Name: Isolatie van mononucleaire cellen uit het centrale zenuwstelsel van ratten met EAE (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:23:00.000+00:00
Duration: 20 min 51 s
Description: Leer de isolatie van mononucleaire cellen uit het centrale zenuwstelsel van ratten met EAE via hartperfusie en Percoll-gradientcentrifugatie. Deze methode minimaliseert bloedcontaminatie en levert levensvatbare cellen voor flowcytometrie en celkweek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li> Diep verdoven ratten. Spray met 70% ethanol en doe een cardiale perfusie met PBS gedurende 10 min om cellen van de bloedvaten (snijd de rechter boezem en perfuseren door het linker ventrikel) te verwijderen. </li><li> Verwijder de hersenen en het ruggenmerg en doe dit in een 50 ml buis met ijskoud PBS. Snijd de hersenen en het ruggenmerg in een 70 mm cel zeef geplaatst in een 10 cm petrischaal met 10 ml ijskoud PBS. Druk op elk stukje orgaan door de cel zeef met behulp van de achterkant van een steriele 1 ml spuit zuiger. Verzamel de enkele celsuspensie in een 50 ml buis op ijs. Was de cel-zeef met PBS en toe te voegen aan de buis totdat de oplossing helder is. </li><li> Centrifugeer voor 8-10 min op 390 g. </li><li> Resuspendeer de cellen in 20 ml PBS + 30% Percoll en overlay op 10 ml PBS + 70% Percoll. </li><li> Centrifugeer bij 390 g gedurende 20 min bij kamertemperatuur. </li><li> Verwijder het vet op de top van de buis. Het verzamelen van de cellen van de interface en was tweemaal met PBS. Tellen. </li></ol>

<ol><li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+clinical+scoring+of+chronic-relapsing+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Visualized Experiments. 5, Forthcoming.</li>
</ol>

Deze procedure, als alle procedures met betrekking tot levende dieren, moet worden goedgekeurd door dier van uw instelling gebruik en onderhoud commissie. Wij adviseren een dierenarts of een veterinaire technicus aanwezig zijn bij het uitvoeren van de eerste cardiale perfusie naar een voldoende niveau van de anesthesie te waarborgen wordt gegeven aan het dier voor en tijdens de procedure, en dat de dieren ondergaan onnodig pijn of angst.

<table><tbody><tr><td>PBS, 1x, steriel</td><td>Reagens</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>Celzeef, 70 um</td><td>Instrument</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1644</td><td></td></tr></tbody></table>

isolatie van mononucleaire cellen uit het centrale zenuwstelsel van ratten met eae

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

Of het bestuderen van een auto-immuunziekte gericht aan het centrale zenuwstelsel (CZS), zoals experimentele auto-immune encephalomyelitis (EAE, 1), of de immuunrespons op een infectie van het CZS, zoals poliomyelitis, Lyme neuroborreliose of neurosyfilis, is het vaak noodzakelijk om de CNS-infiltrerende immuuncellen te isoleren. In deze video-protocol waarin we laten zien hoe mononucleaire cellen (MNC) van het CZS van een rat met EAE te isoleren. De eerste stap van deze procedure is een cardiale perfusie van de knaagdieren met een zoutoplossing om ervoor te zorgen dat er geen bloed blijft in de bloedvaten bevloeit het centraal zenuwstelsel. Elke besmet bloed zorgt voor een kunstmatige toename van het aantal schijnbare CNS-infiltrerende multinationals en kan de schijnbare samenstelling van het immuunsysteem infiltreren wijzigen. Vervolgens hebben we laten zien hoe de hersenen en het ruggenmerg van de rat voor latere dilaceratie te verwijderen om een ​​single-cell suspensie te bereiden. Deze schorsing is gescheiden op een twee-lagen Percoll verloop van de multinationals te isoleren. Na het wassen, deze cellen zijn dan klaar voor elke gewenste behandeling te ondergaan. Mononucleaire cellen geïsoleerd met behulp van deze procedure zijn levensvatbaar en kunnen gebruikt worden voor de elektrofysiologie, flow cytometrie (FACS), of biochemie. Als de techniek wordt uitgevoerd onder steriele omstandigheden (met behulp van steriele instrumenten in een weefselkweek kap) de cellen kunnen ook worden gekweekt in weefselkweek medium. Een bepaalde cel populatie kan verder worden gezuiverd met behulp van magnetische scheiding procedures of een FACS.

