Name: Een eenvoudige en goedkope methode voor het bepalen Koude Gevoeligheid en aanpassing in Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Leer de Cold Plantar Assay om koude gevoeligheid en adaptatie te meten bij muizen. Deze methode gebruikt droogijs en een stopwatch om terugtreklatentie te bepalen voor pijnonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen de bijdragen van het hele Gereau Lab voor het bewerken van het manuscript erkennen. Dit werk wordt ondersteund door NINDS-fondsen 1F31NS078852 aan DSB en NINDS-fonds NS42595 aan RWG.

Alle muis protocollen waren in overeenstemming met de National Institutes of Health richtlijnen en werden goedgekeurd door de Animal Studies Committee van de Washington University School of Medicine (St. Louis, MO). 1. Voorbereiding van de testplaat en behuizingen <ol><li> Reinig het glasoppervlak. </li><li> Zet het T-type filament thermokoppel aan de oppervlakte in het midden van de glasplaat met laboratorium tape. </li><li> Plaats de dierenverblijven op de glasplaat in één lijn langs het midden van de plaat. </li><li> Rijg de thermokoppelsonde door het centrum dierenverblijf en steek de stekker in de datalogger. Draai de datalogger op terwijl deactiveren van de functie voor automatisch uitschakelen, en bevestig de datalogger aan op de computer met de meegeleverde kabel. <ol><li> Als het opnemen van de plaat temperatuur tijdens het experiment, opent u de data logger software om de opname van de plaat temperaturen beginnen. </li><li> Pas indien nodig de software opnieuw tekoord de plaat temperatuur één keer per seconde. </li><li> Beginnen met het opnemen van de temperatuur met behulp van de software geleverd met de thermische datalogger. </li></ol></li><li> Scheid de behuizing met zwarte inzetstukken aan visuele interactie tussen muizen te voorkomen. </li><li> Plaats spiegels onder het glas, zodat de onderkant van de behuizingen zichtbaar vanuit een comfortabele zitpositie. </li></ol> 2. Warming / Koeling van de Plaat van het Glas <ol><li> Vul aluminium dozen met verwarmd water, nat ijs of droog ijs en plaats ze adequaat op de glasplaat (aluminiumfolie pakketten gevuld met droogijs kan ook worden gebruikt om het glas te koelen Figuur 1) 2. <ol><li> Voor het testen bij 30 ° C, de positie van de aluminium dozen ongeveer 0,25 &#39;&#39; weg van de dierenverblijven (Figuur 2B) 2. <ol><li> Stel een verwarmde circulatiepomp aan weerszijden van de glasplaat. Stel de circulatiepomp om 45 - 60 ° C en onse aan de aluminium dozen vullen met een gestage stroom van warm water (figuur 1C) 2. </li><li> Plaats de circulatiepompen zodat het hete water uit de aluminium kisten afvoert direct terug in het reservoir van de circulatiepomp aan elke kant (figuur 1C) 2. </li></ol></li><li> Voor het testen bij RT, laat u de vakken leeg (figuur 2) 2. </li><li> Voor het testen bij 17 ° C, de positie van de boxen ongeveer 0,25 &#39;&#39; weg van de dierenverblijven aan beide zijden en vullen met nat ijs (Figuur 2) 2. </li><li> Voor het testen bij 12 ° C, de positie van de boxen ongeveer 1.25 &#39;&#39; weg van de behuizingen aan beide zijden en vullen met droog ijs (Figuur 2) 2. </li><li> Voor het testen bij 5 ° C, plaats de boxen ongeveer 0,25 &#39;&#39; weg van de behuizingen aan beide zijden en vullen met droog ijs (Figuur 2) 2.<ol><li> Bij koeling het glas met droog ijs, zorg ervoor dat er voldoende ventilatie om de CO 2 opbouw in de ruimte te voorkomen. </li></ol></li></ol></li><li> Wacht tot het glas naar de gewenste temperatuurbereik bereikt. </li><li> Voeg de muizen om de behuizingen op de plaat. OPMERKING: Een witte ruis generator kan worden gebruikt om geluidsoverlast te verminderen. </li><li> Wacht tot de muizen om te acclimatiseren. LET OP: In onze faciliteit neemt dit ongeveer 2,5 uur, maar dit kan sterk variëren op basis van dierlijke huisvesting en behandeling voorwaarden. </li><li> Handhaaf het glas bij het gewenste temperatuurbereik te zorgen dat de dozen met verwarmd water, nat ijs of droog ijs worden bewaard. OPMERKING: Met onze apparaten