Name: Primaire tumor en MEF Cell Isolation om te studeren longmetastase (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 31 s
Description: Leer primaire tumorcelisolatie en longextractie voor borstkankeronderzoek bij muizen. Deze methode met MEF-cellen helpt onderzoekers metastase in vivo bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We willen NIH, LACaTS en Ochsner Clinic Foundation bedanken voor de financiële steun.

Alle muis experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met protocollen door de Institutional Animal Care en gebruik Commissies (IACUC) van LSU School of Medicine goedgekeurd. Alle instrumenten moeten voorafgaand aan de dissectie worden geautoclaveerd. 1. Voorbereiding van de primaire cellen van Mouse borsttumoren <ol><li> Gebruik een muismodel dat genetisch werd ontworpen met de muis borsttumorvirus Polyoma Midden T-antigeen (MMTV-PyMT-transgene muis), die spontaan ontwikkelen tumoren zoals eerder beschreven 6. </li><li> Offer muizen met isofluraan (99,9%) en spuit 75% ethanol in een steriele omgeving (figuur 1A) waarborgen. </li><li> Open de huid ter plaatse van de urethrale opening aan de hals met een schaar. Speld de huid naar een gemakkelijke toegang tot organen (Figuur 1B) mogelijk te maken. </li><li> Isoleer de borstklier tumor en was met koude steriele fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) (pH 7,4) (Figuur 1C). </li><li> Breng de tumoreen steriele 10cm weefselkweek plaat en hak het met een steriel scheermesje en schaar om ongeveer 1 mm 3 stuks. Daaropvolgende stappen moeten worden uitgevoerd in een steriele laminaire stroming kap. </li><li> Incubeer de gehakte tumorweefsel met collagenase opgelost in serumvrij DMEM medium bij een eindconcentratie van 1 mg / ml op een rocker gedurende 2 uur bij 37 ° C. Centrifugeer de suspensie tumorweefsel gedurende 3 minuten bij 200 x g. OPMERKING: De collagenase incubatie essentieel voor enzymatische dissociatie van het weefsel. </li><li> Verwijder het supernatant en was het neerslag 3 maal met PBS (pH 7,4) door centrifugeren gedurende 3 min bij 200 x g. Na de laatste wasbeurt, giet het supernatant. </li><li> Resuspendeer het weefsel met 2 ml trypsine EDTA gedurende 5 minuten bij 37 ° C onder Tuimelschijfmeter. Centrifugeer de schorsing gedurende 3 min bij 200 xg en herhaal de wasbeurten. </li><li> Resuspendeer het weefsel pellet in normale groei medium (DMEM, 10% FBS, 2X pen / strep) op een 10cm plaat. Veranderingde media dagelijks gedurende de volgende 3 dagen. Kweekcellen tot het gewenste aantal cellen is verkregen. OPMERKING: Ongeveer 1x10 7 cellen worden geïsoleerd van deze procedure. Andere muizen mammaire tumorigenese modellen, zoals MMTV-Neu, geven lagere opbrengst aan cellen in vergelijking met MMTV-PyMT. Bij gebruik van modellen met een lagere opbrengst te produceren, is het nuttig om te beginnen met een groter tumor en kweekcellen langer. </li></ol> 2. Mouse Lung Extraction te visualiseren longmetastase <ol><li> Voorafgaand aan long extractie, verwijder de lever en het middenrif. Verdrijven de ribben zonder de longen. </li><li> Met een fijne schaar, opent het bovenste gedeelte van de trachea die dichter bij de halsader. </li><li> Met behulp van een catheter, injecteert een middel zoals 1 ml Z-fix en India inkt door de luchtpijp in de longen (figuur 2A) vullen. Het insluiten Z-fix Longen in paraffine. </li><li> De-vlek de longen geïnjecteerd met Oost-Indische inkt in Fekete&#39;s oplossing(100 ml 70% alcohol, 10 ml 10% gebufferde formaline en 5 ml ijsazijn) gedurende 5 min. Definieer tumor knobbeltjes op secundaire locaties met een ≥ 0,5 mm in diameter, bepalen de knobbeltjes als metastase. LET OP: Door de bronchiën en bronchiole blokkade door de tumor, kunnen tumoren niet absorberen 15% Oost-Indische inkt, en dus normaal longweefsel zal zijn in het zwart, en tumoren zal worden in witte kleur 7. Dit visualisatie van afzonderlijke tumoren (figuur 2B) toe. </li></ol> 3. Voorbereiden van muis embryonale fibroblasten (MEF) van muizenembryo&#39;s <ol><li> Offer zwangere muizen met isofluraan (99,9%) en spuit 75% ethanol om een ​​steriele omgeving te verzekeren. </li><li> Open de huid ter plaatse van de urethrale opening aan de hals met een schaar en isoleer de embryo&#39;s uit de uterus. </li><li> Wees voorzichtig niet om de embryo&#39;s te storen bij het openen van de huid. </li><li> Verwijder de baarmoederhoorns en spoel ze in koud steRILE PBS (pH 7,4). </li><li> Scheid het embryo uit de placenta zeer zorgvuldig en plaats embryo&#39;s in een 10cm plaat met ijskoud PBS (pH 7,4). </li><li> Verwijder de kop, lever en darm van het embryo en plaats het resterende deel in een 12 well weefselkweek plaat met PBS (pH 7,4). </li><li> Breng de embryo lichaam een 12 wells plaat met trypsine EDTA en in kleine stukjes (~ 1 mm 3) met een steriele scheermesje en schaar. Incubeer het gehakselde materiaal met 5 ml trypsine EDTA gedurende 5 minuten bij 37 ° C. </li><li> Inactiveer trypsine door toevoeging van 1 ml foetaal runderserum (FBS) met de gehakte embryo. Centrifugeer de suspensie bij 200 xg snelheid gedurende 10 minuten, verwijder het supernatant, resuspendeer de pellet met 1 ml warm DMEM medium geheel overgaat de inhoudsopgave voor een 10cm schotel met 10 ml DMEM (met 20% FBS en 2X penicilline / streptomycine ). </li><li> Verander het medium elke dag gedurende twee dagen. Kweken van de cellen tot de gewenste cellnummer bereikt. </li></ol>