In deze video laten we zien hoe de mononucleaire cellen van het centrale zenuwstelsel van ratten met experimentele auto-immune encephalomyelitis isoleren.

Isolatie van mononucleaire cellen uit het centrale zenuwstelsel van ratten met EAE

Of men nu een auto-immuunziekte bestudeert die gericht is op het centrale zenuwstelsel (CZS), zoals experimentele auto-immuun encefalomyelitis (EAE, 1), of de ...

Hallo, ik ben Christine Beaton. Ik ben assistent-onderzoeker in het laboratorium van George Chen in de afdeling Fysiologie en Biofysica van de University of California Irvine. Vandaag ga ik u laten zien hoe u mononucleaire cellen uit het centrale zenuwstelsel van ratten isoleert.Deze procedure omvat het diep anesthetiseren van de rat om een cardiale perfusie uit te voeren, zodat er geen bloedcontaminatie in het centrale zenuwstelsel achterblijft. Nadat we deze hebben verwijderd, nemen we de hersenen en het ruggenmerg uit om met behulp van een celzeef een enkelcel-suspensie te maken; vervolgens isoleren we de mononucleaire cellen middels een dubbellaagse Percoll-gradiënt. Laten we beginnen.Ik ben nu klaar om de cardiale perfusie uit te voeren, dus ik zal al het materiaal laten zien dat ik daarvoor nodig heb. Het eerste wat we nodig hebben is een stolp, en hieronder hebben we keukenpapier geplaatst dat is gedrenkt in een vluchtig anestheticum. U kunt halothaan of isofluraan gebruiken.Het volgende dat we nodig hebben is een manier om de rat vast te zetten en een manier om het bloed op te vangen. Daarom hebben we deze geïmproviseerde installatie om de ratten te perfunderen. Je gebruikt

isolation-mononuclear-cells-from-central-nervous-system-rats-with

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Het huidige artikel beschrijft een snelle protocol om efficiënt te isoleren mononucleaire cellen van hersenen en het ruggenmerg weefsels die effectief kan worden gebruikt voor flowcytometrische analyses.

Isolatie van hersenen en ruggenmerg mononucleaire cellen met behulp van Percoll Verlopen

In this video, we perform the isolation of mononuclear cells from a mouse’s brain using density gradient centrifugation. The isolated mononuclear cell suspension can be used for further downstream analysis.

Mononuclear Cell Isolation from Mouse Brain: A Density Gradient Centrifugation Technique to Isolate Brain Resident Mononuclear Cells

This video demonstrates the process of isolating brain microvessels from euthanized rats. It includes the dissection of the brain, cleaning of the tissue, and mechanical digestion, followed by repeated centrifugation to isolate the pure fraction of microvessels.

A Method for the Isolation of Neurovascular Units from Rat Brain

Dit manuscript beschrijft de methoden voor inductie en scoren van het experimentele auto-immuunencefalomyelitis (EAE) model, samen met de beoordeling van immuunceldistributie en mRNA-cytokineniveaus in lymfeklieren, milt, bloed en ruggenmerg met behulp van flowcytometrie en kwantitatieve PCR, respectievelijk, in verschillende fasen van de ziekte.