moeten de vakken worden bijgevuld met ijs ongeveer elke 90 min. OPMERKING: Voor de 17 ° C staat, is het nuttig om het grootste deel van het water uit de aluminium kisten door de afvoer gaten te legen voordat het navullen met ijs. Dit zal de temperatuur beter, en pr te stabiliserengebeurtenis overflow OPMERKING: De exacte hoeveelheid van het droogijs wordt seizoensinvloeden variëren, maar over het algemeen houden de vakken meer dan ¼ volledig over de gehele lengte van het vat zal de temperatuur constant te houden. </li></ol> 3. Testen van de Muizen op een vaste temperatuur <ol><li> Buiten de gedrags kamer, vult een ijsemmer ongeveer de helft vol met droogijs. </li><li> Met behulp van een hamer of een hamer, verpletteren de droogijs tot een fijn poeder. OPMERKING: Bij een te volle bak zal het moeilijk maken om volledig te verpletteren het droogijs tot poeder. </li><li> Met behulp van een straight scheermesje of een schaar, knip de bovenkant van een spuit van 3 ml. </li><li> Met behulp van een 21 G naald, poke 3 gaten aan tegenoverliggende zijden van de spuit (totaal 6 holes). LET OP: Deze gaten zal de druk wordt gegenereerd door sublimatie verminderen, terwijl het comprimeren van het droogijs. De cut-off spuit kan worden hergebruikt voor meerdere experimenten. </li><li> Neem de spuit, droog ijs poeder, en een hand-held stopwatch in de gedrags-kamer. </li><li> Vul de spuit kamer half vol droge poeder ijs. Houd het afgesneden uiteinde van de spuit tegen een plat voorwerp, en aandrukken van de poeder met de plunjer. Wees voorzichtig; de plastic plunjer verbuigen of breken van de druk. Als dit gebeurt, vervang dan de zuiger van een nieuwe spuit. </li><li> Verleng de punt van het gecomprimeerde droog ijs pellet langs de rand van de injectiespuit. </li><li> Test muizen die volledig in rust zijn. <ol><li> Bij 30 ° C, 23 ° C en 17 ° C, proefmuizen alle 4 poten op het glas en niet beweegt, maar niet volledig slaap 19. </li><li> Bij 12 ° C en 5 ° C, testen muizen die op 2 poten of 4 poten en stil of springen. </li></ol></li><li> Met behulp van de spiegels voor targeting, voorzichtig maar stevig op de vlakke pellet vlak tegen het glazen oppervlak onder de muis achterpoot (Figuur 1A) 2. Start de kant-timer. </li><li> Stop de timer en verwijder de pellet wanneer de muis beweegt weg van de gekoelde glazen. OPMERKING: De terugtrekking beweging kan verticaal of horizontaal zijn. <ol><li> Als de muis heel kort beweegt de poot en dan stuurt het terug naar het koeloppervlak, blijven de timing en het stimuleren totdat de muis maakt een permanente beweging weg. OPMERKING: Ons laboratorium gebruikt maximaal stimulus van 20 seconden voor muizen in de meeste gevallen. </li></ol></li><li> Herhaal deze testprocedure tot ten minste 3 waarden op elke poot van elk dier worden verzameld. Afzonderlijke proeven testen tegenover poten op dezelfde muis met tenminste 7 min en afzonderlijke opeenvolgende proeven met een enkele poot met ten minste 15 min. </li><li> Gebruik indien nodig verschillende diktes van glas verschillende tarieven van koeling (figuur 3) 1 genereren. OPMERKING: De koelsnelheid is omgekeerd gecorreleerd met de dikte van het glas. </li></ol> 4. Het testen van de Muizen Tijdens Koude Adaptation LET OP: Dit is een alternatieve protocol dat het testen toestaat als het glas plate koelt, plaats nadat de plaat is gestabiliseerd en de muizen volledig aan de koude omgeving. <ol><li> Volg de in deel 1 voor het opzetten van het apparaat vermelde instructies. </li><li> Volg de in rubriek 3 van de uitgangswaarde van metingen bij kamertemperatuur (Figuur 7A) 2 instructies. </li><li> Pre-koelen aluminium dozen met droogijs. </li><li> Zodra basislijn terugtrekking latencies zijn gemeten, plaatst u de voorgekoeld dozen op de plaat ongeveer 1.25 &#39;&#39; weg van de behuizingen aan weerszijden (Figuur 7A, pijl met het label &quot;Dry ice toegevoegd&quot;) 2. </li><li> Volg de in hoofdstuk 3 genoemde om metingen te nemen als de glazen plaat koelt, het nemen van metingen zo vaak mogelijk instructies. </li></ol>