<ol><li>Minn, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+that+mediate+breast+cancer+metastasis+to+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">Genes that mediate breast cancer metastasis to lung.</a> Natur. 436 (7050), 518-524 (2005).</li>
<li>Poste, G., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathogenesis+of+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">The pathogenesis of cancer metastasis.</a> Natur. 283 (5743), 139-146 (1980).</li>
<li>Wan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+Metastasis+Moving+New+Biological+Insights+into+the+Clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor Metastasis Moving New Biological Insights into the Clinic.</a> Nat Med. 19 (11), 1450-1464 (2013).</li>
<li>Bergers, G., Benjamin, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorigenesis+and+the+angiogenic+switch%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumorigenesis and the angiogenic switch.</a> Nat Rev Cancer. 3 (6), 401-410 (2003).</li>
<li>Frese, K. K., Tuveson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximizing+mouse+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Maximizing mouse cancer models.</a> Nat Rev Cancer. 7 (9), 654-658 (2007).</li>
<li>Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+mammary+tumors+by+expression+of+polyomavirus+middle+T+oncogene%3A+a+transgenic+mouse+model+for+metastatic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease.</a> Mol Cell Biol. 12 (3), 954-961 (1992).</li>
<li>Wexler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+Identification+of+Experimental+Pulmonary+Metastases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Accurate Identification of Experimental Pulmonary Metastases.</a> J Natl Cancer Inst. 36 (4), 641-645 (1966).</li>
<li>Boczkowski, D., Nair, S. K., Nam, J. H., Lyerly, H. K., Gilboa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+tumor+immunity+and+cytotoxic+T+lymphocyte+responses+using+dendritic+cells+transfected+with+messenger+RNA+amplified+from+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Induction of tumor immunity and cytotoxic T lymphocyte responses using dendritic cells transfected with messenger RNA amplified from tumor cells.</a> Cancer Res. 60 (4), 1028-1034 (2000).</li>
<li>Vargo-Gogola, T., Rosen, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+breast+cancer%3A+one+size+does+not+fit+all%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Modelling breast cancer: one size does not fit all.</a> Nat Rev Cancer. 7 (9), 659-672 (2007).</li>
<li>Watts, A. M., Kennedy, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitation+of+Tumor+Foci+in+an+Experimental+Murine+Tumor+Model+Using+Computer-Assisted+Video+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Bioche%22%5BJournal%5D)">Quantitation of Tumor Foci in an Experimental Murine Tumor Model Using Computer-Assisted Video Imaging.</a> Anal Bioche. 256 (2), 217-219 (1998).</li>
<li>Rosenberg, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+Established+Pulmonary+Metastases+and+Subcutaneous+Tumor+Mediated+by+the+Systemic+Administration+of+High-Dose+Recombinant+Interleukin+2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Me%22%5BJournal%5D)">Regression of Established Pulmonary Metastases and Subcutaneous Tumor Mediated by the Systemic Administration of High-Dose Recombinant Interleukin 2.</a> J Exp Me. 161 (5), 1169-1188 (1985).</li>
<li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Re%22%5BJournal%5D)">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Re. 8 (4), 212(2006).</li>
<li>Veer, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profiling+predicts+clinical+outcome+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Gene expression profiling predicts clinical outcome of breast cancer.</a> Nature. 415 (6871), 530-536 (2002).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen onthullingen.