Inductie van experimentele auto-immune Encefalomyelitis in Muizen en evaluatie van de ziekte-afhankelijke Verdeling van immuuncellen in verschillende weefsels

Inspanningen om microglial functie in detail te begrijpen hebben belemmerd door het ontbreken van microglial cultuur modellen die de eigenschappen van volwassen in vivo microglia recapituleren. Dit protocol beschrijft een aanpak van het isolement en cultuur ontworpen om robuust voortbestaan van zeer vertakte volwassen rat microglia voorwaarden gedefinieerd-medium.

Isolatie en cultuur van knaagdier Microglia ter bevordering van een dynamische vertakt morfologie in serumvrij Medium

Het doel van dit protocol is het isoleren van micro vaartuigen uit meerdere regio's van het centrale zenuwstelsel van lissencefische en gyrencephalic vertebraten.

Betrouwbare isolatie van micro vaten van het centrale zenuwstelsel in vijf gewervelde groepen

We bieden een protocol voor isolatie van Microglia uit verschillende ontleed gebieden van een volwassen muis hersen halfrond, gevolgd door semi-geautomatiseerde bibliotheek voorbereiding voor diepe eencellige RNA-sequencing van volledige lengte transcriptomes. Deze methode zal helpen om functionele heterogeniteit van Microglia in gezondheid en ziekte te verhelmaken.

Isolatie van regiospecifieke Microglia van één volwassen muis hersen halfrond voor diepe eencellige RNA-sequencing

Dit manuscript presenteert een protocol om actieve experimentele auto-immuunenceomyelitis (EAE) bij muizen te induceren. Een methode voor de isolatie en karakterisering van de geïnfiltreerde lymfocyten in het centrale zenuwstelsel (CNS) wordt ook gepresenteerd om te laten zien hoe lymfocyten betrokken zijn bij de ontwikkeling van cns auto-immuunziekte.

Flow Cytometrische Analyse van lymfocyten infiltratie in het centrale zenuwstelsel tijdens experimentele auto-immuunenceomyelitis

Een methode voor de isolatie van neurale stamcellen en oligodendrocytenvoorlopercellen uit de hersenen van levende ratten wordt hier in experimenteel detail gepresenteerd. Het maakt meerdere verzamelingen van deze cellen van dezelfde dieren mogelijk zonder hun welzijn in gevaar te brengen.

De "Brain Milking"-methode voor de isolatie van neurale stamcellen en voorlopercellen van oligodendrocyten uit levende ratten

Dit onderzoek schetst twee technieken voor het isoleren van overvloedige neutrofiele extracellulaire vallen (NET's) uit het beenmerg van ratten. De ene methode combineert een commerciële neutrofielenisolatiekit met dichtheidsgradiëntcentrifugatie, terwijl de andere alleen dichtheidsgradiëntcentrifugatie gebruikt. Beide benaderingen leveren functionele NET's op die die van perifere bloedneutrofielen overtreffen.

Unieke aanpak voor het isoleren van beenmergneutrofielen bij ratten met vergelijkbare capaciteit

Tot op heden zijn protocollen voor de gelijktijdige isolatie van alle belangrijke celtypen van het centrale zenuwstelsel uit dezelfde muis een onvervulde vraag. Het protocol toont een procedure die toepasbaar is bij naïeve en experimentele auto-immuun encefalomyelitis-muizen om complexe cellulaire netwerken tijdens neuro-inflammatie te onderzoeken en tegelijkertijd het vereiste aantal muizen te verminderen.

Gelijktijdige isolatie van de belangrijkste celtypen van het centrale zenuwstelsel van volwassen auto-immuun encefalomyelitis-muizen

Leer de isolatie van mononucleaire cellen uit het centrale zenuwstelsel van ratten met EAE via hartperfusie en Percoll-gradientcentrifugatie. Deze methode minimaliseert bloedcontaminatie en levert levensvatbare cellen voor flowcytometrie en celkweek.

Isolatie van mononucleaire cellen uit het centrale zenuwstelsel van ratten met EAE

Meer video's verkennen