bij de schapenfoetus

Optimalisatie van de occlusiedruk en -duur die nodig is om longhypoplasie met tracheale occlusie te verbeteren, is essentieel om in utero corrigerende behandelingen voor congenitale hernia diafragmatica (CDH) te verbeteren. Deze studie rapporteert een nieuwe methode voor continue meting van de tracheale druk in een occluded en unoccluded foetaal lam chirurgisch model van CDH.

Continue telemetrie in utero tracheale drukmetingen bij foetale lammeren

Deze studie presenteert een schaalbare, betrouwbare en reproduceerbare methode voor herhaalde chronische corticale opnames in een varkensmodel. De methode heeft toepassingen in verschillende gebieden van de neurowetenschappen, waaronder pijnonderzoek en diagnostiek van neurologische aandoeningen.

Chronische craniale venstertechniek voor herhaalde corticale opnames tijdens anesthesie bij varkens

Dit protocol beschrijft de chirurgische methodologie voor het implanteren van een draadloos telemetrieapparaat voor grote dieren om continue en langdurige verzameling van hemodynamische gegevens mogelijk te maken, waaronder hartslag, arteriële bloeddruk, inferieure en superieure vena cava-druk en hartritme.

Implantatie van een draadloos telemetrieapparaat in een Fontan-schapenmodel voor continue en langdurige hemodynamische monitoring

Leer de instrumentatie van het foetale schapenmodel voor langdurige fysiologische monitoring zonder verdoving. Deze methode biedt inzicht in foetale ontwikkeling en reacties op fysiologische verstoringen.

Instrumentatie van Near-termijn Foetale Schapen voor Multivariate chronische niet-verdoofde Recordings

Meer video's verkennen