Dit protocol is voor het isoleren van primaire cellen van een nieuwe muis tumor. Lysaten bereid uit deze werkwijze bruikbaar voor eiwitten, DNA en RNA-analyse. Kankercellen uit de primaire borsttumor metastaseren vaak naar de hersenen, longen en botten 1. Inbegrepen is een techniek om de long voor de detectie van metastasen extraheren. Kleuring van de long met een inktvlek zal voor de visualisatie van tumoren zoals getoond in figuur 2B. Vaststelling van de longen in Z-fix oplossing zal ons to...

Metastase is de laatste stap in de progressie van borstkanker 1. Het omvat een reeks stappen waarbij kwaadaardige cellen vrijkomen van de primaire tumor en worden verspreid naar andere organen 2. De cellen moeten in staat zijn om intravasatie te ondergaan, te overleven in circulatie, extravasatie naar verre organen en te overleven in dat nieuwe orgaansysteem 3. Elke stap in tumorigenese wordt strikt gecontroleerd door cellen door verschillende genetische en epigenetische veranderingen 4. Om de mechanismen van borstkankertumorigenese te bestuderen, zijn muismodelsystemen gebruikt vanwege hun korte levensduur, kleine omvang en snelle voortplantingstijd. Enkele grote voordelen van het gebruik van muismodellen in kankeronderzoek zijn de moleculaire en fysiologische overeenkomsten die ze delen met mensen 5.
Gevestigde muis- en menselijke cellijnen zijn uitgebreid gebruikt in borstkankeronderzoek. Hoewel we enige informatie over de stappen in metastase kunnen verkrijgen met behulp van deze cellen, zullen genetisch gemanipuleerde diermodellen met tumorsuppressoren/oncogenen veel meer informatie geven over tumorontwikkeling en metastase vanaf het embryonale stadium. Dus, met deze muismodellen kunnen we genetische en ontwikkelingsregulatie van tumorgroei verkrijgen. Bovendien speelt het tumormicro-omgeving ook een belangrijke rol in de genexpressie van tumorcellen en het kan moeilijk zijn om hetzelfde scenario na te bootsen met studies met gevestigde cellijnen. Primaire menselijke mammaire tumoren kunnen ook worden gebruikt om muis mammaire tumorigenese te bestuderen. Het grootste nadeel van het gebruik van geïsoleerde borsttumoren is dat deze nieuw geïmplanteerde tumor niet de vaat- en lymfweefsel van de muis heeft. Terwijl de genetische muismodelsystemen voor het bestuderen van mammaire tumorigenese ons in staat stellen de stappen van metastase te volgen, het tumormicro-omgeving te analyseren en toegang tot het hele lichaam 5.
Het algemene doel van dit protocol is om borsttumorigenese bij muizen te bestuderen. Het is bekend dat borstkanker zich meestal verspreidt naar de hersenen, long en bot. Dit protocol maakt het mogelijk om primaire mammaire tumorcellen te isoleren, evenals borstkankermetastase naar de long te bestuderen. Bovendien is een ander protocol voor het analyseren van muis embryonale fibroblasten (MEF's) uit het muis embryo opgenomen. Samen zijn deze technieken nuttig bij het bestuderen van muis mammaire tumorigenese.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>HyClone</td><td>SH30243.01</td><td>Bewaar bij 4 &deg;C</td></tr><tr><td>0.05% Trypsin-EDTA</td><td>Life&nbsp; technologies</td><td>25300-062</td><td>Bewaar bij &ndash; 20 &deg;C</td></tr><tr><td>Collagenase Type IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td>Bewaar bij &ndash; 20 &deg;C</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td>Bewaar bij &ndash; 20 &deg;C</td></tr><tr><td>Pen Strep</td><td>Life&nbsp; technologies</td><td>15140-122</td><td>Bewaar bij 4 &deg;C</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Gemini Bio-Products</td><td>100-106</td><td>Bewaar bij &ndash; 80 &deg;C</td></tr><tr><td>Z-fix</td><td>ANATECH</td><td>#174</td><td>Bewaar bij RT</td></tr><tr><td>India Ink</td><td>Yasutomo</td><td></td><td>Bewaar bij RT</td></tr><tr><td>AERRANE (Isoflurane)</td><td>Baxter</td><td>NDC 10019-773-60</td><td>Bewaar bij RT</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>EMD</td><td>AX0441-3</td><td>Bewaar bij RT</td></tr></tbody></table>