<ol><li>Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Behavioral+Assay+for+Measuring+Cold+Sensation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+ONE%22%5BJournal%5D)">A Novel Behavioral Assay for Measuring Cold Sensation in Mice.</a> Plos ONE. 7 (6), 8(2012).</li>
<li>Brenner, D. S., Vogt, S. K., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+to+measure+cold+adaptation+in+freely+behaving+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A technique to measure cold adaptation in freely behaving mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. , (2014).</li>
<li>Choi, Y., Yoon, T. W., Na, H. S., Kim, S. H., Chung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+signs+of+ongoing+pain+and+cold+allodynia+in+a+rat+model+of+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Behavioral signs of ongoing pain and cold allodynia in a rat model of neuropathic pain.</a> Pain. 59 (3), 369-376 (1994).</li>
<li>Gauchan, P., Andoh, T., Kato, A., Kuraishi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+increased+expression+of+transient+receptor+potential+melastatin+8+in+oxaliplatin-induced+cold+allodynia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Involvement of increased expression of transient receptor potential melastatin 8 in oxaliplatin-induced cold allodynia in mice.</a> Neuroscience letters. 458 (2), 93-95 (2009).</li>
<li>Carlton, S. M., Lekan, H. A., Kim, S. H., Chung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+manifestations+of+an+experimental+model+for+peripheral+neuropathy+produced+by+spinal+nerve+ligation+in+the+primate%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Behavioral manifestations of an experimental model for peripheral neuropathy produced by spinal nerve ligation in the primate.</a> Pain. 56 (2), 155-166 (1994).</li>
<li>Pizziketti, R. J., Pressman, N. S., Geller, E. B., Cowan, A., Adler, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+cold+water+tail-flick%3A+A+novel+analgesic+test+that+distinguishes+opioid+agonists+from+mixed+agonist-antagonists%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Rat cold water tail-flick: A novel analgesic test that distinguishes opioid agonists from mixed agonist-antagonists.</a> European Journal of Pharmacology. 119 (1-2), 23-29 (1985).</li>
<li>Pinto-Ribeiro, F., Almeida, A., Pego, J. M., Cerqueira, J., Sousa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+unpredictable+stress+inhibits+nociception+in+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Chronic unpredictable stress inhibits nociception in male rats.</a> Neuroscience letters. 359 (1-2), 73-76 (2004).</li>
<li>Karashima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPA1+acts+as+a+cold+sensor+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">TRPA1 acts as a cold sensor in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (4), 1273-1278 (2009).</li>
<li>Knowlton, W. M., Bifolck-Fisher, A., Bautista, D. M., McKemy, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPM8%2C+but+not+TRPA1%2C+is+required+for+neural+and+behavioral+responses+to+acute+noxious+cold+temperatures+and+cold-mimetics+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">TRPM8, but not TRPA1, is required for neural and behavioral responses to acute noxious cold temperatures and cold-mimetics in vivo.</a> Pain. 150 (2), 340-350 (2010).</li>
<li>Allchorne, A. J., Broom, D. C., Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+cold+pain%2C+cold+allodynia+and+cold+hyperalgesia+in+freely+behaving+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+pain%22%5BJournal%5D)">Detection of cold pain, cold allodynia and cold hyperalgesia in freely behaving rats.</a> Molecular pain. 1, 36(2005).</li>
<li>Colburn, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+cold+sensitivity+in+TRPM8+null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Attenuated cold sensitivity in TRPM8 null mice.</a> Neuron. 54 (3), 379-386 (2007).</li>
<li>Dhaka, A., Murray, A. N., Mathur, J., Earley, T. J., Petrus, M. J., Patapoutian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPM8+is+required+for+cold+sensation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">TRPM8 is required for cold sensation in mice.</a> Neuron. 54 (3), 371-378 (2007).</li>
<li>Bautista, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+menthol+receptor+TRPM8+is+the+principal+detector+of+environmental+cold%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The menthol receptor TRPM8 is the principal detector of environmental cold.</a> Nature. 448 (7150), 204-208 (2007).</li>
<li>Obata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TrpA1+induced+in+sensory+neurons+contributes+to+cold+hyperalgesia+after+inflammation+and+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">TrpA1 induced in sensory neurons contributes to cold hyperalgesia after inflammation and nerve injury.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115 (9), 2393-2401 (2005).</li>
<li>Tang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pirt+functions+as+an+endogenous+regulator+of+TRPM8%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+communications%22%5BJournal%5D)">Pirt functions as an endogenous regulator of TRPM8.</a> Nature communications. 4, 2179(2013).</li>
<li>Lee, H., Iida, T., Mizuno, A., Suzuki, M., Caterina, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+thermal+selection+behavior+in+mice+lacking+transient+receptor+potential+vanilloid+4%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Altered thermal selection behavior in mice lacking transient receptor potential vanilloid 4.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 25 (5), 1304-1310 (2005).</li>
<li>Pogorzala, L. A., Mishra, S. K., Hoon, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+code+for+Mammalian+thermosensation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The cellular code for Mammalian thermosensation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 33 (13), 5533-5541 (2013).</li>
<li>Yalcin, I., Charlet, A., Freund-Mercier, M. -J., Barrot, M., Poisbeau, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiating+thermal+allodynia+and+hyperalgesia+using+dynamic+hot+and+cold+plate+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+pain+official+journal+of+the+American+Pain+Society%22%5BJournal%5D)">Differentiating thermal allodynia and hyperalgesia using dynamic hot and cold plate in rodents.</a> The journal of pain official journal of the American Pain Society. 10 (7), 767-773 (2009).</li>
<li>Callahan, B. L., Gil, A. S., Levesque, A., Mogil, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+mechanical+and+thermal+nociceptive+sensitivity+in+the+laboratory+mouse+by+behavioral+state%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+pain%3A+official+journal+of+the+American+Pain+Society%22%5BJournal%5D)">Modulation of mechanical and thermal nociceptive sensitivity in the laboratory mouse by behavioral state.</a> The journal of pain: official journal of the American Pain Society. 9 (2), 174-184 (2008).</li>
<li>Brenner, D. S., Golden, J. P., Vogt, S. K., Dhaka, A., Story, G. M., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dynamic+set+point+for+thermal+adaptation+requires+phospholipase+C-mediated+regulation+of+TRPM8+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A dynamic set point for thermal adaptation requires phospholipase C-mediated regulation of TRPM8 in vivo.</a> Pain. , (2014).</li>
<li>Patwardhan, A. M., Scotland, P. E., Akopian, A. N., Hargreaves, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+TRPV1+in+the+spinal+cord+by+oxidized+linoleic+acid+metabolites+contributes+to+inflammatory+hyperalgesia%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Activation of TRPV1 in the spinal cord by oxidized linoleic acid metabolites contributes to inflammatory hyperalgesia.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (44), 18820-18824 (2009).</li>
<li>Fujita, F., Uchida, K., Takaishi, M., Sokabe, T., Tominaga, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambient+Temperature+Affects+the+Temperature+Threshold+for+TRPM8+Activation+through+Interaction+of+Phosphatidylinositol+4%2C5-Bisphosphate%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Ambient Temperature Affects the Temperature Threshold for TRPM8 Activation through Interaction of Phosphatidylinositol 4,5-Bisphosphate.</a> Journal of Neuroscience. 33 (14), 6154-6159 (2013).</li>
<li>Rohacs, T., Lopes, C. M., Michailidis, I., Logothetis, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PI%284%2C5%29P2+regulates+the+activation+and+desensitization+of+TRPM8+channels+through+the+TRP+domain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+neuroscience%22%5BJournal%5D)">PI(4,5)P2 regulates the activation and desensitization of TRPM8 channels through the TRP domain.</a> Nature neuroscience. 8 (5), 626-634 (2005).</li>
<li>Daniels, R. L., Takashima, Y., McKemy, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+the+neuronal+cold+sensor+TRPM8+is+regulated+by+phospholipase+C+via+the+phospholipid+phosphoinositol+4%2C5-bisphosphate%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+biological+chemistry%22%5BJournal%5D)">Activity of the neuronal cold sensor TRPM8 is regulated by phospholipase C via the phospholipid phosphoinositol 4,5-bisphosphate.</a> The Journal of biological chemistry. 284 (3), 1570-1582 (2009).</li>
<li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurokinin-1+receptor+enhances+TRPV1+activity+in+primary+sensory+neurons+via+PKCepsilon%3A+a+novel+pathway+for+heat+hyperalgesia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neurokinin-1 receptor enhances TRPV1 activity in primary sensory neurons via PKCepsilon: a novel pathway for heat hyperalgesia.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (44), 12067-12077 (2007).</li>
<li>Wang, H., Zylka, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mrgprd-expressing+polymodal+nociceptive+neurons+innervate+most+known+classes+of+substantia+gelatinosa+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mrgprd-expressing polymodal nociceptive neurons innervate most known classes of substantia gelatinosa neurons.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (42), 13202-13209 (2009).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen

De CPA kan worden gebruikt om koudsensitiviteit en koudaanpassing bij muizen te beoordelen. Het biedt een betaalbare, efficiënte manier om koudreacties te meten bij ongehinderde, geacclimatiseerde dieren binnen een breed scala aan temperatuurbereiken. Het biedt ook een ondubbelzinnige gedragsreactie met een gemakkelijk te kwantificeren en te analyseren uitvoervariabele. Het is al gebruikt om veranderingen in koudsensitiviteit veroorzaakt door ontsteking1, neuropathische letsels1, analgetica1</s...

Meten koude responsiviteit bij knaagdieren is van belang voor een beter begrip van de mogelijke mechanismen van koude gevoeligheid bij mensen zowel onder normale en pathologische omstandigheden. De Koude Plantaire Assay (CPA), oorspronkelijk ontwikkeld enkele jaren geleden 1, is ontworpen om reproduceerbare, eenduidige muizen gedragsreacties op een koude stimulus afgeleverd bij RT genereren. Meer recente verbeteringen van deze assay kon de reproduceerbare meting koude gevoeligheid uiteenlopende temperaturen 2. Beide versies zijn ook ontworpen om relatief hoge doorvoer, en goedkoop te gebruiken. Een groot deel van de vooruitgang is geboekt in het begrijpen van de mechanismen van koude gevoeligheid gebruik van andere gedragsproblemen methoden. Een methode is de aceton verdampen test, wat inhoudt deppen of sproeien aceton op de muis poot en het meten van de hoeveelheid tijd dat de muis besteedt aantikt poot 3,4. Helaas,de reacties op aceton verdamping verstoord door het nat gevoel en de geur van de aceton. Ook kan de koude stimulus die wordt toegepast in de aceton verdampen proef is afhankelijk van de hoeveelheid aceton toegepast en is moeilijk te kwantificeren. Tenslotte verwonde muizen minimale reactie op aceton bij basislijn, waardoor het onmogelijk analgesie gemeten in afwezigheid van overgevoeligheid deze methode. Een andere klassieke test voor koude reacties is de staart flick test, waar de latentie tot de intrekking wordt gemeten na de staart wordt ondergedompeld in koud water 5,6. Terwijl de gedragsreacties in deze test eenduidig ​​en meet het onderzoek antwoorden op een bepaalde temperatuur worden de dieren worden tegengehouden tijdens de test, die koud flexibiliteit door welomschreven stress geïnduceerde analgetische mechanismen 7 kan veranderen. Een andere veel gebruikte tool is de koude plaat test, die de gedragsmaatregelenresponsen van muizen na een Peltier-gekoelde plaat 8-10 geplaatst. Hoewel deze tool geeft informatie over het dier de reacties bij een bepaalde temperatuur, het is ook niet consequent toegepast; verschillende groepen verschillende reacties waaronder het aantal sprongen 8,11, de latentie eerste reactie 8,11- 13 gemeten en het aantal poot liften 11,13,14 met zeer verschillende resultaten. De koude plaat test is ook relatief lage omzet als alleen een dier kunnen worden getest in een tijd, en het een dure en kwetsbare peltier-apparaat vereist. De 2-plaat temperatuur voorkeur test is een veelgebruikte afgeleide van de koude plaat test die de relatieve hoeveelheid tijd dat de dieren doorbrengen op 2 verbonden platen van verschillende temperaturen 9,15- 17 meet. Een ander soortgelijk gebruikte assay is de temperatuurgradiënt assay, waarbij de hoeveelheid tijd die muizen brengen in verschillende temperatuurzonestussen 5 ° C en 45 ° C op een lange metalen plaat gemeten 16. Hoewel deze testen laten vergelijking van temperaturen, is het onduidelijk of het gedrag vertegenwoordigt temperatuur afkeer of om de temperatuur voorkeur. Ten slotte heeft de dynamische koud bord test is gebruikt om te meten hoe muizen reageren op veranderende omgevingstemperatuur 18. Deze werkwijze omvat het plaatsen van muizen op een RT Peltier apparaat en ramping minimumtemperatuur 1 ° C terwijl meten hoeveel de muizen springen of likken hun poten bij verschillende temperaturen plaat. Hoewel deze proef waar muizen aanpassen aan een koelomgeving, verschaft het niet een manier om te testen hoe muizen reageren op een koude stimulus in de setting van een koeler omgevingstemperatuur. Bovendien vereist dure apparatuur te voeren en biedt geen manier aan muizen tot de testapparatuur acclimatiseren voordat meten de koude gevoeligheid. Als aanvulling op deze testen, de CPA test de acclimated responsies op een welbepaalde koude stimulus op verschillende temperatuurbereiken, of tijdens het proces van aanpassing aan koude omgevingstemperaturen. Het kan testen 14 muizen tegelijk met de huidige inrichting, met de potentie om goedkoop worden opgeschaald voor high-throughput testing.

