Een eenvoudige en goedkope methode voor het bepalen Koude Gevoeligheid en aanpassing in Muizen

Het algemene doel van deze procedure is om de kouderesponsiviteit van muizen te meten. Dit wordt bereikt door eerst het glas af te koelen of op te warmen tot de gewenste temperatuur. De tweede stap is om de muizen te acclimatiseren totdat ze in rust zijn.

De derde stap is om droog ijspoeder in een pellet in een spuit te comprimeren. De laatste stap is om de muizen te testen met behulp van het droog ijspellet en een stopwatch om de onttrekkingslatentie te meten. Uiteindelijk wordt de koude planter assay gebruikt om kouderesponsiviteit en aanpassing bij vrij bewegende muizen te meten.

Het belangrijkste voordeel van onze assay ten opzichte van bestaande assays zoals de acetontest en de koude plaattest, is dat we zowel overgevoeligheid als analgese op baseline kunnen testen onder verschillende omgevingsomstandigheden. Hoewel deze methode inzicht kan geven in de kouderesponsiviteit van de muizen. Het kan ook worden gebruikt in andere systemen zoals de aap en de rat en de mens. Het demonstreren van de procedure zal Daniel Brenner zijn, een afgestudeerde student in mijn laboratorium.

Na het reinigen van het glazen oppervlak, bevestigt u de T-type filamentthermokoppelsonde met laboratoriumtape aan het oppervlak in het midden van de glazen plaat. Plaats de dierenkooien op de glazen plaat in een rechte lijn langs het midden. Draai vervolgens de thermokoppelsonde door de centrale dierenkooi en sluit deze aan op de datalogger.

Zet de datalogger aan en deactiveer de automatische uitschakelingsfunctie. Verbind de datalogger met de computer met de meegeleverde kabel. Scheid de dierenkooien met zwarte inzetstukken om visuele interacties tussen de muizen te voorkomen en plaats spiegels onder het glas om de onderkant van de kooi te kunnen bekijken.

Om te beginnen met testen, plaats aluminium dozen op de glazen plaat aan beide kanten van de dierenkooi op een vaste afstand. Als u bij 30 graden Celsius test, sluit u verwarmde watercirculators aan op de aluminium dozen die 0,25 inch van de dierenkooi zijn geplaatst. Vul de dozen halfvol met water terwijl de afvoergaten zijn dichtgeplugd.

Plaats de circulators zodanig dat het hete water uit de aluminium dozen direct terug in het reservoir van de circulator aan elke kant druipt. U moet water toevoegen aan elke circulator. Zodra de metalen dozen zijn gevuld, stelt u de circulators in op 45 tot 60 graden Celsius en vult u de aluminium dozen met een gestadige stroom heet water.

Wanneer de glazen het gewenste temperatuurbereik bereiken, plaatst u de muizen in de kooi op de plaat. Laat de muizen acclimatiseren aan het apparaat en de temperatuur. Deze muizen zullen zich gedurende 2,5 uur acclimatiseren.

Wanneer het einde van de acclimatisatieperiode nadert, vult u een ijsemmer ongeveer halfvol met droog ijs en gebruikt u een hamer of mallet om het droog ijs tot poeder te pletten. Doe dit buiten de gedragsruimte om de muizen niet te storen. Gebruik vervolgens een scheermes of schaar om de bovenkant van een drie milliliter spuit af te snijden.

Gebruik vervolgens een 21 gauge naald om twee sets van drie gaten aan te prikken aan tegengestelde zijden van de spuit om de druk te verminderen die wordt gegenereerd door sublimatie terwijl u het droog ijs terug in de gedragsruimte comprimeert, vult u de spuitkamer halfvol met droog ijspoeder. Houd het gesneden uiteinde van de spuit tegen een vlak object en comprimeer het poeder stevig met behulp van de zuiger. Strek de punt van het gecomprimeerde droog ijspallet uit voorbij de rand van de spuit.

Test nu die muizen die alle vier poten in het glas hebben en niet bewegen, maar niet volledig slapen. Gebruik de spiegels om te mikken, druk de vlakke pellet voorzichtig maar stevig tegen het glazen oppervlak onder de achterste poot van de muis. Druk tegelijkertijd op start op een timer.

Wanneer de muis weg beweegt van het afgekoelde glas, hetzij verticaal of horizontaal, stopt u de timer en verwijdert u het droog ijspellet. Als de muis echter heel kort de poot beweegt en vervolgens terugkeert naar het koeloppervlak, blijft u doorgaan met het timen en stimuleren tot de muis een permanente beweging maakt weg. Als de muis niet weg beweegt van het afgekoelde glas, stopt u de stimulus na 20 seconden.

Herhaal deze testprocedure tot er minimaal drie waarden op elke poot van het dier zijn verzameld om muizen bij 17 graden Celsius te testen. Herhaal het experiment zoals net is getoond, maar in plaats van de aluminium dozen te vullen met verwarmd water, gebruikt u nat ijs en plaatst u de dozen ongeveer 0,25 inch van de kooi om muizen te testen. Bij 12 graden Celsius wordt droog ijs gebruikt, maar de dozen worden 1,25 inch van de kooi geplaatst.

Dit alternatieve protocol test de muizen terwijl de temperatuur van de plaat daalt in plaats van nadat deze is gestabiliseerd. Dit stelt ons in staat om de aanpassing van de muizen te testen terwijl deze plaatsvindt Na het opzetten van het apparaat. Voer zoals eerder beschreven het experiment uit om metingen bij kamertemperatuur te doen.

Zodra de basislatenties bij kamertemperatuur zijn gemeten. Gebruik de eerder getoonde procedure om de lege aluminium dozen te vullen met droog ijs en plaats ze 1,25 inch van de kooi aan beide kanten. Ten slotte herhaalt u het experiment om latentiemetingen te doen terwijl de glazen plaat afkoelt.

Metingen zo vaak mogelijk doen. Deze grafiek toont de gemiddelde onttrekkingslatentie voor muizen beginnend bij 12 graden Celsius, 17 graden Celsius, 23 graden Celsius of 30 graden Celsius. De onttrekkingslatenties zijn consistent over alle temperaturen.

Analgetische effecten kunnen worden gemeten met behulp van de koude planter assay zoals hier getoond. Subcutane injectie van 1,5 milligram per kilogram morfine verhoogt de onttrekkingslatentie van muizen 30 minuten na injectie zoals gemeten door een twee-weg innova met Bonferroni post-hoc test 60 minuten na injectie. Er is geen significant verschil tussen morfine geïnjecteerd en saline geïnjecteerd.

Muizen overgevoeligheid kan hier ook worden gemeten. Intraplantaire injectie van 10 microliters van volledige fros adjuvant verminder