primaire tumor en mef cell isolation om te studeren longmetastase

Primary Tumor and MEF Cell Isolation to Study Lung Metastasis

Bij tumorvorming in de borst vormt het uitzaaiingsstadium van de ziekte de grootste bedreiging voor de getroffen persoon. Normale borstcellen met veranderde genotypen hebben nu de mogelijkheid om andere weefsels binnen te dringen en daar te overleven. In dit protocol worden muisborsttumoren verwijderd en primaire cellen worden bereid uit tumoren. De cellen die uit deze procedure zijn geïsoleerd, zijn vervolgens beschikbaar voor genprofileringsexperimenten. Voor succesvolle metastase moeten deze cellen in staat zijn om intravasatie te ondergaan, te overleven in de circulatie, extravasatie naar verre organen te ondergaan en te overleven in dat nieuwe orgaansysteem. De longen zijn het typische doelwit van metastase van borstkanker. Er is een reeks genen ontdekt die de selectiviteit van metastase naar de long mediëren. Hier beschrijven we een methode om longmetastase te bestuderen vanuit een genetisch gemodificeerde muismodel. Verder is er nog een protocol inbegrepen voor het analyseren van muis embryonale fibroblasten (MEF's) van het muis embryo. MEF-cellen van hetzelfde diertype geven een aanwijzing voor genexpressie van niet-kankercellen. Samen zijn deze technieken nuttig bij het bestuderen van muisborsttumorigenese, de bijbehorende signaalmechanismen en paden van de abnormaliteiten in embryo's.

De tumorprogressie moment waarop het dier offeren hangt af van de studie en IACUC richtlijnen. In figuur 1A, 100 dagen oud C57BL / 6 muis met de muis borsttumorvirus Polyoma Midden T-antigeen (MMTV-PyMT) werd geofferd op drie maanden. De huid werd geopend uit het gebied van de urethra opening aan de hals van de schaar en de huid was vastgepind om gemakkelijke toegang tot organen figuur 1B laten. Hierdoor konden gemakkelijk toegang tot de tumor die werd verkregen in figuur 1C.</s...

Het doel van dit protocol is om borsttumorigenesis te bestuderen. Met deze techniek worden muisborsttumoren verwijderd en worden primaire cellen bereid uit tumoren. Er is een longextractieprotocol opgenomen voor het bestuderen van longmetastasen. Verder is er nog een protocol opgenomen voor het analyseren van muis embryonale fibroblasten van het muizenembryo.

Primaire tumor en MEF Cell Isolation om te studeren longmetastase

In breast tumorigenesis, the metastatic stage of the disease poses the greatest threat to the affected individual. Normal breast cells with altered ...