<table><tbody><tr><td>T-type thermocouple probe</td><td>Physitemp</td><td>IT-24p</td><td>Gebruikt om de oppervlaktetemperatuur van het glas te meten (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)</td></tr><tr><td>Glazen plaat</td><td>Lokaal glasbedrijf (in St. Louis, Stemmerich Inc)</td><td></td><td>We gebruiken pyrex glas (borosilicaat float). Ons lab gebruikt over het algemeen 1/4'', maar 3/16'' en 1/8'' zijn ook nuttig</td></tr><tr><td>Thermische Data logger</td><td>Extech</td><td>EA15</td><td>Thermologger om de glastemperatuur bij te houden (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&amp;prodid=408)</td></tr><tr><td>3 ml Spuit</td><td>BD</td><td>309657</td><td>De bovenkant wordt afgesneden en droog ijs wordt in de spuit geperst om een koude sonde te genereren</td></tr><tr><td>Computer</td><td>Als u de Extech-logger gebruikt, zal elke Pc werken</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aluminium dozen</td><td>Washington University in St. Louis machinewerkplaats</td><td></td><td>dozen zijn 3' lang, 4.5'' breed en 3'' hoog met een afgesloten deksel.  Er is een 1/2'' gat in één korte zijde van elke doos, dicht bij de bodem. Deze gaten worden gevuld met rubberen stopkokers wanneer de dozen worden gevuld met nat ijs of heet water.</td></tr><tr><td>Verwarmde watercirculator</td><td>VWR</td><td></td><td>Elk watercirculatormodel met een pomp zal werken</td></tr><tr><td>21 G naald</td><td>BD</td><td>305165</td><td>De exacte naaldmaat is niet belangrijk</td></tr><tr><td>Handtimer</td><td></td><td></td><td>Elke handtimer zal werken</td></tr><tr><td>Spiegel</td><td></td><td></td><td>Elke platte spiegel zal werken</td></tr></tbody></table>

een eenvoudige en goedkope methode voor het bepalen koude gevoeligheid en aanpassing in muizen