Het algemene doel van deze procedure is het bestuderen van de tumorgenese van borstkanker bij muizen. Eerst wordt de preparatie van primaire cellen uit borsttumoren van muizen gedemonstreerd. Vervolgens wordt getoond hoe de long van de muis wordt geprepareerd voor de visualisatie van longmetastasen.Ten slotte wordt de preparatie van embryonale fibroblasten uit muizenembryo's getoond, aangezien deze methoden aantonen dat muizen die transgeen zijn voor het polyoma middle T-antigeen van het muisborstkankervirus kunnen worden gebruikt om de tumorigenese van borstkanker te onderzoeken. Hoewel deze methode inzicht kan verschaffen in borstkanker, kan deze ook worden toegepast bij het onderzoek naar andere solide tumoren. Een visuele demonstratie van deze methode is cruciaal, omdat het belangrijk is om tijdens de stappen van de tumorisolatie uitsluitend tumoren en geen ander weefsel te isoleren. Begin met het openen van de huid met een schaar, vanaf de urethrale opening tot aan de nek van een muis die transgeen is voor het polyoma middle T-antigeen van het muisborstkankervirus.Zet vervolgens de huid vast en isoleer de mammateumor. Was de tumor in situ met koud PBS en plaats de tumor in een steriele weefkweekplaat van 10 centimeter. Verplaats de plaat vervolgens naar een steriele laminaire flowkast en gebruik een steriel scheermesje en een schaar om de tumor in stukjes van één kubieke millimeter te snijden.Incubeer de stukjes met collagenase op een schudplateau bij 37 °C. Centrifugeer na twee uur de resulterende tumorweefsel-suspensie. Was het pellet nog drie keer met PBS Resus en resuspendeer het pellet na de laatste wasbeurt in twee milliliter trypsine-EDTA gedurende vijf minuten bij 37 °C onder constante menging.Was de cellen vervolgens nog drie keer en resuspendeer ze in normaal groeimedium. Incubeer de cellen tot slot in een weefkweekschaal van 10 centimeter, waarbij het medium de volgende drie dagen dagelijks wordt ververst totdat het gewenste aantal cellen is bereikt. Verwijder vóór de extractie van de long de lever en het diafragma en verwijder de ribben.Open vervolgens het bovenste deel van de trachea, nabij de vena jugularis, en gebruik een katheter om het juiste middel via de trachea in te spuiten om de longen te vullen. Verwijder de longen en bed het weefsel vervolgens in paraffine indien Z-fix wordt gebruikt. Bij gebruik van India ink wordt het weefsel vijf minuten in een inec-oplossing geplaatst; het normale longweefsel zal zwart van kleur worden, terwijl de tumornoduli zichtbaar worden. Classificeer alle tumornoduli die op secundaire locaties worden gevisualiseerd met een diameter van 0,5 mm of groter als metastasen om muisembryonale fibroblasten te genereren.Open eerst de huid van een drachtige muis van de urethrale opening tot de nek, zoals zojuist gedemonstreerd, waarbij u er zorg voor draagt de embryo's niet te verstoren. Verwijder vervolgens de uterine hoorns en spoel deze met steriele PBS. Scheid daarna de embryo's voorzichtig en één voor één van de placenta.Plaats elk embryo in een kweekschaal van 10 centimeter met ijskoud PBS. Nadat de kop, lever en darm zijn verwijderd, spoelt u het resterende deel van het embryo in een putje van een 12-wells weefselkweekplaat met PBS en snijdt u het lichaam in stukjes van one cubic millimeter. Breng dit over naar een ander putje met five milliliters tripsin EDTA en incubeer het weefsel bij 37 degrees Celsius.Voeg na vijf minuten één milliliter FBS toe om de digestie te inactiveren. Centrifugeer vervolgens de resulterende cel-suspensie en resuspendeer het pellet. In één milliliter verwarmd DMEM, breng de cellen tot slot over naar een kweekschaal van 10 centimeter die 10 milliliters DMEM bevat, aangevuld met antibiotica, en kweek de cellen totdat het gewenste celgetal is bereikt.Het stadium van tumorprogressie waarop het dier wordt geofferd, hangt af van de specifieke studie en de I-A-C-U-C-richtlijnen. Bijvoorbeeld, deze 100 dagen oude FVB-muis met het polyoma middle T-antigeen van het muisborsttumorvirus werd geofferd drie maanden na het isoleren van een tumor, zoals zojuist gedemonstreerd bij de muisborst. Primaire tumorcellen werden verkregen.Aangezien veel genen de metastase van borstkanker naar de longen mediëren, werden de longen, zoals zojuist gedemonstreerd, ook verwijderd om het metastatische proces te bestuderen. De longen werden vervolgens opgeblazen met Z fix en gekleurd met India-inkt om de tumornoduli te visualiseren. Hier worden embryonale muis fibroblasten getoond, geïsoleerd uit embryo's van muizen van de FVB-stam.Na het bekijken van deze video zou u een goed beeld moeten hebben van hoe u primaire muis tumorcellen en muis embryonale fibroblasten kunt isoleren, en hoe u de long van de muis kunt extraheren. Vergeet niet dat het werken met isofluraan uiterst gevaarlijk kan zijn; neem daarom altijd de nodige voorzorgsmaatregelen, zoals het werken in een chemische afzuigkap tijdens het uitvoeren van deze procedure.

primary-tumor-and-mef-cell-isolation-to-study-lung-metastasis

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dit artikel beschrijft de procedures van een experimentele metastase test die wordt gebruikt om de metastatisch potentieel van kanker bij de mens cellijnen te bepalen.

Experimentele Metastase Assay

In dit rapport beschrijven we een protocol voor het isoleren van zeer zuivere populaties van leucocyten dat tumoren te infiltreren. Dit protocol is een bewerking van de Miltenyi Biotech-protocol om opbrengst en zuiverheid voor het isoleren van cellen van complexe tumorweefsel te verbeteren.

Isolatie van immuuncellen van primaire tumoren

Neutrofielen spelen niet alleen een belangrijke rol bij de verdediging van het gastheerlichaam tegen binnendringende micro-organismen, maar zijn ook betrokken bij de immuunbewaking van tumorcellen. Hier beschrijven we technieken met betrekking tot de isolatie van neutrofielen met anti-tumoreigenschappen en methoden voor het monitoren van anti-tumor neutrofielen functie in vitro en in vivo.

Isolatie en karakterisering van neutrofielen met Anti-Tumor Properties

Dit manuscript beschrijft een methode om te kwantificeren tumor cel accumulatie in de longen in een diermodel van uitzaaiing van de tumor.

Long Tumor cel aanwerving Assay

Beschrijven we een betrekkelijk eenvoudige werkwijze voor ex vivo beeldvorming van levende het tumorcel-stroma interacties binnen longmetastasen, gebruik fluorescente reporters in muizen. Gebruik draaiende schijf confocale microscopie Deze techniek maakt visualisatie van levende cellen gedurende ten minste 4 uur en kan worden aangepast om andere inflammatoire longaandoeningen bestuderen.

Ex vivo Live-Imaging van Lung metastase en hun Microenvironment

Hier beschrijven we het model en de aanpak om functies van pulmonaire alveolaire macrofagen in kankermetastase te bestuderen. Om de rol van deze cellen in metastase te demonstreren, werd het syngene (4T1) model van borstkanker gebruikt in combinatie met de depletie van alveolaire macrofagen met clodronat liposomen.

Het bestuderen van de rol van alveolaire macrofagen in de uitzaaiing van borstkanker

Het doel van dit artikel is bedoeld als een gedetailleerde beschrijving van het protocol voor de pulmonaire metastase assay (PuMA). Dit model staat onderzoekers bestuderen metastatische Osteosarcoom (OS) celgroei in longweefsel met behulp van een widefield fluorescentie- of confocale laser scanning microscoop.

Praktische overwegingen bij het bestuderen van uitgezaaide longkanker kolonisatie in met behulp van de pulmonaire metastase Assay Osteosarcoom

Een dierlijk model is nodig om het ontcijferen van de rol van circulerende tumorcellen (CTCs) bij de bevordering van longkanker kolonisatie tijdens kanker uitzaaiingen. Hier, we vastgesteld en met succes uitgevoerd een in vivo assay op specifiek proef de eis van polymere fibronectine (polyFN) vergadering over CTCs voor longkanker kolonisatie.

De oprichting van een Long kolonisatie Assay voor het circulerende Tumor visualisatie van de cel in de weefsels van de longen

Hier presenteren we een protocol voor een ex vivo long kanker model dat bootst de stappen van de progressie van de tumor en helpt bij het isoleren van een primaire tumor, circulerende tumorcellen, en metastatische laesies.

Acellulair en cellulaire Lung Model studie Tumor uitzaaiingen

Dit artikel heeft tot doel een protocol te bieden voor de isolatie en kweek van primaire kanker-geassocieerde fibroblasten uit een syngenetisch muizenmodel van triple-negatieve borstkanker en hun toepassing voor de preklinische studie van nieuwe nanodeeltjes die zijn ontworpen om zich te richten op de tumormicro-omgeving.

Isolatie van primaire kanker-geassocieerde fibroblasten uit een syngenetisch muizenmodel van borstkanker voor de studie van gerichte nanodeeltjes

We presenteren een methode voor het bestuderen van de herverspreiding van tumorcellen uit longmetastasen met behulp van een chirurgisch protocol voor de selectieve fotoconversie van longmetastasen, gevolgd door de identificatie van geredissimineerde tumorcellen in tertiaire organen.

Verspreiding van tumorcellen uit longmetastasen volgen met behulp van fotoconversie

Leer primaire tumorcelisolatie en longextractie voor borstkankeronderzoek bij muizen. Deze methode met MEF-cellen helpt onderzoekers metastase in vivo bestuderen.

Primaire tumor en MEF Cell Isolation om te studeren longmetastase

Meer video's verkennen