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Koude overgevoeligheid is een ernstig klinisch probleem dat een brede groep patiënten treft en een aanzienlijke afname van de kwaliteit van leven veroorzaakt. De koude plantar assay maakt de objectieve en goedkope beoordeling van koudegevoeligheid bij muizen mogelijk en kan zowel analgesie als overgevoeligheid kwantificeren. Muizen worden geacclimatiseerd op een glazen plaat, en een gecomprimeerde droogijskorrel wordt tegen het glazen oppervlak onder de achterpoot gehouden. De latentie tot terugtrekking van het koelende glas wordt gebruikt als een maatstaf voor koudegevoeligheid.
Koud gevoel is ook belangrijk voor overleven in regio's met seizoensgebonden temperatuurverschillen, en om gevoeligheid te behouden, moeten dieren hun thermische responsdrempels kunnen aanpassen aan de omgevingstemperatuur. De Cold Plantar Assay (CPA) maakt ook de studie van aanpassing aan veranderingen in omgevingstemperatuur mogelijk door de koudegevoeligheid van muizen te testen bij temperaturen variërend van 30 °C tot 5 °C. Muizen worden geacclimatiseerd zoals hierboven beschreven, maar de glazen plaat wordt afgekoeld tot de gewenste starttemperatuur met behulp van aluminium dozen (of aluminiumfolie zakjes) gevuld met heet water, nat ijs of droog ijs. De temperatuur van de plaat wordt in het centrum gemeten met een T-type thermokoppelsondev. Zodra de plaat de gewenste starttemperatuur heeft bereikt, worden de dieren getest zoals hierboven beschreven.
Deze assay maakt het mogelijk om muizen te testen bij temperaturen variërend van onschadelijk tot pijnlijk. De CPA levert ondubbelzinnige en consistente gedragsreacties op bij niet-gewonde muizen en kan worden gebruikt om zowel overgevoeligheid als analgesie te kwantificeren. Dit protocol beschrijft hoe de CPA te gebruiken om koude overgevoeligheid, analgesie en aanpassing bij muizen te meten.

De gedragsreacties ontlokt muizen beginnend bij 30 ° C, 23 ° C, 17 ° C en 12 ° C zijn zeer reproduceerbaar (figuur 4A) 20. Om de koude stimulus onder de achterpoot wordt gegenereerd meten, werden muizen geanesthetiseerd met ketamine / xylazine / acepromazine cocktail en de poten zijn bevestigd aan het glas op een T-type thermokoppel filament (figuur 4B) 20. Het glas werd gekoeld of verwarmd tot de gewenste testbereik. Hoewel de plaat gelijkmatig gekoeld langs de le...

De Cold Plantar Assay (CPA) meet de koudsensitiviteit tussen 30 °C en 5 °C en kan ook koudaanpassing meten. Dit protocol beschrijft hoe de CPA te gebruiken om koudgevoeligheid, analgesie en aanpassing bij muizen te meten.

Een eenvoudige en goedkope methode voor het bepalen Koude Gevoeligheid en aanpassing in Muizen

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Het algemene doel van deze procedure is om de reactie op kou bij muizen te meten. Dit wordt bereikt door eerst het glas te koelen of te verwarmen tot de gewenste temperatuur. De tweede stap is om de muizen te laten acclimatiseren tot ze in rust zijn.De derde stap is om drogeijs-poeder in een spuit samen te persen tot een pellet. De laatste stap is om de muizen te testen met de drogeijs-pellet en een stopwatch om de latentietijd van de terugtrekreflex te meten. Uiteindelijk wordt de cold planter assay gebruikt om de respons op kou en de adaptatie bij vrij bewegende muizen te meten.Het belangrijkste voordeel van onze assay ten opzichte van bestaande assays, zoals de acetontest en de koudeplaattest, is dat we zowel hypersensitiviteit als analgesie bij de nulmeting onder diverse omgevingsomstandigheden kunnen testen. Hoewel deze methode inzicht kan bieden in de reactie van muizen op kou, kan zij ook worden toegepast in andere systemen, zoals bij apen, ratten en mensen. De procedure zal worden gedemonstreerd door Daniel Brenner, een promovendus in mijn laboratorium.Nadat het glazen oppervlak is gereinigd, wordt de T-type filament-thermocouple-sonde met laboratoriumtape in het midden van de glasplaat op het oppervlak bevestigd. Plaats de dierverblijven in een enkele rij langs het midden op de glasplaat. Leid vervolgens de thermocouple-sonde door het centrale dierverblijf en sluit deze aan op de datalogger.Zet de datalogger aan en schakel de automatische uitschakelingsfunctie uit. Sluit de datalogger met de bijgeleverde kabel aan op de computer. Scheid de dierenverblijven met zwarte inzetstukken om visuele interactie tussen de muizen te voorkomen en plaats spiegels onder het glas om de onderzijde van de verblijven te kunnen bekijken.Om met het testen te beginnen, plaatst u aluminium bakken op de glasplaat aan weerszijden van het dier, waarbij de behuizingen op een vaste afstand staan. Indien er getest wordt bij 30 °C, sluit u verwarmde watercirculatoren aan op de aluminium bakken die 0,25 inches van de behuizing van het dier zijn geplaatst. Vul de bakken voor de helft met water terwijl de afvoergaatjes zijn afgedicht.Positioneer de circulatoren zodanig dat het warme water uit de aluminium bakken direct terugloopt in het reservoir van de circulator aan elke zijde. U moet water toevoegen aan elke circulator. Zodra de metalen bakken zijn gevuld, stelt u de circulatoren in op 45 tot 60 °C en vult u de aluminium bakken met een constante stroom warm water.Wanneer de glazen het gewenste temperatuurbereik hebben bereikt, plaatst u de muizen in de behuizingen op de plaat. Laat de muizen acclimatiseren aan de apparatus en de temperatuur. Deze muizen acclimatiseren gedurende 2,5 uur.Wanneer de acclimatisatieperiode bijna is afgelopen, vult u een isemmer voor ongeveer de helft met droogijs en gebruikt u een hamer of rubberen hamer om het droogijs tot poeder te verbrijzelen. Doe dit buiten de gedragskamer om te voorkomen dat de muizen worden gestoord. Gebruik vervolgens een scheermesje of een schaar om de bovenkant van een spuit van 3 mL af te snijden.Gebruik vervolgens een naald van 21 gauge om aan tegenovergestelde zijden van de spuit twee sets van drie gaatjes te prikken om de door sublimatie opgebouwde druk te verminderen terwijl het droogijs in de gedragskamer wordt samengeperst; vul de kamer van de spuit voor de helft met droogijspoeder. Houd het afgesneden uiteinde van de spuit tegen een plat object en pers het poeder stevig samen met de zuiger. Laat de punt van de samengeperste droogijspellet door de rand van de spuit steken.Test nu de muizen die alle vier de poten op het glas hebben en niet bewegen, maar niet volledig in slaap zijn. Gebruik de spiegels voor de targeting en druk de platte pellet voorzichtig maar stevig tegen het glasoppervlak onder de achterpoot van de muis. Druk gelijktijdig op start op een timer.Wanneer de muis zich verwijdert van het gekoelde glas, zowel verticaal als horizontaal, stop dan de timer en verwijder het droogijs-pellet. Indien de muis echter zeer kortstondig de poot beweegt en deze vervolgens terugplaatst op het koeloppervlak, ga dan door met het timen en stimuleren totdat de muis zich definitief verwijdert. Als de muis zich niet verwijdert van het gekoelde glas, stop dan de stimulus na 20 seconden.Herhaal deze testprocedure totdat er voor elke poot van het dier ten minste drie waarden zijn verzameld om muizen bij 17 °C te testen. Herhaal het experiment zoals zojuist getoond, maar gebruik in plaats van het vullen van de aluminium bakken met warm water nat ijs en plaats de bakken ongeveer 0,25 inches van de kooien verwijderd om muizen te testen. Bij 12 °C wordt droogijs gebruikt, maar de bakken worden op 1,25 inches afstand van de kooien geplaatst.Dit alternatieve protocol test de muizen terwijl de temperatuur van de plaat daalt, in plaats van nadat deze is gestabiliseerd. Hierdoor kunnen we de adaptatie van de muizen testen terwijl deze plaatsvindt na het opstellen van de apparatuur. Voer het experiment, zoals eerder beschreven, uit om metingen bij kamertemperatuur te verrichten.Zodra de basislatenties bij kamertemperatuur zijn gemeten, vult u de lege aluminium bakjes met droogijs volgens de eerder getoonde procedure en plaatst u deze op 1,25 inch afstand van de behuizingen aan weerszijden. Herhaal tot slot het experiment om latentiemetingen uit te voeren terwijl de glasplaat afkoelt.Het uitvoeren van metingen zo vaak mogelijk. Deze grafiek toont de gemiddelde terugtrekreflexlatentie voor muizen die starten bij 12 graden Celsius, 17 graden Celsius, 23 graden Celsius of 30 graden Celsius. De terugtrekreflexlatenties zijn consistent over alle temperaturen.Analgetische effecten kunnen worden gemeten met behulp van de cold planter assay, zoals hier wordt getoond. Subcutane injectie van 1,5 milligram per kilogram morfine verhoogt de latentie tot terugtrekking bij muizen 30 minuten na injectie, gemeten met een two-way innova met Bonferroni post-hoc test 60 minuten na injectie. Er is geen significant verschil tussen de groep die morfine kreeg geïnjecteerd en de groep die een saline-injectie kreeg.De hypersensitiviteit van muizen kan hier ook worden gemeten. Intrapantaire injectie van 10 µL compleet Freunds adjuvans vermindert de latentietijd voor terugtrekking bij muizen twee en drie uur na injectie significant, zoals gemeten met een two-way ANOVA met Bonferroni post-hoc test. Dezelfde muizen kregen na vier uur subcutane injecties met morfine en alle latentietijden voor terugtrekking na 4,5 uur waren significant hoger vergeleken met drie uur, zoals gemeten met een one-way ANOVA met Dunnett's post-hoc test.Zodra de morfine na 5,5 uur na injectie was gemetaboliseerd, vertoonden muizen die met CFA waren geïnjecteerd nog steeds lagere terugtreklatenties dan muizen die met saline waren geïnjecteerd, zoals gemeten met een twee-weg ANOVA met Bonferroni post-hoc test. De adaptatie aan koelende omgevingsveranderingen kan in real-time met deze assay worden gemeten. Wild-type muizen vertonen dezelfde terugtreklatentie terwijl de glasplaat afkoelt, wat suggereert dat zij zich sneller aan dalende temperaturen aanpassen dan kan worden gemeten met de CPA, waarbij geen significante verschillen tussen de groepen werden gevonden.Wanneer de muizen echter zijn geïnjecteerd met U 7 3 1 2 2 om PIP2-hydrolyse te blokkeren, neemt hun latentietijd af naarmate de temperatuur van de plaat daalt, wat wijst op een verminderde adaptatie. Zodra deze techniek onder de knie is, kan deze in vijf uur worden uitgevoerd, inclusief de acclimatisatietijd. Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht hebben in het meten van koudesensatie en adaptatie bij wakkere, vrij bewegende muizen. Vergeet niet dat werken met droogijs uitzonderlijk gevaarlijk kan zijn en dat u tijdens deze methode moet zorgen voor een goede ventilatie en luchtverversing.

a-simple-inexpensive-method-for-determining-cold-sensitivity

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Hier wordt beschreven snel betrouwbare en eenvoudige procedure om de laagste temperatuur waarbij ratten of muizen tonen nocifensive gedrag...

Snelle bepaling van de thermische Nociceptieve drempel in diabetische ratten

Elektronische von Frey metingen zijn een effectieve en verbeterde alternatief voor klassieke von Frey filamenten, omdat ze snelle en nauwkeurige meting van veranderingen in mechanische onttrekkingsdrempels bij knaagdieren mogelijk maken naar continu toegepaste drukstimulering vóór en na een ontstekingsgebeurtenis.

Metingen van veranderingen in tactiele gevoeligheid in de achterpoot van muizen met behulp van een elektronisch von Frey-apparaat

Allergische reacties, gekenmerkt door de activering van mestcellen en basofielen, worden door de verknoping van IgE en het vrijkomen van pro-inflammatoire mediatoren. Een kwantitatieve beoordeling van allergische reacties kunnen worden bereikt door Evans Blue kleurstof veranderingen in vasculaire permeabiliteit na provocatie met allergeen controleren.

Meten Lokaal Anafylaxie in Muizen

Dit manuscript beschrijft een protocol om het reuksysteem van knaagdieren te onderzoeken. De reuk habituatie/dishabituatie test zal onderzoekers in staat stellen om te bepalen of een muis zich aanpast aan een herhaaldelijk gepresenteerde geur en of de muis dishabituatie vertoont wanneer een nieuwe geur wordt gepresenteerd.

Testen voor Geur Discriminatie en gewenning in Muizen

We presenteren een eenvoudige en onbevooroordeelde olfactorische test bij muizen. Met dit protocol kunnen olfactorische discriminatie, voorkeur, vermijding en gevoeligheid voor een nieuwe geur in vergelijking met water worden beoordeeld in sessies van enkel gedrag. Deze methode is geïndiceerd voor een enkele experimentator en de analyse is gebaseerd op computerondersteunde videoverwerking.

Eenvoudig en Computer-assisted Olfactorische testen voor Muizen

Hier laten we zien een nieuwe test om koude nociceptie in Drosophila larven te bestuderen. Deze test maakt gebruik van een op maat gemaakte Peltier probe kunnen toepassen middelpunt schadelijke stimulus koude en resulteert in meetbare koud-specifiek gedrag. Deze techniek zal verder cellulaire en moleculaire dissectie van koude nociceptie mogelijk te maken.

Nieuwe test voor Cold Nociceptie in<em&gt; Drosophila</em&gt; Larven

In deze paper we nadere bijzonderheden te geven voor de wijze van productie en kwaliteitscontrole van een IL4-10 recombinante fusieproteïne. Ook laten we zien hoe te testen van de effectiviteit van dit eiwit op te lossen in een muismodel van inflammatoire pijn pijn.

Ontwikkeling van recombinante eiwitten voor de behandeling van chronische pijn

Hier presenteren we een nieuwe methode voor het nauwkeurig meten van de lichaam temperatuurverschillen in passieve systemische anafylaxie (PSA) en voedsel allergie Muismodellen met behulp van een infrarood thermometer. Deze procedure is nauwkeurig gedupliceerd in de resultaten van de vorige PSA.

Muis lichaamstemperatuurmeting met behulp van Infrarood Thermometer tijdens passieve systemische anafylaxie en voedsel allergie evaluatie

Muizen en ratten worden chirurgisch geïmplanteerd met externe temperatuurtransponders en vervolgens gewend aan de testomgeving en procedure. Veranderingen in spiertemperatuur worden gemeten als reactie op farmacologische of contextuele stimuli in de thuiskooi of tijdens voorgeschreven fysieke activiteit (d.w.z. loopband lopen met een constante snelheid).

Het meten van de thermogenese van de skeletspieren bij muizen en ratten

Contactovergevoeligheid (CHS) is een muizenexperimenteel model van allergische contactdermatitis (ACD). CHS is gebaseerd op sensibilisatie met reactieve hapten door de geschoren huid van de borst en buik te schilderen, met een daaropvolgende oorhuiduitdaging met een verdunde hapten, waardoor een zwellingsreactie ontstaat die op verschillende manieren wordt beoordeeld.

Contactovergevoeligheid als een muizenmodel van allergische contactdermatitis

Leer de Cold Plantar Assay om koude gevoeligheid en adaptatie te meten bij muizen. Deze methode gebruikt droogijs en een stopwatch om terugtreklatentie te bepalen voor pijnonderzoek.

Een eenvoudige en goedkope methode voor het bepalen Koude Gevoeligheid en aanpassing in Muizen

Meer video's verkennen